JPS60237996A - 新規な抗生物質及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗生物質及びその製造法に関する。

本発明省らは、土壌微生物より各種菌株を分離し、その
抗生物質生産能を検索していたところ、今回新たに分離
したＫＯ−５９０５株が新規な抗生物質を生産すること
を見出し、更にこの培養液から該物質を単離することに
成功し、本発明を完成した。

本発明の抗生物質は後述の物理化学的性質ならびに生物
学的性質から明らかな如く、既知抗生物質と異なる新規
物質と認められ、ＫＡ−５９０５物質と曾名された。

本発明のＫＡ−５９０５ｖＩＪ質の生産菌であるＫＣ−
５９０５株はオーストラリア連邦シドニ　３− 一にて採取された土壌試料を例えば滅菌水に懸濁しハー
トインフュージョン寒天培地（栄研）２％、グルコース
０，５％、ウザギ血液１〜２％、マイコスタチン５０μ
ｆ　／　−１’ニジリンＧＯ２４μｆ　／　ｍｌ　％ｄ
ｅリミキシ：／　Ｂ　２　ｐｆ／−、ナリジキシン酸８
μ？　／　ｗｌｓ　寒天０．５％より成るｐｉ　７．　
Ｏの培地に塗床し、２７℃にて７日間培養を行い、生じ
た集落を単離する事によって得られる。

とのＫＣ−５９０５株は下記の菌学的性質を有する。尚
、各種培地上の性質は特に指示のない限り、２７℃で１
４日間培養し、常法に従って観察したものでめ９、色調
の表現はカラー−ハーモニー・マニュアル、ｉ４［（コ
ンテナー・コーポレーション・オブ・アメリ　４− 力）の分類に従った。

（１）　形態学的性質 ＫＯ−５９０５株は、数種の培地上で真性気菌糸を良好
に着生する。菌糸は長く、単純分枝し、胞子柄は、気菌
糸上に枝状に生じ、その先端は、鉤状、輪状るるいは螺
旋状を呈する。胞子は、卵形ないしは短円筒形で、０．
４〜０．７μｍ　Ｘ　Ｑ、　５〜１，２μｍ程度の大き
さを示し、２０個以上の連鎖をなす。胞子表面は、とげ
状である。鞭毛胞子、胞子嚢、菌核形成及び塞化菌糸の
分断は認めらＩＬなかった。

（ｎ）　各種培地上の性状 １、　シュクロース・硝酸塩寒天培地 生　育　良好 気菌糸の着生　良好 気菌糸の色　白色（ｂ）〜淡青色（Ｈｏｅ）可溶性色素
　黄褐色 ２、　グルコース・アスノＱラギン寒天培地生　育　良
好 気菌糸の着生　良好 気菌糸の色　淡青色（１７・ａ） 可溶性色素　緑褐色 ３、グリセリン・アス、Ｑラギン寒天培地生　育　良好 気菌糸の着生　豊富 気菌糸の色　淡青色（１７・Ｃ） 可溶性色素　黄褐色 ４、　スターチ・無機塩寒天培地 生　育　中程度 気菌糸の着生　良好 気菌糸の色　淡青色（１７ｅｅ　） 可溶性色素　微褐色 ５、　チロシン寒天培地 生　育　良好 気菌糸の着生　良好 気菌糸の色　淡青色（１７ｅａ〜１７・Ｃ）可溶性色素
　褐色 ６、栄養寒天培地 生　育　貧弱 気菌糸の着生　中程度 ＝　７− 気菌糸の色　白色（ｂ） 塞化菌糸の色　灰黄禍色（２ｇｃ　） 可溶性色素　微褐色 ７、　イースト麦芽寒天培地 生　育　良好 気菌糸の着生　豊富 気菌糸の色　淡青色（１７・Ｃ〕 基基筒菌糸色　褐色〜点褐色（３ｎｉ〜３ｐｏ）可溶性
色素　黄褐色 ８、　オートミール寒天培地 生　育　良好 気菌糸の着生　中程度 気菌糸の色　白色〜淡青色（＆〜１７・Ｃ）塞化自系の
色　褐色（２ｐｌ　） 可溶性色素　微褐色 　８− （１１生理的性質 １、生育温度範囲：　ｌｏ〜３９℃ 至適生育温度＝　２８．５〜３４．５℃２、　ゼラチン
の液化：　陽性 ３ｏ　スターチの加水分解二　′＠を性４、　脱脂牛乳
の凝固：　陰性 脱脂牛乳のベゾトン化：　陰性 ５、　メラニン様色累の生成：　陽性 （ＩＶ）炭素源の利用性 ゾリドハム・ゴツトリープ寒天培地上での炭素源の利用
性を検討した結果、下記の炭素源全てを利用した。

Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、
Ｄ−フラクトース、７ユクロース、イノシトール、Ｌ−
ラムノース、ラフイノース、Ｄ−マンニトール ■　細胞壁加水分解物中のジアミノピメリン酸の分析 Ｌ−１Ｌ−２，６−ジアミノピメリン酸が認められた。

以上の結果よｊｌｌＫｃ−５９０５株は、ストレプトミ
セス属に属し、胞子形成菌糸は鉤状から螺旋状を呈する
。胞子表面はとげ状で２０個以上の連鎖をなす。気菌糸
の色調は、青色シリーズに属し、基土菌糸は、しばしば
黒褐色を呈し、メラニン様色素を生成し、グルコース・
アスノ（ラギン寒天培地中に緑褐色の可溶性色素が認め
られた。検討した炭素源は全てを利用する。

以上の特徴をもとに本菌株と類似する菌株を「バーシー
ズ・マニュアル・オブ・デターミナテイブ・バクテリオ
ロゾー」第８版、シャーリングおよびゴツトリーブによ
るＩＭＦ記載の諸菌株、ワックスマン著［ゾ・アクテノ
ミセテス」第２巻及びその他の放線菌の新種発表文献か
ら検索したところ、形態、気菌糸の色調、メラニン様色
素の生成及び炭素源の利用性の点で一致する菌株が多数
認められた。

しかし、基土−系の色調及び可溶性色素の点で本菌株と
完全に一致する菌株は認められず比較的近似する１株と
してストレゾトミセス拳ピリドクロモゲネス（８ｔｒｅ
ｐｔｏｎ＋ｙａｅａｖｉｒｉｄａａｈｒｏｍｏｇ＠ｎ＊
ｓ　）　Ｉ８Ｐ　５１１０株（ＫＣＣ８−０８５６株）
が認められた。ストレプトミセス・ピリドクロモゲネス
ｌ８Ｐ５１１０株と１１− ＫＣ−５９０５株はスターチの加水分解能を除く生理的
性質は全て一致してお９、基土菌糸の色調及び可溶性色
素も全体的によく似た印象を与えるが、ストレプトミセ
ス・ピリドクロモゲネスｌ５ｐ５１１０株に特徴的な緑
色な可溶性色素はＫＣ−５９０５株では認められなかっ
た。以上の結果よｆｉＫｃ−５９０５株は、ストレプト
ミセス・ピリドクロモゲネスに近縁な新菌株と考えられ
ストレプトミセスリ、　ＫＯ−５９０５株と命名し、工
業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第７５８８
号（ＦＩＲＭ　ｐ−７５８８）として寄託した。

本発明に於いては、上記ＫＣ−５９０５株のみならず、
この自然変異株及び人工変異株も使用できる。

１２一 本菌株の培養には通常の放線菌の培養方法が用いられる
。培地の炭素源としては種々のものを用いることができ
るが、例えば澱粉、デキストリン、グルコース、フラク
トース、マルトース、マンニット、キクロース、ガラク
トース、リボース、シュクロース等の糖類；メタノール
、エタノール、グリセリン等のアルコール類；酢酸、ノ
Ｑルミテン酸、乳酸、グルコン酸、ピルビン酸等の有機
酸；大豆油、綿実油等の植物油；ノＱラフイン等の炭化
水素類を単独又は組み合せて用いることが好ましい。窒
素源としては、例えば尿素、大豆粉、乾燥酵母、酵母エ
キス、ペプトン、〆リペゾトン、肉エキス、コーンステ
イープリカー、カザミノ酸、デイステイラーズソリュプ
ルなどの有機窒素源；塩化アンモニウム、硫酸アンモニ
ウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウムなどの無機窒
素源の他グリシン、アラニン、グルタミン酸、システィ
ン等のアミノ酸などを単独で又は組み合せて使用できる
。その他必要に応じ、食塩、塩化カリウム、塩化カルシ
ウム、塩化コバルト、塩化鉄、リン酸カリウム、リン酸
ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸亜鉛、硫酸鉄、炭
酸カルシウム、水酸化カルシウムなどの無機塩及び微量
の夏金属を添加することができる。更に、菌の発奮を助
長し、ＫＡ−５９０５物質の生産を促進する有機及び無
機物質を適宜に添加することができる。筐だ、通気培養
法を用いる場合には、更に脂肪油、シリコーン油、パラ
フィン、ポリアルキレングリコールなどの消泡剤を添加
するのが好ましい。

培養方法としては、固体培地上での培養も可能でめるが
、一般抗生物質の生産方法と同様に液体培養法、特に深
部培養法を用いることが好ましい。培養は好気的条件下
、３〜３５℃、好ましくは２５〜３０℃で行われる。

ＫＡ−５９０５物質の生産は、振盪培養、タンク培養の
いずれを用いても工く、１〜１０日間培養を行い、培養
液中の生産量が最大に達した時点で培養を停止し、培養
液中よシ目的の抗生物質を単離及び＃を製する。

上記の方法によって得られる培養液よｐＫ人−５９０５
物質を単離及び精製する方法としては、このような場合
に使用される公知の１５− 穐々の方法が採用できる。

その−例を示せば、まず培養液を遠心分離又はｐ過処理
して菌体を除去し、その培養ν液について次の処理を任
意に組み合せて行なう。すなわち、ｐ液を活性炭、多孔
性合成高分子樹脂等に吸着させ、例えばメタノール、エ
タノール、ブタノール、アセトン等の水性液で溶出して
目的物を抽出する方法、及びＦ液を鉱酸、例えば塩酸、
硫酸等でｐｉｉ　Ｚ付近に調整して、水不溶性の有機溶
媒、例えば酢酸エチル、エーテル、塩化メチレン、クロ
ロホルム、ベンゼン等で抽出し、更に必要に応じ、この
抽出液よシ目的物をアルカリ性水溶液、例えば水酸化ナ
トリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素す）　ＩＪウム等
の希求浴液に転溶１６− した後、再びそのｐＨを２付近に調整して、上記水不齢
性の有機溶媒で抽出する方法などを任意に組み合せて得
られる抽出液を濃縮すると、ＫＡ−９５０５物質の粗製
物が得られる。

この粗製物を、例えばシリカゲル、多孔性合成高分子Ｗ
脂等によるクロマトグラフィーで常法によって処理する
と、ＫＡ−９５０５物質の純品が得られる。

叙上の如くして得られた本発明ＯＫムー９５０５物質は
下記の物理化学的性状及び生物学的性状を有する。

ｌ　物理化学的性状 （１）　元素分析値： 炭　素　５７．５９士１．０％ 水　素　７．０６土Ｏ６５％ 窒　累　４．６６±０，５％ 硫　黄　１１．３０±１．０％ （２）分子ｉ＝ ２２０〜３００ （３）融　点： ６６〜６９℃ （４）比旋光度： （α）”　＋２０　ｓ°　（ｃｌ、メタノール）（５）
紫外側吸収スペクトル： メタノール中で測定した紫外線吸収スペクトルは第１図
のとおｐであり、２３８　ｎｍ及び２９５ｎｍに極大吸
収を弔する。

（６）赤外線吸収スペクトル： 臭化カリウム中にペレットした赤外線吸収スペクトルは
第２図のとおり。

（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中
で測定したスペクトルは第３図のとおり。

（８）浴剤に対する溶解性： メタノール、アセトン及び酢酸エチルに可溶、水、石油
エーテル及びヘキサンに不治。

（９）　呈色反応： 塩化第二鉄反応及び過マンガン酸カリウム反応は陽性、
モーリッシュ反応及びニンヒドリン反応は陰性。

ＣＩＧ　塩基性、酸性、中性の区別：酸性（Ｉｌｌ　薄
層クロマトグラフィー： Ｒｆ値：０．４５［プレート；　ＴＬＣアルミニウムシ
ートシリカゲル６０　Ｆ’ｚｓａ、０．２　ｍｍ（メル
ク社製）、溶媒；酢酸エチル〕、１９− ｉＲ値：０．４０（プレート；上に同じ、沼媒；エーテ
ルーヘキサン（１０：１））、■　生物学的性状 （１）　各種微生物に対する抗菌スペクトラムを次表に
示す。

２Ｏ− （２）毒性 哨乳動物に対しては、殆んど拗性を示さない。

上記の諸性状を有するものを、既知抗生物質より検索す
ると、類似するものとしてチオラクトマイシン〔シャー
ナル・オプ・アンチバイオティックス、３５，３９１〜
４１９（１９８２））及びチオテトロマイシン〔上に同
じ、　３６　、　１０９〜１１４　（１９８３）　）が
挙げられる。しかしながら、Ｋム−５９０５物質は、そ
の構成元素として窒素原子を有しているが、前記２抗生
物質は窒素原子を含有していない点、及び核磁気共鳴ス
ペクトルが両抗生物質と異なっている点で、両物質とは
明らかに相違する。従って、Ｋム−５９０５物質は新規
な抗生物質であることが認められた。

上記のとお９％　Ｋ人−５９０５物質は宿性が低く、主
としてダラム陽性菌に対して抗菌活性を示すので、ヒト
及び動物の微生物感染症に対する治療薬及び予防薬とし
て有用である。

また、Ｋム−５９０５物質は丈に優れた抗生物質及び他
の医薬品を製造するための中間体としても有用である。

実施例 コーンスターチ１％、？リベプトン０，７５％、肉エキ
ス０．７５％、グルコース１％、食塩０．３％、硫酸マ
グネシウム０．０５％の組成を有し％　ＰＨ７，０に調
整した液体培地１１００５ｄｅ５００Ｂのエルレンマイ
ヤーフラスコに入れ、滅菌した。この培地にストレプト
ミセス、ｐ、ＫＣ−５９０５株の寒天斜面培養物を接種
した。これを２２０ｒｐｍ、２７℃で７２時間振盪培養
し、種培養液とした。

コーンスターチ２％、ポリペプトン０．７５％、内エキ
ス２％、綿実油０．５％、グルコース０，５％、食塩０
．３％、硫酸マグネシウム０．０５％、シリコーン０．
１％の組成を有し、ｐＨ７，０に調整し′ｆｃ液体培地
を２０１の発酵槽４基に１０１ずつ分注し、滅菌したの
ち、前記の種培養液を１００−ずつ接種した。これを２
７℃で通気攪拌方式（攪拌数３２゜ｒｐｍ、通気蓋；５
ｔ／分）で７２時間培養した。

この培養液を濾過し、Ｆ液３２Ｌｆ、得た。

このＦ液を活性炭のカラム（６×４０ｃｌＬ）にム２３
− 吸着させ、５０％水性アセトンで溶出した。

浴出液４ｔを減圧下に１ｔＶｃ′Ｉ！に縮し、この濃縮
液に希塩酸を加えてＰＨ２，２に調整して酢酸エテルＩ
Ｌで抽出した。この抽出液を水洗したのち、０．５％炭
酸水素ナトリウム水溶液５００ｍで抗生物質を転溶した
。この転溶液に希塩酸を加えてｐＨ２，２Ｋｍ整し酢酸
エチル５００−で抽出した。この抽出液を水洗したのチ
、濃縮し、０１ｋｍ液をシリカゲルのカラム（２Ｘ４０
Ｑｌ）に付し、ヘキサン−酢酸エチル（４：１）で溶出
した。活性区分を集めて濃縮すると油状の粗製物が得ら
れた。

得られた油状物質を７リカグルのプレート〔シリカブ”
　’　！５４　ｓ厚さ２ｍｍ、２０Ｘ２０ｍ（メルク社
＃り〕に付し、酢酸エチル−へ２４− キサン（７：１　）で展開した。Ｒｆ値が０，５付近の
紫外線吸収を有する部分を集め、酢酸エチルで溶出した
。溶出液を濃縮し、ヘキサンで洗浄後真空乾燥すると無
色結晶としてにムー５９０５物質の純品５８０ｑが得ら
れた。

【図面の簡単な説明】

第１図はにムー５９０５物質の紫外線吸収スペクトル、
第２図は同赤外線吸収スペクトル、第３図は同プロトン
核磁気共鳴スペクトルを示す。 以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　次の物理化学的性状 （１）　元素分析値： 炭素　５７．５９±１．０％ 水素　７．０６±０，５％ 窒素　４．６６±０．５％ 硫黄　１１．３０±１．０％ （２）　分子量： ２２０〜３００ （３）融　点： ６６〜６９℃ （４）　比旋光度：　［ａ］２０＋２０５°（ｅｌ、メ
   タノール）（５）紫外線吸収スペクトル： メタノール中で測定した紫外線吸収スペクトルは第１図
   のとおシであり、２３８ｎｍ及び２９５　ｎｍ　Ｋ極大
   吸収を有する。 （６）赤外線吸収スペクトル： 臭化カリウム中にペレットした赤外線吸収スペクトルは
   第２図のとおり。 （７）プロトン核磁気共鳴スペクトル：電メタノール中
   で測定したスペクトルは第３図の゛とおル。 （８）溶剤に対する溶解ａ＝ メタノール、アセトン及び酢酸エチルに可溶、水、石油
   エーテル及びヘキサンに不溶。 （９）　呈色反応： 塩化第二鉄反応及び過マンガン酸カリウム反応は陽性、
   モーリッシュ反応及びニンヒドリン反応は陰性。 （６）　塩基性、酸性、中性の区分：酸性Ωυ　薄層ク
   ロマトグラフィー： Ｒｆ値Ｈｏ、４５Ｃプレート；　ＴＬＣアルミニウムシ
   ートシリカゲル６０１Ｚ６４．０．２ｍｍ（メルク社製
   ）、溶媒；酢酸エチル〕 Ｒｆ値：０．４０〔クレート；上に同じ、溶媒；エーテ
   ルーヘキサン（１０：１））を有する抗生物質に人−５
   ９０５及びその塩類。 ２、　ストレプトミセス属に属するＫＡ−５９０５物質
   生産菌を培養し、その培養液よシＫＡ−５９０５物質を
   採取し、これを更に必要に応じて塩類とすることを特徴
   とする抗生物質ＫＡ−５９０５及びその塩類の製造法。