JPS6083594A - 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、発１」ｒ法によるＬ−）リゾトファン（以下
、トリシトファンと記す）の装造法に１月する。

従来トリシトファンの製造法としては、トリプトファン
の前駆物質であるアントラニルｆ２、インドール或は３
−インドールピルビン酸よシトリシトファンを製造する
方法が知られている。

これら前、小物質を使用する方法に対し、前１駆物質を
使用しないで、糖７釧等を炭素源とし、バチルス属に屈
しトリプトファンアナログに耐性を有する変異株を使用
して直接発酵法によ、？）リゾトファンを生産する方法
（特公昭４８−１８８２８、特公昭５３−３９５１７　
’）が開発されている。

そこで、本発明者らはバチルス属の微生物を用いて更に
８２類等の炭素源からトリプトファンを直接発酵法によ
シ安価に製造する方法を開発すべく研究を行った結果、
バチルス属の上記のようなトリプトファンアナログ耐性
の他にサルファ剤として知られているサルファグアニジ
ンに対する耐性を付与した微生物の中に従来知られてい
るものより更に大量のＬ−）リプトファンを生産する能
力を有する菌株があることを見い出した。本発明はこの
知見に基づいて更に研究の結果完成されたものである。

本発明において、トリプトファ／を生成する能力を有す
る１紋生Ｉ吻とは、バチルスｔｊうに属し、５−メチル
トリットファン又は、５−フルオロトリプトファン等の
トリットファンアナログに血１；生奮南する微生物をい
い、更に、この性質の他にＬ−フェニルアラニン、Ｌ−
チロシン又はＬ−ヒスチジン等の栄養要求性もしくはフ
ェニルアラニンアナログ、チロシンアナログ又はヒスナ
ノ／アナログ等に対する携剤耐性を付与したバチルス）
４に属する微生物もトリットファンを生産する能力を有
する微生物に含まれる。

本発明において使用される変異株はバチルスｌニジに属
し上記のトリプトファンを主意する能力を有する性質を
もち、かつサルファー剤に耐性をＭする微生物であシ、
例えば次のような変異株が使用される。

バチルス・ズブチリス　ＡＪ１２０９８％田Ｐ−’ｌユ
９Φ（５−ＦＴｒ、　５Ｇｒ） ７２９左 バチルス拳ズブチリス　ＡＪ１２０９９　ＦＥＲＭ−Ｐ
租河含（５−ＦＴｒ、　ＩＭｒ、５Ｇｒ） ５−ＦＴｒ　：　５−フルオロトリプトファン１副川生
ＩＭｒ　：　インドールマイシン耐性 ＳＧｒ　：サルファグアニジン耐性 これら本発明で使用される変異株は、バチルス属のトリ
プトファンアナログ耐性のＬ−）リットファン生産回を
親株とし、これに通常の変異誘導操作、例えば、柴外線
照射或はＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグア
ニジン、亜硝酸等の化学薬剤処理を施した後、親株が生
育できないよう濃度の１０００μμになるようにサルフ
ァグアニジ／を含有する寒天平板培地で培養し、誼平板
培地上に生育するコロニーを分離することによってイ・
４られる。

上記の親株としては、トリプトファンアナログＩＩＪｔ
性の他にトリットファン生産に有用な性質を有するトリ
ット７アン生産菌、例えば、Ｌ−アルギニ／、Ｌ−リジ
ン、Ｌ−ロイシンもＬｌｊ：Ｌ−フェニルアラニン要求
性のトリフ０トフアン生産萌（特公昭５３−３９５１７
号公報）、更にはトリプトファンアナログ耐性でかつイ
ンドールマイシン耐性のトリットファン生産菌（特開昭
５６−９２７９６号公報）等が使用される。具体＆１と
しては次のようなトリプトファンアナログ耐性のトリッ
トファン生産菌が使用される。

バチルス・ズブチリス　ＦＴ−１４５ＦＥＲＭ−Ｐ１７
８３（５−ＦＴｒ） バチルス・ズブチリス　ＡＪ１１４８３　ＦＥＲＭ−７
Ｐ５２１６（５−ＦＴｒ、ＩＭｒ） その他、本発明の変異株はバチルス属の野生株を親株と
し、これにサルファグアニジンの耐性を付与した後、ト
リプトファンアナログ耐性を付与することによっても誘
導できる。

万お、上記のトリシトファンアナログとはバチルス属に
ｇ、′する微生物の生育を阻害し、この生育阻害がＬ−
トリプトグア／の存在によって部分的又は完全に解除さ
れるような薬剤をいい、例えば５−メチル）　ＩＪデト
ファｙ等の５，６又は７−低級アルキルトリプトファン
、５−フルオロトリン０トフアン等の５又は６−バログ
ノトリノトフアン、トリプトファンハイドロキサメート
、又は７−アザトリットフアン等がある。

また本発明において用いるサルファー剤はｐ−アミノ安
息香酸の代謝を拮抗的に阻害する一′ｆ／Ｊ質をいい、
例えばサルファニルアミド、アセトサルフアミン、サル
ファーヒリジン、サルファーグアニジン、サルファーチ
アゾール、サルファーシアノン、サルファーメタシン又
はサルファーメタシン等がある。

以下、実験例にて本発明のサル・グアグアニジン耐性の
トリプトファン生産菌のサルファグアニジンに対する耐
性度を示す。

実験例 第１表に示す組成の最少培地にサルファグアニジンを第
２表に示す濃度となるよう加え、試（’ＩＩＩ管に４　
ｍｌ宛分注し加熱滅菌して液体培地を作成した。

上記液体培地に薬剤無添加培地で２４１ｋｌ’間振鉛培
養したｋも２表に示したバチルス・ズブチリスの変異株
の培養液を０．１　ｍｌ宛做独し、３０℃で４８時間振
３４．！、培養を行い５７０　ｎｍの吸光度を測定する
ことによシ生育度を測定した。その結果を第２表に示す
。

ダシ１表　最少培地の組成（ＰＨ７，０）グルコース　
５．０　ｇ／ｌ 硫酵アンモニウム　１．Ｏ〃 ＫＨ２ＰＯ４８，６５／／ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００・２１／ｌ ＦｃＳＯ４・７Ｈ７Ｈ２Ｏ１０／ｌ ＭｎＳＯ４・４Ｈ２０１０Ｚ’ クエン酸ナトリウム　０．５　ｇ／ＩＩＫＯＨ２，１８
／Ｉ Ｌ　−７ｘ　＝／’　７７　＝　７　１００　ｍ９／　
ＩＬ−システィン　１２５　〃 本発明で使用する培地は炭素源、窒素源、無機塩類、そ
の他必要に応じてアミノ酸、ビタミン等の有機微量栄養
素を含有する通常の栄養培地が使用される。炭素源とし
てはグルコース、シュークロース、マルトース、澱粉氷
解物　Ｊ３蜜等が使用され、その他エタノール、酢酸、
クエン酸等も単独或は上記他の炭素源と併用して用いら
れる。窒素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩
、尿素、（プトン等有機或は無、恨の窒素源が使用され
る。有機微量栄養素としてはアミノ酸、ビタミン、脂肪
酸、核酸、更にこれらのものを含有するペット−、カザ
ミノ酸、酵母エキス、大豆蛋白分解物等が使用され、生
育にアミノ酸等を要求する栄養要求性変異株を使用する
場合ににｌ窃求される栄養素を補添することが必要であ
る。犬（（４森塩類としてはリンぼ塩、マグネシウム１
豆、カルシウム塩、鉄塩、マンガン塩等が使用される。

培養は通常の培養条件下で猜えば良く、Ｐｌｌを５ない
し９、温度を２０ないし４０℃に制御しつつ１〜４日間
振盪培養又は通気攪拌培養することによシ培養液中に倍
量のトリシトファンが蓄積される。培養中にＰＨが下が
る場合には、炭素カルシウムを別殺菌して加えるか又は
アンモニア水、アンモニアガス等のアルカリで中和する
。又、有４３　Ｋを炭素源とする場合はＰＨの上昇を鉱
酸又は有様酸で中和する。

培′Ｉｒ液からトリシトファンを採取する方法は、公知
のトリシトファン回収方法に従って行えば良く、培養液
から菌体を除去した後副縮晶析する方法或はイオン交換
クロマトグラフィー等によって採取される。

以下、実施例にて説明する。

実施例１ 下記第３表に示した組成のトリプトファン生産用培地２
Ｑｎｒｌを５００ｍ１容フラスコに分注し、１１０℃で
１０分間加熱した後、第４表に示す微生物をそれぞれ１
／３スラント量植えつけ３０℃で９６時間振盪培養した
。それぞれの培養液中のトリットファン生成量は第４表
の如くであった。

第３表　トリオドアアン生産用培地組成（Ｐｌｌ７．Ｑ
）成　分　濃　度 グルコース　８０　９／１１ 塩化アンモニウム　１０　〃 ＫＨ２ＰＯ４１／／ ＫＣ７２１／ 八１ｎｓｏ４’４Ｈ２０１０’、ｒｙ／ｌＦｃＳＯ４・
７Ｈ２０１０〃 カザミノば　４　ｇ／ｌ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０ｏ、　４　ｆｔ ＣａＣＯ５４０＃ 第４表　トリブトファン生成量

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. バチルス属にノベし、サルファグアニジンに耐性を有す
   るＬ−トリシトファン生産能を有する微生・吻を液体培
   地中に好気的に培養し、培巷液中にＬ−）ＩＪノトファ
   ／を生成せしめ、これを採取することを特徴とするＬ−
   ）リプトファンの製造法。