JPS6169725A - 抗腫瘍性物質ｓｐｆ−１４０及びその製法 - Google Patents
抗腫瘍性物質ｓｐｆ−１４０及びその製法Info
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- JPS6169725A JPS6169725A JP59190560A JP19056084A JPS6169725A JP S6169725 A JPS6169725 A JP S6169725A JP 59190560 A JP59190560 A JP 59190560A JP 19056084 A JP19056084 A JP 19056084A JP S6169725 A JPS6169725 A JP S6169725A
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- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、＃ｒ規な抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１４０及びそ
の製法に関するものである。
の製法に関するものである。
従来、溶血性連鎖状球菌（以下溶連菌という）の生菌体
を弱毒化して製剤化したものは、ナでに制癌剤として使
用されている〜 また、＃溶菌の菌体を破砕抜水または塩類溶液で有効成
分を抽出し、有機温媒を加えて、抗腫瘍性物質を沈澱と
して、回収する方法（特公昭６８−１６４７ ）、ｍ遍
園を溶菌酵素リゾチーム、セルラーゼまたは蛋白質分解
酵素により、＃菌し、活性画分を水溶性区分として分画
する方法（英国特許第１１６３８６５号）、溶連−の菌
体を破砕抜水不溶性物質を採取し、核酸分解酵素および
蛋白分解酵素で処理する方法（特開昭５５−７０１４）
などが知られている。
を弱毒化して製剤化したものは、ナでに制癌剤として使
用されている〜 また、＃溶菌の菌体を破砕抜水または塩類溶液で有効成
分を抽出し、有機温媒を加えて、抗腫瘍性物質を沈澱と
して、回収する方法（特公昭６８−１６４７ ）、ｍ遍
園を溶菌酵素リゾチーム、セルラーゼまたは蛋白質分解
酵素により、＃菌し、活性画分を水溶性区分として分画
する方法（英国特許第１１６３８６５号）、溶連−の菌
体を破砕抜水不溶性物質を採取し、核酸分解酵素および
蛋白分解酵素で処理する方法（特開昭５５−７０１４）
などが知られている。
このように、ストレプトコッカス属細菌そのものもしく
はその菌体成分に抗ＭｌｊＧ活性があることは広く知ら
れているのであるが、従来仰られたものは、菌体もしく
は水溶性もしくは水不溶性高分子細胞構成吻貴であるに
過ぎなかった。歯体もしくは一体円から有効成分を単離
しよりとすれば、菌体を浴−シたり、機械的に破砕した
りして全体を分画しなければならなかった。
はその菌体成分に抗ＭｌｊＧ活性があることは広く知ら
れているのであるが、従来仰られたものは、菌体もしく
は水溶性もしくは水不溶性高分子細胞構成吻貴であるに
過ぎなかった。歯体もしくは一体円から有効成分を単離
しよりとすれば、菌体を浴−シたり、機械的に破砕した
りして全体を分画しなければならなかった。
このような処理では、精製は複雑となり、有効成分の単
離はきわめて困難でめった。実際に分離し、＋！−効成
分成分て測定された例では分子量２００．０００の蛋白
質が知られている（＋！ｊ公昭４８−４５８４１．・侍
開昭５１−４４６１７）に過ぎないつ本発明者らは、先
にストレプトコッカス属細菌の生産する抗凍瘍性有効成
分を求めて研究した結果、ストレプトコッカス属細菌の
培養の適切な生育期に、ベニ／リンまたはその関連物質
を少加し、更に培養を継続することによって、培地中に
分泌される生理活性物質５ＰＦ−１および５ｐｐ−２゜
抗腫瘍性物質５ｐｐ−ｉ ｏｏを培ｆＰ液中から回収し
、梢襄を行ない、虜規物質として採取した。
離はきわめて困難でめった。実際に分離し、＋！−効成
分成分て測定された例では分子量２００．０００の蛋白
質が知られている（＋！ｊ公昭４８−４５８４１．・侍
開昭５１−４４６１７）に過ぎないつ本発明者らは、先
にストレプトコッカス属細菌の生産する抗凍瘍性有効成
分を求めて研究した結果、ストレプトコッカス属細菌の
培養の適切な生育期に、ベニ／リンまたはその関連物質
を少加し、更に培養を継続することによって、培地中に
分泌される生理活性物質５ＰＦ−１および５ｐｐ−２゜
抗腫瘍性物質５ｐｐ−ｉ ｏｏを培ｆＰ液中から回収し
、梢襄を行ない、虜規物質として採取した。
これらの物質は、高分子透過性大腸菌変異株ＭＰ−２（
ＦｊｊＲＭ−Ｐ５４３２ ） （Ａｇｒ、 Ｂｉｒｏｌ
。
ＦｊｊＲＭ−Ｐ５４３２ ） （Ａｇｒ、 Ｂｉｒｏｌ
。
Ｃｈｅｍ、４６，３７１〜５７Ｂ（１９７９））（以ド
ＭＰ−２株という）に対して生育阻止能を有していた。
ＭＰ−２株という）に対して生育阻止能を有していた。
本発明者らは、ストレプトコッカスｆ４細菌のこの培養
Ｐ液中に、８ＰＰｌ、５ＰＦ−２或いは。
Ｐ液中に、８ＰＰｌ、５ＰＦ−２或いは。
ＳＰＦｌ ００とは別個に、ＭＰ−２株に対して生育阻
止作用を示さないが、抗＠瘍活性を有する両分の存在す
ることを見出すく至ったのである。
止作用を示さないが、抗＠瘍活性を有する両分の存在す
ることを見出すく至ったのである。
本画分の物質は、ＳＰＦ’−１４０と呼称する。
本発明の抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１４０は、培養Ｐ液中に
分泌され、分子量が２５．０００〜７０，０００であり
、ＭＰ−２株に対する抗菌活性を示さないことによって
特徴ずけられる。
分泌され、分子量が２５．０００〜７０，０００であり
、ＭＰ−２株に対する抗菌活性を示さないことによって
特徴ずけられる。
現在までに、溶連菌ＰＡ遵の抗腫瘍性物質で、培養液中
に分泌、蓄積され、分子量数万以下のものは知られてお
らず、更に、本発明の抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１４０は１
元素分析、呈色反応等からペプチド様物質と考えられる
が、紫外線吸収スペクトルから、既矧の抗腫瘍性物質と
は、相異する新規な物質と認められるものである。
に分泌、蓄積され、分子量数万以下のものは知られてお
らず、更に、本発明の抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１４０は１
元素分析、呈色反応等からペプチド様物質と考えられる
が、紫外線吸収スペクトルから、既矧の抗腫瘍性物質と
は、相異する新規な物質と認められるものである。
本発明は、ストレプトコッカス属に属する抗騰瘍性物質
５ＰＦ−１４０生産菌を培養し、培養物から抗腫瘍性物
質ＳＰＦ−１４０を採取することを特徴とする抗腫瘍性
物質５ＰＦ−１４０の製造法を色合するものである。
５ＰＦ−１４０生産菌を培養し、培養物から抗腫瘍性物
質ＳＰＦ−１４０を採取することを特徴とする抗腫瘍性
物質５ＰＦ−１４０の製造法を色合するものである。
本発明においては、ストレゾトコツカス属に属する抗腫
瘍性物質ＳＰＦ−１４０生産菌が広く使用できる、次に
抗腫瘍性物質５ＰＦ−１４０生産菌をｄ己滅する。
瘍性物質ＳＰＦ−１４０生産菌が広く使用できる、次に
抗腫瘍性物質５ＰＦ−１４０生産菌をｄ己滅する。
５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ Ａ
ＴＣＣ２１０６０Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ、
ＡＴＣＣ２１５９７Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴＣＣ２１５４６８ｔｒｅ
ｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴＣＣ２
１５４７Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅ
ｓ ＡＴＣＣ２１５４Ｂ培養液は、肉エキス培地、酵
母エキス培地、プレイン・ハート・イノフユージョｙ培
地（Ｂ Ｈｒ培地）等の天然培地がよく用いられるが、
ストレプトコッカス属細菌の生背に適した培地であれば
任意の培地を使用できる。
ＴＣＣ２１０６０Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ、
ＡＴＣＣ２１５９７Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴＣＣ２１５４６８ｔｒｅ
ｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴＣＣ２
１５４７Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅ
ｓ ＡＴＣＣ２１５４Ｂ培養液は、肉エキス培地、酵
母エキス培地、プレイン・ハート・イノフユージョｙ培
地（Ｂ Ｈｒ培地）等の天然培地がよく用いられるが、
ストレプトコッカス属細菌の生背に適した培地であれば
任意の培地を使用できる。
培養は、ｐｉ−１５，ｏ〜８．０．好ましくは、６．１
〜Ｚ２であり、培１！温度は、３０〜４０’Ｃ，好まし
くは、６５〜３７℃であり、嫌気的に＃置培養または、
撹拌培養を行なうことができる。
〜Ｚ２であり、培１！温度は、３０〜４０’Ｃ，好まし
くは、６５〜３７℃であり、嫌気的に＃置培養または、
撹拌培養を行なうことができる。
本発明においては、培養中に適当な時期に、×ニジリン
または、その関連物質を添／Ｉ口することが、抗腫瘍性
物質ＳＰＦ−１４０の採取に重要な役割をはだすことに
なる。
または、その関連物質を添／Ｉ口することが、抗腫瘍性
物質ＳＰＦ−１４０の採取に重要な役割をはだすことに
なる。
はニジリンまたは、その関連物質の添加時間は。
６７℃の培養で、対数増殖期にかかつて後、６〜２０時
間の間、特に５〜１０時間が好ましい。その後１〜２０
時間、好ましくは、３〜１５時間培養を継続することに
よシ、培養中に抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１４０を多量蓄積
させることができる。
間の間、特に５〜１０時間が好ましい。その後１〜２０
時間、好ましくは、３〜１５時間培養を継続することに
よシ、培養中に抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１４０を多量蓄積
させることができる。
ペニシリンまたはその関連物質としては、すでに知られ
た−”？ ニシリ／と類似の活用をもつ関連物質であれ
ばいかなるものでもよいが、ペニシリンＧが普通用いら
れる。添加竜は、ペニシリンＧで１００〜７０００単位
／ｄ、好ましくは、５００〜５０００単位／４培養液程
度で十分である。
た−”？ ニシリ／と類似の活用をもつ関連物質であれ
ばいかなるものでもよいが、ペニシリンＧが普通用いら
れる。添加竜は、ペニシリンＧで１００〜７０００単位
／ｄ、好ましくは、５００〜５０００単位／４培養液程
度で十分である。
ストンブトコツカス属細菌のはニジリンまたは、その関
連物質の添加培養によって得られた培養液は、遠心分離
によって画体を除去し、戸液に硫安を添加し、５０〜９
ＣＪ％飽和度の画分を分取する。
連物質の添加培養によって得られた培養液は、遠心分離
によって画体を除去し、戸液に硫安を添加し、５０〜９
ＣＪ％飽和度の画分を分取する。
得られだ抗腫瘍性物質５ＰＦ−１４０を含む硫安塩析物
は、凍結状態で保存することもできる。
は、凍結状態で保存することもできる。
この硫安塩析物から抗腫瘍性物質！ＩＩＩＰＦ−１４０
を抽出するには、塩析物を緩衝液に溶解し、イオン交換
体を用いて回分法または流通法により吸着および浴出を
行ない、更にケ゛ル濾過剤を用いるクロマトグラフィー
により、抗腫瘍性物質ＳＰＦ’−１４０を分画する。
を抽出するには、塩析物を緩衝液に溶解し、イオン交換
体を用いて回分法または流通法により吸着および浴出を
行ない、更にケ゛ル濾過剤を用いるクロマトグラフィー
により、抗腫瘍性物質ＳＰＦ’−１４０を分画する。
イオン交換体としては、イオン交換樹脂、イオン交換セ
ルロース、イオン交換セファデックス（ファルマシア社
ｆｉ）、ハイトロキシルアパタイト等が用いられ、ケ゛
ルｐ過剤としては、トヨパールＨＷ５０Ｆ’ｌたはＨＷ
５０ Ｓ Ｆ （東洋ｑ達（株）製）。
ルロース、イオン交換セファデックス（ファルマシア社
ｆｉ）、ハイトロキシルアパタイト等が用いられ、ケ゛
ルｐ過剤としては、トヨパールＨＷ５０Ｆ’ｌたはＨＷ
５０ Ｓ Ｆ （東洋ｑ達（株）製）。
セファデックス（ファルマシア社製）等が用いられる。
イオン交換体への抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１４０の吸着お
よびイオン交換体からの抗腫瘍性物質５ＰＦ−１４０の
溶出は、適切な−と塩濃度の緩衝液が用いられる。更に
、イオン交換体およびゲル濾過剤は２種類以上を組合せ
て用いることもできる。
よびイオン交換体からの抗腫瘍性物質５ＰＦ−１４０の
溶出は、適切な−と塩濃度の緩衝液が用いられる。更に
、イオン交換体およびゲル濾過剤は２種類以上を組合せ
て用いることもできる。
実施例１で得られた抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１４０の凍結
乾燥標品は、淡黄色の粉末であり、次のような理化学的
性質を示すう １、元素分析 Ｃ：４２．５８％〜４１．７９％ Ｈ： ６．１５％〜 ５，９２チ Ｎ：１２．６９％〜１２．５５％ ２、分子量 ゲル濾過法による測定では、分子量約 ２５．０００〜７０．０００である。
乾燥標品は、淡黄色の粉末であり、次のような理化学的
性質を示すう １、元素分析 Ｃ：４２．５８％〜４１．７９％ Ｈ： ６．１５％〜 ５，９２チ Ｎ：１２．６９％〜１２．５５％ ２、分子量 ゲル濾過法による測定では、分子量約 ２５．０００〜７０．０００である。
五 分解点
本物質は１７０℃で褐変し、２４５℃になると黒色とな
り分解する。
り分解する。
４、比旋光度
（ａ）％’＝−７０．０°〜−８０，０°（Ｃ＝１．０
Ｏ）５、紫外線吸収スペクトル 本物質の０．１％の水浴液の紫外線吸収スペクトルは第
１図に示される。２７５ｎｍに吸収極大がみられ特徴的
である。
Ｏ）５、紫外線吸収スペクトル 本物質の０．１％の水浴液の紫外線吸収スペクトルは第
１図に示される。２７５ｎｍに吸収極大がみられ特徴的
である。
６． 赤外巌吸収スにクトル
渠２図に示される。
Ｚ 浴剤に対する溶解性
水に口ｆｍであるが、メタノールには一部溶解シ、エタ
ノール、ｎ−ｆｏＡ／−Ａ／。
ノール、ｎ−ｆｏＡ／−Ａ／。
ｎ−ブタノール、イノブタノール、ｎ−ヘキサン、クロ
ロホルム、アセトン、メチルイソブチルケトン、エチル
エーテル等の溶剤には謔溶又は不溶である。
ロホルム、アセトン、メチルイソブチルケトン、エチル
エーテル等の溶剤には謔溶又は不溶である。
８、塩基性、酸性、中性の区別
本物質の１．０チ水溶液の…は６．５である。
９ 物質の色
淡黄色粉末状である。
ｉｏ、 呈色反応
二／ヒドリン反応 十
ビュウレット反応 十
ローリ−反応 十
そ−リッシュ反応 −
デイシエ反応 −
アンスロン反応 −
システィン硫酸反応 −
１１、安定化
本物質は特に安定化剤を必要としない。
次に本発明における抗菌活性は次の様にして測定する。
抗菌活性
測定にはＭＰ−２を使用して、ＭＰ−２に対する生育阻
止能をもって抗菌活性の指標とする。また、この原理を
利用し九鵜高法（Ｊ、 Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ。
止能をもって抗菌活性の指標とする。また、この原理を
利用し九鵜高法（Ｊ、 Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ。
３５．１３１９〜１３２５（１９８２））にょシ、生理
活性物質の単位を決定する。
活性物質の単位を決定する。
すなわち、バクト・アンチバイオチックメディアム５（
ディ７コ社ｍｌり１．７５％、 寒天１．５１よシ成る
培１（Ｍ５培地）を１２００．１５分加熱殺菌し、２０
１１４ずつシャーレに分注し、放冷してプレート培地を
ｆＪ！４襄する。
ディ７コ社ｍｌり１．７５％、 寒天１．５１よシ成る
培１（Ｍ５培地）を１２００．１５分加熱殺菌し、２０
１１４ずつシャーレに分注し、放冷してプレート培地を
ｆＪ！４襄する。
一方、イブ１−７０．５優、肉エキスα５％、塩化ナト
リウム０．５慢、寒天α８チより成る培地を１２０℃、
１５分加熱殺菌する。その後４２℃の恒温槽に保ち、培
地の温度が４２℃になったらあらかじめ５７℃で１７時
間培養し九ＭＰ−２Ｍをｉ 、７１７中に１０ＪＩ６１
の細胞が存在するように培地中に加えるうピペットによ
って２１Ｌｌを採取し、あらかじめ作製して置いたＭ６
６培地面上に７ＪＯえ、すばやく均一にひろげ固化させ
る。次いで被験液を適当に希釈して、その溶液０．０５
ａ／ｌ−＜−パー・ディスク（直径８属鳳）（東洋Ｐ紙
（株１！りＫＬみ込ませる。このペーパー・ディスクを
前記作製プレート上に置き、５７℃で１７時間培養し、
被験物質によってできる阻止円の観察して抗菌活性を検
査し、阻と円の直径１０１１１１を与える被験物質の生
理活性を測定し、一単位（１ｕ）と定義する。
リウム０．５慢、寒天α８チより成る培地を１２０℃、
１５分加熱殺菌する。その後４２℃の恒温槽に保ち、培
地の温度が４２℃になったらあらかじめ５７℃で１７時
間培養し九ＭＰ−２Ｍをｉ 、７１７中に１０ＪＩ６１
の細胞が存在するように培地中に加えるうピペットによ
って２１Ｌｌを採取し、あらかじめ作製して置いたＭ６
６培地面上に７ＪＯえ、すばやく均一にひろげ固化させ
る。次いで被験液を適当に希釈して、その溶液０．０５
ａ／ｌ−＜−パー・ディスク（直径８属鳳）（東洋Ｐ紙
（株１！りＫＬみ込ませる。このペーパー・ディスクを
前記作製プレート上に置き、５７℃で１７時間培養し、
被験物質によってできる阻止円の観察して抗菌活性を検
査し、阻と円の直径１０１１１１を与える被験物質の生
理活性を測定し、一単位（１ｕ）と定義する。
次に本発明の実施例を示す。
々ｔｔｔ＊ｆ！／す１
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２−１０６０をＢＨＩ培地１００ｄに接種して３７
℃、８時間静置培ａをおこなって侍た柿培養液を第１表
に示す培地Ａ１ ｇＫ接棟し、種培養と同一条件で嫌気
的に前培養を行った。
ＣＣ２−１０６０をＢＨＩ培地１００ｄに接種して３７
℃、８時間静置培ａをおこなって侍た柿培養液を第１表
に示す培地Ａ１ ｇＫ接棟し、種培養と同一条件で嫌気
的に前培養を行った。
第１ 表 培地人
肉エキス １．０チ
ポリはプトン １． Ｏチマルトース
α５％ 酵母エキス Ｑ、２５チ酸性第−燐酸カ
リウム α１チ ［１１！−’ｒグネシウＡ ０．０５＊…
＝６．８ １０１ジャーファーメンタ−に培地Ａ８１を投入して１
２０℃、１０分間加熱殺菌後、５７℃まで冷却して、前
培養液１１を接種し、３７℃、１５．５時間、…６．５
，３００回転／分で撹拌しながら嫌気的に培養する。次
いでペニシリンＧ５０００単位／ｄ培養液になるように
添加して、培養を更に５時間継続した。得られた培養液
を遠心分離にかけて、菌体を除去した。
α５％ 酵母エキス Ｑ、２５チ酸性第−燐酸カ
リウム α１チ ［１１！−’ｒグネシウＡ ０．０５＊…
＝６．８ １０１ジャーファーメンタ−に培地Ａ８１を投入して１
２０℃、１０分間加熱殺菌後、５７℃まで冷却して、前
培養液１１を接種し、３７℃、１５．５時間、…６．５
，３００回転／分で撹拌しながら嫌気的に培養する。次
いでペニシリンＧ５０００単位／ｄ培養液になるように
添加して、培養を更に５時間継続した。得られた培養液
を遠心分離にかけて、菌体を除去した。
培養Ｆ液には硫酸アンモニウムを添加し、５０〜９０チ
飽和度で沈澱する画分を分取した。この沈澱物はＭＰ−
２の生育を阻止する生理活性物質３８１、 ＯＸ １０
’ ｕを含有していた。、この沈澱物を、ｌＸ１０−２
Ｍ、ｐａ−１７：０の燐酸緩衝液Ｏ伍ぼ０４− Ｎａ１
ＨＰＯ４）３００１１１に溶解し、この水溶液をＤＢ人
Ｅセルローズカラム（５ｘ７０ｃＩＩＬ）に吸着させた
後、α３Ｍ塩化ナトリウムを含む上記燐酸緩衝液を用い
て、段階的に溶出させ、２８３．４ｘ１０’Ｕの生理活
性画分を分取した。この生理活性画分をＤＢＡＩ！ｆセ
ファデックス人−２５カラム（２，６×７０（、ＩＩＬ
）に吸着させ、次いで上記燐酸緩衝液中の塩化ナトリウ
ム濃度を直線的に上昇させて溶出を行ない、２４９．６
Ｘ １０’ ｕの生理活性区分を分取した。更に、こ
の溶出液を濃縮し、ゲルー過剤トヨパールＨＷ５０Ｆカ
ラム（２，６Ｘ １００ｃｍ）に加えて、ゲル濾過を行
ない、非抗菌活性画分を分取して、凍結乾燥し抗腫瘍性
物質５ＰＦ−１４０６４０＝９を得た。
飽和度で沈澱する画分を分取した。この沈澱物はＭＰ−
２の生育を阻止する生理活性物質３８１、 ＯＸ １０
’ ｕを含有していた。、この沈澱物を、ｌＸ１０−２
Ｍ、ｐａ−１７：０の燐酸緩衝液Ｏ伍ぼ０４− Ｎａ１
ＨＰＯ４）３００１１１に溶解し、この水溶液をＤＢ人
Ｅセルローズカラム（５ｘ７０ｃＩＩＬ）に吸着させた
後、α３Ｍ塩化ナトリウムを含む上記燐酸緩衝液を用い
て、段階的に溶出させ、２８３．４ｘ１０’Ｕの生理活
性画分を分取した。この生理活性画分をＤＢＡＩ！ｆセ
ファデックス人−２５カラム（２，６×７０（、ＩＩＬ
）に吸着させ、次いで上記燐酸緩衝液中の塩化ナトリウ
ム濃度を直線的に上昇させて溶出を行ない、２４９．６
Ｘ １０’ ｕの生理活性区分を分取した。更に、こ
の溶出液を濃縮し、ゲルー過剤トヨパールＨＷ５０Ｆカ
ラム（２，６Ｘ １００ｃｍ）に加えて、ゲル濾過を行
ない、非抗菌活性画分を分取して、凍結乾燥し抗腫瘍性
物質５ＰＦ−１４０６４０＝９を得た。
この抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１４０を被験物質とした抗腫
瘍性物質は、実験例１および２に示す。
瘍性物質は、実験例１および２に示す。
実権例２
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を第２表に示す培地Ｂを用いて、実施例
１と同様にして培養した。この場合ベニ’／！ＪンＧ＃
ｆ、１０００単位／Ｍｌ培養液となるように添加した。
ＣＣ２１０６０を第２表に示す培地Ｂを用いて、実施例
１と同様にして培養した。この場合ベニ’／！ＪンＧ＃
ｆ、１０００単位／Ｍｌ培養液となるように添加した。
この培養Ｐ液を実施例１と同様に精製して、抗腫瘍性物
質ＳＰＦ−１４０７６７Ｉ９を得た。
質ＳＰＦ−１４０７６７Ｉ９を得た。
第２表 培地Ｂ
肉エキス ０．５チ
ポリはプトン １． ＣＩ Ｌｓ酵母エキス
０．２５チ 塩化ナトリウム ０．１％ ｐｉ（＝６．７ 実施例３ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を第３表に示す培地Ｃを用いて、実施例
１と同様にして培養した。この培養Ｆ液を実施例１と同
様セして精製して、抗腫４性物質５ＰＦ１４０ ５２７
雫を得た。
０．２５チ 塩化ナトリウム ０．１％ ｐｉ（＝６．７ 実施例３ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を第３表に示す培地Ｃを用いて、実施例
１と同様にして培養した。この培養Ｆ液を実施例１と同
様セして精製して、抗腫４性物質５ＰＦ１４０ ５２７
雫を得た。
第６表 培地Ｃ
肉エキス １．０％
ポリにプトン １．０俤
マルトース ０．５ ％
酵母エキス ０．２５チ
酸性第−燐酸カリウム ｏ、ｉ＊
イ流酸マグネ７ウム” α０５チ項化ナトリウム
Ｏ，Ｓチ ｍ＝ ６．５ 実施例４ ８ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を第４表に示す培地りを用いて、実施例
１と同様にして培養した。この１合、にニアリンＧは、
１０００単位／ｄ培養となるように添加したっこの培養
（戸数を実施列１と同様にして精製して抗腫瘍性物質５
ＰＦ−１４０８３０ダを傅た。
Ｏ，Ｓチ ｍ＝ ６．５ 実施例４ ８ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を第４表に示す培地りを用いて、実施例
１と同様にして培養した。この１合、にニアリンＧは、
１０００単位／ｄ培養となるように添加したっこの培養
（戸数を実施列１と同様にして精製して抗腫瘍性物質５
ＰＦ−１４０８３０ダを傅た。
第４衣 培地Ｄ
マルトース ０．８％
ポリはプトン ０．１％
酵母エキス Ｏ，Ｖ％
酸性ｒルー燐酸カリウム １．４５慢硫埴マグネシウ
ム ０．５８５チ硝酸カリウム １
． Ｏチ！利＝６．５ 実施例５ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を第５表に示す培地Ｂを用いて、実施例
１と同様にして培養した。この場合、ハニシリンＧは、
１０００単位／ｄ培讐液となるように添加した。この培
養Ｐ液を実施例１と同様にして精製して、抗腫瘍性物質
１９ＰＦ−１４０５７０Ｉｎ９を得た。
ム ０．５８５チ硝酸カリウム １
． Ｏチ！利＝６．５ 実施例５ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を第５表に示す培地Ｂを用いて、実施例
１と同様にして培養した。この場合、ハニシリンＧは、
１０００単位／ｄ培讐液となるように添加した。この培
養Ｐ液を実施例１と同様にして精製して、抗腫瘍性物質
１９ＰＦ−１４０５７０Ｉｎ９を得た。
第５表 培地Ｅ
マルトース α３％
カザミノ酸 ０．５％
酵母エキス １．０係
酸性第−燐酸カリウム ０．５％
ｇｔｒｓマグネシウム ０．１％塩化ナトリウム
０．１％ 硝酸カリウム ０．５％ ｍ＝６．５ 実験例１ ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｉｃおける被検薬の抗腫瘍活性測定
試験は細胞阻害度測定法にもとづいて実施した。
０．１％ 硝酸カリウム ０．５％ ｍ＝６．５ 実験例１ ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｉｃおける被検薬の抗腫瘍活性測定
試験は細胞阻害度測定法にもとづいて実施した。
肺癌細胞としてはＬ −５１７Ｂ Ｙ （Ｌｅｕｋｅｍ
ｉａ ）を用い、これを１０チＦＣ８箔加ＲＰＭＩ １
６４０培地（５、ｑｒｙ、／ ｌカナマイシン含有）に
懸濁した。
ｉａ ）を用い、これを１０チＦＣ８箔加ＲＰＭＩ １
６４０培地（５、ｑｒｙ、／ ｌカナマイシン含有）に
懸濁した。
この培養液０．４５ｍをファルコン２０５８チューブに
圧加し、細胞数がＩ Ｘ １０５ｃｅｌｊｌ ／ ｔｕ
ｂｅ になるようにした。仄いてこの培養液に所定量
の被検薬（抗腫瘍性＊質ＳＰＦ’−１４０をＱ、３５ｍ
／の培養液に溶解）を圧加して、５７℃で５チω、存在
Ｆに培養した。彼検薬を添加して４８時間後にトリノξ
ンブルーによる染色をおこない、次式により−ｄ帖阻害
変を算出した。
圧加し、細胞数がＩ Ｘ １０５ｃｅｌｊｌ ／ ｔｕ
ｂｅ になるようにした。仄いてこの培養液に所定量
の被検薬（抗腫瘍性＊質ＳＰＦ’−１４０をＱ、３５ｍ
／の培養液に溶解）を圧加して、５７℃で５チω、存在
Ｆに培養した。彼検薬を添加して４８時間後にトリノξ
ンブルーによる染色をおこない、次式により−ｄ帖阻害
変を算出した。
実ｍξ例１で得らまた抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１４０を被
検薬とした結果を！６表に示す。
検薬とした結果を！６表に示す。
第 ６ 表 細胞阻害度■
ＳＰＦ’−１４０（＝ｎ９／ｍ／） Ｌ−５１７８
Ｙ２．０ １５４ １．０ １１．！１ 実験例２ １幀ｖｏにおける被検薬の抗腫瘍活性試験はＣＲＪ−Ｃ
Ｄ−１（ＩＣＲ系、雌性、５週齢）マウスを１！２用し
て実施した。
Ｙ２．０ １５４ １．０ １１．！１ 実験例２ １幀ｖｏにおける被検薬の抗腫瘍活性試験はＣＲＪ−Ｃ
Ｄ−１（ＩＣＲ系、雌性、５週齢）マウスを１！２用し
て実施した。
腫瘍細胞としてはＳａｒｃｏｍａ −１８０腹水癌細胞
を用い、これを生理食塩水に浮遊させ、マウスの腹腔内
Ｋ Ｏ，２ｍ （細胞数Ｉ Ｘ １０’ ｃｅｌｌｌｓ
）接種した。
を用い、これを生理食塩水に浮遊させ、マウスの腹腔内
Ｋ Ｏ，２ｍ （細胞数Ｉ Ｘ １０’ ｃｅｌｌｌｓ
）接種した。
この腫瘍細胞接種後、１日１回７日間遅続して被検薬の
所定量を腹腔内に投与して、その生存数を観察した。
所定量を腹腔内に投与して、その生存数を観察した。
実施例１で得られた抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１４０を被検
薬とした結果を第７表に示す。
薬とした結果を第７表に示す。
第 ７ 表 ＳＰＦ−１４０の抗腫瘍活性−マウスの
生存数 日 数 投与ｔ（Ｉｎ９） ０ １０ １５ ２０
２５ ５０対照 ５１５ ２１５ １１５ ０１５
０１５ ０１５０．３ ５１５ ５１５
５１５ ４／〆５ ４／コ ６１５ま
た、延命率＝被検動物群の平均生存日数／対照動物群の
平均生存日数×１００は２７０％であった。
生存数 日 数 投与ｔ（Ｉｎ９） ０ １０ １５ ２０
２５ ５０対照 ５１５ ２１５ １１５ ０１５
０１５ ０１５０．３ ５１５ ５１５
５１５ ４／〆５ ４／コ ６１５ま
た、延命率＝被検動物群の平均生存日数／対照動物群の
平均生存日数×１００は２７０％であった。
８１図は抗腫瘍性物’］ＳＰＦ’−１４００，１％水溶
液の紫外線吸収ス×クトルを示し、第２図は同じく赤外
線吸収スペクトルを示す。
液の紫外線吸収ス×クトルを示し、第２図は同じく赤外
線吸収スペクトルを示す。
Claims (3)
- （１）下記の理化学的性質を有する抗腫瘍性物質ＳＰＦ
−１４０。 １、元素分析 Ｃ：４２．５８％〜４１．７９％、 Ｈ：６．１５％〜５．９２％、 Ｎ：１２．６９％〜１２．３５％ ２、分子量 ゲル濾過法による測定では、分子量約 ２５，０００〜７０，０００である。 ３、分解点 本物質は、１７０℃で褐変し、２４５ ℃になると黒色となり分解する。 ４、比旋光度 〔α〕＾２＾０＿Ｄ＝−７０．０°〜−８０．０°（Ｃ
＝１．００）５、紫外線吸収スペクトル 本物質の０．１％の水溶液の紫外線吸収 スペクトルは第１図に示される。 ２７５ ｎｍに吸収極大がみられ、特徴的であ る。 ６、赤外線吸収スペクトル 第２図に示される。 ７、溶剤に対する溶解性 水に可溶であるが、メタノールには一 部溶解し、エタノール、ｎ−プロパノ ール、ｎ−ブタノール、イソブタノー ル、ｎ−ヘキサン、クロロホルム、ア セトン、メチルイソブチルケトン、エ チルエーテル等の溶剤には難溶又は不 溶である。 ８、塩基性、酸性、中性の区別 本物質の１．０％水溶液のｐＨは６．５である。 ９、物質の色 淡黄色粉末状である。 １０、呈色反応 ニンヒドリン反応 ＋ ビュウレット反応 ＋ ローリー反応 ＋ モーリッシュ反応 − デイシエ反応 − アンスロン反応 − システイン硫酸反応 − １１、安定化 本物質は、特に安定化剤を必要としな い。 - （２）ストレプトコッカス属に属する抗腫瘍性物質ＳＰ
Ｆ−１４０生産菌を培養し、培養物から抗腫瘍性物質Ｓ
ＰＦ−１４０を採取することを特徴とする抗腫瘍性物質
ＳＰＦ−１４０の製法。 - （３）ストレプトコッカス属に属する抗腫瘍性物質ＳＰ
Ｆ−１４０生産菌を培養するに際し、培養中の適当な時
期にペニシリン又はその関連物質を添加して培養するこ
とを特徴とする特許請求の範囲第２項に記載の抗腫瘍性
物質ＳＰＦ−１４０の製法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59190560A JPS6169725A (ja) | 1984-09-13 | 1984-09-13 | 抗腫瘍性物質ｓｐｆ−１４０及びその製法 |
| GB08522309A GB2164338B (en) | 1984-09-13 | 1985-09-09 | Tumoricidal substance spf-140 and process for the preparation thereof |
| DE3532321A DE3532321C2 (de) | 1984-09-13 | 1985-09-11 | Tumorizide Substanz SPF-140 und Verfahren zu deren Herstellung |
| NL8502483A NL8502483A (nl) | 1984-09-13 | 1985-09-11 | Geneesmiddel spf-140 met een werking tegen tumoren, en werkwijze voor de bereiding hiervan. |
| SE8504228A SE461222B (sv) | 1984-09-13 | 1985-09-12 | Tumoerdoedande aemne spf-140 och foerfarande foer framstaellning daerav |
| FR8513603A FR2569983B1 (fr) | 1984-09-13 | 1985-09-13 | Substance tumoricide spf-140 et procede pour sa preparation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59190560A JPS6169725A (ja) | 1984-09-13 | 1984-09-13 | 抗腫瘍性物質ｓｐｆ−１４０及びその製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6169725A true JPS6169725A (ja) | 1986-04-10 |
| JPH0156073B2 JPH0156073B2 (ja) | 1989-11-28 |
Family
ID=16260095
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59190560A Granted JPS6169725A (ja) | 1984-09-13 | 1984-09-13 | 抗腫瘍性物質ｓｐｆ−１４０及びその製法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6169725A (ja) |
| DE (1) | DE3532321C2 (ja) |
| FR (1) | FR2569983B1 (ja) |
| GB (1) | GB2164338B (ja) |
| NL (1) | NL8502483A (ja) |
| SE (1) | SE461222B (ja) |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS557014A (en) * | 1978-06-29 | 1980-01-18 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | Antitumor agent and its preparation |
| JPS5632492A (en) * | 1979-08-28 | 1981-04-01 | Mitsui Toatsu Chem Inc | Antitumor active substance, its preparation and pharmaceutical |
| JPS58222026A (ja) * | 1982-06-18 | 1983-12-23 | Masahiro Yoshimura | 抗ガン性物質 |
| JPS6092218A (ja) * | 1983-10-26 | 1985-05-23 | Juzo Udaka | 抗腫瘍性物質の製造法 |
| DE3581091D1 (de) * | 1984-03-09 | 1991-02-07 | Advance Kk | Anti-karies- oder anti-periodontitismittel. |
-
1984
- 1984-09-13 JP JP59190560A patent/JPS6169725A/ja active Granted
-
1985
- 1985-09-09 GB GB08522309A patent/GB2164338B/en not_active Expired
- 1985-09-11 DE DE3532321A patent/DE3532321C2/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-09-11 NL NL8502483A patent/NL8502483A/nl not_active Application Discontinuation
- 1985-09-12 SE SE8504228A patent/SE461222B/sv not_active IP Right Cessation
- 1985-09-13 FR FR8513603A patent/FR2569983B1/fr not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB8522309D0 (en) | 1985-10-16 |
| NL8502483A (nl) | 1986-04-01 |
| GB2164338B (en) | 1988-05-05 |
| JPH0156073B2 (ja) | 1989-11-28 |
| SE8504228L (sv) | 1986-03-14 |
| FR2569983A1 (fr) | 1986-03-14 |
| DE3532321C2 (de) | 1994-04-07 |
| SE8504228D0 (sv) | 1985-09-12 |
| GB2164338A (en) | 1986-03-19 |
| SE461222B (sv) | 1990-01-22 |
| FR2569983B1 (fr) | 1988-08-19 |
| DE3532321A1 (de) | 1986-03-27 |
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