BE531164A

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Publication number: BE531164A
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Description


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   Une technique connue est de préparer l'insuline à'teneur en zinc renforcée, tant sous forme cristalline que sous forme aqueuse, en ajoutant de l'insuline à des milieux aqueux dans lesquels elle est insoluble, ou seulement légèrement soluble, et qui contiennent un sel de zinc et un pH de 6 à 7, avec adaition facultative d'acétbne, en quantité allant jusqu' à 8 % en poids, pour dissoudre l'insuline amorphe et favoriser la cristallisation. 



   Une autre technique connue consiste à préparer des suspensions ou solutions injectables d'insuline, ainsi que l'insuline globine, l'insuline protamine et l'insuline méthylalbumine, avec différentes teneurs en zinc, et ce, aussi bien en partant de l'insuline à l'état amorphe qu'à l'état cristallin. 



   Le produit est insoluble, ou seulement légèrement soluble, dans les milieux aqueux dont le pH est celui du sang, et il est donc utilisable en thérapie médicale, quand on désire un effet d'insuline retardé. Une suspension de particules amorphes ou cristallines d'insuline à teneur en zinc renforcée (de solubilité insignifiante au pH de l'organisme, et par suite lentement résorbables) est utilisée directement pour l'injection. 



  La solution peut être isotonique au sang. 



  On a prouvé qu'il était possible de préparer l'insuline de zinc,avec un rendement de pratiquement   100% ..en   mettant   l'insuline.....amorphe   ou   cristalli-   ne en présence de l'ammoniac ou ae milieux organiques, tels que des bases organiques faibles - y compris les amines, les amides et pyridines - ainsi que les phénols, crésols, acides organiques tels que l'acide   acéique   glacial, l'acide lactique, l'acide glycolique, l'acide propionique, ou l' acide formique, les alcools monovalents ou polyvalents ou leurs combinaisons ou dérivés, tels que les esters et éthers, les cétones et les dérivés halogénés ou thio-dérivés de ces substances, pour faire réagir l'insuline sur des composés chimiques de zinc dissous dans un ou plusieurs de ces milieux. 



   Suivant l'invention, il peut être utile que les solutions de zinc dans ces agents contiennent de l'eau. 



   Suivant l'invention, il peut être utile d'utiliser des solvants dans lesquels l'insuline est soluble l'insuline étant utilisée en solution dans un ou plusieurs de ces solvants. 



   Il peut encore, suivant l'invention, être utile, de faire réa- gir l'insuline, sous forme solide, sur l'une de ces solutions de zinc, en l'y suspendant. Les particules cristallines ou amorphes d'insuline se com- binent facilement avec les composés de zinc dissous. 



   Quand on emploie des milieux aqueux, il peut être utile d'ajou-   ter une substance telle que NH3, NH4Cl, pour éviter la précipitation de l' hydroxyde de zinc.   



   Toute l'opération peut, bien entendu, être conduite en milieu stérile. 



   Le résultat du présent procédé est que - contrairement aux mé- thodes précédemment connues - et peut-être sans influence de la concentra- tion en ions   hydrogène,   il sera possible de régler, de façon sure et sim- ple, la quantité de zinc absorbée par 1' insuline, et plus particulière- ment, de réaliser une insuline de zinc cristallisée, à teneur en zinc ren- forcée. 



   L'insuline ordinaire contient un nombre de groupes carboxyles tel qu'une combinaison insuline-zinc peut contenir au maximum 2,72 % de zinc en combinaison avec ces groupes, et on peut supposer que, dans les préparations suivant l'invention, le zinc se trouve combiné de cette ma- nière là avec l'insuline jusqu'à concurrence d'une quantité correspondante, 

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 tandis qu'une quantité supplémentaire facultative de zinc peut être combinée avec l'insuline d'autres manières, car l'hydroxyde de zinc ne peut se former par le procédé suivant l'invention. 



   Aux suspensions injectables d'insuline de zinc conformes à l'invention on peut ajouter des ions de zinc, calcium ou magnésium. 



     EXEMPLE   1 
On suspend 1 gr d'insuline cristalline dans 100 cm3 d'alcool éthylique absolu contenant 5 mgr de zinc par cm3 sous la forme d'un sel soluble de zinc. Après avoir agité pendant 2 heures, on isole les cristaux par filtration, on lave à l'alcool éthylique et on dessèche. Ils   contien-   nent environ 5 % de zinc. 



   Suivant une variante, on peut isoler les cristaux par séparation centrifuge. 



   EXEMPLE 2 
On suspend 1 gr d'insuline cristallisée dans 100 cm3 d'alcool éthylique absolu contenant 2,5 mg de zinc par cm3 sous la forme d'un sel soluble de zinc. Après avoir agité pendant 2 heures, on isole les cristaux comme ci-dessus, on les lave à l'alcool éthylique et on dessèche, Ils contiennent environ   4 %   de zinc. 



   EXEMPLE 3 
On suspend 1 gr d'insuline cristallisée dans 100 em3 d'alcool éthylique absolu contenant 0,5 mg de zinc par   cm3,   sous la forme d'un sel soluble de zinc. Après avoir agité pendant 2 heures, on isole les cristaux comme ci-dessus, on lave à l'alcool éthylique et on dessèche. Ils contiennent environ 3,5   %   de zinc. 



   EXEMPLE 4 
On suspend 1 gr d'insuline cristalline dans 100 cm3 d'alcool éthylique absolu contenant 0,3 mg de zinc par   cm3,   sous la forme d'un sel soluble de zinc. Après avoir agité pendant 2 heures, on isole les cristaux comme ci-dessus, on lave à l'alcool éthylique et on dessèche. Ils contiennent   environ 3 %   de zinc. 



   Si l'on utilise seulement 0,1 mg de zinc par cm3, les cristaux contiendront environ 1,5 % de zinc. 



    EXEMPLE   
On suspend 1 gr d'insuline dans 100 gr de phénol fondu anhydre contenant 1 % de zinc sous forme de ZnCl2. Après avoir agité pendant 2 heures, on ajoute un volume égal d'alcool éthylique, on isole les cristaux comme ci-dessus, on lave à l'alcool éthylique et on dessèche. Les cristaux contiennent environ 5 % de zinc. 



   EXEMPLE 6 
On suspend 1 gr d'insuline dans 100 cm3 d'alcool benzylique contanant 20 mg de zinc sous la forme de ZnCl2. Après avoir agité pendant 2 heures, on isole les cristaux comme ci-dessus, on lave à l'alcool éthylique et on dessèche. Les cristaux contiennent environ 2 % de zinc. 



   EXEMPLE 7 
On suspend 1 gr d'insuline cristalline dans 100 cm3 d'acétone contenant 5 mg de zinc par cm3 sous la forme d'un sel soluble de zinc. 



  Après avoir agité pendant 2 heures, on isole les cristaux comme ci-dessus on lave à l'acétone et on dessèche. Les cristaux contiennent environ 5 % de zinc. 

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   On suspend 1 gr d'insuline cristalline dans 100 cm3 de pyridine contenant   10   mg de zinc par cm3, sous la forme d'un sel soluble de zinc. 



   Après avoir agité pendant 2 heures, on isole les cristaux comme ci-dessus, on lave à l'alcool et on dessèche. Les cristaux contiennent environ 3 % de zinc. 



    EXEMPLE   
On suspend 1 gr d'insuline cristalline dans 100 cm3 d'acide a- cétique glacial contenant 5 mg de zinc par cm3 sous la forme d'un sel soluble 'de   zinc.Après   avoir agité pendant 2 heures, on isole les cristaux comme ci-dessus, on lave à l'alcool éthylique et on dessèche. Les cristaux con- tiennent environ 5 % de zinc. 



   EXEMPLE 10 
On suspend 1 gr d'insuline cristalline dans 100 cm3 d'un mélan- ge d'alcool et d'eau contenant 35 % en volume d'alcool éthylique. Le mé- lange contient 10 mg de zinc par cm3 sous forme de chlorure de zinc. La solution a un pH de 4,5. Après avoir agité pendant 2 heures, on isole les cristaux comme ci-dessus, on lave à l'alcool éthylique et on dessèche. 



  Les cristaux ont une teneur en zinc d'environ 3,5 %. 



   Si le mélange alcool-eau contient   20 %   en volume d'alcool éthy- lique et 1 mg de zinc par cm3, et si l'on conduit le procédé à un pH de 4,7, les cristaux d'insuline présenteront une teneur en zinc d'environ 1,7 %. 



    EXEMPLE il    
On suspend 1 gr d'insuline cristalline dans 100 cm3 d'un mélan- ge d'alcool et d'eau contenant 15 % en volume d'alcool éthylique. Le mé- lange contient 10 mg de zinc par cm3 sous forme de chlorure de zinc. Après avoir agité pendant 2 heures, on isole les cristaux comme ci-dessus, on lave à l'alcool éthylique et on dessèche. Les cristaux présentent   une   te- neur en zinc d'environ 2   %.   



   EXEMPLE 12 
On suspend 1 gr d'insuline cristalline dans 100 cm3 d'un mélan- ge d'alcool et d'eau contenant 50 % en volume d'alcool éthylique. Le mé- lange contient 10 mg par cm3 de zinc sous forme de chlorure de zinc. On ajoute au mélange une solution de NH3-NH4 Cl afin d'obtenir un pH de 7. 



  Après 2 heures d'agitation, on isole les cristaux comme ci-dessus, on la- ve à l'alcool éthylique et on dessèche. Les cristaux contiennent environ 7 % de zinc. 



   EXEMPLE13 
On suspend 1 gr d'insuline cristalline dans 100 cm3 d'un mélan- ge d'eau et d'alcool contenant 35 % en volume d'alcool éthylique. Le mé- lange contient 10 mg de zinc par cm3 sous forme de chlorure de zinc. On   ajoute au mélange une solution de NH -NH Cl pour obtenir un pH de 7. Après avoir agité pendant 2 heures, on isole les cristaux comme ci-dessus,   on lave à l'alcool éthylique et on dessèche. Les cristaux contiennent environ 5,5 % de zinc. 



   EXEMPLE 14 
On suspend 1 gr d'insuline cristalline dans 100 cm3 d'un mélan- ge d'alcool et d'eau contenant 15 % en volume d'alcool éthylique. Le mé- lange contient 10 mg de zinc par cm3 sous la forme de chlorure de zinc. 



  On ajoute au mélange une solution de NH3-NH4 Cl pour obtenir un pH de 7. 



  Après 2 heures d'agitation, on isole les cristaux comme ci-dessus, on 

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 lave à l'alcool éthylique et on dessèche. Les cristaux contiennent enviviron 5 % de zinc. 



   Dans tous les exemples ci-dessus, on peut utiliser l'insuline amorphe au lieu de l'insuline cristalline. 



    EXEMPLES  
On suspend 1 gr d'insuline cristalline dans 100 cm3 d'alcool éthylique à 30 % en poids, contenant 2,3 mg de zinc par cm3 et ayant un pH de 4,4. L'insuline se dissout partiellement. On sépare par filtration la partie non dissoute des cristaux, on lave à l'alcool éthylique et on dessèche. Ils contiennent 2,2 % de zinc. On amène le pH du filtrat à 6,3. L' insuline amorphe se précipite, on la lave à l'alcool éthylique et on la dessèche. L'insuline amorphe a une teneur en zinc d'environ 4,5 %. 



   REVENDICATIONS
1. Procédé de préparation de l'insuline de zinc à teneur en zinc renforcée, caractérisé en ce que l'insuline, sous :fine forme quelconque, en présence d'ammoniac ou de milieux organiques tels que les bases organiques, les phénols, crésols, acides organiques, alcools monovalents ou polyvalents ou composés ou dérivés de ceux-ci, cétones et dérivés halogénés ou thio-dérivés de ces substances, est amenée à réagir sur des composés de zinc dissous dans un ou plusieurs de ces milieux.

Claims

2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que les solutions contiennent de l'eau.

3. Procédé suivant l'une ou l'autre des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que l'insuline est traitée en solution dans un ou plusieurs des milieux en question dans lesquels l'insuline est soluble.

4. Procédé suivant l'une ou l'autre des revendications 1 et 2, caractérisé en ce qu'on fait réagir l'insuline sous forme solide sur l' une de ces solutions de zinc.

5. Procédé suivant la revendication 2, caractérisé en ce qu'on ajoute une substance empêchant la précipitation de l'hydroxyde de zinc.

6. Combinaisons insuline-zinc sous n'importe quelle forme, contenant 2,75 à 8 % de zinc chimiquement combiné à l'insuline sous n'importe quelle forme.

7. Suspension aqueuse de combinaisons injectables insuline-zinc sous n'importe quelle forme, préparée suivant l'une ou l'autre des revendications 1 à 6.

8. Suspension suivant la revendication 7, contenant au moins un des métaux choisis dans le groupe comprenant le zinc, le magnésium et le calcium.

9. Suspension dans des substances organiques résorbables de qombinaisons insuline-zinc préparées suivant l'une ou l'autre des revendications 1 à 6.