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On sait qu'on peut oxygéner ou déshydrogéner des stéroïdes présentant une configuration naturelle, à l'aide de microorganismes, c'est-à-dire introduire des hydroxyles ou des groupes oxo ou des doubles liaisons, ou transformer des hydroxyles en groupes oxo. Or, la demanderesse a fait - l'observation surprenante que les d,#-stéroïdes se comportent différemment vis-à-vis de ces microorganismes, pratiquement
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seule la forme d, c'est-à-dire la forme énantiomorphe correspondant aux stéroïdes naturels, étant oxydée, alors que la formel reste inchangée.
Cette constatation a donc conduit à un nouveau procédé de scission de racémates qui permet d'ob- tenir, à côté des d-stéroïdes oxydés, les #-stéroïdes qui, jusqu'à présent, n'avaient été rencontrés que dans de rares cas.
Ce nouveau procédé est caractérisé par le fait qu'on fait agir des enzymes oxydantes produites à l'aide de cultures aérobies de microorganismes, sur des d,#-stéroïdes, et qu'on isole au moins l'une des formes énantiomorphes. Des enzymes oxydantes sont celles qui sont capables soit d'introduire de l'oxygène dans la molécule de stéroïde, soit d'en enlever de l'hydrogène.
Des substances de départ pour le nouveau procédé sont en général des d,#-stéroïdes saturés et non saturés, portant des substituants quelconques, par exemple des d,#-composés des séries du cholestane, du coprostane, du cholane, du spirostane, d furostane, du bufanolide, du cardanolide, de l'oestrane, notamment ceux de la série du prégnane, de l'androstane et du testane, ainsi que leurs homologues supérieurs et inférieurs, par exemple les A-nor, D-homo, et 19-nor-composés correspondants Des doubles liaisons se trouvent par exemple en position 1 et/ou 4, 5, 6, 7, 9, 11, 14, 15 et/ou 16.
Comme substituants, on envisage en particulier des groupes hydroxyles, oxo ou
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carboxyliques libres ou fonctionnellemont modifiés, par exemple des groupes ester, éther, th')ester, thioéther, thiol-
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et thion-ester, acétal, mercaptal, cétal, hydrazone, semi- carbasone et des groupes énoliques, par exemple en position
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2, 3, 6, 7, 11, 12, 16, 17, 18, 19, 20 et 21, ainsi que des
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atomes d'halogène, en particulier de chlore ou de fluor, par exemple en position 9 et 17.
Il est particulièrement intéres- sant de mettre en oeuvre ce nouveau procédé dans le cas de
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composés d1?-prégnanlqueso Des substances de départ spécifiques de cette série sont, entre autres, la d, /-progestérone, la d$'?e- 17a-progestérone, la d,-l6a-hydrosy -progestérone, la d,t:-17a- hydroxyprogesté3*on, la d,-e-11-oxo-progestêrone, la d,'-lla- ainsi que la d,*113-hydroxy-progeotérone, la d,t-9,11- ou -ll,12-déhydï>o-prosestéroneJ, la d..t-19-o,w-progeetérol'H3, la d,''6'-ll-O3s:o¯17a-h.yd3.'ioxîy¯pï'ogestérone, la d,-I-11a- ainsi que la d..t:11-hYdOXY-17a-hYdroXy-progeatérone, la d,if-9-chloro- ou -9-fluoro-lip,i7a-dîhsrdrosy-progestéron, la dj,f-ll,l8-di- hydrorcy-progestérone, la d,-11,17,18-trlhYdroxy-proggtérone, la d..';
-11-hYàroXY-18-oxo-progestérone, la d..9-chloro- ou -9-fluoro-lip-hydroxy-l8-oxo-progeatérone, la Ci ,-{-Il ,18-dloxo- progestérone, la d,e-19-nor-progeatérone, la d,-19-nor-lip- hydro:ty-l8-oxo-progestérone, la d,C-cortexone, la d,118- hydroxy- et la d,-l8-oso-cort@sone, la d,t-oortîsone, la d,if# hydrocortisone, la d,t-17a;-hyctroxycortéxone, la d,if-aldos- térone, la d,le-prégnénolone, les 1-déhydro-composés corres-
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pondants, par exemple la d, -3-dhydro-progest:one, la d,-;;":l- déhydro-17-a-hydroxy-progestérone, la d, 1--déhyd=o-1-oxo-- proge3téror.e, la d, 1-dhydr o-11-a-hydro:y--p9ogestrone ou la d,1-déhydro-ll-hydroxy-proge6térone, le à,f-androstène- dia, le d,f-l'7-méthyl-androatène-diol, la d,{-déhydro-épi- andro3téror.e, ou leurs dérivés fonctionnels.
Des substances de départ particulièrement importante pour la synthèse de
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l'aldostércne sont, par exemple, la I8 - 11-.actone du d,'-p 3,2C dioo-.1°-hydroy-prgnérie-18-oique, le d ^e¯A4¯ 3,18,20- cr3.oxo-1.-hydroay-prgn:ne ou son 18,11-cyclo-semi- acétal et le d,--& -3,20-dioxo-lll8-dihydroxy-prëgnene. Il y a lieu également d'indiquer les composés correspondants hydroxylés en position 17a.
Le présent procédé est avantageusement mis en oeuvre en faisant agir sur la substance de départ la culture aérobie
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d'un seul microorganisme. Suivant le microorgan1smè utilisé, on obtient, par exemple, le d-stéroïde comportant un hydroxyle en position 6p, 7a, 7P, 8, lia, lip, 14, 15a, 15P, i6a, 17a ou 21, ou comportant une double liaison en position 1,2 et/ou 4,5,
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ou comportant un groupement A 4¯3-cétonîque et/ou 17-cétonique.
On peut toutefois aussi procéder en faisant agir en une phase opératoire plusieurs cultures sur la substance de départe il s'est alors avéré avantageux de faire agir successivement dans le temps les diverses cultures.
Toutes les cultures aérobies de microorganismes qui
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sont capables d'oxyder les stéroldem, c'est-à-dire d'Introduit des hydroxyles ou des doubles liaisons, ou de transformer des hydroxyles en groupes oxo, conviennent pour le présent procédé.
On a indiqué par exemple ci-après quelques catégories qu'on envisage pour le procédé
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Position 6 Trichothecîum roseum Lenzites abietina Rhisopus arrhizus
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G110cladium catenulatum Gliocladium deliquescens Position 70 Curvularia lunata
Curvularia pallescens
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Curvularîa falcata Curvularia fallax
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.Psziza spec.
Position 7 : , Rhisopus arrhisus Proactinomyces rosées Position 8 Curvularia palieseens Pleospora Gaeumanni Helioostylum piriforme
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Position lia ; Rhisopus iiigrîcans Rhiopus arrhizus Aspergillus niger Aspergillus, ochraceus Pénicillium notatum
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Pénicillium adametzi Pénicillium janthinellum Mucor mucedo
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Lensites sepiarla Tilletia tritici Neurospora sitophila Neurospora crassa
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Position 119 Curvularia lunata Curvularia pallescens Curvularia fallax Curvularia brachyspora
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Cunnlnghamel1a Blakesleena
Streptomyces fradiae Stigmlna platani Position Il} :
Sclerophoma entoxylina Parasitella simplex Helicostylum piriforme
Mucor griseocyanus
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Mucor parasiticus Position 15[alpha] Gibberella baccata Nectria cinnabarina
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HorModendrium viride Position 15ss : Lenzites abietina Spicaria Position 16[alpha] : Didymella Vodakii
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Actinomycètes A 6246, A 77*6* A 7747. A 7451,
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A 7486 conservés a l'Ecole Polytechnique Fédérale de Zurich
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Position 17a :
Trîchothecîum roseum Cephalothec1um roseum Oucurbitaria laburni Lspthosphaeria maculans Trichoderma lignorum Trichoderma glacum Acrospeira lavis
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Lophotrichua hartînîl Melanospora parasitica Thielavia terricola Dactylium dendroldes
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Position 21 Ophiobolu3 herpotrichus Sclerotinia fruoticola
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Wojnowlela graminia
Hendersonia r'ubi
Hendersonia abietus
Dilophosphora spec.
Phoma hibernica
Septoria aesculi
Aspergillus niger
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,Oéshydrogénatîon en ll' 2: Fusr1um solani Fsar1m cauca.a1cum Calonectria décora Alternaria passiflorae
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Ophiobolus heterostrophus Ophiobolus Miyabeanus Didymella lycopersici Corynebacterium simplex
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Bacillus sphaer1cus Baeillus subtilis
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%cobacteries Position 3 et/ou 17 Proactinomyces erythropolis
Proactinomyces aquosus
Proactinomyces restrictus
Proactinomyces roseus
Azotobacter
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94yeobactéries Mlcrococcua dehydrogenans Corynebacterium mediols.num Alca11gerHa faecalis Levure et bactéries oxydantes Pseudomonas
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Flavobac terium
androstenedionleum Plavobacterlum carbonilicum Actinomyces albus Aspergillus niger
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Phycomyces blakesleeanus Pénicillium chrysogenum.
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@omme il ressort de la liste ci-dessus, les micro- organismes indiques sont des champignons ou des bactéries et appartiennent par exemple aux classes des phycomycètes, des ascomycétes, des basidiomycètes, des Fungi imperfecti ou des actinomycetes.
Pour la mise en oeuvre du procédé, on peut incuber les substances de départ, dans des conditions aérobies connues en elles -mêmes avec des cultures des microorganismes indiqués.
La croissance a lieu en culture de surface ou, ce qui est techniquement avantageux, en culture immergée, auquel cas on secoue ou agite. Les cultures renferment du carbone assimilable, notamment des hydrates de carbone, ainsi que, le cas échéant, -des substances de croissance, par exemple de l'eau de gonflement du maïs ou du moût de bière, et des sels inorganiques.
On peut par suite utiliser des solutions nutritives naturelles, syn- thétiques ou senti-synthétiques. Un procédé pratiquement très simple sera décrit dans ce qui va suivre sans que l'invention soit limitée pour autant aux indications fourniesOn cultive les organismes dans des appareillages et dans des conditions analogues à. ceux qui sont connus dans la fabrication des antibiotiques sous le nom de procédé de culture immergée.
Après le développement des cultures, on ajoute les substances de départ indiquées à l'état de fine dispersion ou de solution, par exemple dans le méthanol, l'acétone ou l'éthylène-glycol et poursuit l'incubation. Finalement, on sépare le mycélium,
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extrait le filtrat et/ou la masse de mycélium et isole de l'extraite d'une manière en elle-même connue, les d-stéroïdes et/ou les #-stéroïdes, par exemple par répartition entre solvants ou mélanges de solvants non miscibles l'un avec l'autre, par adsorption, chromatographie, cristallisation, transformation en dérivés fonctionnels, tels que les composés de Girard et analogues .
On peut aussi effectuer ces mêmes réactions en séparant d'abord les enzymes actives de cultures aérobies convenables des organismes indiqués et en les utillsar à l'exclusion des cultures en croissance. C'est ainsi qu'on peut, par exemple, séparer le mycélium formé à partir de cultures aérobies convenables des organismes indiqués, le mettre en suspension dans de l'eau ou dans des solutions tampons, ajouter à ces suspensions les substances de départ indiquées, puis incuber.
Si plusieurs microorganismes doivent agir en une phase opératoire, on peut alors procéder par exemple comme suit Après développement des cultures du premier organisme, on ajoute les substances de départ indiquées, à l'état de fine dispersion ou de solution, par exemple dans le méthanol, l'acétone ou l'éthylène-glycol, et poursuit l'incubation jusqu'à ce qu'on atteigne la réaction maximum. On ajoute alors au mélange réactionnel, sans filtrer au préalable ni isoler le produit de réaction, une culture développée du second organisme et, si c'est nécessaire, des substances nutritives
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et des suba@an@es de croissance appropriées, pais poursuit l'incubation.
Le cas échéant, on répète cette avec un troisième microorganisme. On peut suivre par chromatographie sur papier le déroulement des diverses oxydations.
Les produits du procédé peuvent 'être utilises comme médicaments ou comme produits intermédiaires pour la préparation c'autres produits précieux. Le nouveau procède s'est avéré particulièrement intéressant pour la synthèse de !@aldostérone.
C'est ainsi, par exemple, qu'on obtient en une seule phase, avec un bon rendement, la d-aldostérone, en faisant agir une culture aérobie d'Ophiobolus herpotrichua sur du d,#-#4-3,18,20- trioxo-11ss-hydroxy-prégnène ou sur son 18,11-cyclo-semi-acétal.
Lorsqu'on opère au moyen d'un procédé purement chimique, 7 stadoe environ sont nécessaires pour'cette synthèse en partant du même produit initial.
En général, le dédoublement de racémates suivant ce nouveau procédé est particulièrement simple parse que les dérivés hydroxylés ou déshydrogénés de l'un des antipodes se laissent facilement séparer de l'autre antipode Inchangé, par suite de leur polarité élevée.
Déjà depuis les recherches classiques de Pasteur, on avait, il est vrai, occasionnellement utilisé une méthode micro- biologique pour l'obtention de l'un des antipodes à partir de racémates. On utilisait alors habituellement des champignons ou des bactéries ordinaires qui assimilaient les substances de
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départ et qui, notamment, assimilaient l'antipode naturel (d) plus vite que l'antipodes non naturel (±}. Suivant ce procédé, on devait donc, pour obtenir une préparation pure du point de vue optique, traiter par voie microbiologique jusqu'à ce qu'au moins l'une des formes soit complètement détruit, notamment celle qui, la plupart du temps, était la plus intéressante du point de vue biologique.
Au contraire le procédé de la présente invention fournît, même dans le cas d'une réaction qui n'est que partielle, l'antipode modifié, qui, la plupart du temps, représente celui qui est le plus intéres- sant du point de vue biologique, sous une forme optiquement pure, et cela sous la forme d'un dérivé qui est pratiquement précieux en soi ou pour d'autres buts de synthèse, et économise des transformations chimiques. Si l'on transforme complètement l'un des antipodes, suivant ce procédé, l'autre se présente également sous une forme pure du point de vue optique.
La présente invention concerne un procédé permettant de dédoubler des racémates en leurs constituants..
L'invention est décrite plus en détail dans les exemples non limitatifs qui suivent dans lesquels les températures sont indiquées en degrés centigrades.
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E:r.emple 1.
Dans cinq fioles coniques de 500 cm' de capacité, on stérilise dans chacune 120 cm d'une solution aqueuse à
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70% de mocât de "bière et ensemence avec de l'Ophiobolus herpo- tr1c1us. Or agite les fioles à 270. Au bout de 4 jours, et dans des conditions stériles on ajoute à chacune des cultures bien développées, une solution de 30 mg de d j, l<#progestérone dans 1,5 ctt( d'acétone et continue d'agiter à la même tempéra- turne.
Au bcut de 4 jours, on sépare le mveélium et le lave à l'eau et à l'acétate d'éthyle. Après les avoir réunis, on extrait les filtrats, à quatre reprises.. avec chaque fois 200 cm3 d'acétate d'éthyle. On lave à l'eau les extraits réunis, les sèche et les évapore. D'appas une estimation
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effectuée par chromatographie sus papier, le résidu (l60 mg) renferme des quantités à peu près égales de deux composés qui se comportent comme la cortexone Ill1m(Mao;):y-corticoatérone resp. progestérone). On sépare ces deux composes par une chrom4qtograpille de préparation :/,PD7> papier, avec le système Bush B 3.
On coupe les zones correspondant à la cortexone et les élue avec 400 en.3 de méthanol à 50%. On élimine ensuite le méthanol sous vide. On extrait la solution aqueuse qui reste, à quatre reprises, avec chaque fois 50 cm3 de chloro- forme, après les avoir réunis, on lave les extraits à l'eau, les sèche et les évapore sous vide. On cristallise le résidu
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dans un mélange d'acétone et d'éther. et l'on oht1.b toua
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pu.-ce, la d-cortexone d'un point de fusion de 140 - 143 .
[[alpha]]D = + 180 /dans l'éthanol). On traite de la même manière les zones du chromatogramme de préparation sur papier qui correspondant à la progestérone. On obtient 92 mg d'un extrait brut, à partir duquel on obtient, par cristallisatio répétée dans un mélange d'acétone et d'éther de pétrole, de la #-progestérone pure, fondant 122 - 125 ; [[alpha]]D = - 190 (dans l'acétone).
¯Exemple 2.
Dans un récipient d'agitation, on ensemence avec du Cunninghamella Blakesleena 500 cm3 de moût de bière stérile et agite 3 jours à 27 . Dans', des conditions stériles, on ajouta alors à la culture bien développée une solution de 150 mg de d,#-cortexone dans 8 cm3 d'acétone. En même temps, on ensemence dans un second récipient 500 cm3 de moût de bière stérile avec du Trichothecium roseum. On agite les deux cultures. pendant 3 jours à 27 et les réunit alors dans des conditions stériles, après quoi on continue d'agitera la même température.
Au bout de 3 jours, on sépare le mycélium et le lave à l'eau et à l'acétate d'éthyle. Apres avoir réuni les filtrats, on les entrait comme décrit dans l'exemple 1. Suivant une évalua- tion effectuée par sur papier, le résidu obtenu (165 mg) est essentiellement formé de 3 composés qui correspondent respectivement à la cortexone, à l'hydrocortisone, et à la cortisone. On chromatographie ce résidu suivant la
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méthode par passage sur 8 g de gel de silice, en éluant d'abord avec du chloroforme, puis avec un mélange de chloroforme
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rt d'acétone (99 1 L et finalement avec un mélange de chloro- forme et d'acétone (1:1,;.
On soumet les diverses fractions (de 20 cm 3 chacune) à un examen chroniatographique sur papier.
Les fractions éludes au chloroforme renferment des impuretés, tandis que. dans les fractions éluées avec le mélange de chloroforme et d'acétone (99:1), se trouve un composé corres- pondant à la cortexone. On réunit ces fractions et les évapore.
Par cristallisation dans des mélanges d'acétone et d'éther,
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on obtient la -& cort3òne d'un point de fusion de 138 - 112().
[a]p - 1150 (dans l'éthanol). lies autres fractions éludes avec le mélange de chlo20form<s et. d'acétone (1x1) sont essentiellement constituées par d-9 la d-hydrocortisone et de la d-cortleone. On les réunit, les évapore et sépare les constituants à l'aide d'un ch:rom'3.'ogr3mme de préparation sur papier (système p'popylenegly- col-t"luène . Le traitement des zones de papier renfermant respectivement la d-hydrocortisone et la a-cortisone a 11reÙ" comme décrit à l'exemple 1. En cristallisant les deux résidus d'extraction dans des mélanges d'acétone et d'éther iaopropyli- que, on obtient la d-hydrocortisone d'un point de fusion de
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205 - 210 l'ai D 165 (dans l'éthanol) et la d-cortisone d'un point de fusion de 210 - 216 , [a]D" -<- 195 (dans le d 1oxa.nne) .
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Exemple 3.
Dans un réciplent à secouer, on dissout dans 500 cm3 d'eau du robinet 1 g de nitrate de sodium, 0,5 g d'ortho- phosphate primaire de potassium, 0,25 g de sulfate de magnésium- heptahydrate, 0,25 g de chlorure de potassium, 25 g de glucose brut et 0,5 g d'extrait de levure Difco, amené l'ensemble à un pH de 5 et stérilise. On ensemence cette solution nutritive avec du Didymella lycopersici et agite 3 joursà 27 .On ajoute alors au tout, dans des conditions stériles, une solu- tion de 120 mg de d,#-cortisone dans 5 cm3 de méthanol. On continue d'agiter pendant 4 jours à 27 , sépare alors le my- célium par essorage et le lave à l'eau et à l'acétate d'éthyle.
Apres avoir réuni les filtrats, on les extrait comme décrit dans l'exemple 1. Ainsi qu'il résulte d'un examen chromato- graphique sur papier, le résidu d'extraction contient un produit qui se comporte comme la matière de départ,et de la l-déhydrocortisone. A l'aide d'une chromatographie de préparation sur papier /système propylèneglycol-toluène),on sépare les constituants de ce mélange.
Par recristallisation dans de l'acétone, on obtient la d-1déhydro-cortisone d'un point de fusion de 231 - 234 , [[alpha]]D = + 1700 (dans le dioxanne) Par cristallisation répétée dans un mélange d'acétone et d'éther isopropylique, on obtient la "-cortisone pure d'un point de fusion de 211 - 217 , [[alpha]]D = - 1900 (dans le dioxanne).
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Exemple 4.
On prépare une solution nutritive renfermant, pour un litre d'eau du robinet, 20 g de peptone, 5 cm3 d'eau de
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gonflement du maïs (Cornsteep-l1quor) et 10 g de glucose brut et dont le pH est ajusté à 6,3. On py@nd!4 fioles coniques d'une capacité de 500 cm3 et stérilise dns chacune d'elles 120 cm3 de la solution nutritive ci-dessus et les ensemence
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avec du Wojnow1cia gram1nis. On agite ces cultures pendant 4 jours à 27 , après quoi on ajoute, dans des conditions stériles, chaque fois une solution contenant 30 mg de
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(18- # p-llgj-lactone du U 4.x".%1 3, nGlJr'tlJ.o.ad .L.1. iâ'.,doà pâgli"w' 18-oïque dans 1, 5 car de méthanol.
On continue alors <3 "agiter la même température. Au bout de 8 Jours, on sépare le
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mycélium le lave à l'eau et à ls acétate d'éthyle, réunit les filtrats et les extrait comme décrit à l'exemple 1. Le résidu d'extraction (140 mg) renferme, d'après une évaluation
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chyomstogra.phique sur papier, un produit analogue a la matière de départ, ainsi que de la .8 -x.llwlacton du  ! -3,20- dioco-..(,1-dihydror-prgnéne 18-ou. On sépare les constituants de ce résidu à l'aide d'une chromatographie de préparation sur papier (système forraamide -benzène -chloroforme )# Comme décrit à l'exemple 1, on élue sur papier les deux compo- sants et lesextrait.
Par cristallisation dans un mélange
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d'acétone et d'éther, on obtient la tl8yll.p .acton du d-A -'320-dioxo-llp21-dihydroxy-prëgnene-l8-oïque d'un
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point de fusion de 205 - 222 , la]- '= 1170 (dans l'acétone).
Exemple 5.
Dans 4 fioles coniques, on Introduit chaque fois 12C cm3 de la solution nutritive décrite à l'exemple 4, puis
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stérilise. On ensemence avec de l'Ophiobolus herpotricU6 et agite les cultures pendant 5 jours à 27 . On ajoute alors à chacune des cultures, dans des conditions stériles,
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une solution de 30 mg de d9--,.8,20-trioo-â.-Idroy¯ prégnène ou de son 18,11-cyclo-semi-acétal dans 1,5 car de méthanol et continue d'agiter à la Même température.
Au bout de 10 Jours, on sépare le mycélium, le lave à l'eau et à l'acétate d'éthyle, réunit les filtrats et les extrait comme décrit à l'exemple 1. A côte d'un produit analogue a la matière de départ, le résidu d'extraction renferme un compose qui se comporte comme l'aldostérone. On purifie ce résidu à l'aide d'une chromatographie de préparation sur papier (système Bush C), l'élut ion et l'extraction se faisant comme décrit à l'exemple 1. Dans un mélange d'acétone
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et d'éther on obtient la d-aldostërone cristalline qui fond in 162 - 168 , .ct] = . 142 (dans l'acétone"
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Exemple 6.
Dans un récipient à secouer, on stérilise 300 cm3 de la solution nutritive décrite à l'exemple 4 et ensemence avec du Wojnowicia graminis. Après 4 jours d'agitation, la culture s'est bien développée et on y ajoute, dans des conditions stériles, une solution de 50 mg de d,#-#4-3,18,20- trioxo-11ss-hydroxy-prégnene ou de son 18,11-cyclo-semi-acétaldans 3 cm3 de méthanol. En même temps j dans un second/ récipient d'agitation, on ensemence 300 cm3 de moût de bière stérilisé avec du Trichothecium roseum.
On agite les deux cultures pendant 4 Jours à 27 , les réunit alors dans des conditions stériles, et continue d'agiter à la même tempéra- -bure. Au bout de 4 jours, on sépare le mycélium et le lave à l'eau et à l'acétate d'éthyle. Après avoir réuni les filtratson les extrait comme décrit à l'exemple 1.
A côté d'un composé qui se comporte comme la matière de dé- part, le résidu d'extraction (55 mg) renferme de la d'-17[alpha]-hydroxy-aldostérone. On obtient cette dernière à l'état unitaire après une chromatographie de prépara- tion sur papier (système propylèneglycol-toluène), l'élut ion et l'extraction des papiers étant effectuée suivant les indications données dans l'exemple 1.
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Exemple 7
Dans un récipient à secouer, on stérilise 300 cm de moût de bière et les ensemence avec du Trichotecium roaeum. On agite la culture pendant4 jours à 27 , après quoi on ajoute, dans des conditions stériles, une solution de 60 mg de d,#-aldostérone dans 3 cm3 de méthanol. On continue d'agiter pendant 4 jours à 27 , sépare ensuite le mycélium et le lave à l'eau et à l'acétate d'éthyle. Après les avoir réunis, on extrait les filtrats comme décrit dans l'exemple 1. Le résidu d'extraction qui, à côté de la matière de départe renferme de la d-17[alpha]-hydroxy-aldostérone, est séparé à l'aide d'une chromatographie préparatoire sur papier (système Bush C).
Par élution des zones correspondantes des papiers suivant les indications données dans l'exemple 1, la d-17[alpha]-hydroxy-aldos- térone est obtenue sous une forme unitaire. Elle cristallise dans un mélange d'acétone et d'éther. A partir des zones cor- respondant à la matière de départ* on obtient, par cristalli- sation dans un mélange d'éther et d'acétone, la-aldostérone d'un point de fusion de 162-168 et d'un pouvoir rotatoire spécifique [[alpha]]D = -1420 (dans l'acétone).
Exemple 8
Dans un récipient à secouer, on ensemence avec de l'Ophiobolus herpotrichus 300 cm3 de moût de bière stérile et agita à 27 . Au bout de 5 jours, on ajoute au tout, dans
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des conditions stériles, une solution de 60 mg de d, -#4-
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5,20-dioxo-ilpj,l8-dihydrosy-prégnèns dans 4 car do méthanol et continue d'agiter à la même température. Au bout de 6 jours, on sépare le mycélium et le lave à l'eau et à l'acétate
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d t éthyle.
Après les avoir réunis, on extrait les filtrats cossus indiqué dans l'exemple 1. Diaprés une évaluation ef- par chromatographie sur papier., le résidu est consti- tué par un composé analogue à la matière de départ, ainsi
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que par du d-A ¯5J,20 dloxo-lipl8,21¯til)ihydro>î3f¯prëgaàae que l'on sépare à l'aide d'une chromatogaph1G de préparation sur parler (système propylèae-glyool-toluëne). lie d,oL/-3,,20... dioxo."llp.,l8j,21-.trihydroxy-pygnèns cristallise dans un mélange d'acétone et d'éther.
Exemple
Dans un récipient à secoueron stérilise 200 cm
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d'une (.:olutl!:m nutritive qui renferme, pour un litre d'eau du robinet, 10 g de glucose brut., 5 g de peptone, 3 g d'extrait
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de viande (O.Ko Lab .temco L 5 g de chlorure de sodium et 10 g de carbonate de calcium, et qui est ajustée à un pH de 7,5, puis ensemence avec une culture d'une souche de Streptomyoes albus.
On agite 2 Jours à 27 et ajoute alors au tout, dans
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des conditions stériles, une solution de 50 mg de d/L-a-oestra- diol dans 2 cm3 de dioxanne. On continue d'agiter pendant 3 Jours à 27 , après quoi on sépare le mycélium et extrait le
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filtrat de culture avec du chlorure de méthylène. D'après un examen chromatographique sur papier, le résidu d'extraction
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est constitué par- des composés, correspondant à l1a-ostradlo1 et à 1 ort a!e On sépare les constituants du mélange à l'aide d'une chromatographie de préparation sur papier et l'on obtient, par cristallisation dans du méthanol aqueux,
d'une
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part .e ae t=Wdio. d'un point de fusion de 175-178 , - ta] - -81 et, d'autre part, la doëstroue d'un point de fusion de 25'--5g - + 101 & Exemple 10 A 200 cm5 d*une c Ë;: . 4 d'agitation bien déve- loppée de Pseudomonas, on ajoute-;, Y-,A^3 des conditions stériles, une solution de 50 mg de dans 2 cl ds dloxanne. On agite z8 tt:id's:'r3: S 2'Yo et. retrait ensuite la cul- ture au chlorure de méthylène. D'après un examen chromato- graphique sur papier, le résidu d'exaction se comporte comme
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l'androstérone et le r .:.;"51.1.' ?W....ir ' CW vLE'.'.
On sépare les constituants de ce mélange à l'aide d'une chr-omatographiê de préparation sur papier et 1 Ion obtient, par cristallisation
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dans du méthanol aqueux, la )j.a;1droatéx"one d'un point' de fusion.de 180-1820; [a]D m g2a t le ë-3.17ioëtondrostane d'un point de. fusion de 130-132'\ [a]p - - 109 .
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Exemple 11
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-..¯¯¯¯--¯¯¯..
A 200 car d'une culture d'agitation bien dévelop-
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pée elune souche de Streptomyces fradia, on ajoute, dans des conditions stériles, une solution de 50 mg de d, -prgil- nolone dans 2 cm d'acétone. On agite pendant 24 heures à 27 et extrait alors la culture au chlorure de méthylène.
D'après un examen chromatographique sur papier, le résidu
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d'extraction se comporte comme la prégnénolone et la progesté- rone. On sépare les constituants du mélange à l'aide d'une chromatographie de préparation sur papier et l'on obtient, par cristallisation dans des mélanges d'acétone et d'éther
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de pétrole, 7.a-prgrnolane d'un point de fusion de 187-189 , la]D = -250 et la d-progestroae d'un point de fusion de 125-127 , [[alpha]]D = + 1900- @
Exemple 12
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..¯..m..¯,...¯¯¯.
Si$ dans l'exemple ci-dessus, on utilisa pour transformer la dl-pré@1énolonGI à la place de la culture de la souche de Streptomyces fradiae une culture d'Aspergillus niger et qu'on Incube et traite de la manière indiquée, on ,
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peut alors obtenir également la,-prégnénolone d'un point de fusion de 185-I880, [a3p " -23 et la d-progestérone d'un point de fusion dë 123-126 , [ aj D = + 191 .
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EK&sple 13
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On prépare une solution nutritive qui renferma,
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pour un litre d'eau du robinet, 2,6 g décide tartrique, 2 6 g de 8?''?'3rGf d'ammonium, 0117 g dus C31.'a.' â'. áfn.ilt3'iâ'U:
'?s 0,4 g ds phosphate secondaire d'ammonium, 0,k- g do carbonate de potassium, 0,27 g de carbonate de magnésium, 50 g dc glucose et 1 g d extrait de levure (Difoo) et ajuste le pH à , C. Dans une fiole coniques on stérilise 120 ci de cette solution, ensemence avec du Rhizopus nigrieans et agite à bzz. Ai?; bout de 2 jours, on ajoute au tout, dans des 02,;'onN stériles, une solution de 30 mg da dan -progestérone dans 1,5 cm d'se<$ton's et continue d:agiter pendant 2 jours à ' . On sépare alors le mycélium et la lave à 1 c :au et au chlorure de méthylène Après l'as avoir réunis , on extrait ' :!.1t: ;.""'.7.a..S'v..T-.;'s"n. à 5 1?0}.1!'isos avec du chlorure do méthylène, 18.l les e:;::.tt:'2.it,;j à 1 at\$ lus sèche et les évapore.
Un êissaien chcatogph1qu ur papier du réú:1..:'!ü d'extraction contre cua ce dernier sst constitua à parti-as zip? à psu près égalas par des composés qui correspondent respectivement à la progestérone st è la 11a-nYúro;;:y-proges-;6... i0i3.L'o 0: répare les constituants du mélange à â3t.k2 d'une chromatographie de préparation sur papier st obtient, par cristallisation dans dan mélanges dtacetcne et L 4t G 4ne.i,'. dte pétrole, dIU part, la/progea0rOnê <3*un point de fusion de 118-120 , C cI -187 1 (dans le dioxanne) e, tauûr part, la â-l1.:-hydroxy-p:rog6stél"'one d'un point de fusion de 69-1'. [ a]1) = + 176 (dans le chloroformé).
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Exemple 14 On prépare une solution nutritive renfermant, pour un litre d'eau du robinet, 10 g de suera de canne; 10 g de
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Trypton-Difoo, 2 g de nitrate de sodium; 1 g de phosphate secondaire do potassium, 0,5 g de sulfate de magnôs1um.., 0,5 g de chlorure de potassium, et 10 mg de sulfate ferreux hepta-
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hydrata, ajuste le pH à 7PO et ajouta ensuite 2,5 g de car.. bonate de calcium. Dans une fiole conique on. stérilise 120 eu 3 de cette solution, ensemence avec du Curvularia lunata et agite à 27 . Au bout de 2 jourson sépare le mycélium, le lave avec peu d'eau et le met en suspension dans 120 cm3 d'eau distillée.
A cette suspension, on ajouta une solution de 30 mg
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de dans 1,5 com d'eadtone et agite pendant 30 heures à 27 . On extrait el1.suit le, mdiangs à 4 reprises avec de l'acétate d'éthyle. On lave les extraits à l'eau, les sèohe et les évapore. D'appas une évaluation ehromato-
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graphique sur papier, le résidu d'extraction est 0asênt111ament constitue par deux substances qui correspondent respective- ment à la cortexone et à la corticostèrone.
A l'aide d'une chromatographie de préparation sur papier et d'une cristal- lisation subséquente dans des mélanges d'acétone et d'éther
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de pétrole, on obtient la/C-eortexone d'un point de fusion de 138-141 la]D - -175 (dans l'alcool absolu ) et la d-oort1coBtone d'un point de fusion de 178-181 , [a + 220 (dans l'alcool absolu).
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..ti>C:.a) .5.
¯¯Wl.).""#;:Yoo&II.,p.""r...a"""mt En ajoutant,, à uns r1-"'- -',:"i """ Sa \';"'- Ó',.Y "t-:-1 de Curvularia lunata dans 120 m3 df0au distillée,} suspension qui a été obtenus corsas 5s'i},1! 3. f"::;J"mpJ,D tt.!a itaic'.:: une solution \.1=! 1O}"i ing ds ë'-T.7chyës'cxy-oo?t:o êôv-:j "j..5 '-" ..........t ...1....':'i Gte1:1 opérant CC:.'LU\3 t.r..-''.-.vï'i,Fl.;:7"''.¯ avoii3 s.g:1.;0 posant z jours 37 1':\ t't').-f"J.j.Jh'i .1."...hYJ"':t.1...\,.:; ¯f:..=r,-:¯.... ;:;c'L"$ rlÇ1't....\';);::."I bzz évaluation sootuik'; jï3 ehoEË'bc;3iH Dtii? i efôstîrfcl!# lèvent eaux ubaui/ov. qui 6û\'.jHcdnt à la 17o>-h2yâïfos;jr- ccr'csxon e;)t à le 17(z-11tlo1:.:-i .eJG::'i;..c::;j '1Í/(.)L;? 0 -,.
S>. :t mélange il l'ai...1t!> "1h'-¯) $.:L..c. ' :'r:. :.:.. ¯ : - r '..s6::.v> , 5? .. -.';',.e Y.. ¯ :: 4n 5 :i. v.3 sur papier et l5on Oi J\a"1 ¯....... f ' ::¯":=3 ':I <.........1. ï>.'..''.. S.F; ''L.:,...;'<-':: ":::: ;;t3,a.$ i."t'."'.k â ;n
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d'un point de fumier' &-. SILO-- -l::as [au- -:i!SO " ' 1 alcool absolu]' et d'autre ;'.1.'iy..m: ¯' .f' -.;, ': 7, ..x-" -, .:é:<.'.rt..!.Pi-:f 'k.ic i.ji2;'i':;ryC7:r'i3aa0â';> d'ici ;;r:3:;..--:; <.-..:-v:a.i3 'i:: 09-23.2 , [aj # 171e
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(dans ", " ,,..1 absolu).
E;'-iin})1>oe 16 Dans un r6c:1.i'Ü1t ià secoue;?;, on '?L::d3'i,ï'iLéw .dans 500 emï ,u du robinet., 1 g de nitrate ds sodium" O/J5 g d'orthophospliate primaire de potassium,, 0, 2 g de sulfate de magnés ium-heptahydra te, 0,25 g de chlorure de potassium, 25 g de glucose brut et 0, 5 g d'extrait de levure 17i'eap amène le tout à un pH de 5 et stérilise. On ensemence, eette solution nutritive avec du Didymella lycoperslci et l'agite 3 jours à 27
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On ajoute alors, dans des conditions stériles, une solution de
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120 mg de d. Jr¯l7aAvjûvoiz$ **QQX<tQQB t4von& dans QtnJ ôte metliancl. On agite encore 4 LG''!'4S 2E sépare le mycélium pas? essorage et le lave à l'eau et à l'acétatss d'éthyle, Après avoir réuni l'as filtrats,, on les entrait cossue décrit dans 1! simple 1.
Le résidu d' extraction est constitue., ainsi que le montre un examen l:d".t:ï't7r2i: ïC'S..;'.t.:w3î, 'uw sur papier par un produit Qui s's eoraports coaisra la !MEt:igr'.& de départe et par de la "f¯uchyF.)T7'w''t 4i"1,V1-hyd.PwaiJ.L YJ S9V:.7'Lfiw.Jej.YS.i On sépare les C:G s"dï':LrGL!.s':zê:3 ce mélange l5aide d'une chromatographie Cl préparation sur papier (système propyl&neglyeol¯to3.uèsi) .
Par récris tallisatioa dans E3.''"".È.'t',C7g OR obtient d'un part la 3.wy¯l-dëhyd::'esa.bÏo:: ma' aca;;E:=tun: d'un point de fusion il:.; i...',3''j'' [a 4- 98 (<3ar4s le dioxsume) et, set'autre pa2>tj, lal7c;--hydrox?-corticoatdrone d'un point do fusion de 2-..:.arl [o3D -i68o dans l'alcool absolu).
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Exemple 17
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Cornue décrit dans ls exemple précédent, on J;':;xJ.lâ' ut..' culture do Didymella a:;'Jt'àiif?ï:î.é. 5''i 7 ajouta alors une solution de 120 mg de 21-trimthylac4tat d d,17a-hydoxycoytiûogtéron@ dans 5 ôra d'acétone.
Après ' avoir agité pendant 4 jours à 27 , on isole le produit réaction- nal G'c;'ff121' '3:E:'c',-11t Clv. ..II111I'..'T'? ! Le résidu d'extraction est essentiel- lement constitué, ainsi que 1s montre une évaluation effectuée par chromatographie sur papier, par ''1.:3uë produits qui se
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comportent respectivement comme la matière de repart. et comme le tritnéthylaoêtE1.te de la l-dcµhydrQ¯17a¯hyd:i?o.xy* corti-¯ c03t6rcn:e:.
On sépare les constituants de ce mélange à l'aida d'une chpomaogpaphie de préparation sur papier et l'on obi tient, par cristallisation dans l'acétate dl6thyle, d'une: part le 2;:.zrxhy .aca, de la -17a-hycro.ycr.-,:o 4t='on
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d'un peint de i us 5 on de 231-232 , fa3p =' -ll5 (dans le dîo,xa.rr,:e) et d'autre part, le G"lW.d.!'.3' 4±1,.&GVGS' de la d-.xvtdr>a.'Ex.ydrsytc;y.coticostéo:ae d*un peint de fusion de 233236 p [al 4- 1030 (dans le chloroforme).
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Exemple 18
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#J >J> MM t*K M T ta *B #* a On ensemence avec du Didymslla .yop:.:.g 120 car de la solution nutritive décrits dans l'exemple 4 et agite pendant 2 Jou à 27 . On ajoute ensuite, dans des conditions 1':,';é'.":lles, une solution de 30 mg de dl' ± -aldo8téron# dans 1, 5 cm' c'Pacétont'3 et continue d'agiter à la mime h':ml}:)(5- rature.
Au bout de 3 jours, on sépare le mycélium et le lave à l'eau et i. 1 taaé.:-ate d'ethyle. Après avoir réuni les filtrats, on lam extrait comia décrit dans l'exemple 1. Ainsi que 1s montre an exaI:1.an chromatogj=,aphiquê sur papier le résidu ± 'extraction est constitué par un produit qui se com- porte oc-maes :.:3.0'I'Oiscf et par de la .-t'dt'3ytiG-,iLO'Fx'OL, On sépare ce-si deux produits à l'aida d'une chrotnatographie de préparation t:
u? papier (système Bush C) et les cristallise
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ensuite dans un mélange d'acétone et d'éther. On obtient
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lat-aldostérone (fondant à 110'/158-165', [UID = -i4l 0 [dans l'acétone]) et la d-1-dêb-ydro-aldostérone (bandes dans l'infra-rouge, dans le chloroforme, entre autre à 2t82gp 2j95gp 5p87g, 6,01n. 6.17. 6p24J.J' 6e9lg, 7el5ge '(,3llt..
7p77g 9,ten, lO,68, et ll,28|i). on acétyle de manière usuelle la d-1-déhydro- aldostérone à l'aide d'un mélangé de pyridine et d'anhydride acétique. On obtient un mélange de deux, produits qui, à la
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chromatographie sur papier avec le système pr.opylàn0g1ycol- toluÈ/i.'H';, donne" respectivement, des valeurs de R de Oe7O Ot O,15v ces deux produits sont respectivement lô 18,21-diao&tat et le do la d-l déhydro-aldostéî?otiê. On obtient ce dernier sous forai cristalline pure en traitant le mélange brut des acétates par de l'éther absolu.
Point de fusion
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182-18::, , bandes dans 1 t infra'.:\."oug dans Io chlorure de méthyltnô, entre autres à 2p81.,p 5,74j},,; 6,Olv,, 6 16pe bzz 7p31$ 8,\\17t 8iJ93J.,Y 8,98211.J! 9.1'72.I' lO,03!, lO,221.J! lOp62t.ll 11,32 , et 12,29 .
Exemple 19
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On prdpare, cornai décrit dangllexeiaple 6e t 120 cm'' d'unis -culture ds Didymella lycopêreio1. On y ajoute,, dans des conditions stériles, une solution de 25 mg de d,E -éOl't1i3oi1e dans 1,5 om3 de méthanol. On agite pendant
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3 jou'e à 27 et sépara ensuite le Mycélium. On Go damier è lteau et à l'acdtatô dtôthyle. Après avoir rauni les filtrats, on 133 extrait commis décrit dans l'exemple D'après un examen chroma te graphique sur p-apîjr,, le résidu distraction est formé de l-déhyâro-cortiBone ot d'un produit qui ss CO!i1po;:.t comme la 0!! sépare ava dziuz sur." stances par chromatographie do préparation 2ur papier.
On obtient d um; part la d-1-déhydro-cor-tisone [point de fusion 2j51"2j54 , [a!D - + 1690 (dans le âioxanna)j et, d'autre part, laE -oortisone [point de fusion = 215 , [0,1D - "203- (dans le dioxanne)].
Exemple 20
Avec une culture de Trichothecium roseum, on ensemence 120 cm3 d'une solution nutritive stérilisés de Czapek-Dox et agite pendant 5 jours à 27 . On ajoute alors au tout, dans des conditions stériles, une solution de
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30 mg de d,Z-aldootérone dans le5 am3 d'acétone et continue d'agiter à la même température. Au bout de 4 Jours, on sépare le mycélium et le lave à l'eau et à l'acétate d'éthyle.
Après les avoir réunis, on extrait les filtrats comme décrit
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dans l'exemple 1. D'après un examen chrometographique sur papier, le résidu d'extraction est essentiellement constitué par un produit qui se comporte comme l'aldostérone, et par
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de la 17o-hydroxy-aldostérone. On sépare ces deux substances
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1.c:: d'une chromatographie de préparation sur papier (système Bush 0) On obtient oFn AJ"'G6dL4 IICroata7 et la d¯17a- hydroxy-aldostërone.
Exemple 21 Avec une cultur-s d'Ophiobolus horpo4cirîchuo, on
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ensemence 120 cm" 6e moût de biers stérile et agite pendant
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3 jours à 27 . On ajoute alors au tout, dans des conditions
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stériles, une solution de 40 mg de (1$ -----, .r..8j..g'otx du d, L¯A l ..3ndq o0--3.p-hydrQyxgna.3.l8-oïqus dans 1,5 'Ei4" d'acëtono et continue d'agiter à 27 . Au bout do 6 jours on sépare it mycélium et le lave à Iteau et à l'acétate d'éthyle. Après avoir reliai lêc filtrats, on les traits '#olLttl":' décrit clans 1 Exemple 1.
D'après un examen ahr omztogra3:.:q,i sur papier 3 le résidu <38xtraotion est constitue par un produit, qui s@ comporte coame la matière de départ, et par la (l8 3..j...;o:,s du 3at->dco-- llpj On sépare l@s deux substances à l'aide d'uno ahx 7o:g'oraph de préparation sur papier t Iton obtient la (l8 ##-llp)-lacton@ au ,'3 p acâ-. d.cCto-llp-hydroxy-prgs:t.8.o:cu' [a] D -IS1!-0) et la (18 #-ll)-.lsctone du c- ba 3 0-d. r-.3., 2.-c.kZ;crox.. rgri:ea.8...o;qu, Lcc - ?'7 j .
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Exemple 22
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Avec une culture dtOph3.oboiu herpotrîchue, on
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ensemence 120 cm3 de moût de bière stérile et agite pendant 3 jours à 27 . On ajoute alors au tout, dans des conditions stériles, une solution de 40 mg de d,#-#4-3,18,20-trioxo- 11ss-hydroxy-prégnène ou de son dans 1,5 cm3 d'acétone et continue d'agiter 27 . Au bout des 6 jours, on sépare le mycélium et le lave à l'eau et à l'acétata d'éthyle. Après avoir réuni les filtrats, on les traito comme décrit dans l'exemple 1.
D'après un examen chromato- graphique sur papier, le résidu d'extraction, est constitué par un produit qui se comporte comme la matière de départ, et par de l'aldostérone. On sépara ces deux substances à 4 'aide d'une chromatographie de préparation sur papier et l'on obtient le ±-44 ou son 18,11-cyclo-semi-acétal, ainsi que de la d-aidostérone ([[alpha]]D = + 142 ).
La matière de départ niée en oeuvre peut être préparée par exemple suivant le procade décrit dans le brevet belge No. 547.904 du 17 mai 1956 au nom de Monsieur Tadéus REICHSTEIN et ayant pour titre: "Procédé de préparation de stéroïdes oxygénée et nouveaux composés ainsi obtenus.
Exemple 23
A l'aide d'une culture d'Ophiobolue herpotrichus, on ensemence 120 cm3 de moût de bière stérile et agite pendant 3 jours à 27 .On ajoute alors au tout, dans des conditions
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stériles, une solution de 40 mg de dl.19-nor-prOgêstéron dans 1,5 cm d'acétone et continué d'agiter à 27 . Au bout de 3 jours on sépare le mycélium et le lave à l'eau et à
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l'aoét8t d'éthyle. Aprèb avoir réuni les filtrats,, on les extrait somme décrit dans 1 'exemple 1.
D'après un examen chrornatographiquo sur papier, le résidu d' entras tion est oon:3titué par mi produit qui se comporte esomme la matière de départ et par dg la 19-nor-oort0xoneu On sépare ces deux substances à l'aida d'une ohromatogr-aph10 de préparation sur papier et l'on obtient de la/& !9-nor pr ogesfc<iPonê (tal M -<.l43) et do la dQ19-nor-cortexon. On acétyle cette cleraîèrg de manlèro usuelle à l'aide d'un mélange de pyridine ot c1 tan.. hydride acétique. Le 21-acétate présents un pouvoir rotatoire
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spoifique [a]D + 145 .
Exemple 24 A l'aide d'une culture ô sophiobolua heI'potl"1chua on ensemence 120 cm3 de moût de bière stérile at agite pendant 3 jours à 27 . On ajoute alors au tout, dans des con-
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ditions stériles, une solution de 40 mg de d, /±¯9o>±luoro- lip-hydroxy -progestérone dans 1,5 cm 3 dtacétone et continue' d'agiter à 27 . Au bout de 4 jours, on séppré le mycélium et le lave à l'eau et à l'acétate d'éthyle. Après avoir réuni les filtrats, on les extrait comme décrit dans l'exemple 1.
D'après un examen ûhromatographique sur papier, le résidu
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d'extraction est constitua par un produit qui se comporte comme la matière de départ, et par de la 9[alpha]-fluoro-cor- ticostérone. On sépare ces deux substance à l'aide d'une chromatographie de préparation sur papier et l'on obtient de
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1a±-9a-tluoro-ll-hYdroxy-progestérone (la]D - -190 ), et de la 9a-fluoro-eortieostérone, On acétyle cette dernière de manière usuelle à l'aide d'un mélange de pyridine et d'an- hydride acétique.Le 21-monoacétate présente un pouvoir ro- tatoire spécifique [[alpha]]D = + 187 .
Exemple 25
A l'aide d'une culture d'une espèce du genre Rhizopus, on ensemence 120 cm3 de moût de bière stérile et agite pendant 3 jours à 27 . On ajoute alors au tout, dans dee conditions stériles, une solution de 30 mg de d,#-cor-
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texone (11-désoxy-cortlooBtaronè) dans 1,5 cam3 d'aeétone et continue d'agiter à 27 .Au bout de 4 jourson sépare le mycélium et extrait le filtrat de culture comme décrit dans les exemples précédents.D'après un oxamen chromato graphique sur papier,
le résidu d'extraction est essentielle- ment constitué par un produit qui se comporte comme la matière de départ et par de la 6p-hydroxy-cortexone. On sépare ces deux substances à l'aide d'une chromatographie de préparation
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sur papier. On obtient de la ±-aortexon0 (la]D = -175 ) et de la d-6p-hydroxy-cortexone ([[alpha]]D = + 100 ).
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Exemple 26
A l'aide d'une culture d'une espèce du genre Peziza portant le numéro de référence M 26 à l'Ecole Polytechnique Fédérale de Zurich, on ensemence 120 cm3 de moût de bière stérile et agite pendant 3 jours à 27 . On ajoute alors au tout, dans Ses conditions stériles, une solution de 30 mg de
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d, ± >cor.txo:1.e (11-déJ13oxy-certicogtêl"on0) dans 1,5 cm 3 d'acétone et continue d'agiter à 27 . Au bout de 4 jours, on sépare le mycélium et extrait le filtrat de culture comme décrit dans
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1 (1i.fmpl p:;',âcé:dent.
D'après un examen chromatogfaphique sur papier.. le résidu d'extraction est essentiellement constitué par un produit qui se comporte comme la matière de départe
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et par d's la 7a-hydro3Ey-coî>t& one, On sépare ces deux oubstanocs à l'aide dJ'.1:le chromatographie de préparation sur papier.
On obtient da la t-cor1:;(i!:Xona ([a) D = -173 ) et de la d-7a- hydrox; -cortaxone (ïct]j3 + 155 ).
Exemple 27
A l'aide d'une culture de Lenzites abietina, on ensemence 120 om de moût de bière stérile et agite 3 Jours à 27 . On ajoute alorsdans des conditions stériles, une
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solution de 30 mg de d,% -cortexone (11-désoxy-corticoctérone) dans 1,5 cm d'acétone et continue d'agiter à 27 . Au bout de 4 joura, on sépare le mycélium et extrait le filtrat de
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Otlt\.1I' a3Tlli décrit dans les exemples précédents. D'après un exanen chromatographique sur papier, le résidu d'extraction est esEentiellement constitué par un produit qui se comporte comme la matière de départ et par de la l5p-hydroxy-eortexone.
On sépere ces deux substances à l'aide d'une chromatographie
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de préparation sur papier. On obtient de la/,Vl-oortexone ([aJD r -170 ) et de la d-i5¯h'droxy eortexarie ([a.]D = + l4l ).
Exemple 28
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A l'aide d'une culture de Glbberella baccata, on ensemence 120 cm 3 d'une solution nutritive de Czapek-Dox et. agite 3 jours à 27 . On ajoute alors au tout, dans des
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conditions sorties, une solution de 30 mg de d,l...cortexone 3.1.t oxy a>rtiaoatrctke dans 1,5 cm d'acétone et continue d'agiter à 27 . Au bout de 4 jours, on sépare le mycélium et extrait le filtrat de culture comme indiqué dans les exemples précédents.D'après un examen chromatographique sur papier, le résidu d'extraction est essentiellement constitué par un produit qui se comporte comme la matière de départ, et par
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de la :5a-hydroxy-cortezone. On sépare ces deux substances à l'aice d'une chromatographie de préparation sur papier.
On obtient de la L-cortexone ([ a]D :=1 -169 ) et de la d-15a-hydroxy- cortexene t cx1 + 195 ).
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Exemple 29
A l'aide d'une culture de Pleospora Gaeummani, on ensemence 120 car de moût de bière stérile et agite 3 jours à 27 . On ajoute alors au tout, dans des conditions stériles,
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une solution de 30 mg de djb -cortexone (11-désoxy-corticosté- rone) (Jans 1,5 cm 3 d'acétone et continue d'agiter à 27 0. Au bout du 4 jours, on sépare le mycélium et extrait le filtrat de culture comme décrit dans les exemples précédents. D'âpres un examen chromât graphique sur papier, le résidu d'extraction est essentiellement constitue par un produit qui se comporte
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comme 'la matière de départ et par de la l4a.M.hydroxy...oortêxone.
On sépare ces deux substances à l'aide d'une chromatographie
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d.3 préparation sur papier. On obtient de la t -cortêXOD.e {[aïn -1-711.0 et d@ la d<-l4Q-hy<3roxy<-cortexone ([o.] + 179 )-
Exemple 30 On stérilise 120 cm3 d'une solution nutritive
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qui r.B'ferms pour 1 litre d'eau du robinet, 10 g de glucose b?u'.:.) -5 g da peptone, 5 g de NaClj, 3 g d'pxo Lab Lemco (axerait de viande du commerce) et 10 g de CaC03.9 et qui a été 9m3ëe è. un pH de 75 à: llaide 'une solution diluée dlh7drDxyde de sodium, puis ensemence avec une culture de la Houshe d's Streptomyces ? 7747 (Institut de botanique . spéciale de l'Ecole Polytechnique Féférale de Zurich).
On
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agite pendant 2 jours à 27 et ajoute alors, dans des con- ditions stériles, une solution de 30 mg de d,#-cortexone dans le5 cm d'acétone. On continue d'agiter à la même tempé- rature et, au bout de 2 jours, on sépare le mycélium. On extrait le filtrat de culture comme décrit dans l'exemple 1.
D'après un examen chromatographique sur papier, le résidu d'extraction est constitué par un produit qui se comporte comme la matière de départ et par de la 16a-hydroxy-cortexone.
On sépare ces deux substances à l'aide d'une chromatographie
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de préparation sur papier. On obtient dé' la cortexone (Ea3D -171 ) et de la d-16a.Éydroxy-cortexo-ae cCaD + 11
Les substances de départ à utiliser conformément au procédé peuvent être préparées suivant des procédés connus en eux-mêmesen partant des produits intermédiaires tétracycli- ques qui sont accessibles par synthèse totale, par exemple de la série du cholestane, du prégnane ou du testane,