CH382182A - Procédé d'obtention de peptides - Google Patents
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Description
Procédé d'obtention de peptides
La présente invention a pour objet un procédé pour l'obtention des a-peptides de la lysine de formule
EMI1.1
dans laquelle Rs représente un reste d'un aminoacide.
On connaît l'importance de la lysine dans l'enchaînement peptidique de nombreux produits naturels. Ainsi, les corticotropines (White let Landmann,
J. Am. Chem. Soc., 1955,77,1711 : Choh Hao LI, Geschwind, Cole, Raacke, Harris et Dixon, Nature, 1955,176,687) ; la biocytine (USP 2 766 254), certains peptides de structures semblables à 1'A. C. T. H.
(Boissonnas, Guttmann, Waller et Jaquenoud, Experientia, 1956,12,446), la vasopressine la font inter- venir.
Les chercheurs se sont déjà penchés sur les problèmes liés à la synthèse d'a-peptides de la lysine qu'ils ont pu réaliser par blocage sélectif de la fonction aminée en e sous forme carbobenzyloxylée (cf.
Bergmann, Zervas et Ross, J. Biol. Chem., 1955, 111, 245).
On connaît toutefois les difficultés liées à la pro tection d'une amine par benzyloxy-carbonylation qui présente l'inconvénient de réactifs devant tre préparés extemporanément et obligeant à manipuler le phosgène. Il était donc intéressant de trouver un nouveau procédé d'obtention des a-peptides de la lysine et c'est ce que la titulaire a réalisé par la présente invention.
Dans le brevet suisse No 338 197, la titulaire a décrit la préparation des N-trityl-aminoacides et leur utilisation pour la préparation de N-peptides par la méthode aux anhydrides mixtes. Il a été démontré ultérieurement, d'ans le brevet suisse No 343 407 que les N-trityl-aminoacides permettaient un accès aisé aux N trityl-peptides, en les faisant réagir sur l'ester d'un amino-acide en présence de dicyclohexyl- carbodiimide, agent de condensation préconisé en synthèse peptidique par Sheehan et Hess (J. Am.
Chem. Soc., 1955,77,1066) pour d'autres dérivés d'aminoacides, l'ester du peptide N-tritylé ainsi obtenu étant ensuite saponifié puis détritylé par l'acide acétique aqueux chaud.
Or, il a maintenant été trouvé qu'un N, N'-ditri- tyl-lysinate d'alcoyle peut tre facilement détritylé de façon sélective en a, par l'action au reflux d'un mélange acétone-acide chlorhydrique 5N. L'e-N-trityl- lysinate d'alcoyle ainsi obtenu, se prte à la condensation peptidique en a, en suivant le procédé décrit dans le brevet suisse No 338 197 ou celui préconisé dans le brevet suisse No 343 407. L'a-peptide du lysinate d'alcoyle tritylé ainsi obtenu est saponifié, puis détritylé par traitement acide, pour fournir l'a-peptide de la lysine cherché.
L'utilisation de l'e-trityl-lysinate d'alcoyle obtenu en un seul stade au départ du N, N'-ditrityllysinate d'alcoyle correspondant représente un progrès industriel puisque l'e-carbobenzyloxy-lysinate de méhyle, par exemple, nécessite cinq stades de préparation au départ du N, N'-décarbobenzyloxylysinate de méthyle (Bergmann, Zervas et Ross, loc. cit.) et rien ne pouvait, dans l'état actuel de nos connaissances sur la tritylation, laisser prévoir une détritylation sélective en a dans les conditions de l'expérience.
L'invention a pour objet un procédé d'obten- tion des a-peptides de la lysine, qui est caractérisé par le fait qu'on traite un lysinate d'alcoyle inférieur au sein d'un solvant et en présence d'un agent alcalin de fixation des hydracides, par un halogénure de tri tyle, isole le N, N'ditrityl-lysinate d'alcoyle, détrityle ce dernier, sélectivement en a par l'action d'un hydracide en présence d'un solvant, à une température supérieure à la température ambiante, isole le dérivé de lysine-e-N-tritylé correspondant que l'on fait réagir avec un aminoacide substitué, saponifie, isole, l'a lysylpeptide-e-N-tritylé et détrityle ce dernier en milieu acide.
Comme hydracide, on emploie de préférence l'acide chlorhydrique et comme solvant l'acétone.
Selon un mode préféré d'exécution du procédé de l'invention, le lysinate d'alcoyle inférieur utilisé étant le lysinate de méthyle, on ditrityle en chloroforme, puis détrityle sélectivement en a par l'acide chlorhydrique 5 N en acétone en présence de triéthyl- amine. On fait ensuite réagir l'e-N-trityl-lysinate de méthyle en chloroforme avec un N-trityl-aminoacide ou peptide en présence de dicyclohexyl-carbodiimide, saponifie, isole l'a-peptide tritylé de la lysine obtenu et chauffe ce dernier au reflux de l'acide acétique aqueux en vue de sa détritylation.
Les différents produits intermédiaires peuvent servir dans la synthèse de différents a-peptides de la lysine.
Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter. Le mode opératoire décrit peut tre évidemment employé au départ des aminoacides racémiques ou des énantiomorphes. On peut modifier la nature des solvants, des agents de condensation, les températures et durées de réaction sans sortir pour cela du cadre de l'invention. Les points de fusion ont été déterminés sur bloc de Maquenne. Les schémas réactionnels figurent sur le dessin ci-joint.
Exemple 1 I. Préparation du N, N'-ditrityl-lysinate de methyle a) Préparation du N, N'-ditrityl-DL-lysinate de
méthyle
(Formule II, Ri =-CH3)
On met en suspension 4,7 g de dichlorhydrate de DL-lysinate de méthyle de formule I dans 100 cm3 de chloroforme, refroidit à Oo C et ajoute 20 cm3 de triéthylamine puis 14 g de chlorure de trityle. On agite pendant deux heures à la température ambiante, lave à 1'eau, sèche sur sulfate de magnésium et éva- pore à sec sous vide.
Le résidu est repris dans 10 cmS d'éther ; on ajoute 75 cm3 de méthanol, refroidit pendant une heure à Oo C, essore et lave le précipité au méthanol. On obtient ainsi 11,2 g (87 %) de N, N'-ditrityl-DI-lysinate de méthyle, F. 149-150 C.
Le produit qui n'a pas encore été décrit, se présente sous forme de petits prismes incolores, solubles dans le benzène et le chloroforme, solubles à chaud dans l'acétone, peu solubles dans l'alcool et dans l'éther.
Analyse : C45H4402N = 644,82
Calculé : C 83,81 % H 6,88 % 0 4, 96 %
N 4,34 %
Trouvé : C 83,6 % H 6,8 % 0 5,5 %
N 4,4 % b) Preparation dzs N, N'-ditrityl-L-lysinate de rnethyle
(Formule II, Ri =-CH3)
On opère comme décrit dans l'alinéa a), mais au départ du dichlorhydrate du L-lysinate de méthyle et obtient, avec un rendement de 90 %, le N, N'-ditri- tyl-L-lysinate de méthyle.
II. Preparation de l'E-N-trityl-lysinate de méthyle a) Préparation de l'e-N-trityl-DL-lysinate de méthyle
(Formule III, Ri =-CHg)
On introduit 10 g de N, N'-ditrityl-DL-lysinate de méthyle (formule II, RI =-CH3) obtenu dans le stade I alinéa a), dans un mélange de 60 cm d'acé- tone et 15 cm3 d'acide chlorhydrique 5 N, porte au reflux pendant une heure, évapore à sec sous vide à une température inférieure à 500 C et reprend dans 50 cm3 de chloroforme. La solution obtenue est séchée sur sulfate de magnésium, concentrée à 10 cm et additionnée de 100 cm3 d'éther.
Le précipité (6,5 g de dichlorhydrate e-N-trityl-DL-lysinate de méthyle brut F. vers 140 C) est essoré, mis en suspension dans l'éther et traité par une solution saturée de bicarbonate de sodium. On sépare la phase éthérée, la filtre et l'évapore à sec sous vide pour obtenir l'E-N-trityl-DL-lysinate de méthyle de formule III (Ri =-CH3) avec un rendemnt de 50 %.
Il se présente sous forme d'une huile incolore, soluble dans l'alcool, l'éther, l'acétone, le benzène et le chloroforme, insoluble dans l'eau. Il n'a pas encore été décrit. b) Préparation de l'E-N-trityl-L-lysinate de methyle
(Formule III, Ri =-CH3)
On opère comme décrit dans l'alinéa précédent au départ du N, N'-ditrityl-L-lysinate de méthyle (formule II, Ri =-CH3) obtenu comme décrit dans l'exemple 2 et obtient l'E-N-trityl-L-lysinate de méthyle de formule III (R1=-CH3) avec un rendement de 50 %. Le produit se présente sous forme d'une huile incolore. Il n'a pas encore été décrit.
III. Préparation de l'a-glycyl-L-lysine
(Formule V, Rg =-CH=NH*, Rs = OH) a) Obtention de l'a-trityl-glycyl-e-trityl-L-lysine (Formule IV, R =-CH=NH-C (C6HÏ) 3, R3 = OH)
On dissout 3,5 g d's-N-trityl-L-lysinate de méthyle (Formule III, R1=-CH3), préparé dans le stade II alinéa b), dans 50 cm3 de chloroforme, ajoute une solution préalablement agitée, lavée à 1'eau et séchée de 3,5 g de sel de diéthylamine de la
N-trityl-glycine dans 25 cm3 de chloroforme, 25 cm3 d'eau et 9,3 cm3 d'acide chlorhydrique N et concentre l'ensemble à un volume de 50 cm3.
On ajoute 2,2 g de dicyclohexylcarbodiimide et abandonne deux heures à la température ambiante.
Après addition de 0,5 cm3 d'acide acétique et repos de quinze minutes, on filtre, lave à l'eau sèche sur sulfate de magnésium et évapore à sec sous vide.
On reprend le résidu dans 20 cm3 d'éther, ajoute 1 cm3 de diéthylamine, glace, filtre et évapore à sec sous vide. Le résidu huileux est repris dans 40 cm3 d'éthanol, on chauffe au reflux et ajoute 20 cm3 d'hydroxyde de sodium N. On chauffe encore trois minutes au reflux, glace, essore et lave à l'eau glacée.
Le précipité est remis en solution dans 30 cins de chloroforme : on acidifie par 3 cm3 d'acide acétique, lave la solution chloroformique à l'eau, la sèche sur sulfate de magnésium, et l'évapore à sec sous vide.
On reprend le résidu dans 20 cm3 d'éther, glace, essore et lave à l'éther pour obtenir 4,3 g (63 %) d'a-tritylwglycyl-E-trityl-L-lysine, de formule IV, (R2= ¯ CH2-NH-C (CGH) 3, R3 = OH). F. 130 C, [a] 20 = + Z20 2 (c = 2 %, chloroforme). Ce produit, qui n'a pas encore été décrit, se présente sous forme de petites aiguilles incolores, solubles dans l'alcool, l'acétone et le chloroforme, peu solubles dans le benzène, insolubles dans l'eau et l'éther.
Analyse : C4GH45N3O= 687,84
Calculé : C 80,32 % H 6,59 % O 6,98 %
N 6,11 %
Trouvé : C 79,7 % H 6,8 % 0 6,8 %
N 5,8 % b) Obtention du monochlorhydrate d'a-glycyl-L
lysine
(Formule V, R2 =-CH-NHg, Rs = OH
On chauffe 2 g d'a-trityl-glycyl-e-trityl-L-lysine, obtenus selon l'alinéa précédent (formule IV, R2= -CH-NH-C (CGH5) 3, R3 = OH), pendant cinq minutes au reflux d'un mélange composé de 10 cm d'acide acétique, 10 cm3 d'eau et 3 cm d'acide chlorhydrique N. On glace, filtre et évapore le filtrat à sec.
Le résidu est repris dans 10 cm3 de méthanol ; on ajoute 20 ce d'éthanol, essore le précipité qui est lavé à l'éthanol puis à l'éther et séché sous vide pour fournir 0,55 g (80 %) de monochlorhydrate d'a-glycyl-L-lysine, [a] D (ramené au peptide-base) = -13 2 (c=2%, acide chlorhydrique 0,5 N). Le produit se présente sous forme d'une poudre blanche très hygroscopique, soluble dans 1'eau, insoluble dans l'alcool, l'éther, l'acétone, le benzène et le chloroforme, assez soluble dans le méthanol.
Exemple 2
Préparation de l'a-L-lysyl-L-lysine
(Formule V, R., =-CH (NHg)-(CHg) 4-NH, 7 R3 = OH) a) Obtention du sel de diéthylamine de la N, N'-
ditrityl-L-lysine
On introduit 3,2 g de N, N'-ditrityl-L-lysinate de méthyle (formule II, R, =-CH3) préparé selon l'exemple 1, dans un mélange de 25 cm3 de propy- lène glycol et 5 cm3 de xylène et porte au reflux pendant trois minutes jusqu'à dissolution totale. On ajoute 20 cm3 d'une solution à 20 % de potasse dans le propylène glycol et 5 cm3 de xylène et poursuit le reflux pendant cinq minutes.
On additionne de 100 cm3 d'eau glacée, refroidit à 00 C et neutralise par 5 cm3 d'acide acétique. Le précipité obtenu est extrait par 50,20 et 20 cm3 de chloroforme ; on lave la solution chloroformique à l'eau, la sèche sur sulfate de magnésium et l'additionne de 2 cm3 de di éthylamine. On évapore à sec et reprend dans 30 cm3 d'éther, essore et lave à l'éther pour obtenir 2,65 g (75 %) de sel de diéthylamine de la N, N'-ditrityl-L- lysine, F. environ 150a C, [a] 2D = + 230 + 1 = 2 %, chloroforme).
Ce produit qui n'a pas encore été décrit, se présente sous forme de petits prismes inco lores, insolubles dans l'eau et l'éther, solubles à chaud dans l'acétone, le benzène, la méthyléthylcétone, solubles dans l'alcool et le chloroforme. Le produit pour analyse est recristallisé dans la méthyléthylcétone.
Analyse : C48Hj302N3 = 703,92
Calculé : C 81,89 % H 7,59 % N 5,97 %
Trouvé : C 82,0 % H 7,5 % N 5,8 % b) Préparafion de l'a-L-lysyl-L-lysine
(Formule V, R2 =-CH (NH2)-(CH2) 4-NH5"
R3 = OH)
On dissout 3,6 g du sel de diéthylamine de N, N' ditrityl-L-lysine, obtenus selon l'alinéa précédent et 2,5 g de dichlorhydrate d'E-N-trityl-L-lysinate de mé- thyle préparés selon l'exemple 1, dans 25 cm3 de chlorure de méthylène, ajoute 0, 7 cm3 de triéthyl- amine puis 1,15 g de dicyclohexylcarbodiimide et abandonne trois heures à la température ambiante.
On additionne de 0,5 cm3 d'acide acétique, laisse reposer quinze minutes, filtre, lave le filtrat à l'eau, le sèche sur sulfate de magnésium et l'évapore à sec sous vide. Le résidu est repris dans 20 cm3 d'éther.
On ajoute 40 cm3 d'alcool, chauffe au reflux et introduit dans le mélange, progressivement, 15 cm3 de soude N. On élimine l'éther sous vide, chauffe le résidu aqueux pendant trois minutes au reflux, glace, ajoute 50 cm3 d'eau, 3 cm3 d'acide acétique et extrait au chloroforme. Les extraits chloroformiques sont lavés à l'eau, sèches sur sulfate de magnésium et évaporés à sec sous vide. Le résidu est traité pendant cinq minutes au reflux de 20 cm3 d'acide acétique à 50 % ; on glace, filtre et évapore le filtrat à sec sous vide. Le résidu huileux obtenu est traité au reflux d'une solution de 3,6 g d'acide Bavianique dans 25 cm3 d'alcool à 80 %.
On laisse refroidir et essore le diflavianate de l'a-lysyl-Llysine.
Le produit se présente sous forme de prismes oranges, F. 210 C.
Claims (1)
- Analyse : C3SH38019N8SS = 902,82 Calculé : C 42, 57 % H 4,24 % N 12,41 % S 7,10 % Trouvé : C 42,6 % H 4,3 % N 12,0 % S 7,4 % REVENDICATION Procédé d'obtention d'a-peptides de la lysine de formule EMI3.1 dans laquelle R2 représente un reste d'un aminoacide caractérisé en ce qu'on traite un lysinate d'alcoyle inférieur au sein d'un solvant et en présence d'un agent alcalin de fixation des hydracides, par un halogrenure de trityle, isole le N, N-ditrityl-lysinate d'alcoyle, détrityle ce dernier sélectivement en a par l'action d'un hydracide en présence d'un solvant, à une température supérieure à la température am biante,isole le dérivé de lysine E-N-tritylé correspondant que l'on fait réagir avec un amino-acide substitué, saponifie, isole l'a-lysyl-peptide-e-N-tritylé et détrityle ce dernier en milieu acide.SOUS-REVENDICATIONS 1. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce qu'on emploie le lysinate de méthyle comme matière première.2. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce que la détritylation du N, N'-ditrityl-lysinate d'alcoyle, ou de l'a-lysyl-peptide-E-N-trityle a lieu à une température voisine de la température de reflux.3. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce que l'hydracide est l'acide chlorhydrique.4. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce que le mélange d'hydracide et de solvant contient de l'acétone.5. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce que le solvant utilisé pour la ditritylation de la lysine est le chloroforme, l'agent de fixation des hydracides étant la triéthylamine.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR732418 | 1957-02-22 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CH382182A true CH382182A (fr) | 1964-09-30 |
Family
ID=8704162
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CH5612258A CH382182A (fr) | 1957-02-22 | 1958-02-20 | Procédé d'obtention de peptides |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CH (1) | CH382182A (fr) |
-
1958
- 1958-02-20 CH CH5612258A patent/CH382182A/fr unknown
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