CH362086A

CH362086A - Procédé pour la préparation d'un tripeptide

Info

Publication number: CH362086A
Authority: CH
Inventors: Velluz Leon; Amiard Gaston; Bartos Jaroslav; Goffinet Bernard; Heymes Rene
Original assignee: Roussel Uclaf
Priority date: 1956-03-30
Filing date: 1957-03-28
Publication date: 1962-05-31

Description


  



  Procédé, pour la préparation d'un tripeptide
 La présente invention est relative à un. procédé pour la préparation   d'un      wipeptide,    terme intermédiaire de la synthèse de l'ocytocine, hormone   nonapeptidique    dont la formule de constitution suivante :
EMI1.1     
 a ÚtÚ dÚmontrÚe par Du Vigneaud et collaborateurs, J. Am. Chem. Soc., 1954, 76, 3115.



   Le tripeptide dont la prÚparation fait l'objet de la prÚsente invention est la S,N-ditrityl-L-cystÚinyl-L-tyro  syl-L-isoleucine,    composé de formule II suivante :
EMI1.2     
 
 Comme on le voit, ce composé préfigure une portion du cycle polypeptidique de la molécule de l'ocytocine et représente un intermédiaire de grande valeur pour la synthèse de cette hormone du lobe postérieur de l'hypophyse.



   Les avantages de la préparation de la S, N  ditrityl-L-cystéinyl-L-tyrosyl-L-isoleucine    selon   l'in-    vention résident entre autres dans l'utilisation comme matière première, de la S, N-ditrityl-cystÚine, produit d'accès aisé du fait d'un blocage identique à l'azote et au soufre qui peut être facilement clivé par des réactifs simples et dans des installations courantes.



   La grande simplicité du procédé de l'invention, remarquable par la répétition de techniques identiques et l'excellence des rendements, le rend particulièrement apte à l'industrialisation.



   Selon le procédé de l'invention, on dissout dans un solvant un sel de S, N-ditrityl-L-cystÚine et un sel d'un ester de la L-tyrosine, ajoute un léger excès de dicyclohexylcarbodiimide, détruit, après réaction, l'excédent de dicyclohexylcarbodiimide, filtre, évapore à sec, isole 1'ester de la S, N-ditrityl-L-cystÚinyl
L-tyrosine, le saponifie en présence d'un agent alcalin dans un solvant approprié, isole la S, N-ditrityl-L  cystéinyl-L-tyrosine,    dissout dans un solvant un sel de ladite   S, N-ditrityl-L-cystéinyl-L-tyrosine    et un sel d'un ester de la L-isoleucine, ajoute un léger excès de dicyclohexylcarbodiimide, détruit, après réaction, l'excédent de dicyclohexylcarbodiimide, filtre,   éva-    pore à sec, isole 1'ester de la S, N-ditrityl-L-cystÚinyl  L-tyrosyl-L-isoleucine,

      le saponifie en présence d'un agent alcalin dans un solvant et isole la S, N-ditrityl  L-cystéinyl-L-tyrosyl-L-isoleucine.   



   Selon un mode préféré de réalisation du procédé selon l'invention, on dissout dans le chlorure de méthylène le sel de   diéthylamine    de la S, N-ditrityl
L-cystéine, le chlorhydrate du L-tyrosinate d'éthyle et un excès d'environ   10 ouzo    de dicyclohexylcarbodiimide, détruit après réaction l'excédent de ce dernier réactif par addition d'acide acétique, isole le S, N  ditrityl-L-cystéinyl-L-tyrosinate    d'éthyle suivant les méthodes habituelles, le saponifie par traitement au reflux de la potasse   méthanolique,    forme le sel de   triéthylamine    de la S,

     N-ditrityl-L-cystéinyl-L-tyrosine    qu'on fait réagir sur le L-isoleucinate de méthyle en présence de dicyclohexylcarbodiimide au sein du chlorure de méthylène comme indiqué ci-avant pour obtenir, après traitement usuels, le   S,    N-ditrityl-L  cystéinyl-L-tyrosyl-L-isoleucinate    de méthyle d'où l'on passe par saponification dans la potasse méthanolque, à la S,   N-ditrityl-L-cystéinyl-L-tyrosyl-L-iso-    leucine.



   Le mode opératoire décrit dans l'exemple qui suit peut évidemment être utilisé au départ d'aminoacides racémiques ou énantiomorphes. On peut également faire varier les températures de réactions, modifier la nature des solvants, employer d'autre esters que ceux mentionnés ou préparer les matières premières par d'autres voies que celles préconisées ici, et saponifier par toute autre méthode connue. Il est aussi possible d'utiliser un autre carbodiimide   disubstitué.   



  Les points de fusion ont été déterminés sur bloc de
Maquenne.



   Exemple
PrÚparation du S,N-ditrityl-L-cystÚinyl-L-tyrosinate
 d'éthyle
EMI2.1     
   Condensation du S, N-ditrtyl-L-cystéinate de diéthyl-   
 amine sur le chlorhydrate du L-tyrosinate
 d'éthyle
 On dissout dans 100 cm3 de chlorure de mé  thylène    un mélange constitué par 20 g de S, N  ditrityl-L-cystéinate    de   diéthylamine    et 7, 6 g de chlorhydrate du L-tyrosinate d'éthyle, ajoute 6, 7 g de dicyclohexylcarbodiimide en solution dans 20   cmS    de chlorure de méthylène, abandonne deux heures à la température ambiante puis chauffe deux heures aux environs de   35o C.    On ajoute 2   cm3    d'acide acétique cristallisable, laisse reposer trente minutes à la température du laboratoire, filtre,

   lave la solution obtenue à 1'eau tout en ajoutant de l'acide chlorhydrique N jusqu'à pH 2 puis encore à l'eau, la sèche sur sulfate de magnésium et   l'éva-    pore à sec sous vide. On cristallise le résidu dans 30   cml    d'éther pour obtenir 19, 6 g (83    /o)    de S, N  ditrityl-L-cystéinyl-L-tyrosinate    d'éthyle, F 135  C, puis   1830 C    avec resolidification intermédiaire,   (an      =    +77¯¯ 1 (c = 2%, chloroforme). Le produit, qui n'a pas encore été décrit, se présente sous forme de petits prismes rectangulaires incolores, solubles dans le benzène et le chloroforme, peu solubles dans l'alcool et l'acétone, très peu solubles dans l'éther et insolubles dans   l'eau.   



     Analyse : C52H4804N2S=796,    98
Calculé   : C 78, 36 /o H 6, 07 /o N 3, 52 /o S 4, 02 /o       O 8, 03  /o   
Trouvé   : C 78, 3  /o H 6, 0  /o N 3, 6  /o S 4, 0  /o       08, 2  < '/o   
 Pour la préparation du S, N-ditrityl-L-cystÚinate de   diéthylamine,    on procède comme suit :

   dans une solution refroidie à   0O    C, de 25 g de chlorhydrate de
L-cystéine, [a]   D0= +5, 5O (c= 1 /o,    acide chlorhydrique N), dans 480 cm3, d'eau, on introduit, sous courant d'azote et agitation mécanique, 480 cm3 d'éther et 80   cm3    de   diéthylamine    puis refroidit à   -5o C.    Sans interrompre l'agitation, on introduit 120 g de chlorure de trityle et poursuit l'agitation pendant trois heures. On ajoute encore 200 cm3 de chloroforme, décante la phase aqueuse, lave la phase organique avec 300 cm3 d'eau, la sèche sur sulfate de magnésium, ajoute 100 cm3 d'alcool contenant 1   cm    de   diéthylamine    et chasse le chloroforme par distillation.

   On ajoute à la solution alcoolique ainsi obtenue 100   cm3    d'éther et essore 55 g de sel de   diéthyl-    amine de la S,   N-ditrityl-L-cysteine,    [a]   D       =    + 71        1   (c = 2  /o,    chloroforme). Les eaux mères fournissent encore un deuxième jet qui porte le rendement global à   70 g.      



  Saponification du S, N-ditrityl-L-cystéinyl-L-tyrosinate   
 d'éthyle
 On introduit 19 g de S, N-ditrityl-L-cystÚinyl-Ltyrosinate d'éthyle dans 80   cm3 de méthanol,    ajoute 16 cm3 de potasse   méthanolique    3 N, 50 cm3 d'eau et chauffe au reflux pendant quelques minutes. On ajoute alors 600 cm3 d'eau, puis sous vive agitation 49 cm3 d'acide chlorhydrique N, extrait par 3 fois 300 cm3 d'éther, réunit les extraits éthérés qu'on lave à l'eau, sèche sur sulfate de magnésium et Úvapore à sec sous vide.

   On cristallise le résidu dans   20 cm3 d'éthanol    et obtient 14,   9 g, 82 O/o,    de
S,   N-ditrityl-L-cystéinyl-L-tyrosine,    F   146-1480    C,   [a]      = + 87, 50 + 1    (c = 2"/o, chloroforme). Le produit qui est nouveau se présente sous forme de petits prismes rectangulaires incolores solubles dans le chloroforme, peu solubles dans l'alcool, l'éther, l'acÚtone, le benzène, insolubles dans l'eau.



     Analyse : CaoH4404N2S = 768,    93
Calculé   : C78, 09 /o H5, 77 /o N3, 64 /o S4, 17 /o   
Trouve   : 78,    1    /o    5, 8% 3, 8  /o 4,   3 O/o      Préparation    du S,N-ditrityl-L-cystÚinyl-L-tyrosyl-L-isoleucinate de mÚthyle
EMI3.1     
 a) Préparation du   S, N-dtrityl-L-cystéinyl-L-tyrosi-   
 nate de   triéthylamine   
 On dissout 2 g de S, N-ditrityl-L-cystÚinyl-L-tyrosine dans 4   cm'de chloroforme,    ajoute 0, 37 cm3 de   triéthylamine    puis 25 cm3 d'Úther de pétrole (30  75  C),    centrifuge, décante et cristallise dans l'Úther.



  On obtient ainsi 2,   2 g (97 a/o)    de   S,    N-ditrityl-L  cystéinyl-L-tyrosinate    de   triéthylamine      [&alpha;]20D = +77¯       1 (c = 2 /o,    chloroforme). b) Condensation du   S, N-ditrityl-L-cystéinyl-L-tyro-   
   sinate de triéthylamine sur le chlorhydrate du    L
 isoleucinate de méthyle
 On dissout 7, 5 g de sel de   triéthylamine    du S, N  ditrityl-L-cystéinyl-L-tyrosinate    de   triéthylamine    et   1,    7 g de chlorhydrate du L-isoleucinate de méthyle préparé selon Smith, Spackman et Poglase, J. Biol.



  Chem., 1952,   199,    803, dans 30   cm3 de    chlorure de méthylène, ajoute 2, 1 g de dicyclohexylcarbodiimide en solution dans 10 cm3 de chlorure de méthylène et abandonne trois heures à la température ambiante.



  On ajoute 2   cmg    d'acide acétique cristallisable, laisse reposer trente minutes à la température ambiante, filtre, lave la solution organique à 1'eau tout en ajoutant de l'acide chlorhydrique N jusqu'à obtention d'un pH = 2 dans les eaux de lavage, lave à l'eau, sèche sur sulfate de magnésium et évapore à sec sous vide. Le résidu est repris dans 20 cm3 d'éther de pétrole   (30-75O    C). On essore, lave à l'éther de pétrole et obtient ainsi, après séchage, 7, 7 g, soit un rendement quantitatif, de S, N-ditrityl-L-cystÚinyl
L-tyrosyl)-L-isoleucinate de méthyle. Ce produit, qui n'a pas encore été décrit, se présente sous forme d'une poudre incolore soluble dans la plupart des solvants organiques, insoluble dans l'éther de pétrole.   



  Sa ponif ication d u S, N-d itrityl-L-cystéinyl-L-tyrosyl-L-   
 isoleucinate de méthyle
 On dissout à chaud, dans 30 cm3 de méthanol, 7, 7 g de S, N-ditrityl-L-cystÚinyl-L-tyrosyl-L-isoleucinate de méthyle. On introduit 6, 2 cm3 de potasse méthanolique 3 N et 19, 5 cm3 d'eau, porte cinq minutes à l'ébullition, ajoute 230 cm3 d'eau et 18 cm3 d'acide chlorhydrique N. On extrait par deux fois 300 cm3 d'éther, sèche la solution éthérée sur sulfate de magnésium et évapore à sec sous vide.



   Le résidu est repris dans 20 cm3 d'acétone ; on filtre et évapore à sec sous vide pour obtenir une huile qui durcit rapidement par trituration sous l'eau.



  On essore, lave à l'eau, sèche sous vide et obtient ainsi 5, 8 g (76   10/o)    de S,   N-ditrityl-L-cystéinyl-L-tyro-    syl-L-isoleucine. Ce produit, qui n'a pas encore été décrit, se présente sous forme d'une poudre blanche soluble dans   l'alcool,    l'éther, l'acétone, le benzène et le chloroforme, insoluble dans l'eau. Il fond à environ   143-145"C, [a] = + 50"    1   (c = 2 4)/o,      éthanol).

Claims

A nalyse C5GH5505N3S = 882, 08 Calculé : C 76, 25 /o H 6, 28 /o O 9, 07 /o N 4, 76 O/o S3, 630/o Trouvé : C 76,5%H 6,3%O 8,7%N 4,4% S 3, 9 oxo REVENDICATION Procédé de préparation de la S, N-ditrityl-L cystéinyl-L-tyrosyl-L-isoleucine, caractérisé en ce qu'on dissout dans un solvant un sel de S, N-ditrityl L-cystéine et un sel d'un ester de la L-tyrosine, ajoute un léger excès de dicyclohexylcarbodiimide, détruit, après réaction, l'excédent de dicyclohexylcarbodiimide, filtre, évapore à sec, isole 1'ester de la S, N-ditrityl-L-cystéinyl-L-tyrosine,

le saponifie en présence d'un agent alcalin dans un solvant approprié, isole la S, N-ditrityl-L-cystéinyl-L-tyrosine, dissout dans un solvant un sel de ladite S, N-ditrityl-L cystéinyl-L-tyrosine et un sel d'un ester de la L-isoleucine, ajoute un léger excès de dicyclohexylcarbodiimide, détruit, après réaction, l'excédent de dicyclohexylcarbodiimide, filtre, évapore à sec, isole 1'ester de la S, N-ditrityl-L-cystéinyl-L-tyrosyl-L-iso- leucine, le saponifie en présence d'un agent alcalin dans un solvant et isole la S, N-ditrityl-L-cystéinyl-L- tyrosyl-L-isoleucine.

SOUS-REVENDICATIONS 1. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce que le solvant dans lequel on effectue la condensation du sel de S, N-ditrityl-L-cystéine sur le sel d'un ester de la L-tyrosine est le chlorure de méthylène.

2. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce que le sel de S, N-ditrityl-L-cystéine est le sel de diéthylamine.

3. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce que le sel d'un ester de la L-tyrosine est le chlorhydrate du L-tyrosinate d'éthyle.

4. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce que l'excès de dicyclohexylcarbodiimide est compris entre 10 et 30 /o.

5. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce qu'on détruit l'excédent de dicyclohexylcarbodiimide par addition d'acide acétique.

6. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce que la saponification de l'ester est effectuée au sein d'un alcool inférieur miscible à 1'eau et l'agent alcalin est un hydroxyde alcalin.

7. Procédé suivant la revendication et la sousrevendication 6, caractérisé en ce que l'alcool est le méthanol.

8. Procédé suivant la revendication et la sousrevendication 6, caractérisé en ce que l'hydroxyde alcalin est la potasse.

9. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce que le solvant dans lequel on effectue la condensation du sel de S, N-ditrityl-L-cystéinyl-L-tyro- sine sur le sel d'un ester de la L-isoleucine est le chlorure de méthylène.

10. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce que le sel de S, N-ditrityl-L-cystéinyl-L-tyrosine est le sel de triéthylamine.

11. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce que le sel d'un ester de la L-isoleucine est le chlorhydrate du L-isoleucinate de méthyle.