JPH04227268A - 吸着体の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は血液中の有害成分を除去
するための吸着体の製造法に関する。さらに詳しくは、
血液あるいは血漿、血清中からリポ蛋白、とくに極低密
度リポ蛋白（ＶＬＤＬ）および（または）低密度リポ蛋
白（ＬＤＬ）　を選択的に吸着除去するための吸着体の
製造法に関する。

【０００２】

【従来の技術・発明が解決しようとする課題】血液中に
存在するリポ蛋白のうちＶＬＤＬ、ＬＤＬ　はコレステ
ロールを多く含み、動脈硬化の原因となることが知られ
ている。 とりわけ家族性高脂血症などの高脂血症、高コレステロ
ール症においては、正常値の数倍のＶＬＤＬおよび（ま
たは）ＬＤＬ値を示し、冠動脈の硬化などをひきおこす
。

【０００３】これらの疾患の治療には食事療法、薬物療
法が行なわれているが、効果に限度があり、副作用も懸
念されている。とくに家族性高脂血症に対してはＶＬＤ
Ｌ、ＬＤＬを多く含んだ患者の血漿を分離したのち、正
常血漿またはアルブミンなどを成分とする補液と交換し
てＶＬＤＬ値、ＬＤＬ　値を低下させる、いわゆる血漿
交換療法が現在のところほぼ唯一の効果的な治療法であ
る。

【０００４】しかしながら、血漿交換療法は周知のごと
く、（１）　高価な新鮮血漿あるいは血漿製剤を用いる
必要がある、（２）　肝炎ウィルスなどの感染の惧れが
ある、（３）　有害成分のみでなく有用成分も同時に除
去してしまう、すなわち、リポ蛋白のばあい、有用であ
る高密度リポ蛋白（ＨＤＬ）　も同時に除去してしまう
、などの欠点を有する。

【０００５】叙上の欠点を解消する目的で膜による有害
成分の選択的除去が試みられているが、選択性の点で満
足できるものはいまだえられていない。

【０００６】また、同じ目的で抗原、抗体などを固定し
た、いわゆる免疫吸着体を用いる試みがなされており、
該方法は選択性の点ではほぼ満足できるものの、用いる
抗原、抗体の入手が困難かつ高価であるという欠点を有
する。

【０００７】さらには、除去対象物質に特異的な親和性
（アフィニティー）を有する物質（以下、リガンドとい
う）を担体に固定した、いわゆるアフィニティークロマ
トグラフィーの原理による吸着体も試みられている。該
方法に用いられるリガンドは抗原、抗体などに比べれば
入手しやすい物質が多いが、生体に由来する物質が多い
ため、体外循環治療に用いるには滅菌操作などに対する
安定性、価格、安全性などの点で満足しうるものはあま
りない。

【０００８】この中でデキストラン硫酸および（または
）その塩はリガンドとして優れており、これを水不溶性
多孔体に共有結合を介して固定することによって、高効
率でかつ安全に、しかも選択性よくリポ蛋白を吸着除去
しうる体外循環治療用吸着体がえられる。

【０００９】しかしながら、デキストラン硫酸および（
または）その塩は、固定化反応に利用できる官能基とし
て反応性の低い水酸基しかなく、必要量のデキストラン
硫酸および（または）その塩を固定するのが困難であっ
た。

【００１０】本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、デキ
ストラン硫酸および（または）その塩も、担体によって
は効率よく固定できることを見出し、本発明を完成する
に至った。

【００１１】

【課題を解決するための手段】すなわち、本発明は、デ
キストラン硫酸および（または）その塩を共有結合を介
して水不溶性多孔体に固定する体外循環治療用リポ蛋白
吸着体の製造法に関する。

【００１２】

【実施例】デキストラン硫酸および（または）その塩と
は、ロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏ
ｎｏｓｔｏｃ　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）などによ
り生産される多糖であるデキストランの硫酸エステルお
よび（または）その塩であり、直鎖状でも分岐鎖状でも
よく、塩としてはナトリウム、カリウムなどの水溶性塩
が好ましい。

【００１３】なお、本発明に使用するデキストラン硫酸
および（または）その塩は、リポ蛋白の吸着効率や安全
性の面から比較的低分子量でかつイオウ含量が高いもの
が望ましい。目安としては、極限粘度が０．１２ｄｌ／
ｇ以下、イオウ含量が１５重量％以上である。

【００１４】本発明でいう極限粘度とは、デキストラン
硫酸および（または）その塩をナトリウム塩とし、中性
の１Ｍ食塩水溶液中、２５℃で測定したものである。

【００１５】担体として用いる水不溶性多孔体としては
、たとえば多孔質セルロースゲルがあげられる。多孔質
セルロースゲルは、他の担体（とくに合成高分子系担体
）に比べ、担体上の単位活性基あたりのデキストラン硫
酸および（または）その塩の固定量が多く、好都合であ
り、その他にもつぎのような長所を有している。

【００１６】（１）　機械的強度が高く、カラムなどに
充填して、血液、血漿などの体液を流したばあいの圧力
損失が小さく、目詰りなどをおこしにくい。

【００１７】（２）　充分な大きさの細孔が多数存在し
、吸着除去対象物質が細孔内に侵入できるようにせしめ
うる。なお、球状蛋白質およびウィルスを用いて測定し
た排除限界分子量は１００　万〜１億の範囲が適当であ
る（ただし排除限界分子量とは細孔内に侵入できない（
排除される）分子のうち最も小さい分子量をもつものの
分子量をいう）。

【００１８】（３）　同様の細孔径、空孔率を有する合
成ポリマーハードゲルに比べ、強じんで、破砕の恐れが
少ない。

【００１９】（４）　表面に固定化反応に用いうる官能
基または容易に活性化しうる官能基としてヒドロキシル
基が存在する。

【００２０】（５）　高圧蒸気滅菌などの滅菌操作によ
る変化が少ない。

【００２１】なお、（２）　の球状蛋白質およびウィル
スを用いて測定した排除限界分子量（以下、排除限界分
子量という）に関しては、排除限界分子量１００　万未
満の担体を用いたばあいには、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ　の除
去量が小さく実用に耐えないが、排除限界分子量が１０
０　万〜数百万とＶＬＤＬ、ＬＤＬ　の分子量に近い担
体でもある程度実用に供しうるものがえられる。一方、
排除限界分子量が１億をこえると、リガンドの固定量が
減少して結果的に吸着量が減り、またゲルの強度も低下
するため好ましくない。かかる理由のため本発明に用い
る水不溶性多孔体は排除限界分子量が１００　万〜１億
の範囲であるのが適当である。

【００２２】また、水不溶性多孔体の表面は、合成高分
子などでコーティングされていてもよい。

【００２３】水不溶性多孔体の粒子径は小さい方が吸着
能力の点で好ましいが、粒子径があまりに小さくなると
カラムに充填したばあいの圧力損失が大きくなり、好ま
しくなく、１〜５，０００　μの範囲であることが好ま
しい。

【００２４】デキストラン硫酸および（または）その塩
を水不溶性多孔体に固定する方法には種々あるが、体外
循環治療に用いるにはリガンドが脱離しないことが重要
であるので、リガンドが結合の強固な共有結合を介して
水不溶性多孔体に固定されていることが必要である。

【００２５】固定化方法の代表例としては、ハロゲン化
シアン法、エピクロルヒドリン法、ビスエポキサイドな
どのポリオキシラン化合物を用いる方法、ハロゲン化ト
リアジン法などがあげられるが、結合が強固でリガンド
の脱離の危険性が少ないエピクロルヒドリン法、または
ビスエポキサイドなどのポリオキシラン化合物を用いる
方法が本発明に適している。デキストラン硫酸および（
または）その塩の固定化量については、有意なリポ蛋白
吸着量をうるにはカラム体積１ｍｌあたり０．２ｍｇ以
上が好ましく、また経済性を考慮すると１００ｍｇ　以
下が望ましい。

【００２６】なお、固定化反応終了後未反応のデキスト
ラン硫酸および（または）その塩は回収して精製などの
工程を経て再使用することもできる。

【００２７】また、デキストラン硫酸および（または）
その塩を固定した水不溶性多孔体は、未反応の活性基を
モノエタノールアミンなどで不活性化しておくことが望
ましい。

【００２８】本発明による吸着体を体外循環治療に用い
るには種々の方法があるが、入口と出口に体液成分（血
球、蛋白質など）は通過するが吸着体は通過できないフ
ィルター、メッシュなどを装着したカラムに充填し、該
カラムを体外循環回路に組み込み、血液、血漿などの体
液をカラムに通して行なう方法が代表的である。

【００２９】つぎに実施例をあげて本発明の方法をさら
に詳しく説明するが、本発明はかかる実施例のみに限定
されるわけではない。

【００３０】実施例１ 架橋ポリアクリレートであるトヨパールＨＷ６５（東洋
曹達（株）製、排除限界分子量５，０００，０００　、
粒子径５０〜１００　μｍ　）１０ｍｌに飽和ＮａＯＨ
水溶液６ｍｌ、エピクロルヒドリン１５ｍｌを加え、攪
拌しながら５０℃で２時間反応させたのち、ゲルをアル
コールおよび水の順で洗浄してエポキシ化されたゲルを
えた。導入されたエポキシ基の量は、カラム体積１ｍｌ
あたり２５０　μｍｏｌ　であった。

【００３１】えられたゲル２ｍｌに、極限粘度（デキス
トラン硫酸および（または）その塩をナトリウム塩とし
、中性の１Ｍ食塩水溶液中、２５℃で測定したもの、以
下同様）０．０２７ｄｌ／ｇ　、イオウ含量１７．７重
量％のデキストラン硫酸ナトリウム０．５ｇおよび水２
ｍｌを加えた（デキストラン硫酸ナトリウムの濃度は約
１３重量％）。ついでｐＨ１１に調整し、４５℃で１６
時間振とう後ゲルを濾別して２Ｍ食塩水、０．５Ｍ食塩
水および水の順で洗浄してデキストラン硫酸ナトリウム
が固定されたゲルをえた。固定されたデキストラン硫酸
ナトリウムの量は、カラム体積１ｍｌあたり０．４ｍｇ
　であり、エポキシ基１μｍｏｌ　あたりの固定量は１
．６　μｇ　であった。

【００３２】実施例２ 多孔質セルロースゲルであるＣＳＫＡ−３（チッソ（株
）製、排除限界分子量５０，０００，０００、粒子径４
５〜１０５　μｍ　）１０ｍｌに、２０％ＮａＯＨ４ｇ
　、ヘプタン１２ｇ　およびノニオン系界面活性剤ＴＷ
ＥＥＮ２０　を１滴加えた。４０℃で２時間攪拌後、エ
ピクロルヒドリン５ｇ　を加えて２時間攪拌し、ゲルを
水洗濾過してエポキシ化セルロースゲルをえた。導入さ
れたエポキシ基の量はカラム体積１ｍｌあたり３０μｍ
ｏｌ　であった。

【００３３】えられたゲル２ｍｌに極限粘度０．０２７
ｄｌ／ｇ　、イオウ含量１７．７重量％のデキストラン
硫酸ナトリウム０．１２ｇ　および水２ｍｌを加え（デ
キストラン硫酸ナトリウムの濃度は約２．５　重量％）
、ｐＨ１１に調整して４５℃で１６時間振とうした。ゲ
ルを濾別して、２Ｍ食塩水、０．５Ｍ食塩水および水の
順で洗浄し、デキストラン硫酸ナトリウムが固定された
セルロースゲルをえた。

【００３４】固定されたデキストラン硫酸ナトリウムの
量はカラム体積１ｍｌあたり０．１５ｍｇであり、エポ
キシ基１μｍｏｌ　あたりの固定量は５μｇ　であった
。

【００３５】実施例３ 固定化反応時のデキストラン硫酸ナトリウムの濃度を１
３重量％にしたほかは、実施例２と同様にして固定化反
応を行なった。固定されたデキストラン硫酸ナトリウム
の量はカラム体積１ｍｌあたり２．３ｍｇ　で、エポキ
シ基１μｍｏｌ　あたりの固定量は７６μｇ　であった
。

【００３６】試験例 実施例１〜３でえられたゲルをモノエタノールアミンを
用いて未反応のエポキシ基を不活性化させたのち、それ
ぞれ１ｍｌをカラムに充填し、該カラムに高脂血症患者
の血漿（総コレステロール濃度３０８ｍｇ／ｄｌ）６ｍ
ｌを流し、流出した血漿中のＬＤＬ　濃度を総コレステ
ロールを指標として測定した（用いた血漿中のコレステ
ロールはほとんどがＬＤＬ　に由来するため）。

【００３７】結果を表１に示す。

【００３８】

【表１】

【００３９】

【発明の効果】本発明の方法により製造された吸着体を
体外循環治療に用いると、血液あるいは血漿、血精中か
らリポ蛋白、とくに極低密度リポ蛋白（ＶＬＤＬ）およ
び（または）低密度リポ蛋白（ＬＤＬ）　を選択的に吸
着除去しうる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １　　デキストラン硫酸および（または）その塩を共有
   結合を介して水不溶性多孔体に固定する体外循環治療用
   リポ蛋白吸着体の製造法。