JPH0434451B2 - - Google Patents

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JPH0434451B2
JPH0434451B2 JP61027727A JP2772786A JPH0434451B2 JP H0434451 B2 JPH0434451 B2 JP H0434451B2 JP 61027727 A JP61027727 A JP 61027727A JP 2772786 A JP2772786 A JP 2772786A JP H0434451 B2 JPH0434451 B2 JP H0434451B2
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Description

【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］ 本発明はリポ蛋白用吸着体に関する。さらに詳
しくは、アポＢ蛋白を含むリポ蛋白すなわち、低
密度リポ蛋白（以下、LDLという）および極低
密度リポ蛋白（以下、VLDLという）を選択的に
血液成分などから吸着除去するためのリポ蛋白用
吸着体に関する。 ［従来の技術および発明が解決しようとする問題
点］ 血液中に存在するリポ蛋白、なかでもLDLお
よびVLDLはコレステロールを多く含み、動脈硬
化の原因となることが知られている。一方高密度
リポ蛋白（以下、HDLという）は動脈硬化の遅
延因子であることが知られている。 前記LDLおよびVLDLを除去する方法として
は従来より膜による除去方法あるいは吸着体によ
る除去方法が採用されている。 膜による除去方法では、LDLおよびVLDLと
同時にHDLも相当除去されてしまい、かかるリ
ポ蛋白の選択性を満足しうるものではなく、また
血漿蛋白の一部も同時に除去されるため、これを
補う必要があるなどの欠点がある。 また吸着体による除去方法としては、たとえば
抗体などを固定したいわゆる免疫吸着体を用いる
除去方法やLDLおよびVLDLに親和性を呈する
化合物（以下、リガンドという）を固定した、い
わゆるアフイニテイークロマトグラフの原理を用
いた吸着体を用いる除去方法がある。 前記免疫吸着体を用いる除去方法はリポ蛋白の
選択性をほぼ満足するが、用いる抗体には、その
入手が困難でかつ高価であり、またその保存安定
性がわるいなどの問題点がある。 前記アフイニテイークロマトグラフの原理を用
いた吸着体を用いる除去方法では、吸着体のリガ
ンドとしてヘパリン、デキストラン硫酸などが用
いられており、これらのリガンドを用いた吸着体
はリポ蛋白の選択性が良好であり、リガンドその
ものもそれほど高価ではないが、リガンドを大量
に用いるばあいにはさらに低価格のリガンドが望
まれる。またたとえばフエニルグリシジルエーテ
ルのような有機化合物をリガンドとし、フエニル
基とリポ蛋白表面の疎水性部位間の疎水性相互作
用によりリポ蛋白を吸着除去する吸着体としてフ
エニルセフアロースCL−4B（商品名、フアルマ
シアフアインケミカルズ社製）が市販されてい
る。この吸着体は安価ではあるがLDL、VLDL
のみならず、HDLをも大量に吸着するのでリポ
蛋白の選択性の点で大きな問題がある。 本発明は叙上の問題点を解決し、LDLおよび
VLDLのみを選択的に除去しうる安価なリポ蛋白
用吸着体を提供することを目的とするものであ
る。 ［問題点を解決するための手段］ 本発明は低密度リポ蛋白および極低密度リポ蛋
白を吸着除去するための吸着体であつて、アニリ
ンを水不溶性担体に固定したことを特徴とするリ
ポ蛋白用吸着体に関する。 ［実施例］ 本発明の吸着体はアニリンが水不溶性担体に固
定されたものであるが、、その固定の方法として
は公知の種々の方法を特別な制限なしに用いるこ
とができる。 すなわち、物理的方法、イオン結合法、共有結
合法などがあげられる。固定化されたアニリンが
脱離しにくいことが重要であるため、結合の強固
な共有結合法が好ましく、その他の方法を用いる
にしても脱離を防ぐようにすることが好ましい。
また必要に応じてスペーサーを水不溶性担体とア
ニリンの間に導入してもよい。 本発明に用いる水不溶性担体としては無機担
体、合成高分子あるいは多糖類からなる有機担体
あるいは有機担体および無機担体からなる複合担
体のいずれであつてもよいが、血液中に存在する
リポ蛋白の存在環境からいえば親水性の水不溶性
担体が好ましく、さらには目的物質以外の物質の
吸着、いわゆる非特異吸着が少ないものが好まし
い。さらには担体表面に固定化反応に用いうる官
能基あるいは容易に活性化しうる官能基が存在し
ていると好都合である。これらの官能基の代表例
とてはアミノ基、カルボキシル基、ヒドロキシル
基、チオール基、酸無水物基、サクシニルイミド
基、塩素基、アルデヒド基、アミド基、エポキシ
基、シラノール基などがあげられる。 本発明に用いる好ましい水不溶性担体の代表例
としてはガラスビーズ、シリカゲルなどの無機担
体、架橋ポリビニルアルコール、架基ポリアクリ
レート、架橋ポリアミドなどの合成高分子化合物
や結晶性セルロース、架橋セルロース、架橋アガ
ロース、架橋デキストランなの多糖類からなる有
機担体など、さらには無機担体表面を前記合成高
分子化合物あるいは多糖類などでコーテイングし
た有機担体と無機担体の複合担体、前記合成高分
子化合物よりなる担体表面を多糖類でコーテイン
グしたような有機担体と有機担体の複合担体など
があげられるが、本発明はこれらのみに限定され
るものではない。 本発明の吸着体の形状は粒状、繊維状、膜状あ
るいはホローフアイバー状などいずれの形状であ
つてもよく、また吸着体の微細構造は多孔質ある
いは非多孔質のいずれであつてもよいが、単位体
積あたりの高い吸着能をうるためには比表面積が
大きいこと、すなわち多孔質であることが好まし
い。 本発明の吸着体は、血液、血清、血漿およびそ
の希釈液あるいはこれらの液に血球除去や血清タ
ンパク除去などの前処理を施したものなどのよう
な種々のリポ蛋白を含む溶液よりLDLやVLDL
を除去するために用いられ、高脂血症患者の体外
循環治療用吸着体としても用いることができる。
たとえば、体外循環治療用吸着体として用いるば
あい、吸着体の圧密化を防ぐためには充分な機械
的強度を有し、さらに単位体積あたりの高い吸着
量をうるためには多孔質の性能を有する吸着体で
あるのが好ましい。たとえば水不溶性担体にアニ
リンを固定してなる本発明の吸着体において水不
溶性担体としてゲルを用いるばあい、かかるゲル
は硬質ゲルであり、かつ多孔質とくに全多孔質の
ゲルであるのが好ましく、さらには細孔径は、
100万以上の分子量をもつLDLやVLDLがゲル内
に侵入できるのに充分な大きさであることが好ま
しい。ここでいう硬質ゲルとは後記参考例に示す
ごとく、ゲルを円筒状カラムに均一に充填し、水
性流体を流した際の圧力損失と流量の関係が、
0.3Kg／cm2まで比例関係にあるものをいう。また
多孔質とは細孔容積が20％以上で比表面積が３
m2／ｇ以上のものであることを意味し、LDLや
VLDLがゲル内に侵入できるのに充分な大きさの
細孔径とは、ゲルの細孔径の目安としてよく用い
られる排除限界分子量が100万以上（球状蛋白質
を用いてえられた値）の大きさを意味する。排除
限界分子量とはたとえば「実験高速流体クロマト
グラフイ」（波多野博行、花井俊彦共著、(株)化学
同人発行）などの成書に記載されているごとく、
ゲル浸透クロマトグラフイにおいて細孔内に侵入
できない、すなわち排除される分子のうち最も小
さい分子量を有するものの分子量をいう。 つぎに実施例に基づいて本発明の吸着体をさら
に詳細に説明するが、本発明はかかる実施例のみ
に限定されるものではない。 参考例 両端に孔径15μｍのフイルターを装着したガラ
ス製円筒カラム（内径９mm、カラム長さ150mm）
にアガロースゲル（Biorado社製のBiogel A5m、
粒径５〜100メツシユ）、ポリマー硬質ゲル（東洋
曹達工業(株)制のトヨパールHW65、粒径50〜100μ
ｍ、およびチツソ(株)製のセルロフアインGC−
700、粒径45〜105μｍ）をそれぞれ均一に充填
し、ペリスタテイツクポンプにより水を流し、流
量と圧力損失ΔPとの関係を求めた。その結果を
第１図に示す。 第１図の結果からポリマー硬質ゲルが圧力の増
加にほぼ比例して流量が増加するのに対し、アガ
ロースゲルは圧密化をひきおこし、圧力を増加さ
せても流量が増加しないことがわかる。 実施例 １ 多孔質セルロースゲルであるCKゲルＡ−３（チ
ツソ(株)製、球状蛋白質の排除限界分子量
50000000、粒径63〜125μｍ）20mlにｎ−ヘプタ
ン20ml、20％NaOH6mlおよびTween20（花王ア
トラス(株)製）を２滴加え、40℃で２時間攪拌した
のち、エピクロルヒドリン６mlを加え、さらに２
時間40℃で攪拌を継続後、水洗し、エポキシ化ゲ
ルをえた。このエポキシ化ゲル10mlにアニリン
300mgを溶解した。30％（Ｖ／Ｖ）ジオキサン水
溶液10mlを加え40℃で静置下、４時間反応させ
た。反応終了後、15％（Ｖ／Ｖ）ジオキサン水溶
液、水、2M食塩水、水の順でゲルを洗浄し、ア
ニリン固定化ゲルをえた。 つぎにえられたゲル１mlを試験管にとり、ヒト
血清４mlを加えたのち、攪拌しながら37℃で２時
間インキユベートし、ついで上澄み液のLDL、
VLDLおよびHDL−コレステロールの量を測定
した。その結果を第１表に示す。 実施例 ２ 架橋アガロースゲルであるセフアロースCL−
6B（フアルマシアフアインケミカルズ
（Pharmacia Fine Chemicals）社製、排除限界
分子量：4000000）20mlを水に20mlに懸濁させ、
これに2M NaOH10mlを加え、40℃としたのち、
エピクロルヒドリン４mlを加え40℃で２時間攪拌
後、水洗し、エポキシ化ゲルをえた。このエポキ
シ化ゲル10mlにアニリン300mgを溶解させた。30
％（Ｖ／Ｖ）ジオキサン水溶液10mlを加え、室温
で４日間静置下反応させた。反応終了後、15％
（Ｖ／Ｖ）ジオキサン水溶液、水、2M食塩水、水
の順でゲルを洗浄し、アニリン固定化ゲルをえ
た。 つぎにえられたゲルを実施例１と同様にしてヒ
ト血清を加え、インキユベートし、ついで上澄み
液のLDL、VLDLおよびHDL−コレステロール
の量を測定した。その結果を第１表に示す。 比較例 １ 架橋アガロースゲルであるセフアロースCL−
4B（排除限界分子量20000000）にフエニルグリシ
ジルエーテルを反応させて製造されたフエニルセ
フアロースCL−4B（フアルマシアフアインケミ
カルズ社製）１mlを試験管にとり、これに実施例
１と同様にしてヒト血清を加えたのち、インキユ
ベートした。 つぎにえられたゲルを実施例１と同様にして上
澄み液のLDL、VLDLおよびHOL−コレステロ
ールの量を測定した。その結果を第１表に示す。 比較例 ２ 実施例１で用いたゲルのかわりに１mlのリンゲ
ル液（大塚製薬(株)制）を用いたほかは実施例１と
全く同様にしてえられた上澄み液のLDL、
VLDLおよびHDL−コレステロールの量を測定
した。その結果を第１表に示す。
【表】 第１表の結果から本発明の吸着体を用いると
LDLおよびVLDLは吸着されるが、HDL−コレ
ステロールはほとんど吸着されていないことがわ
かる。 ［発明の効果］ 本発明の吸着体は安価であり、かつリポ蛋白を
含む溶液中よりLDLおよびVLDLを選択的に除
去することができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
第１図は３種類のゲルを用いて流速と圧力損失
との関係を調べた結果を示すグラフである。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ 低密度リポ蛋白および極低密度リポ蛋白を吸
    着除去するための吸着体であつて、アニリンを水
    不溶性担体に固定したことを特徴とするリポ蛋白
    用吸着体。 ２ 水不溶性担体が親水性担体である特許請求の
    範囲第１項記載のリポ蛋白用吸着体。 ３ 水不溶性担体が多孔質である特許請求の範囲
    第１項記載のリポ蛋白用吸着体。
JP61027727A 1986-02-10 1986-02-10 リポ蛋白用吸着体 Granted JPS62186940A (ja)

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