JPH0841092A - 抗腫瘍活性化合物ｆｄ−５９４ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 抗腫瘍作用を有する新規な化合物を提供す
る。 【構成】 構造不明の抗腫瘍活性物質ＦＤ−５９４。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、抗腫瘍作用を有する新
規な化合物に関する。

【０００２】

【従来の技術】抗腫瘍作用を有する化合物については種
々報告されているが、本発明の化合物と同一の理化学的
性質を有する化合物は知られていない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、抗腫
瘍作用を有する新規な化合物を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、抗腫瘍作
用を有する新規物質を土壌や植物由来の分離菌から得る
べく探索研究を重ねた結果、本発明者らの見出した特定
の微生物が、各種の癌培養細胞に対して増殖抑制作用を
有する新規な生理活性物質を生産することを見出し本発
明を完成するに至った。

【０００５】本発明は、以下の理化学的性質を示す抗腫
瘍活性化合物ＦＤ−５９４である。 （１）外観：黄色粉末状 （２）融点：２１７〜２２０℃ （３）質量分析値： ＳＩＭＳスペクトル ｍ／ｚ ９４１（Ｍ＋Ｈ）⁺ ＳＩＭＳ（＋ＫＩ）スペクトル ｍ／ｚ ９７９（Ｍ＋
Ｋ）⁺ 陰イオンＦＡＢＭＳスペクトル ｍ／ｚ ９３９（Ｍ−
Ｈ）^- （４）ＦＡＢＭＳ−高分解能マススペクトル： 実測値：９７９．３００９ 理論値：９７９．２９７５（Ｃ₄₃Ｈ₅₂Ｎ₆Ｏ₁₈Ｋとして
計算） （５）分子式：Ｃ₄₃Ｈ₅₂Ｎ₆Ｏ₁₈ （６）分子量：９４０ （７）紫外線吸収スペクトル： λ（ε）：２０６（４０７００），２３５（３６６０
０），２７６（４３８００），３００（ｓｈ）（２８５
００），３６５（２１４００），４２０（６１００）ｎ
ｍ（メタノール溶液中で測定） λ（ε）：２０６（４０７００），２１５（４０６０
０），２３５（３６７００），２７６（４９０００），
３００（ｓｈ）（３２６００），３６５（２３３０
０），４２０（６１００）ｎｍ（塩酸−メタノール溶液
中で測定） λ（ε）：２０９（９３３００），２４３（４３８０
０），２７６（３６８００），２８５（ｓｈ）（３５６
００），３７５（２０６００），４４０（９７００）ｎ
ｍ（水酸化ナトリウム−メタノール溶液中で測定） （８）赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒ錠中で測定したス
ペクトルを図１に示す。 （９）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中で、
３００ＭＨｚで測定したスペクトルを図２に示す。（１
０）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル： 重クロロホルム中で、７５ＭＨｚで測定したスペクトル
を図３に示す。 （１１）溶剤に対する溶解性： ジメチルスルホキシド、ピリジンに可溶 メタノール、アセトン、クロロホルムに難溶 水、ヘキサンに不溶。

【０００６】ＦＤ−５９４を生産する菌株は、本発明者
らが自然界から新たに分離した菌株であり、微生物の名
称「Streptoverticillium baldacci TA-0256」及び微生
物寄託番号「FERM P−14406」として工業技術院生命工
学工業技術研究所に寄託されている。

【０００７】この菌株の菌学的性状を以下に示す。 １）形態 気菌糸は合成寒天培地及び天然寒天培地においてよく発
達し、不規則に分枝する。胞子はシュクロース・硝酸
塩、グリセリン・アスパラギン、スターチ・無機塩、チ
ロシン、オートミール寒天培地などで良好に形成され
る。顕微鏡で観察すると、気菌糸には胞子柄の対生分岐
または３本から５本の輪生分岐が一定の間隔（４０〜８
０μｍ）で形成されている。それらの胞子柄の先端には
通常５本から１０本の胞子連鎖がみられ、それらは胞子
７個から１０個程度より成る連鎖であり、長さは１０μ
ｍ前後で、直線状から多少曲線状である。ＳＥＭで観察
すると、胞子鎖にはねじれがみられる。胞子の表面は平
滑であり、形状は円筒形、大きさは１．２〜１．６μｍ
×０．５〜０．７μｍである。尚、胞子のう、ベン毛胞
子は観察されない。

【０００８】２）培地上での生育状態 各種培地上で、２８℃、１４日間培養した場合の肉眼的
観察結果を次の表１に示した。なお色の表示は日本規格
協会、ＪＩＳ色名帳（１９８５年）の系統色名を引用し
た。

【０００９】

【表１】

【００１０】３）生理的性質 生育温度範囲 イースト・麦芽エキス液体培地で１０〜４９℃の範囲で
生育し、最適生育温度は３３〜３７℃である。 生化学的性質 ａ．好気性、嫌気性の区別：好気性 ｂ．ゼラチンの液化 ：疑陽性 ｃ．脱脂乳の凝固 ：陽性 ｄ．脱脂乳のペプトン化 ：陽性 ｅ．澱分の加水分解 ：陽性 ｆ．メラニン様色素の生産：ペプトン・イースト・鉄寒
天培地で陽性 炭素源の利用 （プリドハム・ゴドリーブ寒天培地上） 利用する：Ｄ−グルコース、イノシトール わずかに利用する：、フラクトース 利用しない：キシロース、シュクロース、マンニトー
ル、Ｌ−アラビノース、Ｌ−ラムノース、ラフィノース 全菌体中のジアミノピメリン酸 ＬＬ−ジアミノピメリン酸が検出された。 主要メナキノン ＭＫ−９（Ｈ６）とＭＫ−９（Ｈ８）であった。

【００１１】以上の性状から、本菌株が放線菌中、Stre
ptoverticillium 属に属することが明らかとなったので
上記諸性状をワックスマン著「ジ・アクチノミセテス」
第２巻（1961年）、「バージーズ・マニュアル・オブ・
デターミネイテイブ・バクテリオロジー」第８巻（1974
年）及びその他の文献に報告されている多くの既知菌株
と比較した。本菌株は、メラニン色素の産生及び炭素源
の資化性について若干の相違点がみられるものの、Stre
ptoverticillium baldacci の特徴と多くの共通点を有
していることから、本菌株を Streptoverticillium bal
dacci TA-0256と命名した。

【００１２】この培養により生産されたＦＤ−５９４を
単離するには、発酵生産物を採取する一般的な方法に準
じて行えば良い。すなわち各種の栄養物質を含む培地で
Streptoverticillium baldacci TA-0256 株を好気的条
件下で培養し、培養終了後、上清液と菌体を分けて菌体
をアセトンで抽出し、アセトンを除去した後、適量の水
を加えて、酢酸エチルで分配を行う。得られた酢酸エチ
ルエキスをゲル濾過カラムクロマトグラフィー、シリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー、および逆相高速液体カ
ラムクロマトグラフィーに付すことにより、ＦＤ−５９
４を精製単離することができる。

【００１３】以上の精製法によって得られたＦＤ−５９
４の理化学的性質を以下に示す。 （１）外観：黄色粉末状 （２）融点：２１７〜２２０℃ （３）質量分析値： ＳＩＭＳスペクトル ｍ／ｚ ９４１（Ｍ＋Ｈ）⁺ ＳＩＭＳ（＋ＫＩ）スペクトル ｍ／ｚ ９７９（Ｍ＋
Ｋ）⁺ 陰イオンＦＡＢＭＳスペクトル ｍ／ｚ ９３９（Ｍ−
Ｈ）^- （４）ＦＡＢＭＳ−高分解能マススペクトル： 実測値：９７９．３００９ 理論値：９７９．２９７５（Ｃ₄₃Ｈ₅₂Ｎ₆Ｏ₁₈Ｋとして
計算） （５）分子式：Ｃ₄₃Ｈ₅₂Ｎ₆Ｏ₁₈ （６）分子量：９４０ （７）紫外線吸収スペクトル： λ（ε）：２０６（４０７００），２３５（３６６０
０），２７６（４３８００），３００（ｓｈ）（２８５
００），３６５（２１４００），４２０（６１００）ｎ
ｍ（メタノール溶液中で測定） λ（ε）：２０６（４０７００），２１５（４０６０
０），２３５（３６７００），２７６（４９０００），
３００（ｓｈ）（３２６００），３６５（２３３０
０），４２０（６１００）ｎｍ（塩酸−メタノール溶液
中で測定） λ（ε）：２０９（９３３００），２４３（４３８０
０），２７６（３６８００），２８５（ｓｈ）（３５６
００），３７５（２０６００），４４０（９７００）ｎ
ｍ（水酸化ナトリウム−メタノール溶液中で測定） （８）赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒ錠中で測定したス
ペクトルを図１に示す。 （９）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中で、
３００ＭＨｚで測定したスペクトルを図２に示す。（１
０）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中で、７
５ＭＨｚで測定したスペクトルを図３に示す。 （１１）溶剤に対する溶解性： ジメチルスルホキシド、ピリジンに可溶 メタノール、アセトン、クロロホルムに難溶 水、ヘキサンに不溶。

【００１４】

【発明の効果】本発明の化合物は各種の癌培養細胞に対
して増殖抑制作用を有するので医薬として有用である。

【００１５】

【実施例】以下、実施例および試験例を挙げて本発明を
具体的に説明する。 実施例 （１）１００ｍｌ当りオートミール２ｇ、グルコース２
ｇ、肉エキス０．３ｇ、塩化ナトリウム０．３ｇ、塩化
マンガン（４水和物）０．０４ｇ、硫酸第二鉄０．０４
ｇ及び炭酸カルシウム０．３ｇを含む無菌液体培地に S
treptoverticillium baldacci TA-0256 株を接種し，２
８℃，７２時間振とう培養した。次に種培地と同じ組成
の無菌培地を内容量５０Ｌの培養槽３基に３０Ｌずつを
入れ、それぞれ１％の前記培養液を接種し、２８℃、７
２時間通気撹拌培養した。

【００１６】（２）培養終了後、上記培養液９０Ｌを遠
心分離し、菌体をアセトン２０Ｌで２回２時間ずつ撹拌
抽出した。アセトンを留去後残査に適量の水を加え、そ
の半量の酢酸エチルで２回分配し、酢酸エチル画分を無
水硫酸ナトリウムで脱水後濃縮して、濃縮物５０．６ｇ
を得た。

【００１７】（３）前項の濃縮物３０ｇを塩化メチレン
で溶かして、溶解したものを塩化メチレンで調製したシ
リカゲル「ワコーゲルＣ−２００（商品名；和光純
薬）」を充填したカラムに付し、塩化メチレンで溶出し
た画分を除いた後、塩化メチレン：メタノール溶液
（１：１）で溶出し、溶媒を留去し、黄土色粉末状物質
１．２８ｇを活性画分として得た。

【００１８】（４）前項の黄土色粉末状物質１．２８ｇ
をジメチルスルホキシドに溶解し、メタノールで調製し
たセファデックスＬＨー２０（商品名；ファルマシア社
製）を充填したカラムを用い、ゲル濾過を行った。、活
性画分を合わせ、濃縮し、ジメチルスルホキシドを含む
黄土色液状物質４１２ｍｇを得た。

【００１９】（５）前項の黄土色液状物質４１２ｍｇを
塩化メチレン：メタノール（１：１）の混合溶媒で調製
したセファデックスＬＨー２０（商品名；ファルマシア
社製）を充填したカラムを用いて前記同様の溶媒でゲル
濾過を行った。活性区分を集め、溶媒を留去し、黄色粉
末７８ｍｇを得た。

【００２０】（６）前項の黄色粉末７８ｍｇをジメチル
スルホキシドに溶解し、以下の条件で行った高速液体カ
ラムクロマトグラフィーの試料とした。 （７）カラムサイズ１０¢×２５０ｍｍ、担体センシュ
パックＯＤＳー４２５１Ｎ（センシュ科学社製）、溶媒
５０％アセトニトリル、流速４．５ｍｌ／ｍｉｎ、検出
波長２１５ｎｍ、装置ウオーターズ社製６００Ｅ、保持
時間１０分の画分を集め、７１ｍｇのＦＤ−５９４を得
た。

【００２１】試験例（各種培養細胞に対する増殖阻害作
用） （検体）実施例で得られたＦＤ−５９４ １０ｍｇをメ
タノールに溶解し、目的濃度となるように滅菌生理食塩
水にて希釈したものを用いた。 （試験細胞） ＨＬ−６０細胞（ヒト前骨髄性白血病細胞） Ｈｅｌａ（ヒト子宮癌細胞） Ａ５４９（ヒト肺癌細胞） （使用した培養液） ＲＰＭＩ−１６４０培地 （試験方法）前記培養液を用いて各種癌細胞を、２×１
０⁴〜１×１０⁵／ｍｌとし、直径３５ｍｍの６穴シャー
レに２ｍｌずつ分注した。次いで目的濃度にあらかじめ
希釈した検体５０μｌを、培養開始と同時に添加した。
試験細胞は、３７℃、５％炭酸ガス培養器内で２〜３日
間培養を続けた後、生細胞を測定し、試料濃度と阻害率
から、ＩＣ₅₀値（５０％阻害のための濃度）を求めた。 （結果）結果は表２に示す。

【００２２】

【表２】

【図面の簡単な説明】

【図１】ＫＢｒ法にて測定したＦＤ−５９４の赤外線吸
収スペクトルを示す。

【図２】重クロロホルム中、３００ＭＨｚで測定したＦ
Ｄ−５９４の¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。

【図３】重クロロホルム中、７５ＭＨｚで測定したＦＤ
−５９４の¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:625） (72)発明者 岡崎 忠靖 東京都豊島区高田３丁目24番１号 大正製 薬株式会社内 (72)発明者 森本 繁夫 東京都豊島区高田３丁目24番１号 大正製 薬株式会社内

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下の理化学的性質を示す抗腫瘍活性化
   合物ＦＤ−５９４。 （１）外観：黄色粉末状 （２）融点：２１７〜２２０℃ （３）質量分析値： ＳＩＭＳスペクトル ｍ／ｚ ９４１（Ｍ＋Ｈ）⁺ ＳＩＭＳ（＋ＫＩ）スペクトル ｍ／ｚ ９７９（Ｍ＋
   Ｋ）⁺ 陰イオンＦＡＢＭＳスペクトル ｍ／ｚ ９３９（Ｍ−
   Ｈ）^- （４）ＦＡＢＭＳ−高分解能マススペクトル： 実測値：９７９．３００９ 理論値：９７９．２９７５（Ｃ₄₃Ｈ₅₂Ｎ₆Ｏ₁₈Ｋとして
   計算） （５）分子式：Ｃ₄₃Ｈ₅₂Ｎ₆Ｏ₁₈ （６）分子量：９４０ （７）紫外線吸収スペクトル： λ（ε）：２０６（４０７００），２３５（３６６０
   ０），２７６（４３８００），３００（ｓｈ）（２８５
   ００），３６５（２１４００），４２０（６１００）ｎ
   ｍ（メタノール溶液中で測定） λ（ε）：２０６（４０７００），２１５（４０６０
   ０），２３５（３６７００），２７６（４９０００），
   ３００（ｓｈ）（３２６００），３６５（２３３０
   ０），４２０（６１００）ｎｍ（塩酸−メタノール溶液
   中で測定） λ（ε）：２０９（９３３００），２４３（４３８０
   ０），２７６（３６８００），２８５（ｓｈ）（３５６
   ００），３７５（２０６００），４４０（９７００）ｎ
   ｍ（水酸化ナトリウム−メタノール溶液中で測定） （８）赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒ錠中で測定したス
   ペクトルを図１に示す。 （９）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中で、
   ３００ＭＨｚで測定したスペクトルを図２に示す。 （１０）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中
   で、７５ＭＨｚで測定したスペクトルを図３に示す。 （１１）溶剤に対する溶解性： ジメチルスルホキシド、ピリジンに可溶 メタノール、アセトン、クロロホルムに難溶 水、ヘキサンに不溶