RS57314B1 - Isporuka irnk za povećanje ekspresije proteina i enzima u humanim genetskim oboljenjima - Google Patents

Isporuka irnk za povećanje ekspresije proteina i enzima u humanim genetskim oboljenjima

Info

Publication number
RS57314B1
RS57314B1 RS20180509A RSP20180509A RS57314B1 RS 57314 B1 RS57314 B1 RS 57314B1 RS 20180509 A RS20180509 A RS 20180509A RS P20180509 A RSP20180509 A RS P20180509A RS 57314 B1 RS57314 B1 RS 57314B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
mrna
pharmaceutical composition
protein
use according
transfer carrier
Prior art date
Application number
RS20180509A
Other languages
English (en)
Inventor
Braydon Charles Guild
Frank Derosa
Michael Heartlein
Michael Concino
Original Assignee
Translate Bio Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=44115246&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS57314(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Translate Bio Inc filed Critical Translate Bio Inc
Publication of RS57314B1 publication Critical patent/RS57314B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
    • A61K48/0033—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being non-polymeric
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
    • A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers comprising non-phosphatidyl surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids or non-phosphatidyl liposomes coated or grafted with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J43/00—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J43/003—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not condensed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/67—General methods for enhancing the expression

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Opis pronalaska
STANJE TEHNIKE
[0001] Za lečenje proteinskih i enzimskih deficijencija su još uvek potrebni novi pristupi i terapije, pre svega strategije i terapije koji prevazilaze izazove i ograničenja vezane za primenu nukleinskih kiselina i transfekciju ciljnih delija. Dodatni pristupi koji bi modulisali ili dopunili ekspresiju deficijentnih proteina ili enzima i time pobošali stanje deficijencije koje se nalazi u osnovi, bi bili korisni u razvoju odgovarajudih terapija za poremedaje koji su sa njima asocirani.
[0002] Na primer, poremedaji metaboličkog ciklusa uree predstavljaju deficijencije proteina i enzima za koje trenutno ne postoje dostupni lekovi. Ciklus uree podrazumeva serije biohemijskih reakcija koje se odvijaju kod mnogih životinja koje proizvode ureu ((NH2)2CO) iz amonijaka (NH3), a kod sisara se odvija samo u jetri. Preciznije, ciklus uree čine serije pet biohemijskih reakcija sa dve primarne funkcije: eliminacija azota u vidu uree i sinteza arginina. Defekti u ciklusu uree dovode do nagomilavanja amonijaka i njegovih prekursorskih aminokiselina (glutamina, glutaminske kiseline, asparaginske kiseline i glicina). Rezultujudi visoki nivoi amonijaka su neurotoksični, a trijada hiperamonemije, encefalopatije i respiratorne alkaloze karakteriše poremedaje ciklusa uree.
[0003] Deficijencija ornitin transkarbamilaze (OTC) predstavlja jedan takav genetski poremedaj ciklusa uree. Osobe sa OTC deficijencijom obično karakteriše smanjen nivo OTC enzima. U klasičnom ozbiljnom obliku OTC deficijencije, kod pacijenata su u prvim danima života prisutni letargija, konvulzije, koma i teška hiperamonemija koji brzo dovode do pogoršanja i smrtonosnog ishoda ukoliko izostane odgovarajuda medicinska intervencija. Ukoliko se OTC deficijencija ne leči, komplikacije mogu uključiti kašnjenje u razvoju, mentalnu retardaciju i/ili smrt.
[0004] Lečenje pacijenata sa OTC deficijencijom primarno podrazumeva regulaciju serumskog amonijaka, a hemodijaliza ostaje kao jedino efikasno sredstvo za brzo snižavanje nivoa amonijaka u serumu. U principu, cilj tretmana metaboličkih poremedaja ciklusa uree je da se obezbedi dovoljno proteina i arginina za rast, razvoj i energetske potrebe, uz prevenciju razvoja hiperamonemije i hiperglutaminemije. Terapijski pristupi koji su trenutno dostupni za terapijsko zbrinjavanje metaboličkih poremedaja ciklusa uree, kao što je OTC deficijencija, velikim delom se oslanjaju na regulisanje ishrane. Trenutno ne postoje dugotrajni tretmani ili lekovi za metaboličke poremedaje ciklusa uree. Nove terapije koje povedavaju nivo ili proizvodnju pogođenog proteina ili enzima u ciljnim delijama, kao što su hepatociti, ili koje modulišu ekspresiju nukleinskih kiselina koje kodiraju protein ili enzim koji nedostaje, mogu obezbediti tretman ili čak lek za poremedaje metabolizma, uključujudi metaboličke poremedaje poput OTC deficijencije.
WO 90/11092 opisuje isporuku i ekspresiju egzogenih polinukleotidnih sekvenci kod kičmenjaka.
IZLAGANJE SUŠTINE PRONALASKA
[0005] Predviđeni su postupci unutardelijske isporuke nukleinskih kiselina koje su sposobne da koriguju postojede genetske defekte i/ili da obezbede korisne funkcije za jednu ili više ciljnih delija. Nakon uspešne isporuke ciljnim tkivima i delijama, kompozicije predmetnog pronalaska vrše transfekciju ciljne delije, a nukleinske kiseline (tj. iRNK) mogu biti prevedene u genski proizvod od interesa (tj. funkcionalni protein). Preciznije, pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži nosač za prenos (nosač transfera), farmaceutski prihvatljiv ekscipijens i najmanje jedan iRNK molekul koji kodira protein, pri čemu nosač transfera sadrži jedan ili više katjonskih lipida, jedan ili više nekatjonskih lipida i jedan ili više lipida modifikovanih sa PEG, i gde nosač transfera predstavlja lipozom, a veličina nosača transfera je manja od 100nm, kao i na upotrebu navedenih farmaceutskih kompozicija u lečenju oboljenja subjekta koja nastaju usled deficijentne poizvodnje proteina, pri čemu se farmaceutska kompozicija preferencijalno distribuira u delije jetre nakon primene subjektu, a kodirani protein se eksprimira u delijama jetre subjekta.
[0006] Kompozicije koje su ovde obezbeđene su korisne za zbrinjavanje i lečenje velikog broja oboljenja koja nastaju usled deficijencija proteina. Osobe koje boluju od navedenih bolesti mogu u osnovi imati genetske nedostatke koji dovode do kompromitovane ekspresije proteina, uključujudi, na primer, izostanak sinteze proteina, smanjenu sintezu proteina ili sintezu proteina kome nedostaje ili je smanjena biološka aktivnost. Preciznije, kompozije koje su ovde obezbeđene su korisne za lečenje metaboličkih poremedaja ciklusa uree koji se javljaju kao rezultat jednog ili više defekata u biosintezi enzima koji su uključeni u ciklus uree. Postupci i kompozicije koje su ovde predviđeni su takođe korisni za razne vidove in vitro i in vivo primene u kojima su poželjni dopremanje nukleinske kiseline (npr. iRNK) do ciljne delije i transfekcija navedene ciljne delije.
U pojedinim primerima primene, kompozicija sadrži iRNK i nosač transfera, kao što je definisano u patentnim zahtevima. U pojedinim primerima primene, iRNK kodira enzim iz ciklusa uree. U pojedinim primerima primene, iRNK može sadržavati jednu ili više modifikacija koje obezbeđuju stabilnost iRNK (npr. u odnosu na originalnu ili nativnu veziju iRNK), a takođe može sadržavati jednu ili više modifikacija u odnosu na originalnu iRNK koje dovode do korekcije defekta za koji je pokazano da je asociran sa aberantnom ekspresijom proteina. Na primer, nukleinske kiseline predmetnog pronalaska mogu sadržavati modifikacije jednog ili oba od 5' i 3' netranslatirajudih regiona. Navedene modifikacije mogu uključivati, ali nisu ograničene na, uključivanje delimične sekvence neposredno-ranog gena tipa 1 (IE1) citomegalovirusa (CMV), poliA repa, Cap 1 strukture ili sekvence koja kodira humani hormon rasta (hGH, od engl. human Growth Hormone)).
[0007] Postupci lečenja subjekta su takođe predviđeni, pri čemu je kod subjekta prisutna deficijencija proteina ili enzima. Postupci mogu podrazumevati primenu kompozicija koje su ovde obezbeđene. Na primer, predviđeni su postupci lečenja ili prevencije stanja u kojima je proizvodnja određenog proteina i/ili upotreba određenog proteina neadekvatna ili ugrožena. U jednom primeru primene, postupci koji su ovde predviđeni mogu biti upotrebljeni za lečenje subjekta sa deficijencijom jednog ili više enzima iz ciklusa uree. Postupak se može sastojati od kontakta i transfekcije ciljnih delija ili tkiva (kao što su hepatociti deficijentni u jednom ili više enzima iz ciklusa uree) sa kompozicijom koja je ovde obezbeđena, pri čemu nukleinska kiselina kodira enzim iz ciklusa uree koji je deficijentan. Na navedeni način, ekspesija deficijentnog proteina u ciljnoj deliji se povedava, a očekuje se da navedeno poboljša efekte deficijencije koja se nalazi u osnovi poremedaja.
Protein koji se eksprimira od strane ciljne delije, translacijom iRNK, može biti zadržan unutar citosola ciljne delije ili, alternativno, može biti sekretovan van delije. U pojedinim primerima primene, iRNK sadrži modifikaciju koja obezbeđuje stabilnost iRNK koda (npr. u odnosu na stabilnost originalne ili nativne verzije iRNK). Na primer, iRNK koja kodira funkcionalni enzim može sadržavati jednu ili više modifikacija jednog ili oba od 5' i 3' netranslatirajudih regiona.
[0008] iRNK koja je ovde obezbeđena je formulisana kao lipidni ili lipozomalni nosač transfera da bi se olakšala isporuka u ciljnu deliju i/ili stabilizovala nukleinskih kiselina koju nosač sadrži. Nosači transfera sadrže jedan ili više katjonskih lipida, nekatjonskih lipida i lipida modifikovanih sa PEG. Na primer, nosač transfera može sadržavati smešu lipida CHOL, DOPE, DLinDMA i DMG-PEG-2000. U drugom primeru primene, nosač transfera može sadržavati lipide ICE, DOPE i DMG-PEG-2000. U još jednom primeru primene, nosač transfera može da sadrži jedan ili više lipida izabranih iz grupe koju čine ICE, DSPC, CHOL, DODAP, DOTAP i C8-PEG-2000 ceramid. Nosač transfera je lipozom koji je sposoban da se prioritetno distribuira u ciljne delije i tkiva in vivo.
[0009] Ciljna delija dolazi u kontakt sa kompozicijom koja sadrži iRNK i nosač tranfera. Nakon ekspresije proteina ili enzima koga kodira iRNK, eksprimirani protein ili enzim se može zadržati u citosolu ciljne delije ili se, alternativno, može sekretovati van delije. U pojedinim primerima primene, iRNK kodira enzim iz ciklusa uree. U pojedinim primerima primene, iRNK može da sadrži jednu ili više modifikacija koje obezbeđuju stabilnost iRNK i takođe može da sadrži jednu ili više modifikacija u odnosu na originalnu iRNK koje koriguju defekte za koje je pokazano da su asocirani sa aberantnom ekspresijom proteina. U pojedinim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska se oslanjaju na ciljne delije da eksprimiraju funkcionalan protein koga kodira egzogeno primenjena iRNK. Pošto se protein koga kodira egzogena iRNK translatira u ciljnoj deliji, eksprimirani proteini i enzimi mogu biti okarakterisani kao manje imunogeni u odnosu na njihove rekombinanto pripremljene parnjake.
Predmetna prijava razmatra upotrebu ciljanih liganada koji su sposobni da poboljšaju afinitet kompozicije za jednu ili više ciljnih delija. U jednom primeru primene, ciljani ligand je apolipoprotein-B ili apolipoprotein-E, dok su odgovarajude ciljne delije one koje eksprimiraju lipoproteinske receptore male gustine čime se olakšava prepoznavanje ciljanog liganda.
[0010] Prethodno diskutovane i mnoge druge karakteristike i pratede prednosti predmetnog pronalaska de postati lakše za razumevanje nakon detaljnog opisa pronalaska koji sledi, kao i pridruženih primera pronalaska.
KRATAK OPIS NACRTA
[0011]
Nacrt 1 ilustruje sintezu imidazolnog lipidnog estra holesterola, ICE.
Nacrt 2 ilustruje prisustvo aktivnosti luciferaze svica proizvedene isporukom egzogene iRNK u jetre i slezine tretiranih i netretiranih CD-1 miševa.
Nacrt 3 ilustruje in situ hibridizaciju kodon optimizovane (CO) iRNK luciferaze svica (FF) u jetrama kontrolnih i tretiranih (BI i B2) miševa koja se uočava na rendgenskom filmu pod malim (2X) uvedanjem. (A) predstavlja bojenje preseka jetri kontrolnih (Ct) i tretiranih B1 i B2 miševa krezilljubičastom bojom; (B) predstavlja rentgenski film autoradiografske detekcije CO-FF luciferazne iRNK, sa “antisens” probama, u jetrama B1 i B2 miševa; i (C) predstavlja kontrolnu (“sens”) hibridizaciju. Skradenice "cv", "as" i "s" se odnose na krezil-ljubičasto, ”antisens” i “sens”, tim redom.
Nacrt 4 ilustruje obeležavanje kodon optimizovane iRNK za luciferazu svica u jetrama tretiranih (B1) i kontrolnih miševa. (A) predstavlja emulzionu autoradiografsku detekciju CO-FF luciferazne iRNK na presecima jetre B1 miševa koja se uočava kao svetlo obeležavanje pod mikroskopom sa tamnim osvetljenjem polja; (B) predstavlja isti region koji je prikazan pod (A), slikan na svetlosnom mikroskopu nakon upotrebe krezil-ljubičaste kao kontrastne boje; (C) predstavlja preseke jetre B1 miševa tretirane sa kontrolnom (“sens”) riboprobom CO-FF luciferaze čime se utvrđuje nivo nespecifičnog obeležavanja; (D) predstavlja isti region koji je prikazan pod (C), slikan na svetlosnom mikroskopu; (E) predstavlja presek kontrolne jetre netretirane životinje koji je tretiran “antisens” probom za CO-FF luciferazu; nije utvrđeno prisustvo signala; (F) predstavlja isti region koji je prikazan pod (E), slikan na svetlosnom mikroskopu; (G) predstavlja presek kontrolne jetre tretirane kontrolnom (“sens”) riboprobom za CO-FF luciferazu čime se utvrđuje nivo nespecifičnog obeležavanja; i (H) predstavlja isti region koji je prikazan pod (G), slikan na svetlosnom mikroskopu. Skradenice "BD", "HA", "H", "PV", "as" i "s" se odnose na žučni kanal, hepatičnu arteriju, hepatocit, portnu venu, “antisens” i “sens”, tim redom. Uvedanje: 100X.
Nacrt 5 ilustruje imunohistohemijsko bojenje jetri miša zarad detekcije proteina luciferaze svica. (A) predstavlja negativno bojenje na luciferazu u kontrolnoj jetri miša tretiranog sa 1xPBS puferom (20X); (B) predstavlja pozitivnu rekaciju detekcije proteina luciferaze upotrebom imunohistohemijskih postupaka koji se baziraju na fluorescenci, a koja prikazuje da se protein luciferaze svica uočava u hepatocitima (20X), kao i u malom broju sinusoidalnih endotelijanih delija koje su takođe bile pozitivne na protein luciferaze; (C) predstavlja pozitivno bojenje na protein luciferaze svica pod vedim uvedenjem (40X). Protein luciferaze se uočava širom citoplazme hepatocita. Skradenice (S) i (H) se odnose na sinusoidalne delije i hepatocite, tim redom.
Nacrt 6 prikazuje nukleotidnu sekvencu iRNK CO-FF luciferaze (SEQ ID NO: 1).
Nacrt 7 prikazuje nukleotidne sekvence 5' CMV sekvence (SEQ ID NO: 2) i 3' hGH sekvence (SEQ ID NO: 3) koje mogu biti upotrebljene kao bočne sekvence za iRNK sekvencu od interesa.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0012] Ovde su predviđene kompozicije koje olakšavaju dopremanje nukleinskih kiselina do ciljnih delija, kao i njihovu potonju transfekciju. Kompozicije koje su ovde obezbeđene su korisne za lečenje oboljenja koje nastaju usled deficijentne proiozvodnje proteina. Na primer, pogodne bolesti koje se mogu lečiti predstavljaju one u kojima genetska mutacija u određenom genu uzrokuje da pogođene delije ne eksprimiraju, smanjeno eksprimiraju ili eksprimiraju nefunkcionalan protein. Kontakt navedenih ciljnih delija sa kompozicijama predmetnog pronalaska koji omogudava da se ciljne delije transfektuju sa nukleinskom kiselinom koja kodira funkcionalnu verziju proteina, i dalje proizvodnju funkcionalnog proteina, je koristan u lečenju navedne deficijencije.
Preciznije, pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži nosač transfera, farmaceutski prihvatljiv ekscipijens i najmanje jedan iRNK molekul koji kodira protein, pri čemu nosač transfera sadrži jedan ili više katjonskih lipida, jedan ili više nekatjonskih lipida i jedan ili više lipida modifikovanih sa PEG, i gde je nosač transfera lipozom, a veličina nosača transfera je manja od 100nm, kao i na upotrebu navedenih farmaceutskih kompozicija u lečenju oboljenja subjekta koje nastaje usled deficijene proizvodnje proteina, pri čemu se farmaceutska kompozicija nakon primene subjektu preferencijalno distribuira u delije jetre, a kodirani protein se eksprimira u delijama jetre subjekta.
iRNK kodira, na primer, funkcionalni enzim ciklusa uree. U pojedinim primerima primene, iRNK kompozicije može biti modifikovana tako da se obezbedi poboljšana stabilnost (npr. u odnosu na originalnu verziju iRNK i/ili verziju iRNK koja se nalazi endogeno u ciljnoj deliji). Na primer, iRNK kompozicije može sadržavati modifikaciju u odnosu na originalnu verziju iRNK, pri čemu modifikacija obezbeđuje stabilnost iRNK kompozicije. U pojedinim primerima primene, iRNK kompozicije je stabilnija od originalne verzije iRNK i/ili je stabilnija od verzije iRNK koja se nalazi endogeno u ciljnoj deliji.
[0013] Postupci lečenja subjekta sa deficijencijom enzima iz ciklusa uree su takođe predviđeni. Postupci podrazumevaju primenu kompozicije koja sadrži iRNK i nosač transfera, pri čemu iRNK kodira enzim iz ciklusa uree. U pojedinim primerima primene, iRNK kompozicije je stabilnija od originalne verzije iRNK i/ili je stabilnije od verzije iRNK koja se nalazi endogeno u ciljnoj deliji.
[0014] U kontekstu pronalaska, termin "nukleinska kiselina" se odnosi na genetski materijal (npr. oligonukleotide ili polinukleotide koji sadrže DNK ili RNK). Nukleinska kiselina kompozicije predmetnog pronalaska je iRNK.
Predmetni pronalazak predviđa upotrebu iRNK ili stabilizovane iRNK kao terapeutika koji je sposoban da olakša ekspresiju funkcionalnog enzima ili proteina koji je deficijentan kod subjekta (npr. enzima iz ciklusa uree). Termin "funkcionalan" se ovde upotrebljava da bi se kvalifikovao protein ili enzim, odnosno da bi se naznačilo da protein ili enzim ima biološku aktivnost, ili, alternativno, da je sposoban da ispoljava istu ili sličnu funkciju kao nativan ili normalno funkcionalan protein ili enzim. Kompozicije predmetnog pronalaska su korisne za lečenje raznih metaboličkih ili genetskih poremedaja, a posebno onih genetskih ili metaboličkih poremedaja koji uključuju odsustvo ekspresije, pogrešnu ekspresiju ili deficijenciju proteina.
[0015] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "ekspresija" se upotrebljava u svom najširem smislu da bi se naznačila bilo transkripcija specifičnog gena ili nukleinske kiseline u najmanje jedan transkript iRNK ili pak translacija najmanje jedne iRNK ili nukleinske kiseline u protein ili enzim. Kompozicije predmetnog pronalaska predstavljaju kompozicije koje sadrže jednu ili više iRNK nukleinskih kiselina koje kodiraju funkcionalne proteine ili enzime, a u kontekstu navedenih iRNK nukleinskih kiselina, termin ekspresija se odnosi na translaciju navedene iRNK da bi se proizveo protein ili enzim koji je njome kodiran.
[0016] Nukleinska kiselina je sposobna da se eksprimira (transkripcija iRNK sa gena) i translatira (translacija kodiranog proteina sa sintetskog ili egzogenog iRNK transkripta). Nukleinska kiselina može kodirati, na primer, hormon, enzim, receptor, polipeptid, peptid ili drugi protein od interesa. U jednom primeru primene predmetnog pronalaska, nukleinska kiselina (npr. iRNK koja kodira deficijentan protein) može opciono sadržavati hemijske ili biološke modifikacije koje, na primer, poboljšavaju stabilnost i/ili poluživot navedene nukleinske kiseline ili koje poboljšavaju ili na drugačiji način olakšavaju translaciju.
[0017] Predmetni pronalazak takođe razmatra istovremenu isporuku jedne ili više jedinstvenih nukleinskih kiselina u ciljne delije, na primer, kombinovanjem dve jedinstvene nukleinske kiseline u jedan nosač tranfera. U jednom primeru primene predmetnog pronalaska, prva terapijska nukleinska kiselina, kao što je iRNK koja kodira galaktoza-1-fosfat uridiltransferazu (GALT), i druga terapijska nukleinska kiselina, kao što je iRNK koja kodira galatokinazu (GALK), mogu biti formulisane u jedan nosač transfera i primenjene kao takve (npr. za lečenje galaktozemije). Predmetni pronalazak takođe razmatra istovremenu isporuku i/ili istovremenu primenu prve terapijske nukleinske kiseline i druge nukleinske kiseline radi olakšavanja i/ili poboljšanja funkcije ili isporuke prve terapijske nukleinske kiseline. Na primer, navedena druga nukleinska kiselina (npr. egzogena ili sintetska iRNK) može kodirati membranski transporterski protein koji nakon ekspresije (npr. translacije egzogene ili sintetske iRNK) olakšava dopremanje ili pojačava biološku aktivnost prve nukleinske kiseline. Alternativno, prva terapijska nukleinska kiselina može biti primenjena sa drugom nukleinskom kiselinom koja, na primer, funkcioniše kao "šaperon" zarad usmeravanja načina na koji se uvija bilo prva terapijska nukleinska kiselina ili endogene nukleinske kiseline.
[0018] Pronalazak takođe razmatra isporuku jedne ili više terapijskih nukleinskih kiselina za lečenje pojedinačne proteinske deficijencije, pri čemu svaka navedena terapijska nukleinska kiselina funkcioniše drugim mehanizmom dejstva. Na primer, kompozicije predmetnog pronalaska mogu sadržavati prvu terapijsku nukleinsku kiselinu koja se primenjuje da bi se korigovala deficijencija endogenog proteina, a što dalje prati isporuka druge nukleinske kiseline koja se primenjuje da bi se deaktivirali ili "izbacili" (“knock-down”) endogena nukleinska kiselina koja nepravnilno funkcioniše i njen proteinski ili enzimski proizvod. Navedene nukleinske kiseline mogu kodirati, na primer, iRNK i siRNK.
[0019] Dok in vitro transkribovane nukleinske kiseline (npr. iRNK) mogu biti transfektovane u ciljne delije, navedene nukleinske kiseline se lako i efikasno degraduju od strane delije in vivo čime navedene nukleinske kiseline postaju neefikasne. Štaviše, pojedine nukleinske kiseline su nestabilne u telesnim tečnostima (posebno u humanom serumu) i mogu biti degradovane pre stizanja do ciljne delije. Dodatno, unutar delije, prirodna iRNK može biti degradovana uz poluživot od između 30 minuta i nekoliko dana.
[0020] Nukleinske kiseline tipa iRNK koje su ovde obezbeđene zadržavaju bar neku sposobnost da budu translatirane, čime dolazi do proizvodnje funkcionalnog proteina unutar ciljne delije. Prema tome, predmetni pronalazak se odnosi na primenu stabilizovane nukleinske kiseline (iRNK koja je stabilizovana u odnosu na in vivo digestiju ili degradaciju nukleazama) koja moduliše ekspresiju gena ili translaciju funkcionalnog proteina unutar ciljne delije. U prioritetnom primeru primene predmetnog pronalaska, aktivnost nukleinske kiseline (iRNK koja kodira funkcionalni protein) se zadržava tokom dužeg vremenskog perioda. Na primer, aktivnost nukleinskih kiselina može biti produžena tako da se kompozicije predmetnog pronalaska primenjuju subjektu dva puta nedeljno ili na dve nedelje, a još prioritetnije na mesečnom, dvomesečnom, tromesečnom ili godišnjem nivou. Proširena ili produžena aktivnost kompozicija predmetnog pronalaska, a posebno iRNK koja je sadržana u njima, je u direktnoj vezi sa količinom funkcionalnog proteina ili enzima koji se translatira sa navedene iRNK. Slično tome, aktivnost kompozicija predmetnog pronalaska se može dalje proširiti ili produžiti modifikacijama koje se sprovode tako da se poboljša ili pojača translacija iRNK nukleinskih kiselina. Na primer, tzv. Kozak konsenzusna sekvenca ima ulogu u inicijaciji translacije protiena, a uključivanje navedene Kozak konsenzusne sekvence u iRNK nukleinsku kiselinu predmetnog pronalaska može dalje proširiti ili produžiti aktivnost iRNK nukleinskih kiselina. Štaviše, količina funkcionalnog proteina koji se translatira od strane ciljne delije je u funkciji količine nukleinske kiseline (npr. iRNK) koja se doprema ciljnim delijama, kao i stabilnosti navedene nukleinske kiseline. Do obima u kome se stabilnost kompozicije predmetnog pronalaska može poboljšati ili pojačati, može se dalje produžiti poluživot, aktivnost prevedenog proteina i frekvencija doziranja kompozicije.
[0021] Shodno navedenom, u prioritetnom primeru primene, nukleinske kiseline koje su ovde obezbeđene sadrže najmanje jednu modifikaciju koja obezbeđuje povedanu ili poboljšanu stabilnost nukleinske kiseline, uključujudi, na primer, poboljšanu otpornost na digestiju nukleazama in vivo. U kontekstu pronalaska, termini "modifikacija" i "modifikovan" kao takvi se odnose na nukleinske kiseline koje su ovde obezbeđene, uključuju najmanje jednu izmenu koja prioritetno poboljšava stabilnost i čini nukleinsku kiselinu stabilnijom (npr. otpornom na digestiju nukleazama) u odnosu na stabilnost originalne ili verzije nukleinske kiseline koja se javlja u prirodi. U kontekstu pronalaska, termini "stabilan" i "stabilnost" kao takvi se odnose na nukleinske kiseline predmetnog pronalaska, a posebno na iRNK, i označavaju povedanu ili pojačanu optornost na degradaciju, na primer, nukleazama (tj. endonukleazama ili egzonukleazama) koje su normalno sposobne da degraduju navedenu RNK. Povedana stabilnost može podrazumevati, na primer, smanjenu osetljivost na hidrolizu ili na druge načine degradacije endogenim enzimima (npr. endonukleazama ili egzonukleazma) ili smanjenu osetljivost na uslove unutar ciljne delije ili tkiva čime se povedava ili poboljšava opstanak navedenih nukleinskih kiselina u ciljnoj deliji, tkivu, subjektu i/ili citoplazmi. Stabilizovane molekule nukleinskih kiselina koji su ovde obzbeđeni karakterišu duži poluživoti u odnosu na njihove prirodno nastale, nemodifikovane parnjake (na primer, originalnu verziju nukleinske kiseline). Temini "modifikacija" i "modifikovan" kao takvi se takođe odnose na nukleinske kiseline predmetnog pronalaska sa izmenama koje poboljšavaju ili pojačavaju translaciju iRNK nukleinskih kiselina, uključujudi, na primer, uključivanje sekvenci sa funkcijom u inicijaciji translacije proteina (npr. Kozak konsenzusne sekvence). (Kozak M.,Nucleic Acids Res 15 (20): 8125-48 (1987)).
[0022] U pojedinim primerima primene, nukleinske kiseline predmetnog pronalaska se podvrgavaju hemijskoj ili biološkoj modifikaciji da bi ih postale stabilnije. Modifikacije nukleinske kiseline za primer uključuju depleciju baze (npr. delecijom ili supstitucijom jednog nukleotida drugim) ili modifikaciju baze, na primer, hemijsku modifikaciju baze. Fraza "hemijske modifikacije", kako se ovde koristi, podrazumeva modifikacije koje uvode hemijske supstance koje se razlikuju od onih koje se javljaju u prirodnim nukleinskim kiselinama, na primer, kovalentne modifikacije poput uvođenja modifikovanih nukleotida (npr. nukleotidnih analoga ili uključivanje bočnih grupa koja se ne javljaju u prirodi u navedene molekule nukleinske kiseline).
[0023] Pored navedenog, pogodne modifikacije podrazumevaju izmene u jednom ili u više nukleotida u okviru kodona, a tako da kodon kodira istu aminokiselinu ali je stabilniji od kodona koji se nalazi u originalnoj verziji nukleinske kiseline. Na primer, pokazan je inverzan odnos između stabilnosti RNK i visokog broja ostataka citidina (C) i/ili uridina (U), a utvrđeno je da su RNK bez C i U ostataka stabilne na dejstvo vedine RNaza (Heidenreich i saradnici, J Biol Chem 269, 2131-8 (1994)).
U pojedinim primerima primene, broj C i/ili U ostataka u iRNK sekvenci je smanjen. U drugom primeru primene, broj C i/ili U ostataka je smanjen supstitucijom jednog kodona koji kodira određenu amino kiselinu sa drugim kodonom koji kodira istu ili srodnu amino kiselinu. Razmatrane modifikacije iRNK nukleinskih kiselina predmetnog pronalaska takođe podrazumevaju ugradnju pseudouridina. Ugradnja pseudouridina u iRNK nukleinske kiseline predmetnog pronalaska može povedati stabilnost i kapacitet translacije, kao i smanjiti imunogenost in vivo. (Pogledati, npr. publikaciju Kariko K. i saradnici, Molecular Therapy 16 (11): 1833-1840 (2008)). Supstitucije i modifikacije nukleinskih kiselina predmetnog pronalaska mogu biti izvedene postupcima koji su dobro poznati prosečno iskusnim stručnjacima iz oblasti.
[0024] Ograničenja u smanjenju broja C i U ostataka u sekvenci de verovatno biti veda unutar kodirajudeg regiona iRNK, a u poređenju sa smanjenjima u netranslatirajudim regionom (tj. verovatno nede biti mogude uklanjanje svih C i U ostataka koji su prisutni u kodirajudem region uz zadržavanje sposobnosti iRNK da kodira željenu aminokiselinsku sekvencu). Degeneracija genskog koda, međutim, predstavlja prilika da se omogudi smanjenje broja C i/ili U ostataka koji su prisutni u sekvenci uz zadržavanje istog kapaciteta kodiranja (tj. u zavisnosti od toga koja amino kiselina je kodirana kodonom, može biti mogude nekoliko različitih modifikacije RNK sekvenci). Na primer, kodoni za Gly mogu biti promenjeni u GGA ili GGG umesto GGU ili GGC.
[0025] Termin modifikacija takođe podrazumeva, na primer, ugradnju veza u sekvence nukleinske kiseline predmetnog pronalaska koje ne predstavljaju veze između nukleotida ili pak ugradnju modifikovanih nukleotida (npr. modifikacije na jednom ili na oba od 3' i 5' krajeva iRNK molekula koji kodiraju funkcionalan protein ili enzim). Navedene modifikacije uključuju adiciju baza u sekvencu nukleinske kiseline (npr. uključivanje poli A repa ili dužeg poli A repa), promenu 3’ netranslatirajude (UTR od engl. un-translated) ili 5' UTR sekvence, obrazovanje kompleksa nukleinske kiseline sa agensom (npr. proteinom ili komplementarnim molekulom nukleinske kiseline), kao i uključivanje elemenata koji menjaju strukturu molekula nukleinske kiseline (npr. onih koji obrazuju sekundarne strukture).
[0026] Smatra se da poli A rep stabilizuje prirodne informacione RNK i sintetske “sens” RNK. Stoga, u jednom primeru primene, na molekul iRNK može biti dodat dugi poli A rep čime RNK postaje stabilnija. Poli A rep može biti dodat upotrebom raznih tehnika koje su poznate u stanju tehnike. Na primer, dugi poli A repovi mogu biti dodati na sintetske ili in vitro transkribovane RNK upotrebom poli A polimeraze (Yokoe i saradnici, Nature Biotechnology. 1996; 14: 1252-1256). Transkripcija vektora takođe može kodirati duge poli A repove. Dodatno, poli A repovi mogu biti dodati transkripcijom direktno sa PCR proizvoda. Poli A može biti i ligiran na 3’ kraj “sens” RNK upotrebom RNK ligaze (pogledati, npr. Laboratorijski priručnik molekularnog kloniranja, 2. izd., izd. Sambrook, Fritsch i Maniatis (Cold Spring Harbour Laboratory Press: izdanje 1991)). U jednom primeru primene, dužina poli A repa iznosi najmanje oko 90, 200, 300, 400 ili najmanje 500 nukleotida. U jednom primeru primene, dužina poli A repa je prilagođena tako da kontroliše stabilnost modifikovanog “sens” iRNK molekula pronalaska i, stoga, transkripciju proteina. Na primer, obzirom da dužina poli A repa može uticati na poluživot “sens” iRNK molekula, dužina poli A repa se može prilagoditi tako da se modifikuje nivo otpornosti iRNK na nukleaze i da se time kontroliše vremenski tok ekspresije proteina u deliji. U jednom primeru primene, stabilizovani molekuli nukleinske kiseline su dovoljno otporni na in vivo degradaciju (npr. nukleazama), tako da se isti mogu biti dopremljeni do ciljne delije bez upotrebe nosača transfera.
[0027] U jednom primeru primene, nukleinska kiselina koja kodira protein može biti modifikovana ugradnjom 3’ i/ili 5' sekvence koje se prirodno ne nalazi u originalnoj nukleinskoj kiselini. U jednom primeru primene, 3’ i/ili 5' bočna sekvenca koja se u prirodno nalazi bočno u odnosu na iRNK i kodira drugi nesrodan protein, može biti ugrađena u nukleotidnu sekvencu iRNK molekula koji kodira terapijski ili funkcionalni protein da bi je modifikovala. Na primer, 3’ ili 5' sekvence iz iRNK molekula koji su stabilni (npr. globina, aktina, GAPDH, tubulina, histona ili enzima ciklusa limunske kiseline) mogu biti ugrađene u 3’ i/ili 5' region molekula “sens” iRNK nukleinske kiseline da bi se povedala stabilnost “sens” iRNK molekula.
[0028] Predmetni pronalazak razmatra i modifikacije sekvenci nukleinske kiseline koje su uvedene na jedan ili na oba od 3’ i 5' krajeva nukleinske kiseline. Na primer, predmetni pronalazak razmatra modifikacije 5’ kraja iRNK da bi se uključila delimična sekvenca neposredno-ranog 1 (IE1) gena CMV ili njegov fragment (npr. SEQ ID NO: 2) radi poboljšanja otpornosti na nukleaze i/ili radi produžavanja poluživota nukleinske kiseline. Pored povedanja stabilnosti sekvence iRNK nukleinske kiseline, iznenadjujude je otkriveno da uključivanje parcijalne sekvence neposredno-ranog 1 (IE1) gena CMV pojačava translaciju iRNK i ekspresiju funkcionalnog proteina ili enzima. Takođe se razmatra uključivanje sekvence koja kodira humani hormon rasta (hGH) ili njenog fragmenta (npr. SEQ ID NO: 3) na jedan ili na oba od 3’ i 5' krajeva iRNK da bi se dalje stabilizovala nukleinska kiselina. U principu, prioritetne modifikacije poboljšavaju stabilnost i/ili farmakokinetička svojstva (npr. poluživot) nukleinske kiseline u odnosu na njene nemodifikovane parnjake, i uključuju, na primer, modifikacije uvedene tako da se poboljša navedena otpornost nukleinske kiseline na digestiju nukleazama in vivo.
[0029] U pojedinim primerima primene, kompozicija može sadržavati stabilizujudi reagens. Kompozicije mogu uključivati jedan ili više reagensa za formulisanje koji se direktno ili indirektno vezuju za i stabilizuju nukleinsku kiselinu, čime se povedava vreme opstanka u citoplazmi ciljne delije. Navedeni reagensi prioritetno dovode do poboljšanja poluživota nukleinske kiseline u ciljnim delijama. Na primer, stabilnost iRNK i efikasnost translacije mogu biti povedani ugradnjom "stabilizujudih reagenasa" koji obrazuju komplekse sa iRNK koja se prirodno javlja unutar delije (pogledati npr. SAD patentni spis br. 5 677 124). Ugradnja stabilizujudeg reagensa može biti postignuta, na primer, kombinovanjem poli A i proteina sa iRNK da bi se iRNK stabilizovala in vitro pre pakovanja ili inkapsulacije u nosač transfera. Stabilizujudi reagensi za primer podrazumevaju jedan ili više proteina, peptida, aptamera, proteina koji omogudavaju pristup enzimima translacije, kao i iRNK vezujude proteine i/ili faktore inicijacije translacije.
[0030] Stabilizacija kompozicija takođe može biti poboljšana upotrebom grupa koje inhibiraju opsonizaciju, a koji uobičajeno predstavljaju velike hidrofilne polimere koji su hemijski ili fizički vezani za nosač transfera (npr. interkalacijom domena za usidravanje koji je rastvorljiv u lipidima u samu membranu, ili pak direktnim vezivanjem za aktivne grupe membranskih lipida). Navedeni hidrofilni polimeri koji inhibiraju opsonizaciju obrazuju zaštitni površinski sloj koji značajno umanjuje preuzimanje lipozoma od strane makrofagno-monocitnog sistema i retikulo-endotelijalnog sistema (npr. kao što je opisano u Patetnom spisu SAD br. 4,920,016). Nosač transfera koji je modifikovan grupama koje inhibiraju opsonizaciju ostaje stoga u cirkulaciji znatno duže u odnosu na njegove nemodifikovane parnjake.
[0031] Kada RNK hibridizuje sa komplementarnim molekulom nukleinske kiseline (npr. DNK ili RNK), ona može biti zaštidena od dejstva nukleaza (Krieg i saradnici, Melton. Methods in Enzymology.
1987; 155, 397-415). Stabilnost hibridizovane iRNK je verovatno posledica jedinstvene inherentne specifičnosti vedine RNaza za jedan lanac. U pojedinim primerima primene, stabilizujudi reagens koji je izabran za obrazovanje kompleksa sa nukleinskom kiselinom označava eukariotski protein (npr. protein sisara). U još jednom primeru primene, iRNK za upotrebu u terapiji može biti modifikovana hibridizacijom sa drugim molekulom nukleinske kiseline. Ukoliko je čitav iRNK molekul hibridizovan sa komplementarnim molekulom nukleinske kiseline, inicijacija translacije može biti smanjena. U pojedinim primerima primene, 5’ netranslatirajudi region i AUG start region iRNK molekula mogu opciono biti ostavljeni nehibridizovanima. Nakon inicijacije translacije, aktivnost odvijanja ribozomalnog kompleksa može biti funkcionalna, čak i pri visokom afinitetu dupleksa, tako da se translacija može nastaviti (Liebhaber J., Mo!. Biol. 1992; 226: 2-13; Monia i saradnici, J Biol Chem.
1993; 268: 14514-22.)
[0032] Podrazumeva se da bilo koji od prethodno opisanih postupaka za poboljšanje stabilnosti nukleinskih kiselina može biti upotrebljen ili samostalno ili u kombinaciji sa jednim ili sa više od bilo kojih drugih postupka koji su prethodno opisani i/ili kompozicija.
[0033] U jednom primeru primene, kompozicije predmetnog pronalaska olakšavaju dopremanje nukleinskih kiselina do ciljnih delija. U pojedinim primerima primene, olakšavanje isporuke ciljnim delijama uključuje povedanje količine nukleinske kiseline koja dolazi u kontakt sa ciljnim delijama. U pojedinim primerima primene, olakšavanje isporuke ciljnim delijama uključuje smanjenje količine nukleinske kiseline koja dolazi u kontakt sa delijama koje nisu ciljne delije. U pojedinim primerima primene, olakšavanje isporuke ciljnim delijama uključuje omogudavanje transfekcije barem nekih ciljnih delija nukleinskom kiselinom. U pojedinim primerima primene, nivo ekspresije proizvoda koga kodira isporučena nukleinska kiselina je povedan u ciljnim delijama.
[0034] Nukleinske kiseline predmetnog pronalaska mogu opciono biti kombinovane sa reporterskim genom (npr. pozicioniranim ushodno ili nishodno od kodirajudeg regiona nukleinske kiseline) koji, na primer, olakšava određivanje stepena dopremanja nukleinske kiseline do ciljnih delija ili tkiva. Pogodni reporterski geni mogu uključivati, na primer, iRNK zelenog fluorescentnog protein (GFP iRNK, od engl. Green Fluorescent Protein), iRNK Renilla luciferaze (iRNK luciferaze), iRNK luciferaze svica ili bilo koju od njihovih kombinacija. Na primer, GFP iRNK može biti fuzionisana sa nukleinskom kiselinom koja kodira OTC iRNK da bi se olakšala potvrda lokalizacije iRNK u ciljnim delijama, tkivima ili organima.
[0035] U kontekstu pronalaska, termini "transfektovan" ili "transfekcija" označavaju unutardelijsko uvođenje nukleinske kiseline u deliju, ili prioritetno u ciljnu deliju. Uvedena nukleinska kiselina može biti stabilno ili tranzientno zžavana u ciljnoj deliji. Izraz "efikasnost transfekcije" se odnosi na relativnu količinu nukleinske kiseline preuzetu od strane ciljne delije koja je predmet transfekcije. U praksi, efikasnost transfekcije se procenjuje količinom proizvoda reporterske nukleinske kiseline koja je eksprimirana od stane ciljnih delija nakon transfekcije. Prioritetne su kompozicije sa visokim efekasnostima transfekcije, a posebno one kompozicije koje minimizuju štetne efekte koji su posredovani transfekcijom delija i tkiva koji ne predstavljaju ciljne delije i tkiva. Kompozicije predmetnog pronalaska koje karakteriše visoka efikasnost transfekcije poboljšavaju verovatnodu da de odgovarajude doze nukleinske kiseline biti dopremljene na mesto patologije, uz smanjenje potencijalnih sistemskih neželjenih efekata.
[0036] Kao što je ovde obezbeđeno, kompozicije sadrže nosač transfera koje sadrži jedan ili više katjonskih lipida, jedan ili više nekatjonskih lipida i jedan ili više lipida modifikovanih sa PEG, pri čemu nosač transfera predstavlja lipozom, a veličina nosača transfera je manja od 100nm. U kontekstu pronalaska, termin "nosač transfera" obuhvata bilo koji od standardnih farmaceutskih nosača, diluenata, ekscipijenasa i sličnih koji su u principu namenjeni za upotrebu prilikom primene biološki aktivnih agenasa, uključujudi nukleinske kiseline. Kompozicije, a posebno nosači transfera koji su ovde opisani, su sposobni da dopreme nukleinske kiseline raznih veličina u ciljne delije ili tkiva. U jednom primeru primene predmetnog pronalaska, nosači transfera predmetnog pronalaska su sposobni da dopreme velike sekvence nukleinske kiseline (npr. nukleinske kiseline od najmanje 1 kDa, 1,5k Da, 2 kDa, 2,5 kDa, 5 kDa, 10 kDa, 12 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25kDa, 30 kDa ili više). Nukleinske kiseline mogu biti formulisane sa jednim ili sa više prihvatljivih reagensa koji obezbeđuju nosač za dopremanje navedenih nukleinskih kiselina do ciljnih delija. Pogodni reagensi se, u principu, biraju uzimajudi u obzir niz faktora, koji uključuju, između ostalog, biološka ili hemijska svojstva nukleinskih kiselina (npr. naelektrisanje), nameravan način primene, očekivano biološko okruženje kome de navedene nukleinske kiseline biti izložene, kao i specifična svojstva ciljnih delija do kojih se dopremanje namerava. U pojedinim primerima primene, nosači transfera, kao što su lipozomi, inkapsuliraju nukleinske kiseline bez ugrožavanja biološke aktivnosti. U pojedinim primerima primene, nosač transfera pokazuje preferencijalno i/ili značajno vezivanje za ciljnu deliju u odnosu na delije koje nisu ciljne. U prioritetnom primeru primene, nosač transfera doprema svoj sadržaj ciljnoj deliji tako da se nukleinske kiseline doprema u odgovarajudi subdelijski odeljak, kao što je citoplazma. Nosač transfera predmetnog pronalaska označava lipozomalnu vezikulu koja olakšava prenos nukleinske kiseline do ciljne delije i tkiva. Lipidi se upotrebljavaju kao sastavni delovi nosača za transfer. Primeri pogodnih lipida uključuju, na primer, fosfatidilna jedinjenja (npr. fosfatidilglicerol, fosfatidilholin, fosfatidilserin, fosfatidiletanolamin, sfingolipide, cerebrozide i gangliozide).
[0037] Nosač transfera može biti izabran i/ili pripremljen tako da optimizuje dopremanje nukleinske kiseline do ciljne delije, tkiva ili organa. Na primer, karakteristike nosača transfera (npr. veličina, naelektrisanje i/ili pH) mogu biti optimizovani tako da dopremanje navedenog nosača za transfer bude efikasno do ciljne delije ili organa, da se smanji imunološki klirens i/ili podstakne zadržavanje u datom ciljnom organu.
[0038] Lipozomi (npr. lipozomalne lipidne nanopartikule) su uglavnom od koristi u raznim primenama u istraživanju, industriji i medicini, posebno prilikom njihove upotrebe kao nosača za transfer dijagnostičkih ili terapijskih jedinjenja in vivo (Lasic, Trends Biotechnol., 16: 307-321, 1998; Drummond i saradnici, Pharmacol. Rev., 5: 691-743, 1999), a obično se karakterišu kao mikroskopske vezikle sa unutrašnjim prostorom ispunjenim vodenom fazom i koji je odvojen od spoljašenjeg medijuma membranom koju zapravo čine jedna ili više dvoslojnih membrana. Dvoslojne membrane lipozoma se obično obrazuju od amfifilnih molekula poput lipida sintetskog ili pripodnog porekla koje čine prostorno razdvojeni hidrofilni i hidrofobni domeni (Lasic, Trends Biotechnol., 16: 307-321, 1998). Dvoslojne membrane lipozoma se takođe mogu obrazovati od amfifilnih polimera i surfaktanata (npr. polimerozoma, niozoma, itd.).
[0039] U kontekstu predmetnog pronalaska, lipozomalni nosač transfera obično služi za transport nukleinske kiseline do ciljne delije. Za potrebe predmetnog pronalaska, lipozomalni nosači transfera se pripremaju tako da sadrže željene nukleinske kiseline. Postupak ugradnje željene nukleinske kiseline u lipozom se često označava kao "opteredivanje" (Lasic i saradnici, FEBS Lett., 312: 255-258, 1992). Nukleinske kiseline koje su ugrađene u lipozom mogu biti potpuno ili delimično locirane u unutrašnjem prostoru lipozoma, unutar dvoslojne membrane lipozoma, ili vezane za spoljnu površinu membrane lipozoma. Ugrađivanje nukleinske kiseline u lipozome se ovde takođe označava kao "inkapsulacija", pri čemu se nukleinska kiselina u potpunosti nalazi unutar unutrašnjeg prostora lipozoma.
[0040] Svrha ugradnje nukleinske kiseline u nosač tranfera poput lipozoma često podrazumeva zaštitu nukleinske kiseline od okruženja koje može sadržavati enzime ili hemikalije koje razgrađuju nukleinske kiseline i/ili sisteme ili receptore koji dovode do brzog izlučivanja nukleinskih kiselina. Prema tome, u prioritetnom primeru primene predmetnog pronalaska, izabrani nosač transfera je sposoban da poboljša stabilnost nukleinske kiseline/nukleinskih kiselina (iRNK koje kodiraju funkcionalni protein) koju sadrži u sebi. Lipozom može omoguditi da inkapsulirana nukleinska kiselina stigne do ciljne delije i/ili može preferencijalno omoguditi da inkapsulirana nukleinska kiselina stigne do ciljne delije ili pak, alternativno, ograničava isporuku navedenih nukleinskih kiselina na druga mesta ili do drugih delija gde prisustvo primenjenje nukleinske kiseline kiselina može biti beskorisno ili nepoželjno. Štaviše, ugradnja nukleinskih kiselina u nosač transfera, kao što je npr. katjonski lipozom, takođe olakšava dopremanje navedenih nukleinskih kiselina do ciljne delije.
[0041] Idealno, nosači transfera se pripremaju za inapsuliranje jedne ili više željenih nukleinskih kiselina (npr. iRNK koja kodira enzim iz ciklusa uree) tako da kompozicije ispoljavaju visoku efikasnost transfekcije i poboljšanu stabilnost. Dok lipozomi mogu olakšati uvođenje nukleinskih kiselina u ciljne delije, dodavanje polikatjona (npr. poli L-lizina i protamina), kao kopolimera, može olakšati, a u pojedinim slučajevima značajno povedati, efikasnost transfekcije nekoliko tipova katjonskih lipozoma za 2-28 puta u brojnim delijskim linijama kako in vitro tako i in vivo (pogledati N.J. Caplen i saradnici, Gene Ther.1995; 2: 603; S. Li i saradnici, Gene Ther.1997; 4, 891).
Katjonski lipidi i lipozomi se upotrebljavaju za inkapsulaciju i/ili povedanje dopremanja nukleinskih kiselina do njihovih ciljnih delija i tkiva. U kontektu pronalaska, fraza "katjonski lipid" se odnosi na bilo koju od brojnih vrsta lipida sa pozitivnim neto naelektrisanjem na odabranom pH, kao što je fiziološki pH. Predviđeni lipozomalni nosači transfera i lipidne nanopartikule se mogu pripremiti uključivanjem višekomponentnih lipidnih smeša u različitim odnosima u kojima se koriste jedan ili više katjonskih lipida, nekatjonskih lipida i lipida modifikovanih sa PEG. Nekoliko katjonskih lipida je opisano u literaturi, od kojih su mnogi komercijalno dostupni. U pojedinim primerima primene, upotrebljava se katjonski lipid N-[1-(2,3-dioliloksi)propil] -N,N,N-trimetilamonijum hlorid ili "DOTMA" (Feigner i sar. (Proc. Nat'lAcad. Sci 84, 7413 (1987); Patentni spis SAD br. 4,897,355). DOTMA može biti formulisan samostalno ili može biti u kombinaciji sa dioleoilfosfatidiletanolaminom ili "DOPE" ili drugim katjonskim ili nekatjonskim lipidima u lipozomalnom nosaču transfera ili lipidnoj nanopartikuli, a navedeni lipozomi mogu biti upotrebljeni za poboljšanje isporuke nukleinskih kiselina u ciljne delije. Drugi pogodni katjonski lipidi uključuju, na primer, 5-karboksispermilglicindioktadecilamid ili "DOGS", 2,3-dioliloksi-N-[2(spermin-karboksamido)etil]-N,N-dimetil-1-propanaminijum ili "DOSPA" (Behr i saradnici, Proc. Nat.'l Acad. Sci. 86, 6982 (1989); Patentni spis SAD br. 5,171,678; Patentni spis SAD br. 5,334,761), 1,2-dioleoil-3-dimetilamonijumpropan ili "DODAP", 1,2-dioleoil-3-trimetilamonijum-propan ili "DOTAP". Razmatrani katjonski lipidi takođe uključuju 1,2-disteariloksi-N,N-dimetil-3-aminopropan ili "DSDMA", 1,2-dioliloksi-N,N-dimetil-3-aminopropan ili "DODMA", 1,2-dilinoliloksi-N,N-dimetil-3-aminopropan ili "DLinDMA", 1,2-dilinoleniloksi-N,N-dimetil-3-aminopropan ili "DLenDMA", N-dioleil-N,N-dimetilamonijum hlorid ili "DODAC", N,N-distearil-N,N-dimetilamonijum bromid ili "DDAB", N-(1,2-dimiristiloksipropil-3-il)-N,N-dimetil-N-hidroksietil amonijum bromid ili "DMRIE", 3-dimetilamino-2-(holest-5-en-3-betaoksibutan-4-oksi)-1- (cis,cis-9,12-oktadekadienoksi)propan ili "CLinDMA", 2- [5’-(holest-5-en-3-betaoksi)-3'-oksapentoksi)-3-dimeti 1-1- (cis, cis-9',1-2'-oktadekadienoksi)propan ili "CpLinDMA", N,N-dimetil-3,4-dioliloksibenzilamin ili "DMOBA", 1,2-N,N'-dioleilkarbamil-3-dimetilaminopropan ili "DOcarbDAP", 2,3-dilinoleoiloksi-N,N-dimetilpropilamin ili "DLinDAP", 1,2-N,N'-dilinolilkarbamil-3-dimetilaminopropan ili "DLincarbDAP", 1,2-dilinoleoilkarbamil-3-dimetilaminopropan ili "DLinCDAP", 2,2-dilinolil-4-dimetilaminometil-[1,3]-dioksolan ili "DLin-K-DMA", 2,2-dilinolil-4-dimetilaminoetil-[1,3]-dioksolan ili" DLin-K-XTC2-DMA" ili njihove smeše. (Heyes J. i saradnici, J Controlled Release 107: 276-287 (2005); Morrissey DV. i saradnici, Nat. Biotechnol. 23(8): 1003-1007 (2005); PCT publikacija WO2005/121348A1).
[0042] Upotreba katjonskih lipida baziranih na holesterolu je takođe predmet predmetnog pronalaska. Navedeni katjonski lipidi na bazi holesterola se mogu upotrebljavati u kombinaciji sa drugim katjonskim i nekatjonskim lipidima. Pogodni katjonski lipidi na bazi holesterola uključuju, na primer, DC-Chol (N,N-dimetil-N-etilkarboksamidoholesterol), 1,4-bis(3-N-oleilamino-propil)piperazin (Gao i saradnici, Biochem. Biophys. Res. Comm.179, 280 (1991); Wolf i saradnici, BioTechniques 23, 139 (1997); Patentni spis SAD br.5,744,335).
[0043] Dodatno, nekoliko reagensa je komercijalno dostupno da bi se poboljšala efikasnost transfekcije. Pogodni primeri uključuju LIPOFECTIN (DOTMA:DOPE) (Invitrogen, Carlsbad, Kalifornija), LIPOFECTAMINE (DOSPA:DOPE) (Invitrogen), LIPOFECTAMINE2000 (Invitrogen), FUGENE, TRANSFECTAM (DOGS) i EFFECTENE.
[0044] Predmet pronalaska su i katjonski lipidi, kao što su lipidi na bazi dialkilamina, na bazi imidazola i na bazi guanidinijuma. Na primer, određeni primeri primene su usmereni na kompoziciju koja sadrži jedan ili više katjonskih lipida na bazi imidazola, na primer, imidazolski estar holesterola ili "ICE" lipid (3S, 10R, 13R, 17R)-10,13-dimetil-17-((R)-6-metilheptan-2-il)-2, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 17-tetradekahidro-1H-ciklopenta[a]fenantren-3-il 3-(1H-imidazol-4-il)propanoat, predstavljen strukturom (I) u nastavku teksta. U prioritetnom primeru primene, nosač transfera za isporuku iRNK, na primer, terapijske količine iRNK, može sadržavati jedan ili više katjonskih lipida na bazi imidazola, na primer, imidazolski estar holesterola ili "ICE" lipid (3S, 10R, 13R, 17R)-10,13-dimetil-17-((R)-6-metilheptan-2-il)-2, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17-tetradekahidro-1H-ciklopenta[a]fenantren-3-il 3-(1H-imidazol-4-il)propanoat, predstavljen strukturom (I).
Bez želje da bude vezano za određenu teoriju, veruje se da je fuzogenost katjonskog lipidna ICE na bazi imidazola povezana sa remedenjem endozoma koje je olakšano usled prisustva imidazolne grupe koju karakteriše niža pKa vrednost u odnosu na tradicionalne katjonske lipide. Remedenje endozoma pospešuje zauzvat osmotsko bubrenje i razlaganje lipozomalne membrane, nakon čega sledi transfekcija ili unutardelijsko oslobađanje sadržaja, nukleinske kiseline/nukleinskih kiselina, u ciljnu deliju.
[0045] Katjonske lipide na bazi imidazola takođe karakteriše njihova smanjena toksičnost u odnosu na druge katjonske lipide. Katjonski lipidi na bazi imidazola (na pr. ICE) mogu biti upotrebljeni kao jedini katjonski lipidi u nosaču za transfer ili oni alternativno mogu biti kombinovani sa tradicionalnim katjonskim lipidima (npr. DOPE, DC-Chol), nekatjonskim lipidima, lipidima modifikovanim sa PEG i/ili pomodnim lipidima. Sadržaj katjonskog lipida može biti takav njihov molarni odnos izanosi od približno 1% do približno 90%, približno 2% do približno 70%, približno 5% do približno 50%, približno 10% do približno 40% od ukupnih lipida prisutnih u nosaču za transfer, ili prioritetno od približno 20% do približno 70% od ukupnih lipida prisutnih u nosaču za transfer.
[0046] Upotreba fosfolipida modifikovanih polietilen glikolom (PEG) i derivatizovanih lipida kao što su derivati ceramida (PEG-CER), uključujudi N-oktanoil-sphingozin-1-[sukcinil(metoksi polietilen glikol)-2000] (CS PEG-2000 ceramid) takođe je predmet pronalaska, bilo samostalno ili prioritetno u kombinaciji sa drugim lipidnim formulacijama sa kojima zajedno čini nosač transfera. Razmatrani lipidi koji su modifikovani sa PEG uključuju, ali nisu ograničeni na, lanac polietilen glikola dužine do 5 kDa koji je kovalentno vezan za lipid sa alkilnim lancem/lancima dužine C6-C20. Dodavanje navednih komponenti može sprečiti složenu agregaciju i takođe može obezbediti način za povedanje vremena zadržavanja u cirkulaciji, kao i poboljšanje isporuke kompozicije koja sadrži lipid i nukleinsku kiselinu do ciljnih tkiva (Klibanov i saradnici (1990) FEBS Letters, 268 (1): 235-237) ili komponente mogu biti izabrane tako da dolazi do brze izmene iz formulacije in vivo (pogledati Patentni spis SAD br.
5,885,613). Posebno korisni izmenjivi lipidi su PEG-ceramidi sa kradim acilnim lancima (npr. C14 ili C18). Fosfolipidi koji su modifikovani sa PEG i derivati lipida predmetnog pronalaska mogu biti prisutni sa molarnim odnosom od približno 0% do približno 20%, približno 0,5% do približno 20%, približno 1% do približno 15%, približno 4% do približno 10% ili približno 2% od ukupnih lipida prisutnih u lipozomalnom nosaču transfera.
[0047] Predmetni pronalazak takođe razmatra upotrebu nekatjonskih lipida. U kontekstu pronalaska, fraza "nekatjonski lipid" se odnosi na bilo koji neutralni, zviterjonski ili anjonski lipid. U kontekstu pronalaska, fraza "anjonski lipid" se odnosi na bilo koju od brojnih vrsta lipida sa negativnim neto naelektrisanjem na odabranom pH, kao što je fiziološki pH. Nekatjonski lipidi uključuju, ali nisu ograničeni na, distearoilfosfatidilholin (DSPC), dioleoilfosfatidilholin (DOPC), dipalmitoilfosfatidilholin (DPPC), dioleoilfosfatidilglicerol (DOPG), dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG), dioleoilfosfatidiletanolamine (DOPE), palmitoiloleoilfosfatidilholin (POPC), palmitoiloleoilfosfatidiletanolamin (POPE), dioleoil-fosfatidiletanolamin 4-(N-maleimidometil)-cikloheksan-1-karbokilat (DOPE-mal), dipalmitoil fosfatidil etanolamin (DPPE), dimiristoilfosfoetanolamin (DMPE), distearoil-fosfatidil-etanolamin (DSPE), 16-O-monometil PE, 16-O-dimetil PE, 18-1-trans PE, 1-stearoil-2-oleoil-fosfatidetanolamin (SOPE), holesterol ili njihove smeše. Navedeni nekatjonski lipidi se upotrebljavaju u kombinaciji sa drugim ekscipijensima, tj. katjonskim lipidima i nekatjonskim lipidima. Kada se upotrebljavaju u kombinaciji sa katjonskim lipidom, moralni odnos nekatjonskih lipid može iznositi od 5% do približno 90% ili prioritetno od približno 10% do približno 70% od ukupnih lipida koji su prisutni u nosaču transfera.
[0048] Nosač transfera se priprema kombinovanjem više komponenti lipida i/ili polimera. Na primer, nosač transfera može biti pripremljen upotrebom DSPC/CHOL/DODAP/C8-PEG-5000 ceramida u molarnim odnosima od približno 1 do 50 : 5 do 65 : 5 do 90 : 1 do 25, tim redom. Nosač transfera može da sadrži dodatne kombinacije lipida u različitim odnosima, uključujudi, na primer, DSPC/CHOL/DODAP/mPEG-5000 (npr. kombinovane u molarnom odnosu od približno 33:40:25:2), DSPC/CHOL/DODAP/C8 PEG-2000-Cer (npr. kombinovane u molarnom odnosu od približno 31:40:25:4), POPC/DODAP/CS-PEG-2000-Cer (npr. kombinovane u molarnom odnosu od približno 75-87:3-14:10) ili DSPC/CHOL/DOTAP/C8 PEG-2000-Cer (npr. kombinovane u molarnom odnosu od približno 31:40:25:4). Izbor katjonskih lipida, nekatjonskih lipida i lipida modifikovanih sa PEG koji čine lipozomalni nosač transfera ili lipidne nanočetice, kao i relativni molarni odnosi navedenih lipida jednih u odnosu na druge, se bazira na karakteristikama izabranog/izabranih lipida, na prirodi ciljnih delija ili tkiva koje je potrebno transfektovati, kao i na karakteristikama nukleinskih kiselina koje treba isporučiti limpozomalnim nosačem transfera. Dodatna razmatranja uključuju, na primer, zasidenje alkilnog lanca, kao i veličinu, naelektrisanje, pH, pKa, fuzogenost i toksičnost odabranog/odabranih lipida.
[0049] Lipozomalni nosači transfera za upotrebu u predmetnom pronalasku mogu biti pripremljeni raznim tehnikama koje su trenutno poznate u struci. Višeslojne vezikle (MLV) mogu biti pripremljene konvencionalnim tehnikama, na primer, deponovanjem izabranog lipida na unutrašnjem zidu odgovarajudeg kontejnera ili suda, rastvaranjem lipida u odgovarajudem rastvaraču, a zatim uparavanjem rastvarača da bi na unutrašnjoj strani posude ostao tanak sloj ili pak sušenjem pod mlazom. U posudu se dalje može dodati vodena faza, uz mešanje na vorteksu, što dovodi do obrazovanja MLV. Jednoslojne vezikule (ULV) se zatim mogu obrazovati homogenizacijom, sonikacijom ili ekstruzijom višeslojnih vezikula. Pored toga, jednoslojne vezikule mogu biti sintetisane tehnikom uklanjanja deterdžentima.
[0050] U određenim primerima primene predmetnog pronalaska, kompozicije predmetnog pronalaska sadrže nosač transfera u kome je terapijska iRNK (npr. iRNK koja kodira OTC) vezana za obe površine nosača transfera (npr. lipozoma) i inkapsulirana unutar istog nosača transfera. Na primer, tokom pripreme kompozicija predmetnog pronalaska, katjonski lipozomalni nosači transfera mogu biti vezani za iRNK elektrostatičkim interakcijama sa navedenom terapijskom iRNK.
[0051] U određenim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska mogu nositi dijagnostičke radionuklide, fluorescentne materijale ili druge materijale koji se mogu detektovati nakon i in vitro i in vivo primene. Na primer, pogodni dijagnostički materijali za upotrebu u predmetnom pronalasku mogu uključivati rodamin-dioleoilfosfatidiletanolamin (Rh-PE), iRNK zelenog fluorescentnog proteina (GFP iRNK), iRNK Renilla luciferaze i iRNK luciferaze svica.
[0052] Tokom pripreme lipozomalnih nosača transfera, nosedi agensi koji su rastvorljivi u vodi mogu biti inkapsulirani u unutrašnji prostor na bazi vode, uključivanjem u rastvor za hidrataciju, dok lipofilni molekuli mogu biti uključeni u lipidnu formulaciju ugrađivanjem u lipidni dvosloj. U slučaju određenih molekula (npr. katjonskih ili anjonskih lipofilnih nukleinskih kiselina), ugrađivanje nukleinske kiseline u prethodno formirane lipozome može biti postignuto, na primer, postupcima opisanim u Patentnom spisu SAD br. 4,946,683. Nakon inkapsulacije nukleinske kiseline, lipozomi mogu biti obrađeni da bi se uklonila neinkapsulirana iRNK, procesima poput hromatografije na gelu, dijafiltracije ili ultrafiltracije. Na primer, ukoliko je poželjno da se ukloni nukleinska kiselina koja je vezana za spoljašnju površinu formulacije lipozomalnog nosača transfera, navedeni lipozomi mogu biti podvrgnuti postupku u kome se upotrebljavaju dietilaminoetil SEPHACEL kolone.
[0053] Pored inkapsulirane nukleinske kiseline, jedan ili više terapijskih ili dijagnostičkih agenasa može biti uključen u nosač transfera. Na primer, navedeni dodatni terapijski agensi mogu biti vezani za površinu lipozoma, mogu biti ugrađeni u lipidni dvosloj lipozoma i tako uključeni u lipidne formulacije ili pak mogu uvedeni u prethodno pripremljene lipozome (pogledati Patentne spise SAD br. 5,194,654 i 5,223,263).
[0054] Postoji nekoliko postupaka za smanjenje veličine ili "dimenzioniranje" lipozomalnih nosača tranfera, a bilo koji od navedenih postupaka se u principu može upotrebiti kada se dimenzioniranje upotrebljava kao deo pronalaska. Postupak ekstruzije je prioritetan postupak dimenzioniranja lipozoma. (Hope MJ i saradnici, Reduction of Liposome Size and Preparation of Unilamellar Vesicles by Extrusion Techniques, u: Liposome Technology (izd. G. Gregoriadis) volume 1, str. 123 (1993). Postupak se sastoji od ekstruzije lipozoma kroz polikarbonatnu membranu malih pora ili asimetričnu keramičku membranu da bi se smanjila veličina lipozoma dok se ne postigne relativno dobro definisana distribucija veličina. Uobičajeno je da se suspenzija ciklično propušta kroz memranu, jedan ili više puta, dok se ne postigne željena distribucija veličine lipozoma. Lipozomi mogu biti ekstrudirani kroz membrane sukcesivno manjih pora da bi se postiglo postepeno smanjenje veličine lipozoma.
[0055] Za dimenzioniranje populacije lipozomalnih nosača tranfera su dostupni razni alternativni postupci koji su poznati u stanju tehnike. Jedan takav postupak je opisan u Patentnom spisu SAD br.
4,737,323. Sonikacija suspenzije lipozoma bilo sonikacijom u kupatilu ili upotrebom sonde dovodi do progresivnog smanjenja veličine i do obrazovanja malih ULV, manjih od približno 0,05 mikrona u prečniku. Homogenizacija je još jedan postupak koji se oslanja na silu cepanja fragmenata velikih lipozoma do onih manjih. U uobičajenoj proceduri homogenizacije, MLV se više puta uvode u standardan emulzioni homogenizer dok se ne utvrdi prisustvo izabrane veličine lipozoma, obično između 0,1 i 0,5 mikrona. Veličina lipozomskih vezikla može biti određena upotrebom kvazielektričnog rasejavanja svetla (QELS), kao što je opisano u publikaciji Bloomfield, Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 10:421-450 (1981).
Prosečan prečnik lipozoma može biti smanjen sonikacijom prethodno obrazovanih lipozoma. Intermitentni ciklusi sonikacije se mogu smenjivati sa procenom veličine upotrebom QELS postupka, a da bi se sprovela efikasna sinteza lipozoma.
[0056] Izbor pogodne veličine lipozomalnih nosača tranfera mora uzeti u razmatranje poziciju ciljne delije ili tkiva i, do određene mere, primenu za koju se lipozom pravi. Poželjno je da se transfekcija nukleinskih kiselina ograniči na određene delije ili tkiva. Jetra predstavlja ciljni organ za kompozicije predmetnog pronalaska, delom zbog svoje centralne uloge u metabolizmu i proizvodnji proteina, a delom zbog oboljenja koja nastaju usled deficijencije produkata gena koji su specifični za jetru (npr. poremedaji ciklusa uree) i za koje može biti od koristi specifična ekspresija u ciljnim delijama (npr. hepatocitima). Strukturne karakteristike ciljnog tkiva se iskorišdavaju za usmeravanje distribucije lipozomalnog nosača transfera u navedena ciljna tkiva. Da bi se specifično dopremio do hepatocita, lipozomalni nosač za transfer može biti dimenzioniran tako da su dimenzije manje od veličine fenestriranih pora endotelijalnog sloja koji oblaže hepatične sinusoide u jetri; prema tome, lipozomalni nosač transfera može lako prodreti kroz navedene endotelne pore da bi došao do ciljnih hepatocita. Veličina nosača transfera je manja od 100nm, 75nm, 50nm, 25nm ili 10nm.
[0057] Kompozicije predmetnog pronalaska se distribuiraju u delije i tkiva jetre da bi se olakšala isporuka i naknadna ekspresije nukleinskih kiselina (npr. iRNK) koja se unutar njih nalaze, u delije i tkiva jetre (npr. hepatocite). Dok se navedene kompozicije mogu preferencijalno distribuirati u delije i tkiva jetre, terapijski efekti eksprimiranih nukleinskih kiselina ne moraju biti ograničeni na ciljne delije i tkiva. Na primer, ciljni hepatociti mogu funkcionisati kao "rezervoar" ili "depo" sposoban za ekspresiju ili proizvodnju i sistemsko izlučivanje funkcionalnog proteina ili enzima. Shodno tome, u jednom primeru primene predmetnog pronalaska, lipozomalni nosač tranfera može biti specifičan za dopremanje do hepatocita i/ili se može preferencijalno distribuirati do delija i tkiva jetre i nakon isporuke. Nakon transfekcije ciljnih hepatocita, iRNK nukleinska kiselina/nukleinske kiseline koje lipozomalni nosač sadrži se translatira/ju, a funkcionalni proteinski proizvod se eksprimira, izlučuje i sistemski distribuira. U pojedinim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska sadrže jedan ili više dodatnih molekula (npr. proteina, peptida, aptamera ili oliogonukleotida) koji olakšavaju prenos nukleinskih kiselina iz nosača transfera do unutardelijskih organela ciljne delije. U jednom primeru primene, dodatni molekul olakšava isporuku nukleinskih kiselina u, na primer, citosol, lizozom, mitohondriju, jedro, nukleolus ili proteozom ciljne delije. Obuhvadeni su i agensi koji olakšavaju transport translatiranog proteina od interesa iz citoplazme do njegove normalne unutardelijske lokacije (npr. u mitohondriji) da bi se lečila deficijencije u navedenoj organeli. U pojedinim primerima primene, agens se bira iz grupe koju čine protein, peptid, aptamer i oligonukleotid.
[0058] Kompozicije predmetnog pronalaska olakšavaju endogenu proizvodnju jednog ili više funkcionalnih proteina kod subjekta, a posebno proizvodnju proteina koji pokazuju manju imunogenost u odnosu na njihove parnjake koji su rekombinantno pripremljeni. Nakon distribucije kompozicija u ciljna tkiva i naknadne transfekcije navedenih ciljnih delija, egzogena iRNK koju sadrži lipozomalni nosač transfera može biti prevedena in vivo da bi se proizveo funkcionalan protein koga kodira egzogeno primenjena iRNK (tj. protein koji je deficijentan kod subjekta). Shodno tome, kompozicije predmetnog pronalaska koriste sposobnost subjekta da translatira egzogenu ili iRNK koja je rekombinantno pripremljena, a da bi se proizveo endogeno translatiran protein ili enzim i time proizveo (i gde je primenjivo, izlučio) funkcionalan protein ili enzim. Eksprimirani ili translatirani proteini ili enzimi mogu takođe biti okarakterisani in vivo, uključivanjem prirodnih post-translacionih modifikacija koje često mogu biti odsutne kod rekombinantno pripremljenih proteina ili enzima, a čime se dodatno smanjuje imunogenost translatiranog proteina ili enzima.
[0059] Primenom iRNK koja kodira deficijentan protein ili enzim se izbegava potreba isporuke nukleinske kiseline specifičnim organelima unutar ciljne delije (npr. mitohondrijama). Pre svega, nakon transfekcije ciljne delije i isporuke nukleinskih kiselina u citoplazmu ciljne delije, iRNK sadržaj nosača za tranfer može biti translatiran, a funkcionalan protein ili enzim eksprimiran.
[0060] Predmetni pronalazak takođe razmatra diskriminatorno dopremanje do ciljnih delija i tkiva kako pasivnim tako i aktivnim načinima ciljanja. Fenomen pasivnog ciljanja iskorišdava prirodne obrasce distribucije nosača za transfer in vivo, bez oslanjanja na upotrebu dodatnih ekcipijenasa ili načina za poboljšanje prepoznavanja nosača za transfer od strane ciljnih delija. Na primer, nosači tranfera koji podležu fagocitozi od strane delija retikulo-endotelijalnog sistema de se verovatno akumulirati u jetri ili slezini, a navedeno može obezbediti načine za direknu pasivnu isporuku kompozicija navedenim ciljnim delijama.
[0061] Alternativno, predmetni pronalazak razmatra aktivnu ciljnu isporuku koja podrazumeva upotrebu dodatnih ekscipijenasa, ovde označenih kao "ciljani ligandi" koji mogu biti vezani (bilo kovalentno ili nekovalentno) za nosač tranfera da bi se podstakla lokalizacija navedenog nosača transfera u određene ciljne delije ili ciljne tkiva. Na primer, ciljna isporuka može biti posredovana uključivanjem jednog ili više endogenih ciljanih liganada (npr. apolipoproteina E) u ili na nosaču tranfera da bi se podstakla distribucija do ciljnih delija ili tkiva. Prepoznavanje ciljanog liganda od strane ciljnog tkiva aktivno olakšava distribuciju i prezimanje nosača transfera od strane delije i/ili njegovog sadržaja do ciljnih delija i tkiva (npr. uključivanje liganda koji ciljano vezuje apolipoprotein-E u ili na nosaču tranfera, a što podstiče prepoznavanje i vezivanje nosača transfera za endogene lipoproteinske receptore male gustine koje eksprimiraju hepatociti). Kao što je ovde obezbeđeno, kompozicija može sadržavati ligand sposoban da poveda afinitet kompozicije za ciljnu deliju. Ciljani ligandi mogu biti vezani za spoljni dvosloj lipidne čestice tokom formulisanja ili nakon formulacije. Navedeni postupci su dobro poznati u stanju tehnike. Pored toga, pojedine formulacije lipidne partikule mogu koristiti fuzogene polimer poput PEAA, hemaglutinina, drugih lipopeptida (pogledati Patentne spise SAD br. 08/835,281 i 60/083,294), kao i druge osobine korisne za in vivo i/ili unutardelijsku isporuku. U pojedinim drugim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska karakterišu poboljšane efikasnosti transfekcije i/ili poboljšana selektivnost prema ciljnim delijama ili tkivima. Razmatraju se stoga kompozicije koje sadrže jedan ili više liganda (npr. peptide, aptamere, oligonukleotide, vitamina ili drugih molekula) koji su sposobni da poboljšavaju afinitet kompozicija, i nukleinskih kiselina koje sadrže, za ciljne delije ili tkiva. Pogodni ciljani ligandi opciono biti vezani ili linkovani za površinu nosača tranfera. U pojedinim primerima primene, ciljani ligand može prolaziti kroz površinu nosača tranfera ili biti inkapsuliran unutar nosača tranfera. Pogodni ligandi se biraju se na osnovu svojih fizičkih, hemijskih ili bioloških osobina (npr. selektivnog afiniteta i/ili prepoznavanja markera na površini, kao i karakteristika ciljne delije). Ciljna mesta koja su specifična za delije i njihovi odgovarajudi ciljani ligandi mogu široko varirati. Pogodni ciljani ligandi se biraju tako da se iskoriste jedinstvene karakteristike ciljne delije, čime se omogudava da kompozicija vrši diskriminaciju između ciljnih i delija koje nisu ciljne. Na primer, kompozicije predmetnog pronalaska mogu nositi površinske markere (npr. apolipoprotein-B ili apolipoprotein-E) koji selektivno povedavaju prepoznavanje od strane ili afinitet prema hepatocitima (npr. prepoznavanje koje je posredovano receptorom i vezivanjem za ovake površinske markere). Dodatno, očekuje se da upotreba galaktoze kao ciljanog liganda usmerava kompozicije predmetnog pronalaska ka parenhimskim hepatocitima ili, alternativno, očekuje se da upotreba ugljeno-hidratnih ostataka koji sadrže manozu kao ciljani ligand usmeri kompozicije predmetnog pronalaska ka endotelijalnim delijama jetre (npr. ugljeno-hidratni ostaci koji sadrže manozu se preferencijlno mogu vezivati za receptor azijaloglikoproteina koji je prisutan u hepatocitima). (Pogledati Hillery AM i saradnici, "Drug Delivery and Targeting: For Pharmacists and Pharmaceutical Scientists" (2002) Taylor & Francis, Inc.). Prezentacija navedenih ciljanih liganda konjugovanih sa strukturama prisutnim u nosaču transfera stoga olakšava prepoznavanje i preuzimanje kompozicija predmetnog pronalaska u ciljne delije i tkiva. Primeri pogodnih ciljnih liganda uključuju jedan ili više peptida, proteina, aptamera, vitamina i oligonukleotida.
[0062] U kontekstu pronalaska, termin "subjekat" se odnosi na bilo koju životinju (npr. sisara), uključujudi, ali ne ograničavajudi se na, ljude, nehumane primate, glodare i slično, kojima se primenjuju kompozicije predmetnog pronalaska. Uobičajeno je da se termini "subjekat" i "pacijent" ovde koriste naizmenično kada se odnose na ljude kao subjekte.
[0063] U kontekstu pronalaska, termin "ciljna delija" se odnosi na deliju ili tkivo prema kojima je potrebno kompoziciju pronalaska usmeriti ili ciljano dopremiti. U pojedinim primerima primene, ciljne delije su deficitarne u proteinu ili enzimu od interesa. Obzirom da je poželjno dopremanje nukleinske kiseline do hepatocita, hepatocit predstavlja ciljnu deliju. U pojedinim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska transfektuju ciljne delije na osnovi diskriminacije (tj. ne tranfektuju delije koje nisu ciljne). Kompozicije predmetnog pronalaska se pripremaju da preferencijalano ciljaju hepatocite.
[0064] Nakon transfekcije jedne ili više ciljnih delija kompozicijama i nukleinskim kiselinama predmetnog pronalaska, prioritetno se stimuliše ekspresija proteina koga kodira navedena nuklinska kiselina, a sposobnost navednih ciljnih delija da eksprimiraju protein od interesa je poboljšana. Na primer, transfekcija ciljne delije sa OTC iRNK de omoguditi ekspresiju OTC proteinskog proizvoda nakon translacije nukleinske kiseline.
[0065] Metabolički poremedaji ciklusa uree i proteinske deficijencije u pricipu mogu biti pogodni za tretman kompozicijama koje su ovde obezbeđene. Nukleinske kiseline kompozicija koje su ovde obezbeđene kodiraju protein i prioritetno kodiraju proizvod čija je in vivo proizvodnja poželjna.
[0066] Metabolički poremedaji ciklusa uree su primere deficijencije proteina i enzima koji mogu biti lečeni upotrebom postupaka i kompozicija koje su ovde opisani. Navedeni poremedaji metaboličkog ciklusa uree uključuju OTC deficijenciju, deficijenciju arginosukcinat sintetaze (ASD) i deficijenciju argininosukcinat liaze (ALD). Stoga, u pojedinim primerima primene, nukleinska kiselina upotrebljena u postupcima i kompozicijma koje su ovde opisani kodira enzim uključen u ciklus uree, uključujudi, na primer, ornitin transkarbamilazu (OTC), karbamil fosfat sintetazu (CPS), argininosukcinat sintetazu 1 (ASS1), argininosukcinat liazu (ASL) i arginazu (ARG).
[0067] Opisano je pet metaboličkih poremedaja koji nastaju usled defekata u biosintezi enzima uključenih u ciklus uree, a isti uključuju deficijenciju ornitin transkarbamilaze (OTC), deficijenciju karbamil fosfat sintetaze (CPS), deficijenciju argininosukcinat sintetaze 1 (ASS1) (citrulinemiju), deficijenciju argininosukcinat liaze (ASL) i deficijenciju arginaze (ARG). Od navedenih pet metaboličkih poremedaja, OTC deficijencija predstavlja najčešdi poremedaj za koji je proceno da se javlja sa učestalošdu od jedan na svakih 80.000 rođenih.
[0068] OTC je homotrimerni mitohondrijalni enzim koji se eksprimira skoro isključivo u jetri i koga kodira prekursorski OTC protein, koji se cepa u dva koraka nakon inkorporacije u mitohondrijalni matriks. (Horwich AL. i saradnici, Cell 1986; 44: 451-459). OTC deficijencija je genetski poremedaj koji nastaje usled prisustva mutiranog i biološki neaktivnog oblika enzima ornitin transkarbamilaze. OTC deficijencija često postaje očigledna u prvih nekoliko dana života, obično nakon ingestije proteina. U klasičnom ozbiljnom obliku OTC deficijencije, u prvim danima života pacijenata su prisutne letargija, konvulzije, koma i teška hiperamonemija, što brzo dovodi do pogoršanja i smrtonosnog ishoda ukoliko izostane odgovarajuda medicinska intervencija. (Monish S. i saradnici, Genetics for Pediatricians; Remedica, Cold Spring Harbour Laboratory (2005)). Ukoliko se nepravno leče ili ne leče, komplikacije OTC deficijencije mogu uključiti kašnjenje u razvoju i mentalnu retardaciju. OTC deficijentni subjekti mogu takođe ispoljavati progresivno oštedenje jetre, lezije na koži i krtu kosu. Kod pojedinih obolelih subjekata, znaci i simptomi OTC deficijencije mogu biti manje ozbiljni i mogu se javiti tek kasnije u životu.
[0069] OTC gen koji se nalazi na kratkom kraku X hromozoma unutar Xp21.1 trake, prostire se na više od 85 kb i sastoji se od 10 egzona koji kodiraju protein od 1062 aminokiseline. (Lindgren V. i saradnici, Science 1984; 226: 698-7700; Horwich AL. i saradnici, Science 224: 1068-1074, 1984; Horwich AL. i saradnici, Cell 44: 451-459, 1986; Hata A. i saradnici, J. Biochem.100: 717-725, 1986). OTC enzim katalizuje prevođenje ornitina i karbamoil fosfata do citrulina. Pošto je OTC na X hromosomu, ženke su primarni nosioci, dok mužjaci sa nekonzervativnim mutacijama retko preživljavaju 72 sata od rođenja.
[0070] Kod zdravih subjekata, OTC se eksprimira gotovo isključivo u hepatocelularnim mitohondrijama. Iako nije eksprimiran u mozgu zdravih subjekata, OTC deficijencija može dovesti do neuroloških poremedaja. Na primer, jedan od uobičajenih simptoma OTC deficijencije, koja je heterogena u svojoj prezentaciji, je hiperamonemična koma (Gordon N., Eur J Pediatr Neurol 2003; 7: 115-121.).
[0071] OTC deficijencija je veoma heterogena, sa više od 200 jedinstvenih mutacija koje su prijavljene, kao i sa velikim delecijama koje čine otprilike 10-15% svih mutacija, dok ostatak generalno podrazumeva “ missens” tačkaste mutacije (mutacije promene smisla kodona), kao i manji broj “ nonsens” mutacija (kojima se gubi smisao kodona), mutacije mesta obrade i mutacije tipa manjih delecija. (Monish A. i saradnici). Fenotip OTC deficijencije je izuzetno heterogen i može varirati od akutne neonatalne hiperamonemične kome do asimptomatskih hemizigotnih odraslih osoba. (Gordon N., Eur J Paediatr Neurol 2003; 7: 115-121). Navedene mutacije koje dovode do ozbiljne i životno-ugrožavajude neonatalne bolesti su grupisane u važnim strukturalnim i funkcionalnim domenima u unutrašnjosti proteina, na mestima aktivnosti enzima ili na površinama koje se nalaz između lanaca, dok se mutacije asocirane sa oboljenjem koje se javlja kasnije tokom života nalaze na površini proteina (Monish A. i saradnici). Pacijente sa blažim ili parcijalnim oblicima OTC deficijencije može karakterisati početak bolesti u kasnijem životnom dobu, kao i simptotomi tipa ponavljanog povradanja, neurobihejvioralnih promena ili epileptičkih napada koji su povezani sa hiperamonemijom.
[0072] Kompozicije predmetnog pronalaska su široko primenjive za dopremanje nukleinskih kiselina, a posebno iRNK, i lečenje brojnih poremedaja. Kompozicije predmetnog pronalaska su pogodne za lečenje bolesti ili poremedaja koji se odnose na deficijenciju proteina. U jednom primeru primene, nukleinske kiseline predmetnog pronalaska kodiraju funkcionalne proteine ili enzime koji se izlučuju ili sekretuju od strane ciljne delije u okolnu vandelijsku tečnost (npr. iRNK koja kodira hormone i neurotransmitere). Alternativno, u još jednom primeru primene, nukleinske kiseline predmetnog pronalaska kodiraju funkcionalne proteine ili enzime koji ostanu u citosolu ciljne delije (npr. iRNK koja kodira enzime bitne za metaboličke poremedaje ciklusa uree). Ostali poremedaji za koje je predmetni pronalazak koristan uključuju poremedaje kao što su spinalna mišidna atrofija (SMA) povezana sa SMNI; amiotrofična lateralna skleroza (ALS); galaktozemija povezana sa GALT; cistična fibroza (CF); poremedaji povezani sa SLC3Al uključujudi cistinuriju; poremedaji povezani sa COL4A5 uključujudi Alportov sindrom; deficijenciju galaktoceribrozidaze; X-vezanu adrenoleukodistrofiju i adrenomijeloneuropatiju; Fridrihovu ataksiju; Pelizeus-Mercbaherovu bolest; tuberoznu sklerozu povezanu sa TSC1 i TSC2; Sanfilipo B sindrom (MPS IIIB); cistinozu povezanu sa CTNS; poremedaje povezane sa FMR1 koji uključuju fragilni X sindrom, fragilni X-vezani sindrom sa tremorom/ataksijom i fragilni X sindrom preuranjene insuficijencije jajnika; Prader-Vilijev sindrom; naslednu hemoragičnu telangiektaziju (AT); Njuman-Pikovu bolest tipa C1; oboljenja povezana sa neuronalnim ceroidnim lipofuscinozama uključujudi juvenilnu insuficijenciju neuronalne ceroidne lipofuscinoze (JNCL), juvenilnu Batenovu bolest, Satavuori-Haltia, Janski-Bielšovski bolest i PTT-1 i TPP1 deficijencije; dečije ataksije povezane se EIF2B1, EIF2B2, EIF2B3, EIF2B4 i EIF2B5 pradene hipomijelinizacijom/nestankom bele mase centralnog nervnog sistema; epizodne ataksije tipa 2 povezane sa CACNA1A i CACNB4; poremedaje povezane sa MECP2 uključujudi klasičan Retov sindrom, tešku neonatalnu encefalopatiju povezanu sa MECP2 i PPM-X sindrom; atipičan Retov sindrom povezan sa CDKL5; Kenedijevu bolest (SBMA); cerebralnu autozomno-dominantnu arteriopatiju povezanu sa Notch-3 pradenu subkortikalnim infarktima i leukoencefalopatijom (CADASIL); poremedaje sa epileptičnim napadima povezane sa SCN1A i SCN1B; poremedaje povezane sa polimerazom G koji uključuju Alpers-Hutenloherov sindrom, senzornu ataksičnu neuropatsku disartriju i oftalmoparezu povezanu sa POLG i dalje autozomno-dominantnu i recesivno-progresivnu eksternu oftalmoplegiju sa delecijama mitohondrijalne DNK; X-vezanu adrenalnu hipoplaziju; X-vezanu agamaglobulinemiju; i Vilsonovu bolest. U jednom primeru primene, nukleinske kiseline, a posebno iRNK, predmetnog pronalaska mogu kodirati funkcionalne proteine ili enzime. Na primer, kompozicije predmetnog pronalaska mogu sadržavati iRNK koja kodira eritropoetin, α1-antitripsin, karboksipeptidazu N ili humani hormona rasta.
[0073] Alternativno, nukleinske kiseline mogu kodirati antitela pune dužine ili manja antitela (npr. i teški i lake lance) da bi se obezbedio imunitet subjektu. Dok se jedan primer primene predmetnog pronalaska odnosi na kompozicije korisne za obezbeđivanje imuniteta subjekta (npr. putem translacije iRNK nukleinskih kiselina koji kodiraju funkcionalna antitela), pronalasci koji su ovde predviđeni i time razmatrani su široko primenljivi. U alternativnom primeru primene, kompozicije predmetnog pronalaska kodiraju antitela koja mogu biti upotrebljena za prolazan ili hroničan efekat na funcionalni odgovor kod subjekta. Na primer, iRNK nukleinske kiseline predmetnog pronalaska mogu kodirati funkcionalno monoklonsko ili poliklonsko antitelo koje nakon translacije (a po potrebi i sistemskog izlučivanja iz ciljnih delija) može biti korisno za ciljno vezivanje za i/ili inaktivaciju biološke mete (npr. stimulatorni citokin poput faktora nekroze tumora). Slično tome, iRNK nukleinske kiseline predmetnog pronalaska mogu kodirati, na primer, funkcionalna antitela za nefritički faktor koja su korisna za lečenje membranoproliferativnog glomerulonefritisa tipa II ili akutnog hemolitičkog uremičnog sindroma ili iste alternativno mogu kodirati antitela za vaskularni endotelni faktor rasta (VEGF) koja su od koristi za lečenje oboljenja koja su povezana sa VEGF-om, poput kancera.
[0074] Kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti primenjene subjektu. U pojedinim primerima primene, kompozicija je formulisana tako daj je u kombinaciji sa jednim ili sa više dodatnih nukleinskih kiselina, nosača, ciljnih liganada ili stabilizujudih reagensa, ili je pak u vidu farmakološke kompozicije u kojoj su prisutne smeše sa odgovarajudim ekscipijensima. Na primer, u jednom primeru primene, kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti pripremljene tako da dopremaju iRNK koje kodiraju dva ili više različitih proteina ili enzima. Alternativno, kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti pripremljene tako da dopremaju jednu nukleinsku kiselinu, a dve ili više populacija ovakvih kompozicija može biti iskombinovano u pojedinačnom doznom obliku ili primenjeno zajedno subjektu. Tehnike formulisanja i primene lekova se mogu nadi u publikaciji "Remington’s Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Co., Easton, Pa., najnovije izdanje.
[0075] Kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti primenjene i dozirane u skladu sa trenutnom medicinskom praksom, uzimajudi u obzir kliničko stanje subjekta, mesto i način primene, kao i raspored primene, starost, pol, telesnu težinu subjekta i drugih faktora koji su relevantni za prosečno iskusne kliničare. U kontekstu pronalaska, "efikasna količina" može biti utvrđena relevantnim razmatranjima koja su poznata iskusnim stučnjacima iz oblasti eksperimentalnih kliničkih istraživanja, farmakološke, kliničke i medicinske oblasti. U pojedinim primerima primene, primenjena količina je efikasna za postizanje barem neke stabilizacije, poboljšanja ili eliminacije simptoma i drugih indikatora koji su izabrani kao odgovarajudi parametri progresije, regresije ili poboljšanja oboljenja od strane iskusnih stučnjaka. Na primer, pogodna količina i režim doziranja su oni koji dovode do barem prolazne ekspresije nukleinske kiseline u ciljnoj deliji.
[0076] U jednom primeru primene, kompozicije predmetnog pronalaska su formulisane tako da budu pogodne za produženo oslobađanje nukleinskih kiselina koje sadrže. Navedene kompozicije sa produženim oslobađanjem mogu biti pogodne za primenu subjektu u produženim dozirnim intervalima. Na primer, u jednom primeru primene, kompozicije predmetnog pronalaska se primenjuju subjektu dva puta dnevno, svakog dana ili svakog drugog dana. U prioritetnom primeru primene, kompozicije predmetnog pronalaska se primenjuju subjektu dva puta nedeljno, jednom nedeljno, svakih deset dana, svake dve nedelje, svake tri nedelje, ili prioritetnije svake četiri nedelje, jednom mesečno, svake šeste nedelje, svake osme nedelje, svakog drugog meseca, svaka tri meseca, svaka četiri meseca, svakih šest meseci, svakih osam meseci, svakih devet meseci ili godišnje. Prioritento, upotrebljeni načini produženog oslobađanja se kombinuju sa modifikacijama kojima se nukleinskoj kiselini poboljšava stabilnost.
[0077] Dok su određene kompozicije predmetnog pronalaska opisane sa specifičnostima u skladu sa određenim primerima primene, primeri koji slede služe samo za ilustraciju kompozicija predmetnog pronalaska i nisu namenjeni da iste ograniče.
[0078] Termin "jedan" koji se ovde koristi, u specifikaciji i patentnim zahtevima, treba shvatiti tako da podrzumeva množinu pojma, osim ukoliko nije jasno naznačeno suprotno. Opisi koji sadrže "ili" između jednog ili više članova grupe se smatraju zadovoljavajudim ukoliko su jedan, više od jednog ili svi članovi grupe prisutni u, iskoriščeni za, ili na drugi način relevantni za dati proizvod ili process, osim ukoliko nije naznačeno suprotno ili se to drugačije podrazumeva na osnovu konteksta.
Ukoliko su elementi predstavljeni u vidu liste, (npr. kao Markušijeva grupa ili sličan format) podrazumeva se da je svaka podgrupa elemenata takođe predviđena, kao i da bilo koji element(i) može/mogu biti uklonjen(i) iz grupe. Podrazumeva se takođe da, u principu, kada se pronalazak, ili aspekti pronalaska, definišu tako da podrazumevaju određene elemente, osobine itd., određeni primeri primene pronalaska ili aspekti pronalaska podrazumevaju, ili suštinski podrazumevaju, navedene elemenate, navedene osobine itd. U svrhu jednostavnosti, ovde navedeni primeri primene nisu navedeni u baš svakom slučaju sa mnogo reči.
PRIMERI
Primer 1
Opšta priprema nosača transfera tehnikom razblaživanja rastvarača
[0079] Navedeni primer u principu ilustruje proces proizvodnje malih (<100 nm) lipozomalnih formulacija koje sadrže iRNK, kao i načina procene količine inkapsulirane iRNK. Parametri koji mogu biti modifikovani zarad dalje optimizacije efikasnosti transfekcije obuhvataju, ali nisu ograničeni na, izbor lipida, odnos lipida, molarni odnos lipida koji sadrži PEG, dužinu domena za usidravanje lipida koji sadrži PEG i dimenzioniranje lipozomalnih nosača za prenos.
[0080] Odgovarajude količine lipida (npr. DSPC/CHOL/DODAP/C8-PEG2000-Cer) za konstrukciju nosača za prenos sa željenim odnosom lipida (npr. molarni odnos 31:40:25:4) su izmerene i rastvorene u apsolutnom etanolu na 70°C da bi se dobili željeni odnosi lipida i koncentracije. Da bi se sinteza lipida pratila, u lipidni rastvor je rutinski dodata mala količina (obično 0,05 mol%) rodamindioleoilfosfatidiletanolamina (Rh-PE).
[0081] iRNK, na primer, koja kodira GFP, OTC ili luciferazu je denaturisana grejanjem na 70°C tokom 10 minuta, nakon čega je sledilo hlađenje na ledu. Navedeni rastvor je analiziran da bi se potvrdila koncentracija iRNK pre formulisanja. Alikvot iRNK je razblažen vodom, a zatim pomešan sa jednakom zapreminom 10 mM citratnog pufera, pH 5,0, tako da finalna koncentracija citrata nakon dodavanja lipida (iz rastvarača) iznosi 4 mM.
[0082] Rastvori iRNK/citratnog pufera su zatim zagrejani do 90°C tokom 5 minuta da bi se potpuno denaturisala iRNK. Prilikom mešanja ili vorteksovanja denaturisane iRNK, u iRNK je dodat rastvor lipida u etanolu (na 70°C) da bi se obrazovale višeslojne vezikule (MLV). MLV su potom, pre ekstruzije, ohlađene do 70°C. Za uzorke pripremljene u visokim koncentracijama rastvarača (> 20%), MLV su pre ekstruzije razblažene sa 5 mM citratnim puferom pH 5,0 (na 70°C) da bi se dobila koncentracija rastvarača od 20% za generisanje jednoslojnih vezikula (LUY).
[0083] MLV su ekstrudirane na 70°C propuštanjem kroz 3 naslagana polikarbonatna filtera (80 nm), upotrebom ekstrudera sa termoskupljajudim materijalom. Rutinski je sprovođeno pet prolazaka kroz filtere da bi se proizvele velike jednoslone vezikule (LUV) željenog raspona veličina. Nakon ekstruzije, formulacije su profiltrirane kroz filter za špric sa veličinom pora od 0.2μm da bi se uklonila mala količina čestičnih materijala koji su imali tendenciju da ometaju određivanje veličine vezikula.
[0084] iRNK koja nije bila vezana za lipozome ili je bila vezana za spoljnu površinu lipozoma koji su sadržavali DODAP je uklonjena anjonskom izmenom tako da se sva preostala vezana iRNK inkapsulirala u lipozome. Dva pogodna postupka uključuju upotrebu anjonske izmene upotrebom Acrodisc jedinica sa MUSTANG Q membranama (Pall Life Sciences) ili anjonsku izmenu upotrebom DEAE-SEPHACEL kolona (Sigma-Aldrich, suspenzija u 20% etanolu). Navedene tehnike su omogudile efikasno uklanjanje neinkapsulirane iRNK bez značajnog razblaživanja formulacija.
[0085] Nakon uklanjanja spoljašnje iRNK, pufer je mogao biti izmenjen upotrebom PD-10 filtracionih kolona sa gelom (SEPHADEX G-25, GE Healthcare) upotrebom protokola sa centrifugiranjem koji omogudava zadržavanje sastojaka male molekulske mase iz formulacije lipozoma (poput rastvarača i borata) u gelu, kao i zamenu ekvilbracionim puferom bez značajnog razblaženja uzorka. Alternativno, u pojedinim eksperimentima, rastvarač može biti uklonjen upotrebom Spectrum 500,000 MWCO dijafiltracionog kertridža. Uzorci su ultrafiltrirani do 2-10 mL, a zatim su dijafiltrirani upotrebom 10 volumena željenog finalnog pufera za ispiranje da bi se uklonio rastvarač i izmenio pufer. Uzorak je ponekad dalje koncentrovan ultrafiltracijom, a nakon procesa dijafiltracije.
[0086] Da bi se kvantifikovala iRNK u uzorcima sa niskim odnosom lipid:iRNK, pripremljena je standarna kriva razblaživanjem osnovnog koncentrovanog rastvora vodom, a da bi se dobili standardi u rasponu od 0-200μg/mL. Uzorci su razblaživani (na osnovu očekivanih koncentracija iRNK) sa odgovarajudim puferom kako bi se obezbedile koncentracije iRNK unutar opsega standardnih koncentracija. Po 180μL alikvota svih standarda ili uzoraka je pomešano sa 300μL 5% SDS-a i 120μL etanola. Uzorci su inkubirani 10 minuta na 50°C da bi se rastvorio lipid. Nakon hlađenja, uzorci su u duplikatu (alikvoti od po 250μL) razliveni u bunaride UV-transparentne mikrotitar ploče. Izmerena je apsorbanca na 260nm, a koncentracija iRNK u uzorcima je izračunata iz standardne krive. U uzorcima u kojima je odnos lipid:iRNK (težina:težina) iznosio 10:1 (ciljni odnos) ili manje, interferencija lipida sa apsorbancom na 260 nm je bila relativno niska i mogla se zanemariti.
[0087] U uzorcima u kojima je odnos lipid:iRNK (težina:težina) bio vedi od 10:1, interferencija lipida je postajala značajnija kako se količina lipida povedavala i stoga je bilo potrebno ukloniti lipid da bi se precizno kvantifikovao sadržaj iRNK. Standardna kriva iRNK je pripremljena razblaživanjem osnovnog koncentrovanog rastvora sa vodom da bi se obezbedili standardi u opsegu od 0-250μg/mL. Uzorci koji je bilo potrebno ispitati su razblaženi (na osnovu očekivanih koncentracija iRNK) sa odgovarajudim puferom da bi se proizvele koncentracije iRNK unutar opsega standardnih koncentracija. Po 180 μL svakog standarda ili uzoraka je pomešano sa 20 μL 0,1 M natrijum borata (da bi se povedao pH, čime je neutralisano naelektrisanje DODAP-a u uzorcima lipozoma što rezultuje disocijacijom iRNK sa DODAP-a). U svaki standard ili uzorak je zatim dodato 600 μL smeše hloroform:metanol (1:2, v:v), pa su uzorci vorteksovani. Uz vorteksovanje je dalje dodato 200 μL hloroforma, a zatim i 200 μL vode. Uzorci su snažno vorteksovani i zatim centrifugirani 2 minuta na 1000xg da bi se razdvojile faze. Po 250 μL alikvota gornje (vodene) faze je razliveno (u duplikatu) u bunare UV-transparentne mikrotitar ploče i izmerena je apsorbanca na 260 nm. Koncentracija iRNK u uzorcima je izračunata iz standardne krive. Treba obratiti pažnu da za lipozomske uzorke koji su sadržavali DOTAP (ili bilo koji drugi katjonski lipid koji se ne može neutralisati inkubacijom na visokom pH), navedeni test nije bio pogodan za određivanje koncentracije iRNK obzirom da se iRNK ne može odvojiti od DOTAP-a, a proporcija iRNK ima tendenciju ekstrakcije u rastvarač (CHCl3) faze zajedno sa lipidom.
[0088] Inkapsulacija iRNK je određena razdvajanjem uzoraka na DEAE-SEPHACEL koloni (sa anjon izmenjivačkim gelom) na slededi način. Upotrebom staklenih Pasterovih pipeta zapremine 2mL koje su bile zapušene staklenom vunom, na DEAE-SEPHACEL kolone je naneto 5 zapremina (~10 mL) 145 mM natrijum hlorida-10 mM boratnog pufera pH 8,0 čime je kolona ekvilibrisana. Zatim je na kolone nanošeno 0,5 mL uzorna, pa je prikupljen eluat. Kolona je dalje isprana nanošenjem 7 alikvota od po 0,5 mL 145 mM natrijum hlorida-10 mM boratnog pufera pH 8,0 i posebno je prikupljana svaka eluirana frakcija. Početni uzorak i svaki alikvot su ispitani na iRNK i lipid kao što je prethodno opisano. Izračunat je % inkapsulacije kao 100 x (iRNK/lipid) materijala koji je eluiran sa kolone/ (iRNK/lipid) početnog uzorka). Na osnovu izračunate koncentracije iRNK iz ekstrakcione analize koja je prethodno opisana, uzorci lipozomalnih iRNK su razblaženi do željene koncentracije iRNK (1 μg) u ukupnoj zapremini od 5 μL (tj.0,2 mg/mL).
Primer 2
Priprema DSPC/CHOL/DODAP/C8-PEG-2000 ceramida (molarni odnos 31:40:25:4)/iRNK Renilla luciferaze (Formulacija 1)
[0089] Formulacija 1 je pripremljena rastvaranjem odgovarajudih masa DSPC, CHOL, DODAP i C8-PEG-2000 ceramida u apsolutnom etanolu, a zatim dodavanjem navedenog rastvora u rastvor iRNK Renilla luciferaze u puferu da bi se produkovale MLV sa 10,8 mg/mL lipida, 250 μg/mL iRNK, 20% rastvarača. MLV su ekstrudirane da bi se dobile LUV, a zatim su LUV propuštene kroz filter sa porama veličine 0,2 μm. Vrednost pH je povedana kombinovanjem jednake zapremine 100 mM NaCl-50 mM borata pH 8,0, pa je iRNK sa spoljašnjosti uklonjena anjonskom izmenom, upotrebom postupka sa DEAE-Sephacel kolonama i centrifugiranjem koji je opisan u Primeru 1. Rastvarač je uklonjen, spoljašni pufer je zamenjen i uzorak je koncentrovan dijafiltracijom/ultrafiltracijom. Koncentrovani uzorak je zatim propušten kroz filter sa porama veličine 0,2 μm, pa su alikvoti razliveni u bočice i čuvani na 2-8°C
Primer 3
Priprema DSPC/CHOL/DOTAP/C8-PEG-2000 ceramida (molarni odnos 31:40:25:4)/iRNK Renilla luciferaze (Formulacija 2)
[0090] Formulacija 2 je pripremljena upotrebom slične metodologije kao za Formulaciju 1 sa manjim izmenama. Ukratko, odgovarajude mase DSPC, CHOL, DOTAP i C8-PEG-2000 ceramida su rastvorene u apsolutnom etanolu i zatim dodate u rastvor iRNK Renilla luciferaze u puferu da bi se produkovale MLV sa 10,8 mg/mL lipida, 250 μg/mL iRNK, 20% rastvarača. MLV su ekstrudirane da bi se dobile LUV. Pošto je u navedenoj formulaciji upotrebljen DOTAP, iRNK sa spoljašnjosti nije mogla biti efikasno uklonjena anjonskim izmenom i stoga je navedeni korak izostavljen. Rastvarač je uklonjen, spoljašnji pufer je zamenjen i uzorak je koncentrovan dijafiltracijom/ultrafiltracijom. Koncentrovani uzorak je dalje propušten kroz filter sa porama veličine 0,2 μm, pa su alikvoti razliveni u bočice i čuvani na 2-8°C.
Primer 4
Priprema DSPC/CHOL/DODAP/C8-PEG-2000 ceramida (molarni odnos 31:40:25:4)liRNK luciferaze svica (Formulacija 3)
[0091] Za pripremu formulacija 3, odgovarajude mase DSPC, CHOL, DODAP i C8-PEG-2000 ceramida su rastvorene u apsolutnom etanolu, a zatim dodate u rastvor iRNK luciferaze svica u puferu da bi se produkovale MLV sa 10,8 mg/mL lipida, 250 μg/mL iRNK, 20% rastvarača. MLV su ekstrudirane da bi proizvele LUV, a zatim su propuštene kroz filter sa porama veličine 0,2 μm. Vrednost pH je povedana kombinovanjem sa 0,1 volumenom 0,1 M natrijum borata, pa je iRNK uklonjena sa spoljašnosti anjonskom izmenom, upotrebom postupka sa DEAE-Sephacel kolonama, kao što je opisano u Primeru 1. Rastvarač je uklonjen, zamenjen je spoljašni pufer i uzorak je koncentrovan dijafiltracijom/ultrafiltracijom. Koncentrovani uzorak je potom propušten kroz filter sa porama veličine 0,2 μm, pa su alikvoti razliveni u bočice i čuvani na 2-8°C.
Primer 5
Priprema DSPC/CHOL/DODAP/C8-PEG-2000 ceramida (molarni odnos 31:40:2:4)/iRNK OTC miša (Formulacija 4)
[0092] Formulacija 4 je pripremljena rastvaranjem odgovarajude mase DSPC, CHOL, DODAP i C8-PEG-2000 ceramida u apsolutnom etanolu, a zatim dodavanjem rastvora u rastvor iRNK OTC miša u puferu da bi se produkovale MLV sa 10,8 mg/mL lipida, 250 μg/mL iRNK, 20% rastvarača. MLV su ekstrudirane da bi dobile LUV, a zatim su iste propuštene kroz filter sa porama veličine 0,2 μm. Vrednost pH je povedana kombinovanjem sa 0,1 volumenom 0,1 M natrijum borata, pa je iRNK uklonjena sa spoljašnjosti anjonskom izmenom, upotrebom postupka sa DEAE-Sephacel kolonama, kao što je opisano u Primeru 1. Rastvarač je uklonjen, zamenjen je spoljašni pufer i uzorak je koncentrovan dijafiltracijom/ultrafiltracijom. Koncentrovani uzorak je zatim propušten kroz filter sa porama veličine 0,2 μm, pa su alikvoti razliveni u bočice i čuvani na 2-8°C.
Primer 6
Priprema i karakterizacija imidiazolnog lipidnog estra holesterola (3S, 10R, 13R, 17R)-10,13-dimetil-17-((R)-6-metilheptan-2-il)-2, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17-tetradekahidro-1H-ciklopenta[a]fenantren-3-il 3-(1H-imidazol-4-il) propanoat; Imidazolski estar holesterola (ICE)
[0093] Nacrt 1 prikazuje reakcionu šemu za sintezu ICE. Smeša tritil-deamino-histidina (1), (1,97g; 5,15 mmol), holesterola (2), (1,97 g; 5,1 mmol), dicikloheksilkarbodiimida (DCC), (2,12g; 5,2 mmol) i dimetilaminopiridina (DMAP), (0,13g; 1,0 mmol) u anhidrovanom benzenu (100 ml) je mešana na sobnoj temperaturi tokom dva dana. Dobijena suspenzija je profiltrirana kroz Celit, pa je filtrat uklonjen pod sniženim pritiskom. Dobijena pena je osušena pod visokim vakuumom preko nodi da bi se obezbedio sirovi estar (3) koji je upotrebljen u slededem koraku bez prečišdavanja.
[0094] Sirovi ester (3) je rastvoren u anhidrovanom dihlormetanu (DCM), (200ml), pa je na sobnoj temperaturi dodata trifluorosirdetna kiselina (TFA), (50 ml). Dobijeni rastvor je zatim mešan na sobnoj temperaturi tokom 4 sata. Dalje je pažljivo dodat zasiden vodeni rastvor NaHCO3(250ml), nakon čega je dodat i čvrst Na2CO3dok rastvor nije postao blago bazan.
[0095] Faze su razdvojene i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (200 ml). Organske faze su isprane koncentrovanim slanim rastvorom (200 ml), osušene (Na2SO4) i profiltrirane. Dobijeni filtrat je uparen, a ostatak je osušen pod visokim vakuumom preko nodi. Prečišdavanje fleš hromatografijom (silika gel, 0-10% metanolin hloroform) je obezbedilo čist željeni proizvod (4) (1,07g; prinos 37% u dva koraka) u vidu bele čvrste supstance (tt: 192-194°C).
<1>H NMR (CDCI3): δ 0,66 (s, 3H), 0,84-1,64 (m, 33H), 1,76-2,05 (m, 5H), 2,29 (d, 2H), 2,63 (t, 2H), 2,90 (t, 2H), 4,61 (m, 1H), 5,36 (d, 1H), 6,80 (s, 1H), 7,53 (s, 1H).<13>C NMR (CDCI3): δ 11,9; 18,8; 19,4; 21,1; 21,6; 22,6; 22,9; 23,9; 24,4; 27,8; 28,1; 28,3; 31,9; 34,5; 35,9; 36,3; 36,7; 37,0; 38,2; 39,6; 39,8; 42,4; 50,1; 56,2; 56,8; 74,1; 122,8; 134,7; 139,6; 173,4. APCI(<+>)-MS (m/z): izrač. 509, utvrđeno 509. Elem. Anal. (C,H,N): izrač.77,90; 10,30, 5,51; utvrđeno 77,65; 10,37; 5,55.
Primer 7
Protokol formulisanja
[0096] Informaciona RNK luciferaze svica sa optimizovanim kodonima, predstavljena kao SEQ ID NO: 1 (FFL iRNK), je sintetisana in vitro transkripcijom sa plazmidne DNK matrice koja kodira gen, nakon čega je sledilo dodavanje strukture Cap1 na 5’ kraj i poli(A) repa dužine od približno 200 nukleotida na 3' kraj, što je određeno elektroforezom na gelu. (Pogledati, na primer, Fechter P. i saradnici, J. Gen. Virology, 86, 1239-1249 (2005).)
5’ i 3' netranslatirajudi regioni prisutni u iRNK FFL proizvodu su podvučeni (SEQ ID NO: 1).
[0097] Nosači za transfer tipa nanopartikula su sintetisani upotrebom standardnih postupaka ubrizgavanja etanola. (Pogledati, na primer, Ponsa M. i saradnici, Int. J. Pharm. 95, 51-56 (1993).) Osnovni koncentrovani rastvor lipida u etanolu je prethodno pripremljen (koncentracija 50 mg/mL) i čuvan na -20°C.
FFL iRNK je čuvana u vodi sa finalnom koncentracijom od lmg/mL na -80°C, do vremena upotrebe.
[0098] Sve koncentracije iRNK su određene upotrebom Ribogreen testa (Invitrogen). Inkapsulirana iRNK je izračunata upotrebom Ribogreen testa u prisustvu i u odsustvu 0,1% Triton-X 100. Dimenzije čestica (dinamično rasejavanje svetlosti (DLS)) i zeta potencijali su određeni upotrebom Malvern Zetasizer instrumenata u 1xPBS puferu i ImM KCl rastvoru, tim redom.
[0099] Alikvoti rastvora imidazolnog lipidnog estra holesterola (ICE), DOPE i DMG-PEG-2000 u etanolu, koncentracija 50mg/mL, su pomešani i razblaženi etanolom do finalne zapremine od 3mL. Molarni odnos pripremljenog ICE:DOPE:DMG-PEG-2000 nosača za prenos je iznosio 70:25:5. Posebno je od osnovnog koncentrovanog rastvora (lmg/ml) pripremljen vodeni rastvor (10mM citrat/150mM NaCl, pH 4,5) FFL iRNK u puferu. Lipidni rastvor je brzo injeciran u vodeni rastvor iRNK i smeša je treskana da bi se dobila finalna suspenzija u 20% etanolu. Nastala suspenzija nanopartikula je profiltrirana, dijafiltrirana sa 1xPBS puferom (pH 7,4), koncentrovana i čuvana na 2-8°C. Finalna koncentracija je bila jednaka 1,73 mg/mL CO-FF iRNK (inkapsulirane), Zavebio je jednak 68,0nm (sa Dv(50)od 41,8nm i Dv(90)od 78,0 nm), dok je Zeta potencijal bio jednak 25,7 mV.
Analiza biodistribucije
[0100] Sve studije su urađene upotrebom ženki CD-1 miševa starih približno 3 nedelje na početku svakog eksperimenta. Uzorci su uvedeni jednom bolus injekcijom koja je bila ekvivalentna ukupnoj dozi od 200 μg inkapsulirane FFL iRNK, u repnu venu. Četiri sata nakon injekcije miševi su žrtvovani i perfundovani fiziološkim rastvorom.
[0101] Jetra i slezina svakog miša su prikupljeni, podeljeni na tri dela i sačuvani na jedan od slededih načina (i) potapanjem u 10% neutralno puferisanog formalina, (ii) trenutnim zamrzavanjem i čuvanjem na -80°C za analizu bioluminiscencije (pogledati ispod) ili za studije in situ hibridizacije ili (iii) zarad pripreme preseka, jetra je najpre potopljena u kupatilo izopentana (2-metilbutana), održavano na -35°C, pa je ispirana sa 1xPBS puferom, lagano obrisana specijalnim upijajudim materijalom (kimwipe) da bi se uklonio sav višak tečnosti i stavljena u kupatilo približno 5 -7 minuta, nakon čega je jetra izvađena, umotana u foliju i čuvana u maloj sterilnoj plastičnoj kesi na -80°C dok sve nije bilo spremno za analizu.
[0102] Analiza bioluminiscencije je urađena upotrebom luciferaznog test sistema firme Promega (artikal # E1500 Promega). Priprema tkiva je izvedena na slededi način: delovi željenog uzorka tkiva (trenutno zamrznutog) su odleđeni, isprani RODI vodom i prebačeni u epruvetu za homogenizaciju sa keramičkim zrncima. Tkivo je tretirano puferom za liziranje i homogenizovano. Nakon podvrgavanja naizmeničnom zaržavanju/odmrzavanju i potom centrifugiranju na 4°C (5 ciklusa), supernatant je prebačen u nove epruvete za mikrocentrifugu. Ponoviti i ekstrakte tkiva čuvati na -80°C.
[0103] Reagensi luciferaznog testa su pripremljeni dodavanjem 10mL pufera iz testa za luciferazu u supstrat testa za luciferazu i zatim mešanjem na vorteksu. Po 20uL homogenata uzoraka je razliveno u mikrotitar ploču sa 96 bunarida nakon čega je dodato po 20μL kontrole u svaki uzorak. Posebno je razliveno po 120μL reagensa luciferaznoog testa (pripremljenog kao što je prethodno opisano) u svaki bunarid mikrotitar ploče sa 96 mesta sa ravnim dnom. Svaka mikrotitar ploča je ubačena u odgovarajudu komoru Molecular Device Flex Station instrumenta i izmerena je luminescenca (u relativnim jedinicama svetlosti (RLU)).
In situ hibridizacija
Priprema preseka tkiva
[0104] Priprema i analiza preseka je urađena na slededi način: svaka jetra je zamrznuta na -35°C u skladu sa procedurom koja je prethodno opisana. Zamrznute jetre su isečene na preseke debljine 6 mikrometara koji su zatim postavljeni na staklene mikroskopske pločice. Pre in situ hibridizacije, preseci su fiksirani u 4% formaldehidu u fosfatom puferisanom fiziološkom rastvoru (PBS), nakon čega su preseci tretirani smešom anhidrida trientanolamina i sirdetne kiseline, isprani i dehidratisani provlačenjem kroz seriju rastvora etanola.
Priprema cRNK probe
[0105] DNK matrice su dizajnirane tako da se sastoje od pBSKII+ vektora koji sadrži EcoRI i XbaI restrikciona mesta za dobijanje “antisens” i “sens” lanaca, tim redom. cRNK transkripti su sintetisani na osnovu navedenih DNK matrica (“antisens” i “sens” strane, svaki dužine 700bp) upotrebom T3 i T7 RNK polimeraza, tim redom. Matrice su validirane sintezom RNK probe na hladnom pre pripreme riboproba sa<35>S-UTP. Radioaktivno obeležene i “antisens” i “sens” probe su sintetisane in vitro, pradenjem protokola proizvođača (Ambion) i obeležavanjem sa 35S-UTP (>1,000Ci/mmol).
Hibridizacija i procedura ispiranja
[0106] Preseci su hibridizovani preko nodi na 55°C u dejonizovanom formamidu, 0,3 M NaCI, 20 mM Tris-HCl (pH 7,4), 5 mM EDTA, 10 mM Na2HPO4, 10% dektran sulfatu, 1X Denhardovom reagensu, sa 50μg/mL ukupne RNK kvasca i 50-80,000 cpm/μL cRNK probe obeležene sa 35S. Tkiva su podvrgnuta jakom ispiranju na 65°C sa 50% formamidom, 2X SSC, 10 mM DTT i dalje ispiranju sa PBS puferom pre tretmana sa 20 μg/ml RNKaze A na 37°C tokom 30 minuta. Nakon pranja u 2X SSC i 0,1X SSC tokom 10 minuta na 37°C, preseci su dehidratisani i izloženi rendgenskom filmu Kodak BioMaxMR tokom 90 minuta, a potom i emulzionoj autoradiografiji sa vremenom ekspozicije od 11 i 24 sata.
Slikanje preseka jetre
[0107] Razvijanje fotografija je urađeno upotrebom Kodak D-19 aparata. Preseci su blago obojeni krezil-ljubičastom kontrastnom bojom i analizirani upotrebom svetlosne i mikroskopije tamnog polja. “Sens” (kontrolne) riboprobe su upotrebljene za utvrđivanje nivoa signala pozadine.
Rezultati in vivo bioluminiscencije
[0108] Životinje su intravenozno injecirane jednom dozom od 200 μg inkapsulirane iRNK i žrtvovane nakon četiri sata. Aktivnost eksprimiranog luciferaznog proteina svica u jetri i slezini je određena bioluminiscentnim testom. Kao što je prikazano na Slici 2, u svakoj ispitivanoj životinji je uočen detektabilan signal koji je bio iznad bazalne vrednosti. Prisustvo luminescentnog signala intenzivnijeg od signala pozadine je ukazalo na ekspresiju luciferaznog proteina svica sa egzogene iRNK. Luminescenca primedena u jetri je bila povedana u odnosu na slične signale koji su uočeni u slezini.
Rezultati in situ hibridizacije
[0109] Studije in situ hibridizacije su urađene na jetri uzetoj iz dve različite životinje iz grupe miševa koji su bili tretirani upotrebom ICE:DOPE:DMG-PEG-2000 nosača transfera (pripremljenog kao što je prethodno opisano), kao i na jednoj kontrolnoj jetri iz grupe netretiranih miševa. Autoradiografski rendgenski filmovi su iskorišdeni za detekciju kodon optimizovane iRNK luciferaze svica, upotrebom probe obeležene sa<35>S-U. (Pogledati, Wilcox J.N., J. Histochem. Cytochem. 41, 1725-1733 (1993)). Nacrt 3 prikazuje i mikroskopiju na svetlosnom (kontrastno bojenje krezil-ljubičastim) i na mikroskopu tamnog polja za jetre kontrolnih i tretiranih miševa pod malim uvedanjem (2X). iRNK CO-FF luciferaze je detektovana u jetrama obe tretirane grupe (BI i B2, tanke strelice), ali ne i u kontrolnoj jetri (Ct) kada je upotrebljena “antisens” riboproba (Nacrt 38). Visok nivo obeležavanja iRNK je uočen u marginalnoj traci tkiva jetre (velika strelica). Signal nije bio detektovan ni u jednoj od jetri nakon primene kontrolne (“sens”) riboprobe (Nacrt 3C).
[0110] Mikroskopijom tamnog polja u jetrama injeciranih životinja je detektovana obeležena FFL iRNK u vidu svetlih tačaka (uvedanje 100X) nastalih hibridizacijom “antisens” probe za FFL iRNK (Nacrt 4A), dok je istu jetru karakterisalo prisustvo svega nekoliko svetlih tačaka kada je za hibridizaciju upotrebljen “sens” lanac kao proba (Nacrt 4C). Kontrolnu jetru, uzetu iz životinje koja injeciranjem nije primila bilo koju od nanočestica, nije karakterisao nikakav značajan signal pod mikroskopom tamnog polja kada je za hibridizaciju upotrebljena bilo “antisens” (Nacrt 4E) ili “sens” proba (Nacrt 4G).
Primer 8
Rezultati imunohistohemijske analize
[0111] FFL iRNK je upakovana i isporučena upotrebom formulacije lipidnog nosača za prenos koja se sastojala od holesterola, DOPE, DLinDMA i DMG-PEG2000, na način sličan načinu koji je prethodno opisan.
[0112] Translacija FFL iRNK u njen odgovarajudi protein je uspešno identifikovana upotrebom imunohistohemijske analize (Nacrt 5). Upotrebom antitela na protein svica, mogla se uočiti ekspresija proteina svica u hepatocitima tretiranih miševa (Nacrti 5B i 5C). Analiza kontrolnih miševa tretiranih sa 1xPBS puferom nije pokazala nikakav detektabilni nivo proteina svica (Nacrt 5A).
Diskusija
[0113] Sintetska informaciona RNK, inkapsulirana u materijalima na bazi lipida, može biti upotrebljena za dopremanje i ekspresiju gena in vivo u jetri, uključujudi ekspresiju u heptocitima. Smeše katjonskih, nekatjonskih i lipida modifikovanih sa PEG su upotrebljene za ekspresiju reporterskog proteinskog molekula. Katjonski lipid na bazi imidazola, ICE, je doveo do obogadene isporuke iRNK u jetri u odnosu na slezinu in vivo. Uočavanje bioluminescentnog signala je ukazalo na translaciju proteinskog reporterskog molekula sa egzogene iRNK koja je dopremljena u lipidnoj nanopartikuli in vivo. Studije in situ hibridizacije su demonstrirale direktnu detekciju egzogene iRNK upotrebom obeležavanja sa<35>S-U riboprobom. Emulziona autoradiografija je proizvela signal koji je mogao biti upotrebljen za lokalizaciju iRNK u tkivu jetre i precizniju lokalizaciju u hepatocitima koji su bili obeleženi u jetri tretiranih životinja (pogledati Nacrti 3 i 4). FFL iRNK nije detektovana u jetri netretiranih kontrolnih miševa.
[0114] Uspešna isporuka navedene iRNK u jetru, a posebno u hepatocite, podržava zaključak da se formulacije i kompozicije predmetnog pronalaska mogu upotrebljavati za lečenje i korekciju urođenih grešaka u metabolizmu koje su lokalizovane u jetri. Na primer, oboljenja kao što su ASD, ARO, CPS, ASS1 i OTC deficijencije, kao i drugi poremedaji, se mogu lečiti putem genske terapije tipa zamene iRNK za gene koji nedostaju ili nepravilno funkcionišu. Metabolička zonacija ciklusa uree u hepatocitima podrazumeva da se može očekivati da zamena aktivnosti enzima koji nedostaje u navedenim delijama znatno poboljša normalnu biohemijsku obradu kod osoba sa deficijencijom enzima, a posebno kod osoba sa poremedajem ciklusa uree.
LISTA SEKVENCI
[0115]

Claims (20)

Patentni zahtevi
1. Farmaceutska kompozicija za upotrebu u postupku lečenja bolesti kod subjekta koja je rezultat deficijencije proteina, farmaceutska kompozicija koja sadrži:
nosač transfera i najmanje jedan iRNK molekul koji kodira navedeni protein,
nosač tranfera koji sadrži jedan ili više katjonskih lipida, jedan ili više nekatjonskih lipida i jedan ili više lipida modifikovanih sa PEG, pri čemu je nosač tranfera lipozom, a veličina nosača tranfera je manja od 100 nm,
i pri čemu se farmaceutska kompozicija preferencijalno distribuira u delije jetre nakon primene subjektu, a kodirani protein se eksprimira u delijama jetre subjekta.
2. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, gde su jedan ili više katjonskih lipida izabrani iz grupe koju čine ICE, DOTMA, DC-Chol, DOGS, DOSPA, DODAP, DOTAP, DSDMA, DODMA, DLinDMA, DLenDMA, DODAC, DDAB, DMRIE, CLinDMA, CplindDMA, DMOBA, DOcarbDAP, DLindDAP, DLincarbDAP, DLinCDAP, Dlin-K-DMA i/ili Dlin-K-XTC2-DMA.
3. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde su jedan ili više nekatjonskih lipida izabrani iz grupe koju čine DSPC, DOPC, DOPG, DPPC, DPPG, DOPE, POPC, POPE, DOPE-mal, DPPE, DMPE, DSPE ili SOPE.
4. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde nosač transfera sadrži jedan ili više katjonskih lipida na bazi holesterola.
5. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde lipid modifikovan sa PEG predstavlja lipid modifikovan sa PEG koji sadrži PEG lanac dužine do 5 kDa kovalentno vezan za lipid sa alkilnim lancem/lancima dužine C6-C20, fosfolipid modifikovan sa PEG ili ceramid modifikovan sa PEG.
6. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde molarni odnos za jedan ili više lipida modifikovanih sa PEG iznosi između 0% i 20% ukupnih lipida prisutnih u nosaču tranfera.
7. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde molarni odnos za jedan ili više katjonskih lipida iznosi od 20% do 70% ukupnih lipida prisutnih u nosaču za prenos.
8. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde iRNK molekul sadrži jednu ili više modifikacija koje obezbeđuju povedanu ili poboljšanu stabilnost u odnosu na stabilnost njenog nemodifikovanog parnjaka koji se javlja u prirodi.
9. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 8, gde je jedna ili više modifikacija izabrana iz grupe koju čine: ugradnja veza koje ne predstavljaju veze između nukleotida ili ugradnja modifikovanih nukleotida; promena 5’ ili 3' netranslatirajudeg regiona; uključivanje poli-A repa ili dužeg poli A repa; uključivanje Cap1 strukture; ili hemijska modifikacija nukleotidne baze.
10. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 8, gde je iRNK modifikovana ugradnjom pseudouridina.
11. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih zahteva, gde je iRNK molekulske težine od najmanje 1 kDa, 1,5 kDa, 2 kDa, 2,5 kDa, 5 kDa, 10 kDa, 12 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30kDa ili više.
12. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde iRNK kodira dva ili više različitih proteina.
13. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde protein predstavlja hormon, enzim, receptor ili antitelo.
14. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 12, pri čemu je bolest uzrokovana defektom u proizvodu gena koji je specifičan za jetru.
15. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 14, pri čemu bolest označava metabolički poremedaj ciklusa uree, opciono gde je protein izabran iz grupe koju čine ornitin transkarbamilaza (OTC), karbamil fosfat sintetaza (CPS), argininosukcinat sintetaza 1 (ASS 1), argininosukcinat liaza (ASL) i arginaza (ARG).
16. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 13, pri čemu se protein izlučuje ili sekretuje od strane delija jetre u okolnu vandelijsku tečnost, opciono gde se protein sistemski distribuira nakon izlučivanja.
17. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 15, pri čemu protein ostaje u citosolu delija jetre.
18. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu se farmaceutska kompozicija primenjuje subjektu intravenski.
19. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu se farmaceutska kompozicija primenjuje subjektu dva puta nedeljno, jednom nedeljno, svakih deset dana, svake dve nedelje, svake tri nedelje, svake četiri nedelje ili jednom mesečno.
20. Farmaceutska kompozicija koja sadrži:
nosač transfera, farmaceutski prihvatljiv ekscipijens i najmanje jedan iRNK molekul koji kodira protein,nosač transfera koje sadrži jedan ili više katjonskih lipida, jedan ili više nekatjonskih lipida i jedan ili više lipida modifikovanih sa PEG, pri čemu je nosač transfera lipozom, a veličina nosača transfera je manja od 100 nm.
RS20180509A 2009-12-01 2010-11-30 Isporuka irnk za povećanje ekspresije proteina i enzima u humanim genetskim oboljenjima RS57314B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US26565309P 2009-12-01 2009-12-01
PCT/US2010/058457 WO2011068810A1 (en) 2009-12-01 2010-11-30 Delivery of mrna for the augmentation of proteins and enzymes in human genetic diseases
EP10835016.6A EP2506857B1 (en) 2009-12-01 2010-11-30 Delivery of mrna for the augmentation of proteins and enzymes in human genetic diseases

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS57314B1 true RS57314B1 (sr) 2018-08-31

Family

ID=44115246

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20180509A RS57314B1 (sr) 2009-12-01 2010-11-30 Isporuka irnk za povećanje ekspresije proteina i enzima u humanim genetskim oboljenjima
RS20190197A RS58405B1 (sr) 2009-12-01 2010-11-30 Stereoidni derivati za isporuku irnk u humanim genetskim oboljenjima

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190197A RS58405B1 (sr) 2009-12-01 2010-11-30 Stereoidni derivati za isporuku irnk u humanim genetskim oboljenjima

Country Status (20)

Country Link
US (10) US20110244026A1 (sr)
EP (5) EP3318248B1 (sr)
AU (1) AU2010326132B9 (sr)
CA (2) CA2782676C (sr)
CY (2) CY1120272T1 (sr)
DK (2) DK3338765T3 (sr)
ES (3) ES2734973T3 (sr)
HR (2) HRP20180696T1 (sr)
HU (2) HUE038039T2 (sr)
LT (2) LT3338765T (sr)
ME (2) ME03327B (sr)
NO (1) NO2506857T3 (sr)
NZ (5) NZ750556A (sr)
PL (2) PL2506857T3 (sr)
PT (2) PT2506857T (sr)
RS (2) RS57314B1 (sr)
SI (2) SI2506857T1 (sr)
SM (2) SMT201900113T1 (sr)
TR (1) TR201901311T4 (sr)
WO (1) WO2011068810A1 (sr)

Families Citing this family (334)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3269395A1 (en) 2008-11-07 2018-01-17 Massachusetts Institute Of Technology Aminoalcohol lipidoids and uses thereof
EP3318248B1 (en) 2009-12-01 2019-04-10 Translate Bio, Inc. Delivery of mrna for the augmentation of proteins and enzymes in human genetic diseases
ES2646669T3 (es) 2010-07-06 2017-12-14 Glaxosmithkline Biologicals Sa Procedimientos de aumento de una respuesta inmunitaria mediante el suministro de ARN
EP2591114B1 (en) 2010-07-06 2016-06-08 GlaxoSmithKline Biologicals SA Immunisation of large mammals with low doses of rna
US9770463B2 (en) 2010-07-06 2017-09-26 Glaxosmithkline Biologicals Sa Delivery of RNA to different cell types
MX342608B (es) 2010-07-06 2016-10-06 Novartis Ag * Particulas de suministro similares a viriones para moleculas de arn de autorreplicacion.
ES2557382T3 (es) 2010-07-06 2016-01-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa Liposomas con lípidos que tienen un valor de pKa ventajoso para el suministro de ARN
WO2012019168A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US9193827B2 (en) 2010-08-26 2015-11-24 Massachusetts Institute Of Technology Poly(beta-amino alcohols), their preparation, and uses thereof
SI4043040T1 (sl) 2010-08-31 2023-04-28 Glaxosmithkline Biologicals Sa Mali liposomi za dostavo imunogen-kodirajoče RNA
LT4226941T (lt) 2010-08-31 2025-01-10 Glaxosmithkline Biologicals Sa Pegilintos liposomos, skirtos imunogeną koduojančios rnr pristatymui
DE212011100045U1 (de) * 2010-09-09 2012-10-25 Saint-Gobain Glass France Transparente Scheibe mit Heizbeschichtung
EP2625189B1 (en) 2010-10-01 2018-06-27 ModernaTX, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2012051211A2 (en) 2010-10-11 2012-04-19 Novartis Ag Antigen delivery platforms
US8853377B2 (en) 2010-11-30 2014-10-07 Shire Human Genetic Therapies, Inc. mRNA for use in treatment of human genetic diseases
EP2691443B1 (en) 2011-03-28 2021-02-17 Massachusetts Institute of Technology Conjugated lipomers and uses thereof
AU2012236099A1 (en) 2011-03-31 2013-10-03 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
RU2013154295A (ru) 2011-06-08 2015-07-20 Шир Хьюман Дженетик Терапис, Инк. КОМПОЗИЦИИ ЛИПИДНЫХ НАНОЧАСТИЦ И СПОСОБЫ ДЛЯ ДОСТАВКИ мРНК
ES2795110T3 (es) * 2011-06-08 2020-11-20 Translate Bio Inc Lípidos escindibles
EP2729165B1 (en) 2011-07-06 2017-11-08 GlaxoSmithKline Biologicals SA Immunogenic combination compositions and uses thereof
CN102253778B (zh) * 2011-07-22 2013-06-19 苏州瀚瑞微电子有限公司 一种电容传感器的定位方法
US10323236B2 (en) 2011-07-22 2019-06-18 President And Fellows Of Harvard College Evaluation and improvement of nuclease cleavage specificity
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
DE19216461T1 (de) 2011-10-03 2021-10-07 Modernatx, Inc. Modifizierte nukleoside, nukleotide und nukleinsäuren und verwendungen davon
PE20181541A1 (es) 2011-10-27 2018-09-26 Massachusetts Inst Technology Derivados de aminoacidos funcionalizados en la terminal n capaces de formar microesferas encapsuladoras de farmaco
EP3485875A1 (en) * 2011-11-04 2019-05-22 Nitto Denko Corporation Single use system for sterelily producing lipid-nucleic acid particles
US9579338B2 (en) 2011-11-04 2017-02-28 Nitto Denko Corporation Method of producing lipid nanoparticles for drug delivery
CA3018046A1 (en) * 2011-12-16 2013-06-20 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
AU2013237874B2 (en) 2012-03-29 2018-01-18 Translate Bio, Inc. Lipid-derived neutral nanoparticles
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US10501513B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of oncology-related proteins and peptides
US9254311B2 (en) 2012-04-02 2016-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
WO2013151665A2 (en) 2012-04-02 2013-10-10 modeRNA Therapeutics Modified polynucleotides for the production of proteins associated with human disease
CN104411338A (zh) 2012-04-02 2015-03-11 现代治疗公司 用于产生与人类疾病相关的生物制剂和蛋白质的修饰多核苷酸
EP2858679B2 (en) * 2012-06-08 2024-06-05 Translate Bio, Inc. Pulmonary delivery of mrna to non-lung target cells
WO2013185067A1 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Nuclease resistant polynucleotides and uses thereof
WO2014028487A1 (en) 2012-08-13 2014-02-20 Massachusetts Institute Of Technology Amine-containing lipidoids and uses thereof
WO2014028429A2 (en) 2012-08-14 2014-02-20 Moderna Therapeutics, Inc. Enzymes and polymerases for the synthesis of rna
PL2922554T3 (pl) 2012-11-26 2022-06-20 Modernatx, Inc. Na zmodyfikowany na końcach
EP4331620A3 (en) * 2012-12-07 2024-12-04 Translate Bio, Inc. Lipidic nanoparticles for mrna delivery
AU2013374345A1 (en) 2013-01-17 2015-08-06 Moderna Therapeutics, Inc. Signal-sensor polynucleotides for the alteration of cellular phenotypes
EP2968391A1 (en) * 2013-03-13 2016-01-20 Moderna Therapeutics, Inc. Long-lived polynucleotide molecules
ES2708562T3 (es) 2013-03-14 2019-04-10 Translate Bio Inc Evaluación cuantitativa de la eficacidad de tapa de ARN mensajero
EP2970940B1 (en) 2013-03-14 2018-07-25 Translate Bio, Inc. Mrna therapeutic compositions and use to treat diseases and disorders
JP6586075B2 (ja) 2013-03-14 2019-10-02 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド メッセンジャーｒｎａの精製方法
BR112015022855A2 (pt) 2013-03-14 2017-11-07 Shire Human Genetic Therapies composições e método para produção de um anticorpo in vitro
EP3750903A1 (en) * 2013-03-14 2020-12-16 Translate Bio, Inc. Ribonucleic acids with 4'-thio-modified nucleotides and related methods
RS57739B1 (sr) 2013-03-14 2018-12-31 Translate Bio Inc Kompozicije cftr irnk i postupci i upotrebe u vezi sa njima
WO2014152211A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
EP2971165A4 (en) 2013-03-15 2016-11-23 Moderna Therapeutics Inc DISSOLUTION OF DNA FRAGMENTS IN MRNA MANUFACTURING METHODS
US10590161B2 (en) 2013-03-15 2020-03-17 Modernatx, Inc. Ion exchange purification of mRNA
WO2014152027A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Manufacturing methods for production of rna transcripts
EP3388834B1 (en) * 2013-03-15 2020-04-15 Translate Bio, Inc. Synergistic enhancement of the delivery of nucleic acids via blended formulations
WO2014152031A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Ribonucleic acid purification
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
HK1221640A1 (zh) * 2013-04-12 2017-06-09 Infinite Cells, Llc 表达治疗性肽的细胞
WO2014179562A1 (en) 2013-05-01 2014-11-06 Massachusetts Institute Of Technology 1,3,5-triazinane-2,4,6-trione derivatives and uses thereof
RU2716420C2 (ru) 2013-06-17 2020-03-11 Те Брод Инститьют Инк. Доставка и применение систем crispr-cas, векторов и композиций для целенаправленного воздействия и терапии в печени
CA2917348A1 (en) 2013-07-11 2015-01-15 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions comprising synthetic polynucleotides encoding crispr related proteins and synthetic sgrnas and methods of use
US9163284B2 (en) 2013-08-09 2015-10-20 President And Fellows Of Harvard College Methods for identifying a target site of a Cas9 nuclease
EP3041934A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
WO2015034925A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
US9322037B2 (en) 2013-09-06 2016-04-26 President And Fellows Of Harvard College Cas9-FokI fusion proteins and uses thereof
US9228207B2 (en) 2013-09-06 2016-01-05 President And Fellows Of Harvard College Switchable gRNAs comprising aptamers
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
EP3052511A4 (en) 2013-10-02 2017-05-31 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
EP3052521A1 (en) 2013-10-03 2016-08-10 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
CN106413811A (zh) * 2013-10-22 2017-02-15 夏尔人类遗传性治疗公司 精氨基琥珀酸合成酶缺乏症的mrna疗法
ES3032935T3 (en) 2013-10-22 2025-07-29 Translate Bio Inc Lipid formulations for delivery of messenger rna
AU2014340149B2 (en) 2013-10-22 2020-12-24 Shire Human Genetic Therapies, Inc. CNS delivery of mRNA and uses thereof
JP6506749B2 (ja) 2013-10-22 2019-04-24 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド フェニルケトン尿症のためのｍＲＮＡ療法
US20150165054A1 (en) 2013-12-12 2015-06-18 President And Fellows Of Harvard College Methods for correcting caspase-9 point mutations
US20170143848A1 (en) * 2014-03-24 2017-05-25 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Mrna therapy for the treatment of ocular diseases
PL4023249T3 (pl) 2014-04-23 2025-03-10 Modernatx, Inc. Szczepionki z kwasem nukleinowym
EP3134546A4 (en) * 2014-04-24 2017-12-06 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Tumor suppressor and oncogene biomarkers predictive of anti-immune checkpoint inhibitor response
US9850269B2 (en) 2014-04-25 2017-12-26 Translate Bio, Inc. Methods for purification of messenger RNA
ES2936810T3 (es) 2014-05-16 2023-03-22 Pfizer Anticuerpos biespecíficos con interfaces CH1-CL de ingeniería
JP6557722B2 (ja) 2014-05-30 2019-08-07 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド 核酸の送達のための生分解性脂質
TR201908550T4 (tr) 2014-06-04 2019-07-22 Exicure Inc Profilaktik veya terapötik uygulamalar için lipozomal sferik nükleik asitler tarafından immün modülatörlerin çok değerlikli teslimi.
KR102559979B1 (ko) 2014-06-24 2023-07-25 샤이어 휴먼 지네틱 테라피즈 인크. 핵산의 전달용 입체화학적으로 풍부한 조성물
BR112016030852A2 (pt) 2014-07-02 2018-01-16 Shire Human Genetic Therapies encapsulação de rna mensageiro
US9840479B2 (en) 2014-07-02 2017-12-12 Massachusetts Institute Of Technology Polyamine-fatty acid derived lipidoids and uses thereof
EP3169310A1 (en) * 2014-07-15 2017-05-24 Life Technologies Corporation Compositions with lipid aggregates and methods for efficient delivery of molecules to cells
US10407683B2 (en) 2014-07-16 2019-09-10 Modernatx, Inc. Circular polynucleotides
US20170204152A1 (en) 2014-07-16 2017-07-20 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
EP3171895A1 (en) 2014-07-23 2017-05-31 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of intrabodies
US10077453B2 (en) 2014-07-30 2018-09-18 President And Fellows Of Harvard College CAS9 proteins including ligand-dependent inteins
WO2016028940A1 (en) 2014-08-19 2016-02-25 Northwestern University Protein/oligonucleotide core-shell nanoparticle therapeutics
US11213593B2 (en) 2014-11-21 2022-01-04 Northwestern University Sequence-specific cellular uptake of spherical nucleic acid nanoparticle conjugates
JP6767976B2 (ja) 2014-12-05 2020-10-14 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド 関節疾患の治療のためのメッセンジャーｒｎａ治療法
JP2018509387A (ja) * 2015-01-21 2018-04-05 フェーズアールエックス インコーポレイテッド 細胞に治療および診断剤を送達するための方法、組成物、ならびにシステム
WO2016149508A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Mrna therapy for pompe disease
PE20180673A1 (es) * 2015-06-01 2018-04-19 Univ Chicago Tratamiento contra el cancer por manipulacion de la microflora comensal
WO2016205691A1 (en) 2015-06-19 2016-12-22 Massachusetts Institute Of Technology Alkenyl substituted 2,5-piperazinediones and their use in compositions for delivering an agent to a subject or cell
US11364292B2 (en) 2015-07-21 2022-06-21 Modernatx, Inc. CHIKV RNA vaccines
MA42502A (fr) 2015-07-21 2018-05-30 Modernatx Inc Vaccins contre une maladie infectieuse
MA42543A (fr) 2015-07-30 2018-06-06 Modernatx Inc Arn épitope peptidiques concatémériques
US11564893B2 (en) * 2015-08-17 2023-01-31 Modernatx, Inc. Methods for preparing particles and related compositions
JP6948313B6 (ja) 2015-09-17 2022-01-14 モデルナティエックス インコーポレイテッド 治療剤の細胞内送達のための化合物および組成物
EP3350333B2 (en) 2015-09-17 2025-08-06 ModernaTX, Inc. Polynucleotides containing a stabilizing tail region
WO2017049286A1 (en) 2015-09-17 2017-03-23 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides containing a morpholino linker
EP3359670B2 (en) 2015-10-05 2024-02-14 ModernaTX, Inc. Methods for therapeutic administration of messenger ribonucleic acid drugs
JP6997704B2 (ja) 2015-10-14 2022-02-04 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド 生産性向上のためのｒｎａ関連酵素の修飾
SI3362461T1 (sl) 2015-10-16 2022-05-31 Modernatx, Inc. Analogi kape MRNA z modificirano fosfatno povezavo
WO2017066797A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Modernatx, Inc. Trinucleotide mrna cap analogs
WO2017066793A1 (en) * 2015-10-16 2017-04-20 Modernatx, Inc. Mrna cap analogs and methods of mrna capping
EP4011451A1 (en) 2015-10-22 2022-06-15 ModernaTX, Inc. Metapneumovirus mrna vaccines
AU2016342045A1 (en) 2015-10-22 2018-06-07 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
AU2016341309A1 (en) 2015-10-22 2018-06-07 Modernatx, Inc. Cancer vaccines
WO2017070624A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Tropical disease vaccines
IL310721B2 (en) 2015-10-23 2025-11-01 Harvard College Nucleobase editors and uses thereof
MA43415A (fr) 2015-12-09 2018-10-17 Modernatx Inc Arnm modifié codant pour une uridine diphosphate glucuronosyltransférase et utilisations associées
PL3386484T3 (pl) 2015-12-10 2022-07-25 Modernatx, Inc. Kompozycje i sposoby dostarczania środków terapeutycznych
MA43568A (fr) 2015-12-17 2018-11-14 Modernatx Inc Polynucléotides codant pour la méthylmalonyl-coa mutase
LT3394030T (lt) 2015-12-22 2022-04-11 Modernatx, Inc. Junginiai ir kompozicijos terapinei medžiagai teikti intraceliuliniu būdu
PL3394093T3 (pl) 2015-12-23 2022-05-16 Modernatx, Inc. Metody stosowania polinukleotydów kodujących ligand ox40
MA43587A (fr) 2016-01-10 2018-11-14 Modernatx Inc Arnm thérapeutiques codant pour des anticorps anti-ctla-4
EP3405579A1 (en) 2016-01-22 2018-11-28 Modernatx, Inc. Messenger ribonucleic acids for the production of intracellular binding polypeptides and methods of use thereof
EP3825400B1 (en) 2016-04-08 2024-12-25 Translate Bio, Inc. Multimeric coding nucleic acid and uses thereof
US11446398B2 (en) 2016-04-11 2022-09-20 Obsidian Therapeutics, Inc. Regulated biocircuit systems
WO2017180917A2 (en) 2016-04-13 2017-10-19 Modernatx, Inc. Lipid compositions and their uses for intratumoral polynucleotide delivery
MA45036A (fr) 2016-05-18 2019-03-27 Modernatx Inc Polynucléotides codant pour la citrine pour le traitement de la citrullinémie de type 2
US12123030B2 (en) 2016-05-18 2024-10-22 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding lipoprotein lipase for the treatment of hyperlipidemia
WO2017201342A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding jagged1 for the treatment of alagille syndrome
IL263079B2 (en) 2016-05-18 2024-05-01 Modernatx Inc Polynucleotides encoding relaxin
EP3458108A4 (en) 2016-05-18 2020-04-22 ModernaTX, Inc. POLYNUCLEOTIDES ENCODING A CYSTIC FIBROSIS TRANSMEMBRANE CONDUCTANCE REGULATOR FOR THE TREATMENT OF CYSTIC FIBROSIS
SI3458083T1 (sl) 2016-05-18 2023-03-31 Modernatx, Inc. Polinukleotidi, ki kodirajo interlevkin-12 (IL12) in njihova uporaba
US11001861B2 (en) 2016-05-18 2021-05-11 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding galactose-1-phosphate uridylyltransferase for the treatment of galactosemia type 1
JP2019519601A (ja) 2016-05-18 2019-07-11 モダーナティエックス・インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ， Ｉｎｃ． 急性間欠性ポルフィリン症の治療のためのポルホビリノゲン脱アミノ酵素をコードするポリヌクレオチド
EP3469074B1 (en) 2016-06-13 2020-12-09 Translate Bio, Inc. Messenger rna therapy for the treatment of ornithine transcarbamylase deficiency
WO2017223176A1 (en) 2016-06-24 2017-12-28 Modernatx, Inc. Methods and apparatus for filtration
US10927383B2 (en) 2016-06-30 2021-02-23 Ethris Gmbh Cas9 mRNAs
MX383505B (es) * 2016-07-06 2025-03-14 Univ Texas Eliminación de la cistina mediada por enzimas humanas.
CN110214183A (zh) 2016-08-03 2019-09-06 哈佛大学的校长及成员们 腺苷核碱基编辑器及其用途
WO2018031683A1 (en) 2016-08-09 2018-02-15 President And Fellows Of Harvard College Programmable cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof
US11542509B2 (en) 2016-08-24 2023-01-03 President And Fellows Of Harvard College Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing
KR102622411B1 (ko) 2016-10-14 2024-01-10 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 핵염기 에디터의 aav 전달
EP3528821A4 (en) 2016-10-21 2020-07-01 ModernaTX, Inc. HUMAN CYTOMEGALOVIRUS VACCINE
US11583504B2 (en) 2016-11-08 2023-02-21 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
AU2017357758B2 (en) 2016-11-10 2023-11-16 Translate Bio, Inc. Improved process of preparing mRNA-loaded lipid nanoparticles
MA46761A (fr) * 2016-11-10 2019-09-18 Translate Bio Inc Administration sous-cutanée d'arn messager
CA3043033A1 (en) 2016-11-10 2018-05-17 Translate Bio, Inc. Improved ice-based lipid nanoparticle formulation for delivery of mrna
MA46766A (fr) 2016-11-11 2019-09-18 Modernatx Inc Vaccin antigrippal
ES2912270T3 (es) * 2016-11-23 2022-05-25 Mayo Found Medical Education & Res Transporte de productos biológicos por medio de partículas
WO2018107088A2 (en) 2016-12-08 2018-06-14 Modernatx, Inc. Respiratory virus nucleic acid vaccines
WO2018119359A1 (en) 2016-12-23 2018-06-28 President And Fellows Of Harvard College Editing of ccr5 receptor gene to protect against hiv infection
JP2020503390A (ja) 2017-01-09 2020-01-30 オイシン バイオテクノロジーズ， インコーポレイテッド 治療用タンパク質の標的細胞特異的な産生のため、および標的細胞に関連する疾患、状態、または障害の治療のための、膜融合性脂質ナノ粒子、ならびにその作製および使用のための方法
MA47515A (fr) 2017-02-16 2019-12-25 Modernatx Inc Compositions immunogènes très puissantes
CA3054321A1 (en) 2017-02-27 2018-08-30 Translate Bio, Inc. Methods for purification of messenger rna
EP3585886B1 (en) 2017-02-27 2023-11-22 Translate Bio, Inc. Large scale synthesis of messenger rna
EP3585892B8 (en) 2017-02-27 2022-07-13 Translate Bio, Inc. Methods for purification of messenger rna
EA201991747A1 (ru) 2017-02-27 2020-06-04 Транслейт Био, Инк. НОВАЯ КОДОН-ОПТИМИЗИРОВАННАЯ мРНК CFTR
CA3055200A1 (en) 2017-03-03 2018-09-07 Obsidian Therapeutics, Inc. Compositions and methods for immunotherapy
KR102746901B1 (ko) 2017-03-03 2024-12-26 옵시디안 테라퓨틱스, 인크. Cd19 조성물 및 면역요법을 위한 방법
MA47824A (fr) 2017-03-07 2020-01-15 Translate Bio Inc Administration polyanionique d'acides nucléiques
US12390514B2 (en) 2017-03-09 2025-08-19 President And Fellows Of Harvard College Cancer vaccine
EP3592853A1 (en) 2017-03-09 2020-01-15 President and Fellows of Harvard College Suppression of pain by gene editing
US11542496B2 (en) 2017-03-10 2023-01-03 President And Fellows Of Harvard College Cytosine to guanine base editor
EP4186888B1 (en) 2017-03-15 2025-11-26 ModernaTX, Inc. Compound and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
CA3055653A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle formulation
WO2018170322A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Crystal forms of amino lipids
EP3595676A4 (en) 2017-03-17 2021-05-05 Modernatx, Inc. RNA VACCINES AGAINST ZOONOSES
KR20240116572A (ko) 2017-03-23 2024-07-29 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 핵산 프로그램가능한 dna 결합 단백질을 포함하는 핵염기 편집제
US11905525B2 (en) 2017-04-05 2024-02-20 Modernatx, Inc. Reduction of elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins
WO2018209270A1 (en) 2017-05-11 2018-11-15 Northwestern University Adoptive cell therapy using spherical nucleic acids (snas)
US11560566B2 (en) 2017-05-12 2023-01-24 President And Fellows Of Harvard College Aptazyme-embedded guide RNAs for use with CRISPR-Cas9 in genome editing and transcriptional activation
MX2019013752A (es) 2017-05-16 2020-07-20 Translate Bio Inc Tratamiento de la fibrosis quística mediante el suministro de arnm que codifica cftr optimizado en codones.
BR112019025224A2 (pt) 2017-05-31 2020-12-08 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Terapêutica para doença de armazenamento de glicogênio tipo iii
US20200131498A1 (en) 2017-06-14 2020-04-30 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding methylmalonyl-coa mutase
WO2018232120A1 (en) 2017-06-14 2018-12-20 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of agents
MA49421A (fr) 2017-06-15 2020-04-22 Modernatx Inc Formulations d'arn
MA49634A (fr) 2017-07-21 2020-05-27 Modernatx Inc Arnm modifié codant pour une propionyl-coa-carboxylase et utilisations associées
MA49684A (fr) 2017-07-24 2020-06-03 Modernatx Inc Arnm modifié codant une glucose-6-phosphatase et utilisations associées
CN111801345A (zh) 2017-07-28 2020-10-20 哈佛大学的校长及成员们 使用噬菌体辅助连续进化(pace)的进化碱基编辑器的方法和组合物
WO2019027055A1 (ja) * 2017-08-04 2019-02-07 協和発酵キリン株式会社 核酸含有脂質ナノ粒子
EP3676376B1 (en) 2017-08-30 2025-01-15 President and Fellows of Harvard College High efficiency base editors comprising gam
EP3675817A1 (en) 2017-08-31 2020-07-08 Modernatx, Inc. Methods of making lipid nanoparticles
WO2019055807A1 (en) 2017-09-14 2019-03-21 Modernatx, Inc. RNA VACCINES AGAINST ZIKA VIRUS
EP3461487A1 (en) * 2017-09-29 2019-04-03 Nlife Therapeutics S.L. Compositions and methods for the delivery of mrna to hepatic cells
KR20250107288A (ko) 2017-10-16 2025-07-11 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 아데노신 염기 편집제의 용도
CA3079428A1 (en) 2017-11-22 2019-05-31 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding ornithine transcarbamylase for the treatment of urea cycle disorders
US12406749B2 (en) 2017-12-15 2025-09-02 The Broad Institute, Inc. Systems and methods for predicting repair outcomes in genetic engineering
US11167043B2 (en) 2017-12-20 2021-11-09 Translate Bio, Inc. Composition and methods for treatment of ornithine transcarbamylase deficiency
EP3746496A1 (en) 2018-02-02 2020-12-09 Translate Bio, Inc. Cationic polymers
CN112312918A (zh) 2018-04-18 2021-02-02 奥依信生物技术公司 促融合脂质纳米粒和制备其的方法以及其用于靶细胞特异性产生治疗蛋白和治疗与靶细胞有关的疾病、病况或障碍的用途
AU2019271132B2 (en) * 2018-05-15 2026-02-05 Translate Bio, Inc. Subcutaneous delivery of messenger RNA
US11964051B2 (en) 2018-05-16 2024-04-23 Translate Bio, Inc. Ribose cationic lipids
US12157760B2 (en) 2018-05-23 2024-12-03 The Broad Institute, Inc. Base editors and uses thereof
CA3101454A1 (en) 2018-05-30 2019-12-05 Translate Bio, Inc. Messenger rna vaccines and uses thereof
WO2019241315A1 (en) 2018-06-12 2019-12-19 Obsidian Therapeutics, Inc. Pde5 derived regulatory constructs and methods of use in immunotherapy
WO2020051223A1 (en) 2018-09-04 2020-03-12 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods for organ specific delivery of nucleic acids
US12357580B2 (en) 2018-06-19 2025-07-15 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Lipid nanoparticle compositions for delivery of mRNA and long nucleic acids
US12522807B2 (en) 2018-07-09 2026-01-13 The Broad Institute, Inc. RNA programmable epigenetic RNA modifiers and uses thereof
KR102950141B1 (ko) 2018-08-24 2026-04-07 트랜슬레이트 바이오 인코포레이티드 전령 rna의 정제 방법
WO2020061367A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
CA3113025A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. Peg lipids and uses thereof
EP3852764A4 (en) * 2018-09-19 2022-06-15 ModernaTX, Inc. STEROL ANALOGUES AND USES THEREOF
JP2022501371A (ja) * 2018-09-19 2022-01-06 モデルナティエックス インコーポレイテッドModernaTX, Inc. ステロールの精製
WO2020061295A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. High-purity peg lipids and uses thereof
WO2020061457A1 (en) 2018-09-20 2020-03-26 Modernatx, Inc. Preparation of lipid nanoparticles and methods of administration thereof
EP3856757A4 (en) 2018-09-28 2022-06-29 Nutcracker Therapeutics, Inc. Tertiary amino lipidated cationic peptides for nucleic acid delivery
HRP20240586T1 (hr) 2018-10-09 2024-07-19 The University Of British Columbia Sastavi i sustavi koji sadrže transfekcijske sposobne vezikle bez organskih otapala i deterdženta i s njim povezanim postupcima
US20210386788A1 (en) 2018-10-24 2021-12-16 Obsidian Therapeutics, Inc. Er tunable protein regulation
WO2020092453A1 (en) 2018-10-29 2020-05-07 The Broad Institute, Inc. Nucleobase editors comprising geocas9 and uses thereof
KR20210089648A (ko) 2018-11-08 2021-07-16 트랜슬레이트 바이오 인코포레이티드 메신저 rna 정제를 위한 방법 및 조성물
EP3876914A2 (en) 2018-11-09 2021-09-15 Translate Bio, Inc. Messenger rna therapy for treatment of ocular diseases
AU2019376660B2 (en) 2018-11-09 2025-06-26 Translate Bio, Inc. 2,5-dioxopiperazine lipids with intercalated ester, thioester, disulfide and anhydride moieities
CA3119449A1 (en) 2018-11-12 2020-05-22 Translate Bio, Inc. Methods for inducing immune tolerance
CN113272426A (zh) * 2018-11-16 2021-08-17 医福斯治疗有限公司 用于尿素循环蛋白和核酸的替代的细胞外囊泡
WO2020106946A1 (en) 2018-11-21 2020-05-28 Translate Bio, Inc. TREATMENT OF CYSTIC FIBROSIS BY DELIVERY OF NEBULIZED mRNA ENCODING CFTR
AU2019394996B2 (en) 2018-12-06 2025-11-06 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions and methods for treating ornithine transcarbamylase deficiency
US12042527B2 (en) 2019-01-08 2024-07-23 Modernatx, Inc. Use of mRNAs encoding OX40L, IL-23 and IL-36gamma in combination with immune checkpoint blockade for treating particular cancers
TWI852977B (zh) 2019-01-10 2024-08-21 美商健生生物科技公司 前列腺新抗原及其用途
US12351837B2 (en) 2019-01-23 2025-07-08 The Broad Institute, Inc. Supernegatively charged proteins and uses thereof
US11351242B1 (en) 2019-02-12 2022-06-07 Modernatx, Inc. HMPV/hPIV3 mRNA vaccine composition
WO2020168466A1 (en) 2019-02-19 2020-08-27 Stemirna Therapeutics Co., Ltd. Modified nucleoside and synthetic methods thereof
US12070495B2 (en) 2019-03-15 2024-08-27 Modernatx, Inc. HIV RNA vaccines
WO2020191233A1 (en) 2019-03-19 2020-09-24 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for editing nucleotide sequences
US12473543B2 (en) 2019-04-17 2025-11-18 The Broad Institute, Inc. Adenine base editors with reduced off-target effects
CA3140423A1 (en) 2019-05-14 2020-11-19 Translate Bio, Inc. Improved process of preparing mrna-loaded lipid nanoparticles
AU2020275885B2 (en) 2019-05-15 2026-02-05 Translate Bio, Inc. Methods for purification of messenger RNA
US20230181483A1 (en) 2019-07-08 2023-06-15 Translate Bio, Inc. Improved mrna-loaded lipid nanoparticles and processes of making the same
AU2020322014B2 (en) 2019-07-30 2026-04-02 Translate Bio, Inc. Treatment of cystic fibrosis by delivery of nebulized mRNA encoding CFTR
AU2020329156A1 (en) * 2019-08-09 2022-03-03 Nutcracker Therapeutics, Inc. Lipidated cationic peptide-PEG compositions for nucleic acid delivery
CA3155015A1 (en) 2019-09-19 2021-03-25 Modernatx, Inc. Carbonate containing lipid compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
AU2020350759A1 (en) 2019-09-19 2022-03-31 Modernatx, Inc. Branched tail lipid compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
EP4031662A1 (en) 2019-09-20 2022-07-27 Translate Bio, Inc. Mrna encoding engineered cftr
CN114729376A (zh) 2019-09-23 2022-07-08 欧米茄治疗公司 用于调节肝细胞核因子4α(HNF4α)基因表达的组合物和方法
EP4048807A1 (en) 2019-09-23 2022-08-31 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating apolipoprotein b (apob) gene expression
WO2021072172A1 (en) 2019-10-09 2021-04-15 Translate Bio, Inc. Compositions, methods and uses of messenger rna
US12435330B2 (en) 2019-10-10 2025-10-07 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for prime editing RNA
CR20220220A (es) 2019-11-18 2022-09-20 Janssen Biotech Inc Vacunas basadas en calr y jak2 mutantes y sus usos
JP2023508881A (ja) 2019-12-20 2023-03-06 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド Ｍｒｎａ担持脂質ナノ粒子を調製する改善されたプロセス
CN115515559B (zh) 2019-12-20 2026-03-24 翻译生物公司 信使rna的直肠递送
WO2021142245A1 (en) 2020-01-10 2021-07-15 Translate Bio, Inc. Compounds, pharmaceutical compositions and methods for modulating expression of muc5b in lung cells and tissues
US12194089B2 (en) 2020-02-04 2025-01-14 CureVac SE Coronavirus vaccine
US20210324369A1 (en) 2020-02-10 2021-10-21 Translate Bio, Inc. Methods and compositions for messenger rna purification
EP3865122A1 (en) * 2020-02-11 2021-08-18 Pantherna Therapeutics GmbH Lipid composition and use thereof for delivery of a therapeutically active agent to endothelium
AU2021224892A1 (en) 2020-02-18 2022-10-13 Translate Bio, Inc. Improved processes for in vitro transcription of messenger RNA
CN115427021A (zh) 2020-02-25 2022-12-02 翻译生物公司 制备负载mrna的脂质纳米颗粒的改进方法
US12351834B2 (en) 2020-03-03 2025-07-08 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of ornithine transcarbamylase deficiency
CA3173528A1 (en) 2020-03-11 2021-09-16 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating forkhead box p3 (foxp3) gene expression
IL297419B2 (en) 2020-04-22 2025-02-01 BioNTech SE Coronavirus vaccine
EP4146265A1 (en) 2020-05-07 2023-03-15 Translate Bio, Inc. Optimized nucleotide sequences encoding sars-cov-2 antigens
EP4146680A1 (en) 2020-05-07 2023-03-15 Translate Bio, Inc. Composition and methods for treatment of primary ciliary dyskinesia
IL297761A (en) 2020-05-08 2022-12-01 Broad Inst Inc Methods and compositions for simultaneously editing two helices of a designated double-helix nucleotide sequence
JP2023526284A (ja) 2020-05-15 2023-06-21 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド ｍＲＮＡ送達のための脂質ナノ粒子製剤
EP4175664A2 (en) 2020-07-06 2023-05-10 Janssen Biotech, Inc. Prostate neoantigens and their uses
MA71659A (fr) 2020-08-06 2025-05-30 Modernatx, Inc. Compositions pour l'administration de molécules de charge utile à l'épithélium des voies respiratoires
US11406703B2 (en) 2020-08-25 2022-08-09 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
CZ310613B6 (cs) 2020-09-23 2026-01-28 Ústav organické chemie a biochemie AV ČR, v. v. i. Lipidoidy pro transfekci nukleových kyselin a jejich použití
KR20230087536A (ko) 2020-10-12 2023-06-16 트랜슬레이트 바이오 인코포레이티드 Mrna-로딩된 지질 나노입자를 제조하는 개선된 프로세스
US20220133631A1 (en) * 2020-10-12 2022-05-05 Translate Bio, Inc. Process of preparing ice-based lipid nanoparticles
EP4228658A4 (en) 2020-10-14 2025-02-19 George Mason Research Foundation, Inc. IONIZABLE LIPIDS AND METHODS FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF
WO2022082001A1 (en) 2020-10-15 2022-04-21 Translate Bio, Inc. Large scale synthesis of messenger rna
WO2022099003A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Sanofi Lipid nanoparticles for delivering mrna vaccines
US11918643B2 (en) 2020-12-22 2024-03-05 CureVac SE RNA vaccine against SARS-CoV-2 variants
WO2022155404A1 (en) * 2021-01-14 2022-07-21 Translate Bio, Inc. Methods and compositions for delivering mrna coded antibodies
US11524023B2 (en) 2021-02-19 2022-12-13 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same
JP2024511463A (ja) 2021-03-22 2024-03-13 リコード セラピューティクス，インク． 細胞への標的送達のための組成物および方法
CA3213107A1 (en) 2021-03-23 2022-09-29 Mirko HENNIG Polynucleotide compositions, related formulations, and methods of use thereof
EP4313115A1 (en) 2021-03-25 2024-02-07 Translate Bio, Inc. Optimized nucleotide sequences encoding the extracellular domain of human ace2 protein or a portion thereof
EP4355308A1 (en) 2021-06-18 2024-04-24 Sanofi Multivalent influenza vaccines
EP4367242A2 (en) 2021-07-07 2024-05-15 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating secreted frizzled receptor protein 1 (sfrp1) gene expression
CZ310443B6 (cs) 2021-07-19 2025-06-25 Ústav organické chemie a biochemie AV ČR, v. v. i. Cyklohexanové lipidoidy pro transfekci nukleových kyselin a jejich použití
AU2022315530A1 (en) 2021-07-20 2024-01-18 Ags Therapeutics Sas Extracellular vesicles from microalgae, their preparation, and uses
US20240398940A1 (en) 2021-09-03 2024-12-05 CureVac SE Novel lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids
AU2022361432A1 (en) 2021-10-08 2024-05-23 Sanofi Pasteur Inc. Multivalent influenza vaccines
EP4422698A1 (en) 2021-10-29 2024-09-04 CureVac SE Improved circular rna for expressing therapeutic proteins
EP4426828A1 (en) 2021-11-01 2024-09-11 Tome Biosciences, Inc. Single construct platform for simultaneous delivery of gene editing machinery and nucleic acid cargo
MX2024005462A (es) 2021-11-05 2024-05-22 Sanofi Sa Vacuna de arn del virus respiratorio sincitial.
WO2023079113A1 (en) 2021-11-05 2023-05-11 Sanofi Hybrid multivalent influenza vaccines comprising hemagglutinin and neuraminidase and methods of using the same
WO2023086893A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Translate Bio, Inc. Composition and methods for treatment of primary ciliary dyskinesia
CN118829423A (zh) 2021-11-12 2024-10-22 摩登纳特斯有限公司 用于将有效载荷分子递送至气道上皮的组合物
US12186387B2 (en) 2021-11-29 2025-01-07 BioNTech SE Coronavirus vaccine
JP2024542635A (ja) 2021-11-30 2024-11-15 サノフィ パスツール インコーポレイテッド ヒトメタニューモウイルスワクチン
JP2025500880A (ja) 2021-12-17 2025-01-15 サノフイ ライム病ｒｎａワクチン
AU2022420615A1 (en) 2021-12-22 2024-07-04 Tome Biosciences, Inc. Co-delivery of a gene editor construct and a donor template
US20250099614A1 (en) 2022-01-28 2025-03-27 CureVac SE Nucleic acid encoded transcription factor inhibitors
WO2023144127A1 (en) 2022-01-31 2023-08-03 Ags Therapeutics Sas Extracellular vesicles from microalgae, their biodistribution upon administration, and uses
US20250327041A1 (en) 2022-02-24 2025-10-23 Io Biotech Aps Nucleotide delivery of cancer therapy
WO2023205744A1 (en) 2022-04-20 2023-10-26 Tome Biosciences, Inc. Programmable gene insertion compositions
WO2023215831A1 (en) 2022-05-04 2023-11-09 Tome Biosciences, Inc. Guide rna compositions for programmable gene insertion
CA3256624A1 (en) 2022-05-06 2023-11-09 Sanofi SIGNAL SEQUENCES FOR NUCLEIC ACID-BASED VACCINES
WO2023225670A2 (en) 2022-05-20 2023-11-23 Tome Biosciences, Inc. Ex vivo programmable gene insertion
US20250345407A1 (en) 2022-05-25 2025-11-13 CureVac SE Nucleic acid based vaccine encoding an escherichia coli fimh antigenic polypeptide
WO2023232976A1 (en) 2022-06-03 2023-12-07 Ags Therapeutics Sas Extracellular vesicles from genetically-modified microalgae containing endogenously-loaded cargo, their preparation, and uses
JP2023181989A (ja) 2022-06-13 2023-12-25 上海臻上医薬科技有限公司 マイクロニードル注射製剤およびその使用
US12297285B2 (en) 2022-06-24 2025-05-13 Orna Therapeutics, Inc. Circular RNA encoding chimeric antigen receptors targeting BCMA
WO2024002985A1 (en) 2022-06-26 2024-01-04 BioNTech SE Coronavirus vaccine
WO2024020587A2 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Tome Biosciences, Inc. Pleiopluripotent stem cell programmable gene insertion
EP4565209A1 (en) 2022-08-04 2025-06-11 Sanofi Pasteur Inc. Quantitative assessment of rna encapsulation
JP2025529906A (ja) 2022-08-22 2025-09-09 ザ ヘンリー エム ジャクソン ファンデイション フォー ザ アドヴァンスメント オブ ミリタリー メディシン インコーポレイテッド コロナウイルスに対するワクチン
WO2024088808A1 (en) 2022-10-24 2024-05-02 Ags Therapeutics Sas Extracellular vesicles from microalgae, their biodistribution upon intranasal administration, and uses thereof
EP4608442A1 (en) 2022-10-28 2025-09-03 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Nucleic acid based vaccine
KR20250099727A (ko) 2022-11-04 2025-07-02 사노피 파스퇴르 인크 호흡기 세포융합 바이러스 rna 백신접종
WO2024102677A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 Orna Therapeutics, Inc. Circular rna compositions
WO2024123812A1 (en) 2022-12-05 2024-06-13 Shattuck Labs, Inc. Fusion proteins for the treatment of cardiometabolic diseases
EP4630057A1 (en) 2022-12-08 2025-10-15 Recode Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions and uses thereof
WO2024126809A1 (en) 2022-12-15 2024-06-20 Sanofi Mrna encoding influenza virus-like particle
EP4637813A1 (en) 2022-12-20 2025-10-29 Sanofi Pasteur Rhinovirus mrna vaccine
WO2024138194A1 (en) 2022-12-22 2024-06-27 Tome Biosciences, Inc. Platforms, compositions, and methods for in vivo programmable gene insertion
IL322368A (en) 2023-02-03 2025-09-01 Genzyme Corp HSC-specific antibody-conjugated lipid nanoparticles and their uses
CN120813371A (zh) 2023-03-02 2025-10-17 赛诺菲巴斯德有限公司 用于在衣原体病的治疗中使用的组合物
WO2024184500A1 (en) 2023-03-08 2024-09-12 CureVac SE Novel lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
US12502424B2 (en) 2023-05-05 2025-12-23 Sanofi Pasteur Inc. Compositions for use in treatment of acne
WO2024231565A1 (en) 2023-05-10 2024-11-14 Sanofi Combination respiratory mrna vaccines
WO2024234006A1 (en) 2023-05-11 2024-11-14 Tome Biosciences, Inc. Systems, compositions, and methods for targeting liver sinusodial endothelial cells (lsecs)
WO2024230934A1 (en) 2023-05-11 2024-11-14 CureVac SE Therapeutic nucleic acid for the treatment of ophthalmic diseases
EP4716741A2 (en) 2023-05-23 2026-04-01 Flagship Labs 114, Inc. Compositions and methods for reducing cxcl9, cxcl10, and cxcl11 gene expression
CN121620357A (zh) 2023-06-01 2026-03-06 赛诺菲巴斯德有限公司 包含mRNA脂质纳米颗粒的热稳定组合物
EP4734960A1 (en) 2023-06-28 2026-05-06 Sanofi Pasteur Inc. Sterol analogs in lipid nanoparticle formulations
AU2024291595A1 (en) 2023-07-19 2026-03-05 Sanofi Porphyromonas gingivalis antigenic constructs
WO2025050069A1 (en) 2023-09-01 2025-03-06 Tome Biosciences, Inc. Programmable gene insertion using engineered integration enzymes
WO2025051975A1 (en) 2023-09-06 2025-03-13 Sanofi Modified influenza b hemagglutinin polypeptides and nucleic acids and uses thereof
EP4520345A1 (en) 2023-09-06 2025-03-12 Myneo Nv Product
WO2025059215A1 (en) 2023-09-12 2025-03-20 Aadigen, Llc Methods and compositions for treating or preventing cancer
WO2025104351A1 (en) 2023-11-17 2025-05-22 Sanofi Pasteur Inc. Hplc-based assays for detecting multiple mrna constructs
US12364773B2 (en) 2023-12-01 2025-07-22 Recode Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions and uses thereof
WO2025134071A1 (en) 2023-12-22 2025-06-26 Sanofi Malic and glutaric acid based ionizable lipids
WO2025141521A1 (en) 2023-12-29 2025-07-03 Sanofi Lipids having dendritic moieties
WO2025176843A1 (en) 2024-02-21 2025-08-28 Ags Therapeutics Sas Microalgae extracellular vesicle based gene therapy vectors (mev-gtvs), their preparation, and uses thereof
WO2025193628A2 (en) 2024-03-09 2025-09-18 Aadigen, Llc Compositions for treating cancer with kras mutations and uses thereof
WO2025196065A1 (en) 2024-03-20 2025-09-25 Sanofi Novel homocysteine based lipids and their use for delivery of nucleic acids
WO2025210592A1 (en) 2024-04-05 2025-10-09 Sanofi Pasteur Inc. Muscle cell lnp-mrna quality control assays
EP4677108A1 (en) 2024-04-22 2026-01-14 Basecamp Research Ltd Method and compositions for detecting off-target editing
WO2025224182A2 (en) 2024-04-23 2025-10-30 Basecamp Research Ltd Single construct platform for simultaneous delivery of gene editing machinery and nucleic acid cargo
WO2025255199A1 (en) * 2024-06-05 2025-12-11 Modernatx, Inc. Argininosuccinate synthase 1 and argininosuccinate lyase polypeptides and polynucleotides and uses thereof
WO2026008743A1 (en) 2024-07-02 2026-01-08 Sanofi Pasteur Inc. Water-soluble polyanionic polymer as adjuvant for carrier-formulated nucleic acid
WO2026027730A1 (en) 2024-07-31 2026-02-05 Sanofi Modified h5 influenza hemagglutinin polypeptides and nucleic acids and uses thereof
WO2026033123A1 (en) 2024-08-08 2026-02-12 Sanofi Pasteur Inc. Lipid nanoparticle formulations for mrna delivery
WO2026053147A1 (en) 2024-09-05 2026-03-12 Sanofi Pasteur Inc. Helper lipids and lnp compositions comprising same
WO2026052773A1 (en) 2024-09-06 2026-03-12 Sanofi Modified influenza a hemagglutinin polypeptides and nucleic acids and uses thereof

Family Cites Families (422)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2647121A (en) 1951-02-02 1953-07-28 Ruth P Jacoby Diamine-bis-acetamides
US2819718A (en) 1953-07-16 1958-01-14 Isidore H Goldman Drainage tube
US2717909A (en) 1953-09-24 1955-09-13 Monsanto Chemicals Hydroxyethyl-keryl-alkylene-ammonium compounds
US2844629A (en) 1956-04-25 1958-07-22 American Home Prod Fatty acid amides and derivatives thereof
US3096560A (en) 1958-11-21 1963-07-09 William J Liebig Process for synthetic vascular implants
GB1072118A (en) 1962-12-01 1967-06-14 Sandoz Ag Amides of aminopropionic acid
FR1378382A (fr) 1962-12-01 1964-11-13 Sandoz Sa Amides de l'acide amino-propionique, utilisables en particulier pour le traitement des fibres textiles
JPS5141663B1 (sr) 1966-03-12 1976-11-11
JPS4822365B1 (sr) 1968-10-25 1973-07-05
NL143127B (nl) 1969-02-04 1974-09-16 Rhone Poulenc Sa Versterkingsorgaan voor een defecte hartklep.
US3614954A (en) 1970-02-09 1971-10-26 Medtronic Inc Electronic standby defibrillator
US3614955A (en) 1970-02-09 1971-10-26 Medtronic Inc Standby defibrillator and method of operation
US3945052A (en) 1972-05-01 1976-03-23 Meadox Medicals, Inc. Synthetic vascular graft and method for manufacturing the same
US3805301A (en) 1972-07-28 1974-04-23 Meadox Medicals Inc Tubular grafts having indicia thereon
JPS49127908A (sr) 1973-04-20 1974-12-07
JPS5624664B2 (sr) 1973-06-28 1981-06-08
US4013507A (en) 1973-09-18 1977-03-22 California Institute Of Technology Ionene polymers for selectively inhibiting the vitro growth of malignant cells
JPS5123537A (ja) 1974-04-26 1976-02-25 Adeka Argus Chemical Co Ltd Kasozaisoseibutsu
GB1527592A (en) 1974-08-05 1978-10-04 Ici Ltd Wound dressing
US3995623A (en) 1974-12-23 1976-12-07 American Hospital Supply Corporation Multipurpose flow-directed catheter
JPS5813576B2 (ja) 1974-12-27 1983-03-14 アデカ ア−ガスカガク カブシキガイシヤ 安定化された合成高分子組成物
US4281669A (en) 1975-05-09 1981-08-04 Macgregor David C Pacemaker electrode with porous system
DE2520814A1 (de) 1975-05-09 1976-11-18 Bayer Ag Lichtstabilisierung von polyurethanen
JPS5210847A (en) 1975-07-16 1977-01-27 Nippon Steel Corp Pinch roll
US4096860A (en) 1975-10-08 1978-06-27 Mclaughlin William F Dual flow encatheter
CA1069652A (en) 1976-01-09 1980-01-15 Alain F. Carpentier Supported bioprosthetic heart valve with compliant orifice ring
US4134402A (en) 1976-02-11 1979-01-16 Mahurkar Sakharam D Double lumen hemodialysis catheter
US4072146A (en) 1976-09-08 1978-02-07 Howes Randolph M Venous catheter device
US4335723A (en) 1976-11-26 1982-06-22 The Kendall Company Catheter having inflatable retention means
US4099528A (en) 1977-02-17 1978-07-11 Sorenson Research Co., Inc. Double lumen cannula
US4140126A (en) 1977-02-18 1979-02-20 Choudhury M Hasan Method for performing aneurysm repair
US4265745A (en) 1977-05-25 1981-05-05 Teijin Limited Permselective membrane
US4182833A (en) 1977-12-07 1980-01-08 Celanese Polymer Specialties Company Cationic epoxide-amine reaction products
US4180068A (en) 1978-04-13 1979-12-25 Motion Control, Incorporated Bi-directional flow catheter with retractable trocar/valve structure
EP0005035B1 (en) 1978-04-19 1981-09-23 Imperial Chemical Industries Plc A method of preparing a tubular product by electrostatic spinning
US4284459A (en) 1978-07-03 1981-08-18 The Kendall Company Method for making a molded catheter
US4227533A (en) 1978-11-03 1980-10-14 Bristol-Myers Company Flushable urinary catheter
US4375817A (en) 1979-07-19 1983-03-08 Medtronic, Inc. Implantable cardioverter
DE3010841A1 (de) 1980-03-21 1981-10-08 Ulrich Dr.med. 6936 Haag Uthmann Katheder
US4308085A (en) 1980-07-28 1981-12-29 Jenoptik Jena Gmbh Process for the preparation of high molecular thermoplastic epoxide-amine-polyadducts
US4339369A (en) 1981-04-23 1982-07-13 Celanese Corporation Cationic epoxide-amine reaction products
US4406656A (en) 1981-06-01 1983-09-27 Brack Gillium Hattler Venous catheter having collapsible multi-lumens
US4475972A (en) 1981-10-01 1984-10-09 Ontario Research Foundation Implantable material
US4401472A (en) 1982-02-26 1983-08-30 Martin Marietta Corporation Hydraulic cement mixes and processes for improving hydraulic cement mixes
US4568329A (en) 1982-03-08 1986-02-04 Mahurkar Sakharam D Double lumen catheter
US4546499A (en) 1982-12-13 1985-10-15 Possis Medical, Inc. Method of supplying blood to blood receiving vessels
US4530113A (en) 1983-05-20 1985-07-23 Intervascular, Inc. Vascular grafts with cross-weave patterns
US4647416A (en) 1983-08-03 1987-03-03 Shiley Incorporated Method of preparing a vascular graft prosthesis
US4550447A (en) 1983-08-03 1985-11-05 Shiley Incorporated Vascular graft prosthesis
US5104399A (en) 1986-12-10 1992-04-14 Endovascular Technologies, Inc. Artificial graft and implantation method
US4710169A (en) 1983-12-16 1987-12-01 Christopher T Graham Urinary catheter with collapsible urethral tube
US4571241A (en) 1983-12-16 1986-02-18 Christopher T Graham Urinary catheter with collapsible urethral tube
US4737518A (en) 1984-04-03 1988-04-12 Takeda Chemical Industries, Ltd. Lipid derivatives, their production and use
US4562596A (en) 1984-04-25 1986-01-07 Elliot Kornberg Aortic graft, device and method for performing an intraluminal abdominal aortic aneurysm repair
US4782836A (en) 1984-05-24 1988-11-08 Intermedics, Inc. Rate adaptive cardiac pacemaker responsive to patient activity and temperature
US4897355A (en) 1985-01-07 1990-01-30 Syntex (U.S.A.) Inc. N[ω,(ω-1)-dialkyloxy]- and N-[ω,(ω-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
US4662382A (en) 1985-01-16 1987-05-05 Intermedics, Inc. Pacemaker lead with enhanced sensitivity
US4762915A (en) 1985-01-18 1988-08-09 Liposome Technology, Inc. Protein-liposome conjugates
US4860751A (en) 1985-02-04 1989-08-29 Cordis Corporation Activity sensor for pacemaker control
US5223263A (en) 1988-07-07 1993-06-29 Vical, Inc. Liponucleotide-containing liposomes
CA1320724C (en) 1985-07-19 1993-07-27 Koichi Kanehira Terpene amino alcohols and medicinal uses thereof
US4701162A (en) 1985-09-24 1987-10-20 The Kendall Company Foley catheter assembly
US4737323A (en) 1986-02-13 1988-04-12 Liposome Technology, Inc. Liposome extrusion method
DE3616824A1 (de) 1986-05-17 1987-11-19 Schering Ag Verwendung von haertbaren kunstharzmischungen fuer oberflaechenbeschichtungen und druckfarben und verfahren zu ihrer herstellung
EP0255899B1 (de) 1986-07-31 1992-07-15 Werner Prof. Dr.-Ing. Irnich Frequenzadaptierender Herzschrittmacher
US4960409A (en) 1986-09-11 1990-10-02 Catalano Marc L Method of using bilumen peripheral venous catheter with adapter
JPH0829776B2 (ja) 1986-10-29 1996-03-27 東燃化学株式会社 合成樹脂製容器及びその製造用金型
US4720517A (en) 1986-11-24 1988-01-19 Ciba-Geigy Corporation Compositions stabilized with N-hydroxyiminodiacetic and dipropionic acids and esters thereof
US4920016A (en) 1986-12-24 1990-04-24 Linear Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
DE3728917A1 (de) 1987-08-29 1989-03-09 Roth Hermann J Neue lipide mit unsymmetrisch substituierter disulfidbruecke
US4946683A (en) 1987-11-18 1990-08-07 Vestar, Inc. Multiple step entrapment/loading procedure for preparing lipophilic drug-containing liposomes
US5047540A (en) 1987-12-17 1991-09-10 Shionogi & Co., Ltd. Lipid derivatives
US5138067A (en) 1987-12-17 1992-08-11 Shionogi & Co. Ltd. Lipid derivatives
US4892540A (en) 1988-04-21 1990-01-09 Sorin Biomedica S.P.A. Two-leaflet prosthetic heart valve
US5176661A (en) 1988-09-06 1993-01-05 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Composite vascular catheter
US5024671A (en) 1988-09-19 1991-06-18 Baxter International Inc. Microporous vascular graft
US5200395A (en) 1988-10-18 1993-04-06 Ajinomoto Company, Inc. Pharmaceutical composition of BUF-5 for treating anemia
CA2001401A1 (en) 1988-10-25 1990-04-25 Claude Piantadosi Quaternary amine containing ether or ester lipid derivatives and therapeutic compositions
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
CA2489769A1 (en) 1989-03-21 1990-10-04 Philip L. Felgner Expression of exogenous polynucleotide sequences in a vertebrate
US6214804B1 (en) 1989-03-21 2001-04-10 Vical Incorporated Induction of a protective immune response in a mammal by injecting a DNA sequence
FR2645866B1 (fr) 1989-04-17 1991-07-05 Centre Nat Rech Scient Nouvelles lipopolyamines, leur preparation et leur emploi
US5194654A (en) 1989-11-22 1993-03-16 Vical, Inc. Lipid derivatives of phosphonoacids for liposomal incorporation and method of use
US5279833A (en) 1990-04-04 1994-01-18 Yale University Liposomal transfection of nucleic acids into animal cells
US5101824A (en) 1990-04-16 1992-04-07 Siemens-Pacesetter, Inc. Rate-responsive pacemaker with circuitry for processing multiple sensor inputs
US5264618A (en) 1990-04-19 1993-11-23 Vical, Inc. Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules
EP0549590A1 (en) 1990-07-26 1993-07-07 LANE, Rodney James Self expanding vascular endoprosthesis for aneurysms
US5693338A (en) 1994-09-29 1997-12-02 Emisphere Technologies, Inc. Diketopiperazine-based delivery systems
JPH0765267B2 (ja) 1990-08-22 1995-07-12 花王株式会社 柔軟仕上剤
ATE135555T1 (de) 1990-10-09 1996-04-15 Cook Inc Perkutane stentanordnung
ATE120971T1 (de) 1990-12-19 1995-04-15 Osypka Peter Herzschrittmacherleitung mit einem inneren kanal und mit einem elektrodenkopf.
US5116360A (en) 1990-12-27 1992-05-26 Corvita Corporation Mesh composite graft
US5405363A (en) 1991-03-15 1995-04-11 Angelon Corporation Implantable cardioverter defibrillator having a smaller displacement volume
US5330768A (en) 1991-07-05 1994-07-19 Massachusetts Institute Of Technology Controlled drug delivery using polymer/pluronic blends
US5545449A (en) 1991-10-02 1996-08-13 Weyerhaeuser Company Polyether-reinforced fiber-based materials
US5151105A (en) 1991-10-07 1992-09-29 Kwan Gett Clifford Collapsible vessel sleeve implant
US5858784A (en) 1991-12-17 1999-01-12 The Regents Of The University Of California Expression of cloned genes in the lung by aerosol- and liposome-based delivery
US5284491A (en) 1992-02-27 1994-02-08 Medtronic, Inc. Cardiac pacemaker with hysteresis behavior
US5352461A (en) 1992-03-11 1994-10-04 Pharmaceutical Discovery Corporation Self assembling diketopiperazine drug delivery system
SE9200951D0 (sv) 1992-03-27 1992-03-27 Kabi Pharmacia Ab Pharmaceutical composition containing a defined lipid system
CA2132342A1 (en) 1992-04-06 1993-10-14 Kenneth F. Buechler Novel opiate derivatives and protein and polypeptide opiate derivative conjugates and labels
US6670178B1 (en) * 1992-07-10 2003-12-30 Transkaryotic Therapies, Inc. In Vivo production and delivery of insulinotropin for gene therapy
KR950702628A (ko) 1992-08-01 1995-07-29 치세이 라 항알레르기 조성물(Antiallergic agent)
US5334761A (en) 1992-08-28 1994-08-02 Life Technologies, Inc. Cationic lipids
US5461223A (en) 1992-10-09 1995-10-24 Eastman Kodak Company Bar code detecting circuitry
US5300022A (en) 1992-11-12 1994-04-05 Martin Klapper Urinary catheter and bladder irrigation system
US5496362A (en) 1992-11-24 1996-03-05 Cardiac Pacemakers, Inc. Implantable conformal coil patch electrode with multiple conductive elements for cardioversion and defibrillation
US5552155A (en) 1992-12-04 1996-09-03 The Liposome Company, Inc. Fusogenic lipsomes and methods for making and using same
US5716395A (en) 1992-12-11 1998-02-10 W.L. Gore & Associates, Inc. Prosthetic vascular graft
KR100283601B1 (ko) 1993-02-19 2001-03-02 아만 히데아키 글리세롤 유도체, 디바이스 및 의약 조성물
US5395619A (en) 1993-03-03 1995-03-07 Liposome Technology, Inc. Lipid-polymer conjugates and liposomes
US5697953A (en) 1993-03-13 1997-12-16 Angeion Corporation Implantable cardioverter defibrillator having a smaller displacement volume
US5624976A (en) 1994-03-25 1997-04-29 Dentsply Gmbh Dental filling composition and method
US5314430A (en) 1993-06-24 1994-05-24 Medtronic, Inc. Atrial defibrillator employing transvenous and subcutaneous electrodes and method of use
DE4325848A1 (de) 1993-07-31 1995-02-02 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von N-(2-Hydroxyethyl)-piperazin
EP1064980B1 (en) 1993-10-06 2003-02-12 The Kansai Electric Power Co., Inc. Method for removing carbon dioxide from combustion exhaust gas
US5609624A (en) 1993-10-08 1997-03-11 Impra, Inc. Reinforced vascular graft and method of making same
SE9303481L (sv) 1993-10-22 1995-04-23 Berol Nobel Ab Hygienkomposition
WO1995013033A1 (en) 1993-11-08 1995-05-18 Lazarus Harrison M Intraluminal vascular graft and method
CA2176714A1 (en) 1993-11-24 1995-06-01 Valentis, Inc. Amphiphilic derivatives of piperazine
US5595756A (en) 1993-12-22 1997-01-21 Inex Pharmaceuticals Corporation Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents
US5464924A (en) 1994-01-07 1995-11-07 The Dow Chemical Company Flexible poly(amino ethers) for barrier packaging
US5844107A (en) 1994-03-23 1998-12-01 Case Western Reserve University Compacted nucleic acids and their delivery to cells
US6077835A (en) 1994-03-23 2000-06-20 Case Western Reserve University Delivery of compacted nucleic acid to cells
WO1995027478A1 (en) 1994-04-12 1995-10-19 The Liposome Company, Inc. Fusogenic liposomes and methods of making and using same
US5795790A (en) 1994-07-20 1998-08-18 Cytotherapeutics, Inc. Method for controlling proliferation and differentiation of cells encapsulated within bioartificial organs
US5885613A (en) 1994-09-30 1999-03-23 The University Of British Columbia Bilayer stabilizing components and their use in forming programmable fusogenic liposomes
US5820873A (en) 1994-09-30 1998-10-13 The University Of British Columbia Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof
US5641665A (en) 1994-11-28 1997-06-24 Vical Incorporated Plasmids suitable for IL-2 expression
US6071890A (en) 1994-12-09 2000-06-06 Genzyme Corporation Organ-specific targeting of cationic amphiphile/DNA complexes for gene therapy
US5965434A (en) 1994-12-29 1999-10-12 Wolff; Jon A. Amphipathic PH sensitive compounds and delivery systems for delivering biologically active compounds
US6485726B1 (en) 1995-01-17 2002-11-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
US5830430A (en) 1995-02-21 1998-11-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Cationic lipids and the use thereof
EP0822835A1 (en) 1995-04-17 1998-02-11 Imarx Pharmaceutical Corp. Hybrid magnetic resonance contrast agents
US5772694A (en) 1995-05-16 1998-06-30 Medical Carbon Research Institute L.L.C. Prosthetic heart valve with improved blood flow
US5783383A (en) 1995-05-23 1998-07-21 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method of detecting cytomegalovirus (CMV)
US5705385A (en) 1995-06-07 1998-01-06 Inex Pharmaceuticals Corporation Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5981501A (en) 1995-06-07 1999-11-09 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers
US5976567A (en) 1995-06-07 1999-11-02 Inex Pharmaceuticals Corp. Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5609629A (en) 1995-06-07 1997-03-11 Med Institute, Inc. Coated implantable medical device
US7422902B1 (en) 1995-06-07 2008-09-09 The University Of British Columbia Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5607385A (en) 1995-08-17 1997-03-04 Medtronic, Inc. Device and algorithm for a combined cardiomyostimulator and a cardiac pacer-carioverter-defibrillator
US5744335A (en) 1995-09-19 1998-04-28 Mirus Corporation Process of transfecting a cell with a polynucleotide mixed with an amphipathic compound and a DNA-binding protein
FR2740978B1 (fr) 1995-11-10 1998-01-02 Ela Medical Sa Dispositif medical actif du type defibrillateur/cardioverteur implantable
US5874105A (en) 1996-01-31 1999-02-23 Collaborative Laboratories, Inc. Lipid vesicles formed with alkylammonium fatty acid salts
WO1997030167A1 (en) * 1996-02-13 1997-08-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method of treating liver disorders
US5780286A (en) * 1996-03-14 1998-07-14 Smithkline Beecham Corporation Arginase II
WO1997038010A2 (en) 1996-04-11 1997-10-16 The University Of British Columbia Fusogenic liposomes
US6258792B1 (en) * 1996-04-12 2001-07-10 University Of Pittsburgh Cationic cholesteryl derivatives containing cyclic polar groups
US5935936A (en) 1996-06-03 1999-08-10 Genzyme Corporation Compositions comprising cationic amphiphiles and co-lipids for intracellular delivery of therapeutic molecules
US5913848A (en) 1996-06-06 1999-06-22 Luther Medical Products, Inc. Hard tip over-the-needle catheter and method of manufacturing the same
US5677124A (en) 1996-07-03 1997-10-14 Ambion, Inc. Ribonuclease resistant viral RNA standards
US5736573A (en) 1996-07-31 1998-04-07 Galat; Alexander Lipid and water soluble derivatives of drugs
US7288266B2 (en) * 1996-08-19 2007-10-30 United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Liposome complexes for increased systemic delivery
DK0941066T3 (da) 1996-08-26 2004-02-23 Transgene Sa Kationisk lipid-nukleinsyre-komplekser
CN1138533C (zh) 1996-09-13 2004-02-18 利普森有限公司 脂质体
TW520297B (en) 1996-10-11 2003-02-11 Sequus Pharm Inc Fusogenic liposome composition and method
DE69735382T2 (de) 1996-11-04 2006-11-30 Qiagen Gmbh Kationische reagenzien zür transfektion
US6887665B2 (en) 1996-11-14 2005-05-03 Affymetrix, Inc. Methods of array synthesis
US6204297B1 (en) 1996-11-26 2001-03-20 Rhodia Inc. Nonionic gemini surfactants
JPH10197978A (ja) 1997-01-09 1998-07-31 Mitsubishi Paper Mills Ltd ハロゲン化銀写真感光材料
EP0853123A1 (de) 1997-01-10 1998-07-15 Roche Diagnostics GmbH Reinigung von DNA durch Cross-Flow-Filtration
FR2760193B1 (fr) 1997-02-28 1999-05-28 Transgene Sa Lipides et complexes de lipides cationiques et de substances actives, notamment pour la transfection de cellules
US5837283A (en) 1997-03-12 1998-11-17 The Regents Of The University Of California Cationic lipid compositions targeting angiogenic endothelial cells
AU733310C (en) 1997-05-14 2001-11-29 University Of British Columbia, The High efficiency encapsulation of charged therapeutic agents in lipid vesicles
US20030104044A1 (en) 1997-05-14 2003-06-05 Semple Sean C. Compositions for stimulating cytokine secretion and inducing an immune response
US6835395B1 (en) 1997-05-14 2004-12-28 The University Of British Columbia Composition containing small multilamellar oligodeoxynucleotide-containing lipid vesicles
JPH115786A (ja) 1997-06-13 1999-01-12 Pola Chem Ind Inc 新規アミノヒドロキシプロピルピペラジン誘導体
US6067471A (en) 1998-08-07 2000-05-23 Cardiac Pacemakers, Inc. Atrial and ventricular implantable cardioverter-defibrillator and lead system
JPH1180142A (ja) 1997-09-05 1999-03-26 Pola Chem Ind Inc ジフェニルアルキル化合物の製造法
US20030083272A1 (en) 1997-09-19 2003-05-01 Lahive & Cockfield, Llp Sense mrna therapy
US6734171B1 (en) 1997-10-10 2004-05-11 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating nucleic acids in lipid bilayers
CA2309727C (en) 1997-10-10 2012-12-04 Inex Pharmaceuticals Corporation Methods for encapsulating nucleic acids in lipid bilayers
US6165763A (en) 1997-10-30 2000-12-26 Smithkline Beecham Corporation Ornithine carbamoyltransferase
US6096075A (en) 1998-01-22 2000-08-01 Medical Carbon Research Institute, Llc Prosthetic heart valve
US6617171B2 (en) 1998-02-27 2003-09-09 The General Hospital Corporation Methods for diagnosing and treating autoimmune disease
US6271209B1 (en) 1998-04-03 2001-08-07 Valentis, Inc. Cationic lipid formulation delivering nucleic acid to peritoneal tumors
US6176877B1 (en) 1998-04-20 2001-01-23 St. Jude Medical, Inc. Two piece prosthetic heart valve
DE19822602A1 (de) 1998-05-20 1999-11-25 Goldschmidt Ag Th Verfahren zur Herstellung von Polyaminosäureestern durch Veresterung von sauren Polyaminosäuren oder Umesterung von Polyaminosäureestern
NO313244B1 (no) 1998-07-08 2002-09-02 Crew Dev Corp Fremgangsmåte for isolering og produksjon av magnesitt eller magnesiumklorid
US6055454A (en) 1998-07-27 2000-04-25 Cardiac Pacemakers, Inc. Cardiac pacemaker with automatic response optimization of a physiologic sensor based on a second sensor
JP4898991B2 (ja) 1998-08-20 2012-03-21 クック メディカル テクノロジーズ エルエルシー 被覆付植込式医療装置
US6210892B1 (en) 1998-10-07 2001-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Alteration of cellular behavior by antisense modulation of mRNA processing
WO2000030444A1 (en) 1998-11-25 2000-06-02 Vanderbilt University Cationic liposomes for gene transfer
US6287951B1 (en) 1998-12-07 2001-09-11 Motorola Inc. Process for forming a combination hardmask and antireflective layer
WO2000034239A2 (en) * 1998-12-08 2000-06-15 Merck & Co., Inc. Inhibitors of prenyl-protein transferase
US6248725B1 (en) 1999-02-23 2001-06-19 Amgen, Inc. Combinations and methods for promoting in vivo liver cell proliferation and enhancing in vivo liver-directed gene transduction
US6379698B1 (en) 1999-04-06 2002-04-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Fusogenic lipids and vesicles
JP5117648B2 (ja) 1999-04-20 2013-01-16 ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア カチオン性ｐｅｇ脂質および使用方法。
US6169923B1 (en) 1999-04-23 2001-01-02 Pacesetter, Inc. Implantable cardioverter-defibrillator with automatic arrhythmia detection criteria adjustment
ATE340592T1 (de) 1999-04-23 2006-10-15 Alza Corp Konjugate enthaltend eine spaltbare bindung zur anwendung in einem liposom
RU2262510C9 (ru) 1999-05-19 2006-04-20 Лексиген Фармасьютикэлс Корп. Слитый белок, обладающий биологической активностью интерферона-альфа, димерный слитый белок, фармацевтическая композиция, их содержащая, молекула днк (варианты) и способ адресования интерферона-альфа в ткани печени
US6696424B1 (en) 1999-05-28 2004-02-24 Vical Incorporated Cytofectin dimers and methods of use thereof
US6346382B1 (en) * 1999-06-01 2002-02-12 Vanderbilt University Human carbamyl phosphate synthetase I polymorphism and diagnostic methods related thereto
EP1202714A1 (en) 1999-07-16 2002-05-08 Purdue Research Foundation Vinyl ether lipids with cleavable hydrophilic headgroups
CA2378944A1 (en) 1999-07-23 2001-02-01 Genentech, Inc. Method for rnase- and organic solvent-free plasmid dna purification using tangential flow filtration
US6358278B1 (en) 1999-09-24 2002-03-19 St. Jude Medical, Inc. Heart valve prosthesis with rotatable cuff
US6371983B1 (en) 1999-10-04 2002-04-16 Ernest Lane Bioprosthetic heart valve
US7060291B1 (en) * 1999-11-24 2006-06-13 Transave, Inc. Modular targeted liposomal delivery system
CA2395636A1 (en) 1999-12-30 2001-07-12 Novartis Ag Novel colloid synthetic vectors for gene therapy
WO2001060414A2 (en) 2000-02-17 2001-08-23 Genzyme Corporation Genetic modification of the lung as a portal for gene delivery
US6370434B1 (en) 2000-02-28 2002-04-09 Cardiac Pacemakers, Inc. Cardiac lead and method for lead implantation
US6565960B2 (en) 2000-06-01 2003-05-20 Shriners Hospital Of Children Polymer composite compositions
WO2002000870A2 (en) 2000-06-26 2002-01-03 Christian Plank Method for transfecting cells using a magnetic field
IL138474A0 (en) 2000-09-14 2001-10-31 Epox Ltd Highly branched water-soluble polyamine oligomers, process for their preparation and applications thereof
USRE43612E1 (en) 2000-10-10 2012-08-28 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable poly(β-amino esters) and uses thereof
US7427394B2 (en) 2000-10-10 2008-09-23 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable poly(β-amino esters) and uses thereof
US6998115B2 (en) 2000-10-10 2006-02-14 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable poly(β-amino esters) and uses thereof
ATE354350T1 (de) 2000-10-25 2007-03-15 Univ British Columbia Lipidformulierungen zur zielgerichteten abgabe
GB0028361D0 (en) 2000-11-21 2001-01-03 Glaxo Group Ltd Method of separating extra chromosomal dna from other cellular components
US20020094528A1 (en) 2000-11-29 2002-07-18 Salafsky Joshua S. Method and apparatus using a surface-selective nonlinear optical technique for detection of probe-target interations
JP2002167368A (ja) 2000-12-01 2002-06-11 Nitto Denko Corp アルキル置換デンドリマーおよびその製造法
US20050004058A1 (en) * 2000-12-07 2005-01-06 Patrick Benoit Sequences upstream of the carp gene, vectors containing them and uses thereof
DE10109897A1 (de) * 2001-02-21 2002-11-07 Novosom Ag Fakultativ kationische Liposomen und Verwendung dieser
DE10109898A1 (de) * 2001-02-21 2002-09-05 Novosom Gmbh Lipide mit veränderlicher Ladung
US20020192721A1 (en) 2001-03-28 2002-12-19 Engeneos, Inc. Modular molecular clasps and uses thereof
TW588032B (en) 2001-04-23 2004-05-21 Shinetsu Chemical Co New tertiary amine compound having ester structure and method for producing the same
US6585410B1 (en) 2001-05-03 2003-07-01 The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration Radiant temperature nulling radiometer
ES2340499T3 (es) 2001-06-05 2010-06-04 Curevac Gmbh Arnm de antigeno tumoral estabilizado con un contenido de g/c aumentado.
EP2447370B1 (en) 2001-09-28 2018-07-18 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. MicroRNA molecules
WO2003040288A2 (de) 2001-11-09 2003-05-15 Bayer Healthcare Ag Isotopencodierte affinitätsmarker 3
DE10162480A1 (de) 2001-12-19 2003-08-07 Ingmar Hoerr Die Applikation von mRNA für den Einsatz als Therapeutikum gegen Tumorerkrankungen
DE10207178A1 (de) 2002-02-19 2003-09-04 Novosom Ag Komponenten für die Herstellung amphoterer Liposomen
DE10214983A1 (de) 2002-04-04 2004-04-08 TransMIT Gesellschaft für Technologietransfer mbH Vernebelbare Liposomen und ihre Verwendung zur pulmonalen Applikation von Wirkstoffen
US20030215395A1 (en) 2002-05-14 2003-11-20 Lei Yu Controllably degradable polymeric biomolecule or drug carrier and method of synthesizing said carrier
US7601367B2 (en) 2002-05-28 2009-10-13 Mirus Bio Llc Compositions and processes using siRNA, amphipathic compounds and polycations
EP1519714B1 (en) 2002-06-28 2010-10-20 Protiva Biotherapeutics Inc. Method and apparatus for producing liposomes
DE10229872A1 (de) 2002-07-03 2004-01-29 Curevac Gmbh Immunstimulation durch chemisch modifizierte RNA
US20040028804A1 (en) 2002-08-07 2004-02-12 Anderson Daniel G. Production of polymeric microarrays
JP2005536214A (ja) 2002-08-22 2005-12-02 セルトラン リミテッド 細胞培養表面
WO2004041912A1 (de) 2002-11-04 2004-05-21 Ge Bayer Silicones Gmbh & Co. Kg Lineare polyamino- und/oder polyammonium-polysiloxancopolymere i
WO2004048345A2 (en) 2002-11-22 2004-06-10 Novo Nordisk A/S 2,5-diketopiperazines for the treatment of obesity
US7169892B2 (en) * 2003-01-10 2007-01-30 Astellas Pharma Inc. Lipid-peptide-polymer conjugates for long blood circulation and tumor specific drug delivery systems
US8054291B2 (en) 2003-01-20 2011-11-08 Asahi Kasei Emd Corporation Pointing device
AU2004217437B2 (en) 2003-03-05 2009-11-19 Senesco Technologies, Inc. Use of antisense oligonucleotides or siRNA to suppress expression of eIF-5A1
US20040224912A1 (en) 2003-05-07 2004-11-11 Isis Pharmaceuticals Inc. Modulation of PAI-1 mRNA-binding protein expression
US7619017B2 (en) 2003-05-19 2009-11-17 Wacker Chemical Corporation Polymer emulsions resistant to biodeterioration
EP1644479A4 (en) 2003-06-16 2008-04-23 Mark W Grinstaff FUNCTIONAL SYNTHETIC MOLECULES AND MACROMOLECULES FOR GENERAL FEEDING
EP1664316B1 (en) 2003-09-15 2012-08-29 Protiva Biotherapeutics Inc. Polyethyleneglycol-modified lipid compounds and uses thereof
EP1675943A4 (en) 2003-09-15 2007-12-05 Massachusetts Inst Technology SYNTHESIS OF BIOMATERIALS ARRANGED IN AN ARRAY IN THE NANOLITE ASSEMBLY AND SCREENING THEREOF
US20050069590A1 (en) 2003-09-30 2005-03-31 Buehler Gail K. Stable suspensions for medicinal dosages
PT1685251E (pt) * 2003-10-10 2014-04-15 Powderject Vaccines Inc Construções de ácido nucleico
WO2005037226A2 (en) 2003-10-17 2005-04-28 Georgia Tech Research Corporation Genetically engineered enteroendocrine cells for treating glucose-related metabolic disorders
WO2005044782A1 (ja) 2003-11-10 2005-05-19 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha ジイモニウム塩化合物およびその用途
US7022214B2 (en) 2004-01-21 2006-04-04 Bio-Rad Laboratories, Inc. Carrier ampholytes of high pH range
US7556684B2 (en) 2004-02-26 2009-07-07 Construction Research & Technology Gmbh Amine containing strength improvement admixture
US20060228404A1 (en) 2004-03-04 2006-10-12 Anderson Daniel G Compositions and methods for treatment of hypertrophic tissues
JP4764426B2 (ja) * 2004-06-07 2011-09-07 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド カチオン性脂質および使用方法
CA2569664C (en) 2004-06-07 2013-07-16 Protiva Biotherapeutics, Inc. Lipid encapsulated interfering rna
US7670595B2 (en) 2004-06-28 2010-03-02 Merck Patent Gmbh Fc-interferon-beta fusion proteins
GB0418172D0 (en) 2004-08-13 2004-09-15 Ic Vec Ltd Vector
DE102004043342A1 (de) 2004-09-08 2006-03-09 Bayer Materialscience Ag Blockierte Polyurethan-Prepolymere als Klebstoffe
WO2006048329A1 (en) 2004-11-05 2006-05-11 Novosom Ag Improvements in or relating to pharmaceutical compositions comprising an oligonucleotide as an active agent
GB0502482D0 (en) 2005-02-07 2005-03-16 Glaxo Group Ltd Novel compounds
WO2007086881A2 (en) 2005-02-14 2007-08-02 Sirna Therapeutics, Inc. Cationic lipids and formulated molecular compositions containing them
EP1869106B1 (en) 2005-03-28 2014-06-25 Dendritic Nanotechnologies, Inc. Janus dendrimers and dendrons
WO2006138380A2 (en) 2005-06-15 2006-12-28 Massachusetts Institute Of Technology Amine-containing lipids and uses thereof
PL2578685T3 (pl) 2005-08-23 2020-01-31 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Rna zawierający zmodyfikowane nukleozydy i sposoby jego zastosowania
US9012219B2 (en) 2005-08-23 2015-04-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania RNA preparations comprising purified modified RNA for reprogramming cells
WO2007031091A2 (en) 2005-09-15 2007-03-22 Santaris Pharma A/S Rna antagonist compounds for the modulation of p21 ras expression
CN101346393B (zh) 2005-11-02 2015-07-22 普洛体维生物治疗公司 修饰的siRNA分子及其应用
US7238791B1 (en) 2005-12-16 2007-07-03 Roche Diagnostics Operations, Inc. 6-monoacetylmorphine derivatives useful in immunoassay
US20090221684A1 (en) 2005-12-22 2009-09-03 Trustees Of Boston University Molecules for Gene Delivery and Gene Therapy, and Methods of Use Thereof
CN100569877C (zh) 2005-12-30 2009-12-16 财团法人工业技术研究院 含多uv交联反应基的分枝状结构化合物及其应用
EP2010659B1 (en) 2006-04-14 2014-06-18 CellScript, Inc. Kits and methods for generating 5' capped RNA
US9085778B2 (en) 2006-05-03 2015-07-21 VL27, Inc. Exosome transfer of nucleic acids to cells
US20070275923A1 (en) 2006-05-25 2007-11-29 Nastech Pharmaceutical Company Inc. CATIONIC PEPTIDES FOR siRNA INTRACELLULAR DELIVERY
US8808681B2 (en) 2006-06-05 2014-08-19 Massachusetts Institute Of Technology Crosslinked, degradable polymers and uses thereof
US20090186805A1 (en) 2006-07-06 2009-07-23 Aaron Thomas Tabor Compositions and Methods for Genetic Modification of Cells Having Cosmetic Function to Enhance Cosmetic Appearance
FR2904144A1 (fr) 2006-07-19 2008-01-25 St Microelectronics Rousset Procede de fabrication d'un wafer de semi-conducteur comprenant un filtre optique integre
ES2293834B1 (es) 2006-07-20 2009-02-16 Consejo Superior Investig. Cientificas Compuesto con actividad inhibidora de las interacciones ubc13-uev, composiciones farmaceuticas que lo comprenden y sus aplicaciones terapeuticas.
EP2046266A4 (en) 2006-07-21 2009-11-04 Massachusetts Inst Technology ENDMODICIFIED POLY (BETA AMINO ESTER) AND ITS USE
CA2927045A1 (en) 2006-10-03 2008-04-10 Muthiah Manoharan Lipid containing formulations
CA2665620A1 (en) 2006-10-12 2008-04-17 Copernicus Therapeutics Inc. Codon optimized cftr
DE102006051516A1 (de) 2006-10-31 2008-05-08 Curevac Gmbh (Basen-)modifizierte RNA zur Expressionssteigerung eines Proteins
WO2008140615A2 (en) 2006-12-21 2008-11-20 Novozymes, Inc. Modified messenger rna stabilizing sequences for expressing genes in bacterial cells
DE102007001370A1 (de) 2007-01-09 2008-07-10 Curevac Gmbh RNA-kodierte Antikörper
WO2008097926A2 (en) * 2007-02-02 2008-08-14 Yale University Transient transfection with rna
WO2008113364A2 (en) 2007-03-20 2008-09-25 Recepticon Aps Amino derivatives to prevent nephrotoxicity and cancer
JP5186126B2 (ja) 2007-03-29 2013-04-17 公益財団法人地球環境産業技術研究機構 新規トリアジン誘導体ならびにその製法およびそのガス分離膜としての用途
US20080262077A1 (en) 2007-04-18 2008-10-23 Shorr Robert G L Pharmaceutical formulations containing lipoic acid derivatives
WO2008137470A1 (en) 2007-05-01 2008-11-13 Pgr-Solutions Multi-chain lipophilic polyamines
HUE040417T2 (hu) 2007-05-04 2019-03-28 Marina Biotech Inc Aminosavlipidek és alkalmazásuk
US20090163705A1 (en) 2007-05-21 2009-06-25 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Cationic lipids
WO2009030254A1 (en) 2007-09-04 2009-03-12 Curevac Gmbh Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation
WO2009036280A1 (en) 2007-09-12 2009-03-19 Copernicus Therapeutics, Inc. Long-term in vivo transgene expression
WO2009046220A2 (en) 2007-10-02 2009-04-09 Mdrna, Inc. Lipopeptides for delivery of nucleic acids
EP2500427B1 (en) 2007-11-22 2014-07-30 Japan Science and Technology Agency Translation regulation system in cell or artifical cell model by using low-molecular-weight RNA
WO2009073809A2 (en) 2007-12-04 2009-06-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides
CA2710983A1 (en) 2007-12-27 2009-10-01 The Ohio State University Research Foundation Lipid nanoparticle compositions and methods of making and using the same
ES2535419T3 (es) 2007-12-27 2015-05-11 Protiva Biotherapeutics Inc. Silenciamiento de expresión de quinasa tipo polo usando ARN interferente
WO2009088891A1 (en) 2008-01-02 2009-07-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Screening method for selected amino lipid-containing compositions
WO2009086558A1 (en) 2008-01-02 2009-07-09 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Improved compositions and methods for the delivery of nucleic acids
CA2721183C (en) 2008-04-11 2019-07-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components
CA2721333C (en) 2008-04-15 2020-12-01 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for nucleic acid delivery
US20090263407A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Abbott Laboratories Cationic Lipids and Uses Thereof
WO2009127230A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Curevac Gmbh MODIFIED (m)RNA FOR SUPPRESSING OR AVOIDING AN IMMUNOSTIMULATORY RESPONSE AND IMMUNOSUPPRESSIVE COMPOSITION
US8222221B2 (en) 2008-06-04 2012-07-17 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Modulation of gene expression through endogenous small RNA targeting of gene promoters
US20100035249A1 (en) 2008-08-05 2010-02-11 Kabushiki Kaisha Dnaform Rna sequencing and analysis using solid support
JP5492207B2 (ja) 2008-08-27 2014-05-14 ライフ テクノロジーズ コーポレーション 生物学的サンプルの処理装置および処理方法
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
CA2740000C (en) 2008-10-09 2017-12-12 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids
JP2012505913A (ja) 2008-10-16 2012-03-08 マリーナ バイオテック，インコーポレイテッド 遺伝子発現を抑制する治療におけるリポソームによる効率的な送達のプロセスおよび組成物
US9080211B2 (en) 2008-10-24 2015-07-14 Epicentre Technologies Corporation Transposon end compositions and methods for modifying nucleic acids
WO2010062322A2 (en) 2008-10-27 2010-06-03 Massachusetts Institute Of Technology Modulation of the immune response
EP3269395A1 (en) 2008-11-07 2018-01-17 Massachusetts Institute Of Technology Aminoalcohol lipidoids and uses thereof
CN111808084A (zh) 2008-11-10 2020-10-23 阿布特斯生物制药公司 用于递送治疗剂的新型脂质和组合物
US20110305769A1 (en) 2008-11-17 2011-12-15 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Branched cationic lipids for nucleic acids delivery system
US9023820B2 (en) 2009-01-26 2015-05-05 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing apolipoprotein C-III expression
US20100222489A1 (en) 2009-02-27 2010-09-02 Jiang Dayue D Copolymer composition, membrane article, and methods thereof
AU2010223967B2 (en) 2009-03-12 2015-07-30 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of Eg5 and VEGF genes
CN102334237B (zh) 2009-04-02 2015-05-13 西蒙公司 电信接线板
US20130053426A1 (en) 2009-04-17 2013-02-28 Yiqi Seow Composition For Delivery Of Genetic Material
SG10201911942UA (en) 2009-05-05 2020-02-27 Muthiah Manoharan Lipid compositions
KR101766408B1 (ko) 2009-06-10 2017-08-10 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 향상된 지질 조성물
US9051567B2 (en) 2009-06-15 2015-06-09 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Methods for increasing efficacy of lipid formulated siRNA
JP5894913B2 (ja) 2009-06-15 2016-03-30 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． Ｐｃｓｋ９遺伝子を標的とする、脂質で製剤化されたｄｓｒｎａ
EP2449106B1 (en) 2009-07-01 2015-04-08 Protiva Biotherapeutics Inc. Compositions and methods for silencing apolipoprotein b
US8569256B2 (en) 2009-07-01 2013-10-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
US9018187B2 (en) 2009-07-01 2015-04-28 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
US8716464B2 (en) 2009-07-20 2014-05-06 Thomas W. Geisbert Compositions and methods for silencing Ebola virus gene expression
US9040701B2 (en) 2009-07-30 2015-05-26 Laboratorios Salvat, S.A. Apaf-1 inhibitor compounds
CA2769670C (en) 2009-07-31 2018-10-02 Ethris Gmbh Rna with a combination of unmodified and modified nucleotides for protein expression
DE102009043342A1 (de) 2009-09-29 2011-03-31 Bayer Technology Services Gmbh Stoffe für selbstorganisierte Träger zur kontrollierten Freisetzung eines Wirkstoffs
EP3318248B1 (en) 2009-12-01 2019-04-10 Translate Bio, Inc. Delivery of mrna for the augmentation of proteins and enzymes in human genetic diseases
US8808982B2 (en) 2009-12-07 2014-08-19 Cellscript, Llc Compositions and methods for reprogramming eukaryotic cells
EP3494963A1 (en) 2009-12-18 2019-06-12 The University of British Columbia Methods and compositions for delivery of nucleic acids
EP2338520A1 (de) 2009-12-21 2011-06-29 Ludwig Maximilians Universität Konjugat mit Zielfindungsligand und dessen Verwendung
CA3009891C (en) 2009-12-23 2020-09-15 Novartis Ag Lipids, lipid compositions, and methods of using them
US20130123338A1 (en) 2010-05-12 2013-05-16 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel cationic lipids and methods of use thereof
KR20190039347A (ko) 2010-06-03 2019-04-10 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 활성제의 전달을 위한 생분해성 지질
CN101863544B (zh) 2010-06-29 2011-09-28 湖南科技大学 一种氰尿酸基重金属螯合絮凝剂及其制备方法
US9006417B2 (en) 2010-06-30 2015-04-14 Protiva Biotherapeutics, Inc. Non-liposomal systems for nucleic acid delivery
WO2012016184A2 (en) 2010-07-30 2012-02-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for delivery of active agents
WO2012019168A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2012019630A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded protein
US9193827B2 (en) 2010-08-26 2015-11-24 Massachusetts Institute Of Technology Poly(beta-amino alcohols), their preparation, and uses thereof
EP2625189B1 (en) 2010-10-01 2018-06-27 ModernaTX, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US8853377B2 (en) 2010-11-30 2014-10-07 Shire Human Genetic Therapies, Inc. mRNA for use in treatment of human genetic diseases
EP2691443B1 (en) 2011-03-28 2021-02-17 Massachusetts Institute of Technology Conjugated lipomers and uses thereof
AU2012236099A1 (en) 2011-03-31 2013-10-03 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
WO2012133737A1 (ja) 2011-03-31 2012-10-04 公益財団法人地球環境産業技術研究機構 架橋性アミン化合物、該化合物を用いた高分子膜及びその製造方法
CA2835428A1 (en) 2011-05-17 2012-11-22 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof for non-human vertebrates
EP2532649B1 (en) 2011-06-07 2015-04-08 Incella GmbH Amino lipids, their synthesis and uses thereof
RU2013154295A (ru) 2011-06-08 2015-07-20 Шир Хьюман Дженетик Терапис, Инк. КОМПОЗИЦИИ ЛИПИДНЫХ НАНОЧАСТИЦ И СПОСОБЫ ДЛЯ ДОСТАВКИ мРНК
ES2795110T3 (es) 2011-06-08 2020-11-20 Translate Bio Inc Lípidos escindibles
WO2013003475A1 (en) 2011-06-27 2013-01-03 Cellscript, Inc. Inhibition of innate immune response
WO2013039861A2 (en) 2011-09-12 2013-03-21 modeRNA Therapeutics Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP2755986A4 (en) 2011-09-12 2015-05-20 Moderna Therapeutics Inc MANIPULATED NUCLEIC ACIDS AND METHOD OF APPLICATION THEREFOR
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
JP2014530602A (ja) 2011-10-05 2014-11-20 プロティバ バイオセラピューティクス インコーポレイテッド アルデヒドデヒドロゲナーゼをサイレンシングするための組成物および方法
PE20181541A1 (es) 2011-10-27 2018-09-26 Massachusetts Inst Technology Derivados de aminoacidos funcionalizados en la terminal n capaces de formar microesferas encapsuladoras de farmaco
WO2013130161A1 (en) 2011-12-14 2013-09-06 modeRNA Therapeutics Methods of responding to a biothreat
WO2013090186A1 (en) 2011-12-14 2013-06-20 modeRNA Therapeutics Modified nucleic acids, and acute care uses thereof
CA3018046A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
CN104968354A (zh) 2011-12-21 2015-10-07 现代治疗公司 增加器官或器官外植体的活力或寿命的方法
WO2013101690A1 (en) 2011-12-29 2013-07-04 modeRNA Therapeutics Modified mrnas encoding cell-penetrating polypeptides
EP3144389B1 (en) 2011-12-30 2018-05-09 Cellscript, Llc Making and using in vitro-synthesized ssrna for introducing into mammalian cells to induce a biological or biochemical effect
EP2817287B1 (en) 2012-02-24 2018-10-03 Arbutus Biopharma Corporation Trialkyl cationic lipids and methods of use thereof
BR112014024131A2 (pt) 2012-03-29 2017-07-25 Shire Human Genetic Therapies lipídios catiônicos ionizáveis
AU2013237874B2 (en) 2012-03-29 2018-01-18 Translate Bio, Inc. Lipid-derived neutral nanoparticles
US20140275229A1 (en) 2012-04-02 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides encoding udp glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide a1
WO2013151665A2 (en) 2012-04-02 2013-10-10 modeRNA Therapeutics Modified polynucleotides for the production of proteins associated with human disease
US20150050354A1 (en) 2012-04-02 2015-02-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the treatment of otic diseases and conditions
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
CN104411338A (zh) 2012-04-02 2015-03-11 现代治疗公司 用于产生与人类疾病相关的生物制剂和蛋白质的修饰多核苷酸
US9254311B2 (en) 2012-04-02 2016-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US20150126589A1 (en) 2012-06-08 2015-05-07 Ethris Gmbh Pulmonary Delivery of Messenger RNA
WO2013185067A1 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Nuclease resistant polynucleotides and uses thereof
EP2858679B2 (en) 2012-06-08 2024-06-05 Translate Bio, Inc. Pulmonary delivery of mrna to non-lung target cells
WO2014028487A1 (en) 2012-08-13 2014-02-20 Massachusetts Institute Of Technology Amine-containing lipidoids and uses thereof
PL2922554T3 (pl) 2012-11-26 2022-06-20 Modernatx, Inc. Na zmodyfikowany na końcach
EP4331620A3 (en) 2012-12-07 2024-12-04 Translate Bio, Inc. Lipidic nanoparticles for mrna delivery
WO2014093574A1 (en) 2012-12-13 2014-06-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for altering cell phenotype
AU2013374345A1 (en) 2013-01-17 2015-08-06 Moderna Therapeutics, Inc. Signal-sensor polynucleotides for the alteration of cellular phenotypes
US20160022774A1 (en) 2013-03-12 2016-01-28 Moderna Therapeutics, Inc. Diagnosis and treatment of fibrosis
EP2968391A1 (en) 2013-03-13 2016-01-20 Moderna Therapeutics, Inc. Long-lived polynucleotide molecules
EP3750903A1 (en) 2013-03-14 2020-12-16 Translate Bio, Inc. Ribonucleic acids with 4'-thio-modified nucleotides and related methods
ES2708562T3 (es) 2013-03-14 2019-04-10 Translate Bio Inc Evaluación cuantitativa de la eficacidad de tapa de ARN mensajero
RS57739B1 (sr) 2013-03-14 2018-12-31 Translate Bio Inc Kompozicije cftr irnk i postupci i upotrebe u vezi sa njima
WO2014152211A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
JP6586075B2 (ja) 2013-03-14 2019-10-02 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド メッセンジャーｒｎａの精製方法
EP2970940B1 (en) 2013-03-14 2018-07-25 Translate Bio, Inc. Mrna therapeutic compositions and use to treat diseases and disorders
BR112015022505A2 (pt) 2013-03-14 2017-10-24 Shire Human Genetic Therapies avaliação quantitativa para eficiência do cap de rna mensageiro
BR112015022855A2 (pt) 2013-03-14 2017-11-07 Shire Human Genetic Therapies composições e método para produção de um anticorpo in vitro
EP3388834B1 (en) 2013-03-15 2020-04-15 Translate Bio, Inc. Synergistic enhancement of the delivery of nucleic acids via blended formulations
WO2014152031A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Ribonucleic acid purification
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
WO2014152027A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Manufacturing methods for production of rna transcripts
US10590161B2 (en) 2013-03-15 2020-03-17 Modernatx, Inc. Ion exchange purification of mRNA
US20160017313A1 (en) 2013-03-15 2016-01-21 Moderna Therapeutics, Inc. Analysis of mrna heterogeneity and stability
EP2971165A4 (en) 2013-03-15 2016-11-23 Moderna Therapeutics Inc DISSOLUTION OF DNA FRAGMENTS IN MRNA MANUFACTURING METHODS
WO2014144039A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Characterization of mrna molecules
WO2014179562A1 (en) 2013-05-01 2014-11-06 Massachusetts Institute Of Technology 1,3,5-triazinane-2,4,6-trione derivatives and uses thereof
WO2014210356A1 (en) 2013-06-26 2014-12-31 Massachusetts Institute Of Technology Multi-tailed lipids and uses thereof
CA2917348A1 (en) 2013-07-11 2015-01-15 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions comprising synthetic polynucleotides encoding crispr related proteins and synthetic sgrnas and methods of use
JP6620093B2 (ja) 2013-07-23 2019-12-11 アービュートゥス バイオファーマ コーポレイションＡｒｂｕｔｕｓ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ メッセンジャーｒｎａを送達するための組成物及び方法
WO2015034925A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
EP3041934A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
EP3052479A4 (en) 2013-10-02 2017-10-25 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
EP3052511A4 (en) 2013-10-02 2017-05-31 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
GB2519318B (en) 2013-10-16 2015-12-09 Univ Cape Town Stabilising kit
AU2014337156A1 (en) 2013-10-18 2016-05-12 Modernatx, Inc. Compositions and methods for tolerizing cellular systems
CN106413811A (zh) 2013-10-22 2017-02-15 夏尔人类遗传性治疗公司 精氨基琥珀酸合成酶缺乏症的mrna疗法
AU2014340149B2 (en) 2013-10-22 2020-12-24 Shire Human Genetic Therapies, Inc. CNS delivery of mRNA and uses thereof
JP6506749B2 (ja) 2013-10-22 2019-04-24 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド フェニルケトン尿症のためのｍＲＮＡ療法
EP3076994A4 (en) 2013-12-06 2017-06-07 Modernatx, Inc. Targeted adaptive vaccines
EP3053585A1 (en) 2013-12-13 2016-08-10 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
US20170143848A1 (en) 2014-03-24 2017-05-25 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Mrna therapy for the treatment of ocular diseases
US9850269B2 (en) 2014-04-25 2017-12-26 Translate Bio, Inc. Methods for purification of messenger RNA
BR112016030852A2 (pt) 2014-07-02 2018-01-16 Shire Human Genetic Therapies encapsulação de rna mensageiro
EP3201338B1 (en) 2014-10-02 2021-11-03 Arbutus Biopharma Corporation Compositions and methods for silencing hepatitis b virus gene expression
WO2016071857A1 (en) 2014-11-07 2016-05-12 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing ebola virus expression
WO2016077125A1 (en) 2014-11-10 2016-05-19 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules containing reduced uracil content and uses thereof
WO2016077123A1 (en) 2014-11-10 2016-05-19 Moderna Therapeutics, Inc. Multiparametric nucleic acid optimization
EP3247363A4 (en) 2015-01-21 2018-10-03 Moderna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions
EP3247398A4 (en) 2015-01-23 2018-09-26 Moderna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions
US20180245077A1 (en) 2015-03-20 2018-08-30 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for treating hypertriglyceridemia
WO2016164762A1 (en) 2015-04-08 2016-10-13 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor egf-a and intracellular domain mutants and methods of using the same
CA3043033A1 (en) 2016-11-10 2018-05-17 Translate Bio, Inc. Improved ice-based lipid nanoparticle formulation for delivery of mrna

Also Published As

Publication number Publication date
PT3338765T (pt) 2019-03-18
US10576166B2 (en) 2020-03-03
TR201901311T4 (tr) 2019-02-21
US20190192690A1 (en) 2019-06-27
HUE042177T2 (hu) 2019-06-28
US20220111076A1 (en) 2022-04-14
DK2506857T3 (en) 2018-05-07
ES2666559T3 (es) 2018-05-07
AU2010326132B2 (en) 2014-08-21
CA2782676C (en) 2021-06-15
US20220111074A1 (en) 2022-04-14
US10143758B2 (en) 2018-12-04
US20160287725A1 (en) 2016-10-06
NO2506857T3 (sr) 2018-07-14
ES2734973T3 (es) 2019-12-13
CA3077990A1 (en) 2011-06-09
LT3338765T (lt) 2019-06-25
NZ791007A (en) 2024-02-23
EP2506857A4 (en) 2014-04-02
LT2506857T (lt) 2018-07-10
HRP20180696T1 (hr) 2018-08-24
EP4115874A1 (en) 2023-01-11
EP2506857A1 (en) 2012-10-10
HUE038039T2 (hu) 2018-09-28
EP3338765B1 (en) 2018-12-19
US20240123084A1 (en) 2024-04-18
ME03327B (me) 2019-10-20
NZ600616A (en) 2014-11-28
HRP20190269T1 (hr) 2019-05-03
SMT201800220T1 (it) 2018-07-17
EP3318248A1 (en) 2018-05-09
CY1121516T1 (el) 2020-05-29
PT2506857T (pt) 2018-05-14
US20130195967A1 (en) 2013-08-01
EP3318248B1 (en) 2019-04-10
US20110244026A1 (en) 2011-10-06
NZ716192A (en) 2017-07-28
ME03091B (me) 2019-01-20
US20140294940A1 (en) 2014-10-02
US20220111075A1 (en) 2022-04-14
WO2011068810A1 (en) 2011-06-09
SI2506857T1 (en) 2018-08-31
NZ750556A (en) 2022-11-25
SMT201900113T1 (it) 2019-02-28
PL3338765T3 (pl) 2019-06-28
SI3338765T1 (sl) 2019-05-31
AU2010326132B9 (en) 2014-10-02
PL2506857T3 (pl) 2018-09-28
CA2782676A1 (en) 2011-06-09
NZ733634A (en) 2022-10-28
ES2713852T3 (es) 2019-05-24
RS58405B1 (sr) 2019-04-30
DK3338765T3 (en) 2019-03-04
EP2506857B1 (en) 2018-02-14
CY1120272T1 (el) 2019-07-10
NZ700688A (en) 2016-02-26
AU2010326132A1 (en) 2012-07-05
EP3338765A1 (en) 2018-06-27
EP3403647A1 (en) 2018-11-21
US20240342307A1 (en) 2024-10-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240123084A1 (en) Liver specific delivery of messenger rna
JP2024019459A (ja) 切断可能な脂質
US10130649B2 (en) Synergistic enhancement of the delivery of nucleic acids via blended formulations
RS59037B1 (sr) Kompozicije lipidnih nanočestica i postupci za isporuku irnk
AU2023201438A1 (en) Delivery of mRNA for the augmentation of proteins and enzymes in human genetic diseases
AU2018203895B2 (en) Delivery Of mRNA For The Augmentation Of Proteins And Enzymes In Human Genetic Diseases
HK40087251A (en) Delivery of mrna for the augmentation of proteins and enzymes in human genetic diseases
HK1177421B (en) Delivery of mrna for the augmentation of proteins and enzymes in human genetic diseases
HK1177421A (en) Delivery of mrna for the augmentation of proteins and enzymes in human genetic diseases