BE425307A - - Google Patents

Description

   <Desc/Clms Page number 1> 
 



  Procédé pour l'obtention de l'hormone gonadotrope à partir du sérum de juments gravides. 



   On sait déjà depuis quelques années que le sérum de ju- ments ayant une période déterminée de gravidité constitue une matière de départ excellente pour la préparation dé l'hormone gonadotrope. Cette propriété importante   a.donné   lieu à la publication de quelques procédés de   préparation (Goss   et Cole,   Endocrinology,Vol.15,   Page 214,1931; brevets anglais 440530 et brevet américain 2.027.446). 



   D'après le procédé de ce dernier brevet, on obtient l'hormone gonadotrope par extraction de l'hypophyse ou du pré-, cipité obtenu par précipitation par l'acétone des matières albuminoïdes du sérum de jument à l'aide de solutions alcoo- liques très diluées (6   %)   ayant une tension superficielle déterminée. 

 <Desc/Clms Page number 2> 

 



   Ce mode de préparation entraine des pertes en hormone, car cette dernière est retenue   d'une manière   très tenace par le précipité acétonique et exige en outre l'évaporation très fastidieuse à 40  C de solutions alcooliques à 6 %. 



   Le .procédé de la présente invention est notablement plus simple que les procédés connus jusqu'ici. Il n'exige pour son exécution que de l'alcool, de l'acide chlorhydrique dilué et un peu de lessive de soude diluée et donne un produit final de grahde pureté avec un rendement presque quantitatif. 



   Les recherches ayant conduit à la présente inventi.on ont permis de constater qu'on parvient à précipiter la majeure par- tie des matières albuminoides du sérum à-un pH égal à 5 par . addition de I Volume environ d'alcool tandis que l'hormone ,reste en solution et peut être retirée de cette solution à l'état très pur par précipitation par addition d'alcool avanta- geusement jusqu'à 77   %   des hormones brutes et dissolutions ré- pétées dans un alcali dilué et nouvelle précipitation par l'al- cool après neutralisation de la solution alcaline. Au lieu de l'extraction par les alcalis faibles, l'hormone peut être aussi extraite par l'eau seulement. Cette façon de procéder exige ce- pendant plus de temps et donne un rendement plus faible. 



   Exemple. 



   A 45 litres de sérum de juments gravides on ajoute 
2 litres d'acide chlorhydrique normal et 47,6 litres d'al- cool (à 96   %'en   volume). On élimine le précipité d'albumine ainsi produit et on mélange le filtrat avec un peu de chloru- re de sodium et avec 1,5 volumes d'alcool frais. Le deuxième précipité ainsi obtenu est recueilli soigneusement et contient la totalité de l'hormone, brute à l'état concentré. La purifi- cation subséquente s'effectue de la manière suivante: 
On délaie le produit dans 500 ce. d'eau ; on mélange avec de la lessive de soude diluée jusqu'à ce qu'on obtienne une faible alcalinité (pH-9); on élimine les parties insolubles 

 <Desc/Clms Page number 3> 

 par centrifugation, 'on neutralise, on mélange à 1 volume d'al- cool et on sépare de nouveau par centrifugation.

   On mélange enfin le produit de la centrifugation avec 1,5 volumes d'al- cool.   La   matière obtenue constitue   l'hormone déjà   épurée (deuxième phase),mais il faut encore répéter au moins quatre fois les opérations de dissolution et de précipitation du pro- duit brut. En pratique, on poursuit l'extraction jusqu'à ce qu'une solution alcoolique à   48 %   mélangée à 1,5 volumes d'al- cool ne donne plus qu'un précipité insignifiant. 



   Enfin la dernière purification du deuxième précipité (deuxième phase) est effectuée en délayant de nouveau le pré- cipité dans l'eau, en alcalinisant la solution ; en centrifu- geant et en traitant comme indiqué ci-dessus. 



   Le produit final obtenu de cette façon représente envi-   ron 7 grammes d'une poudre blanche qui est complètement solu-   ble dans l'eau et dont l'activité physiologique est d'une uni- té Evans dans 10 à 15   ( =   un millième de milligramme). L'unité Evans est la quantité d'hormone qui, injectée en trois doses, à des rats femelles de trois semaines produit le cinquième jour une augmentation quintuple des ovaires.

Claims (1)

1. R E S U M E .

   L'invention a pour objet: Un procédé pour l'obtention d'hormone gonadotrope à partir du sérum de juments gravides, remarquable notamment par les caractéristiques suivantes considérées séparément ou en com- binaison: a) on élimine la majeure partie de l'albumine du sérum à un pH égal à 5 par addition de I volume d'alcool, et on sépare l'hormone brute du filtrat par addition d'alcool. b) L'addition d'alcool s'opère jusqu'à. 77 % des hormones brutes. c) l'hormone est extraite du produit brut obtenu'suivant le <Desc/Clms Page number 4> paragraphe a qui précède en deux phases, en dissolvant l'hor- mone dans un alcali dilué, en mélangeant après neutralisation avec I volume d'alcool, en séparant de la partie insoluble et en recueillant finalement par addition de 1,5 volumes d'al- cool.