JPH0262859A - γ−ラクタム化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 Ｌ１上上皇上遣１ 本発明は血小板凝集阻害剤として有用な７−ラクタム化
合物に関する。

に未卑鼓（ 本発明の７−ラクタム化合物は新規の物質であって、類
似の構造を有する物質で血小板凝集阻害作用のあるもの
は、現在まで知られていない。

明が解決しようとする課題 本発明の目的は、アラキドン酸、アデノシンニノン酸、
コラーゲンによる血小板凝集に対して強い抑制作用を有
する新規の７−ラクタム化合物を提供することにある。

課題を　決するための手段 本発明者らは、新規な７−ラクタム化合物の探索を目的
に多数の菌株を土壌等より分離し、その菌株の培養物に
ついて種々検討した結果、ある種の菌株が新規な物質を
生産し、それが血小板凝集に対して強い抑制作用を有す
ることを見出し、本発明を完成した。

本発明は、下記式Ｉ で表わされる７−ラクタム化合物（以下、ｒＰＩ−０９
１」と略称する。）である。

本発明のＰＩ−０９１を生産する菌株は、発明者らが宮
城県宮城郡松島町の土壌より新たに分離した菌株であり
、微生物の名称「ベニシロマイセス・エスピーＦ−３４
３０（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ、ｓｐ、　Ｆ−３４３
０）、および微生物受託番号１微工研条寄第１５０３号
（ＦＥＲＭ　ＢＰ−１５０３）」として工業技術院微生
物工業技術研究所に寄託されている。この菌株を培養す
ることにより本発明の目的物質を得ることができる。

この菌株の菌学的性状を以下に示す。

１）形態 本菌株は、麦芽エキス寒天培地、バレイショ・ブドウ糖
寒天培地および合成ムコール寒天培地などで中程度に生
育し、分生子の着生も良好である。

麦芽エキス寒天培地に生育したコロニーを顕微鏡で観察
すると、菌糸は透明で隔壁を有し、高度に分枝しており
、分生子柄は主に基底菌糸より分岐し立ち上がり、１３
０〜２７５Ｘ１．８〜２．８μと変化に富み、先端に２
〜６個のマイアライドが輪生状に形成される。

マイアライドは円筒状（１１〜１４×２〜３μ〉で先端
は先細り（０，５〜０．８μ）となる。

はじめにマイアライドの頂端にフイアロ型分生子が１個
着生し、培養時間の経過とともに連鎖状となる。分生子
は普通２５〜３５個の連鎖をなしているが、それ以上の
長鎖も観察される。

電子顕微鏡で観察すると、分生子は亜球形からレモン形
で大きさは３．４〜４．２Ｘ２．２〜３．０μであり、
その表面はとげ状を呈している。厚膜胞子の形成は観察
されない。

２）培地上での生育状態 各種培地上で２８°Ｃ１１４日間培養したときの肉眼に
よる観察結果を第１表に示す。

３）生理的、生態的性質 （１）最適生育条件 本菌株の最適生育条件は、ＹｐＳｓ培地上においてｐＨ
６，８〜７．２、温度２０〜２８℃である。

（２）生育の範囲 本菌株の生育範囲は、ＹｐＳｓ培地においてｐ）１３．
８〜９．３、温度１０〜３０℃である。

（３）好気性、嫌気性の区別：　好気性以上の形態的特
徴および培養上の性状から本菌株がベニシロマイセス属
に属することは明らかとなったので、前記諸性状を基に
宇田用俊−５椿啓介編「菌類図鑑ヨ（１９７８年）およ
びサムソン（ＲＡ、　Ｓａｍｓｏｎ　）著の’Ｐａｅｃ
ｉｌｏｍｙｃｅｓ　ａｎｄ　ｓｏｍｅ　ａｌｌｉｅｄＨ
ｙｐｈｏｍｙｃｅｔｅｓ（Ｓｔｕｄｉｅｓ　Ｍｙｃｏｌ
、　、　６．　（１９７４））Ｊに報告されている多く
の既知菌株と比較検討した結果、本菌株は不完全菌の分
類土嚢も重要な特徴とされている分生子の形態およびマ
イアライドの形態等がベニシロマイセス命カーネス（Ｐ
ａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓｃａｒ’ｎｅｅｓ）に最も近い
性状を示すことが明らかとなった。

しかし、文献記載のベニシロマイセス・カーネスは生育
速度が本菌株に比べ遅く、また、コロニーは培養初期に
白色、培養後期に桃色がかると記述されているが、本菌
株では培養初期、後期とも白色を呈する点で異なる他、
分生子の形状でも若干具なっていた。しかしながら、ベ
ニシロマイセス属の中で分生子表面がとげ状を呈する種
は、ベニシロマイセス・カーネスのみであることから、
本菌株はベニシロマイセス・カーネスかその変種と考え
られるが、決定的な根拠がないのでベニシロマイセス・
エスピー・Ｆ−３４３０と命名した。

ＰＩ−０９１の生産は、大略、一般の醗酵生産物を生産
する場合に準じ、各種栄養物質を含む培地でベニシロマ
イセス・エスピー・Ｆ−３４３０を好気的条件下で培養
することにより行なう。

培地は主として液体培地を用い、炭素源としてはグルコ
ース、シュクロース、糖蜜、スターチなどを単独か、ま
たは混合して用いる。窒素源としては肉エキス、酵母エ
キス、大豆粉、ポリペプトンなどを単独か、または混合
して用いる。

その細末菌株の生育を助けＰＩ−０９１の生産を促進す
る有機物および無機塩を適当に添加することができる。

消泡剤としては、アデカノール、シリコンなど常用の消
泡剤を用いることができる。

培養方法は振とう培養、通気攪拌培養などの好気的培養
が適しておりｐＨ４〜８．２５〜３０”Ｃで２〜６日間
、望ましくはｐ　Ｈ６，８〜７．０．２５〜２８℃で５
日間培養する。

この培養により生産されたＰＩ−０９１を単離するには
、醗酵生産物を採取する一般的な方法に準じて行えばよ
い。

ＰＩ−０９１は主に培養濾液中に含有されるので、たと
えば次の方法が効果的である。

すなわち、培養終了後遠心分離または濾過により培養濾
液を得、この濾液を吸着ｖＩ４詣、たとえば、ダイヤイ
オンＨＰ−２０（商品名二三菱化最工業社製）に吸着さ
せたのち、低級アルコール、アセトンなどの有機溶媒で
′″ＰＩ−０９１を溶出させる。この溶出液を濃縮後、
酢酸エチノ呟ベンゼン、クロロホルムなどの非水溶性有
機溶媒に転溶し、これを濃縮してシロップ状とする。こ
のシロップを再度酢酸エチル、ベンゼン、クロロホルム
などの有機溶媒に溶解し、セファデックスＬＨ−２０（
商品名：ファルマシア社製）を用いたゲル濾過に付する
ことにより、ＰＩ−０９１を精製、単離することができ
る。

以上の精製方法で単離されたＰＩ−０９１は、下記の理
化学的性質を有している。

（ａ）元素分析値 Ｃ：６５．７０％、Ｈ：９．２３％、Ｎ：４．３７％（
ｂ）分子量 Ｆ　Ａ　Ｂ　−Ｍ　Ｓ　：　ｍ／ｚ　３１２（Ｍ＋　Ｈ
）”（ｃ）分子式　Ｃｒ　ｖ　Ｈ＊　＊　０４Ｎ（ｄ）
比旋光度 ［αコ”−−３２，８゜ （ｃ＝０．５．クロロホルム中） （ｅ）紫外線吸収スペクトル アセトニトリル中で測定した結果を第１図に示す。

（ｆ’）赤外線吸収スペクトル クロロホルム中で測定した結果を第２図に示す。

（ｇ）’Ｈ−ＮＭＲスペクトル 重クロロホルム中２００ＭＨｚで測定した結果を第３図
に示す。

（ｈ）溶剤に対する溶解性 水に不溶。メタノーノ呟エタノール、酢酸エチル、ベン
ゼン、クロロホルム、 ｎ−ヘキサンに可溶。

（ｆ）呈色反応 ニンヒドリン、塩化第二鉄反応：陰性 ヨード反応、バニリン−硫酸、 アニスアルデヒド−硫酸：陽性 （ｊ）塩基性、酸性、中性の区別 中性 （ｋ）物質の色 無色 発明の効果 本発明のＰＩ−’０９１は、アラキドン酸、アデノシン
ニリン酸、コラーゲンによる血小板凝集に対し優れた抑
制作用を有する新規の７−ラクタム化合物であり、血栓
症などの治療薬として有用である。

実施例 以下、実施例および試験例を挙げ本発明を具体的に説明
する。

実施例 （１）５７！容ジャーファーメンタ−容器に、グルコー
ス４％、ポリペプトン１％から成る培地３ｋをいれて、
オートクレーブで滅菌した。これと同じ組成の培地で３
０℃３日間振とう培養したベニシロマイセス・エスピー
・Ｆ−３４３０菌液を前記滅菌培地に２％接種し、２８
°Ｃで５日間攪拌通気培養した。

培養終了後、ジャーノアメンタ−８台分２ｉの培養液を
合わせて濾過し、菌体と濾液に分けた。

得られた濾液を吸着樹脂［ダイヤイオンＨＰ−２０（商
品名：　三菱化成工業社製）　１５００ｔｎｌｌ　］に
吸着させた後、精製水３！で洗浄し、次いでメタノール
２０００ｒｄで活性物質を溶出した。溶出液は減圧濃縮
し、得られた残渣を５００ｍ１ｌの酢酸エチルにて抽出
し、濃縮乾固することによりシロップ状液２ｇを得た。

（２）前項（υで得られたシロップ状液をメタノール５
’ｄに溶解し、不溶物を濾過により除去した後、セファ
デックスＬＨ−２０（商品名：ファルマシア社製、８５
０ｍＱ）を用い、メタノールでゲル濾過を行なった。４
００〜５００ｍＱに溶出してくる活性画分を集めたのち
、減圧濃縮してシロップ状物質８００ｍｇを得た。

（３）前項（りで得られたシロップ状液をクロロホルム
に溶解し、クロロホルムで調製したワコーゲル−２００
（商品名：和光紬薬工業社製、３００ｔｎｌｌ　）に吸
着させた６次いで、クロロホルム３００ｍＱ及び０．５
％メタノール含有クロロホルム３００ｍ１で展開し、両
溶出液を合わして濃縮乾固し、４００■のＰＩ−０９１
を得た。

試験例　（血小板凝集阻害作用） （１）血小板の調製法 体重２．０〜２．５ｋｇの雄家兎の総頚動脈より採血し
、血液量の１０分の１容の３．８％クエン酸ナトＪウム
溶液を加えて軽く混和し、１３００Ｘｇで２分間遠心分
離した上清を多血小板血漿（以下’ＰＲＰＪという）と
した。沈澱をきらに１６００Ｘｇで１０分間遠心分離し
て得られた上清を乏血小板血漿（以下’ＰＰＰＪという
）とした。

（２）凝集惹起剤の調製法 あらかじめ、アラキドン酸（シグマ社製）は、エタノー
ルで、アデノシンニリン酸またはコラーゲン（京都第一
化学社製：アグリバック）は生理食塩水で所要濃度に希
釈し、前記成分を個別に含む凝集惹起剤を調製した。

（３）　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ血小板凝集阻害活性測定法２
００ｙｎｌ！のＰＲＰを採り、ＰＰＰとの吸光度の差を
一定にした後、メタノールにて所要濃度に調製したＰＩ
−０９１をＰＲＰに加え、攪拌した。対照はメタノール
のみを使用した。次いで、上記凝集惹起剤（最終濃度：
アラキドン酸の場合０．１ｍＭ、アデノシンニリン酸の
場合１０μＭ１フラーゲンの場合１０μｇ／ｍ＃）を添
加し吸光度の変化を二元バイオサイエンス社プレイドレ
ットアグリゲーショントレーサー４Ａ型血小板凝集計を
用い、ボーン等の比濁法［Ｂｏｒｎ、　Ｊ、　Ｐｈｙｓ
ｉｏｌ、　、　１６８．１７８（１９６８）］により測
定し、ＰＩ−０９１の５０％血小板凝集阻害濃度（ＩＣ
ｉｅ値）を求めた。

その結果を第２表に示す。

第２表

【図面の簡単な説明】

第１図はアセトニトリル中で測定したＰＩ−０９１の紫
外線吸収スペクトル、第２図はクロロホルム中で測定し
たＰＩ−０９１の赤外線吸収スペクトル、第３図は重ク
ロロホルム中、２００ＭＨｚで測定したＰＩ−０９１の
’Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。 Ｉｌ：１％ ＋Ｇ１ｎ 第１図

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされるγ−ラクタム化合物