JPH09316090A

JPH09316090A - Ｆｒ１９８２４８物質およびｆｒ２０２３０６物質

Info

Publication number: JPH09316090A
Application number: JP8128486A
Authority: JP
Inventors: Yutaka Nishihara; 豊西原; Eisaku Tsujii; 栄作辻井; Reiko Otsu; 礼子大津; Noritoshi Sakamoto; 憲俊坂本; Shigehiro Takase; 茂弘高瀬; Toru Kino; 亨木野; Masaharu Hashimoto; 正治橋本
Original assignee: Fujisawa Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Astellas Pharma Inc
Priority date: 1996-05-23
Filing date: 1996-05-23
Publication date: 1997-12-09

Abstract

(57)【要約】【課題】この発明の課題は新規な医薬、とりわけ抗ウ
イルス剤とその製造方法を提供することにある。【解決手段】アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｉｌｌｕ
ｓ）属に属するＦＲ１９８２４８物質生産菌を培養する
ことにより、ＦＲ１９８２４８物質が得ることができ、
更に本物質をメタノールの存在下結晶化させることによ
り、ＦＲ２０２３０６物質を得ることができる。ＦＲ１
９８２４８物質およびＦＲ２０２３０６物質は、強い医
薬活性、とりわけ抗ウイルス活性を有し、抗ウイルス剤
として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ＦＲ１９８２４８
物質もしくはＦＲ２０２３０６物質、またはその塩およ
びその製造方法に関する。また、本発明はＦＲ１９８２
４８もしくはＦＲ２０２３０６物質、またはその塩を有
効成分として含有する医薬、とりわけ抗ウイルス剤に関
する。

【０００２】

【従来の技術】抗ウイルス剤としては、現在までに種々
のものが開発されてきている。例えばよく知られたもの
として、インフルエンザウイルスに対するアマンタジ
ン、単純ヘルペスウイルスに対するアシクロビル（ＡＣ
Ｖ）、ヴィダラビン（ａｒａ−Ａ）、エイズウイルスに
対するアジドチミジン（ＡＺＴ）などがある。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明が解決しようと
する課題は、新規な医薬、とりわけ抗ウイルス剤とその
製造方法を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者は、抗ウイルス
作用に優れた抗ウイルス剤を提供することを目的として
各種微生物を検索した結果、メキシコ国で採集した土壌
試料から分離した糸状菌Ｎｏ．１３８３０株が培養液中
に目的物質を蓄積することを発見した。そして更にこの
物質についてその理化学的性質を詳細に研究したとこ
ろ、従来未知の新規物質であることを確認し、この物質
を新たにＦＲ１９８２４８物質と命名した。また、ＦＲ
１９８２４８物質をメタノールの存在下に結晶化させる
ことにより新たな目的物質が生成することを発見し、こ
の物質についての理化学的性質を詳細に研究したとこ
ろ、従来未知の新規物質であることを確認し、この物質
を新たにＦＲ２０２３０６物質と命名した。そして、更
に研究の結果、ＦＲ１９８２４８物質およびＦＲ２０２
３０６物質の工業的製法を確立し、本発明を完成するに
至った。

【０００５】

【発明の実施の形態】本発明に係るＦＲ１９８２４８物
質およびＦＲ２０２３０６物質は、下記の理化学的性質
を有する。ＦＲ１９８２４８物質の理化学的性質（１）物質の性状酸性物質（２）分子式Ｃ₉Ｈ₁₀Ｏ₅ （３）分子量 198 ［EI-MS : m/z 180 (M-H₂O)⁺］（４）溶剤に対する溶解性溶解：ジメチルスルホキサイド、メタノール難溶：水不溶：ジクロロメタン（５）呈色反応陽性：硫酸セリウム反応、塩化鉄反応、沃素蒸気反応陰性：ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応（６）紫外線吸収スペクトル λmax(メタノール): 230 (sh), 310 nm λmax(メタノール+塩酸): 230 (sh), 250 (sh), 310 nm λmax(メタノール+水酸化ナトリウム): 225 (sh), 250
(sh),300 (sh) nm （７）¹Ｈ核磁気共鳴スペクトル (500MHz,CD₃OD)δ_H 6.18 (1H,d,J=2Hz), 5.00 (1H,dd,J=12 and 2Hz), 4.83
(1H,d,J=12Hz), 2.00 (3H,s). （８）¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル (125MHz,CD₃OD)δ_c 147.2 (s), 140.5 (s), 133.9 (s), 131.8 (s), 115.7
(s),109.8 (s), 108.1 (d), 73.0 (t), 11.8 (q). （９）赤外線吸収スペクトル νmax (KBr) : 3440, 3230, 1640, 1510, 1490, 1430,
1400,1300, 1110, 1010, 940, 920 cm^-1 （１０）元素分析値計算値（C₉H₁₀O₅に対する）：C 54.55, H 5.09 (%) 実測値：C 54.22, H 5.07 (%) （１１）分解点 112〜117℃(分解) （１２）色および状態無色針状晶（１３）薄層クロマトグラフィ固定相：ＲＰ−１８ＷＦ₂₅₄ （Ｅ．Ｍｅｒｃｋ社製）移動相：１０％アセトニトリル−１０％メタノール− ０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液Ｒｆ値：０．４２（１４）高速液体クロマトグラフィカラム：ＹＭＣＯＤＳＡＭ３０３−Ｓ−５（φ４．
６×２５０ｍｍ）移動相：１０％アセトニトリル−１０％メタノール− ０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液流速：１ｍｌ／ｍｉｎ検出：ＵＶ２１０ｎｍ保持時間：８分ＦＲ２０２３０６物質の理化学的性質（１）物質の性状酸性物質（２）分子式Ｃ₁₀Ｈ₁₂Ｏ₅ （３）分子量 212 ［EI-MS : m/z 180 (M-CH₃OH)⁺］（４）溶剤に対する溶解性溶解：ジメチルスルホキサイド、メタノール難溶：水不溶：ジクロロメタン（５）呈色反応陽性：硫酸セリウム反応、塩化鉄反応、沃素蒸気反応陰性：ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応（６）紫外線吸収スペクトル λmax(メタノール): 230 (sh), 310 nm λmax(メタノール+塩酸): 240 (sh), 310 nm λmax(メタノール+水酸化ナトリウム): 225 (sh), 250
(sh),300 (sh) nm （７）¹Ｈ核磁気共鳴スペクトル (500MHz,DMSO-d₆)δ_H 8.57 (1H,s), 8.28 (1H,s), 8.16 (1H,S), 6.08 (1H,d,
J=2Hz),4.88 (1H,dd,J=12 and 2Hz), 4.76 (1H,d,J=12H
z), 3.20 (3H,s),1.91 (3H,s) （８）¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル (125MHz,DMSO-d₆)δ_c 145.7 (s), 139.3 (s), 132.4 (s), 130.1 (s), 114.6
(s),107.7 (s), 106.2 (d), 71.3 (t), 52.9 (q), 11.9
(q). （９）赤外線吸収スペクトル νmax (KBr) : 3490, 3340, 2940, 2860, 1640, 1510,
1500, 1400,1370, 1300, 1260, 1120, 1080 cm^-1 （１０）元素分析値計算値（C₁₀H₁₂O₅に対する）：C 56.60, H 5.70 (%) 実測値：C 56.84, H 5.86 (%) （１１）分解点 99〜104℃(分解) （１２）色および状態微帯黄白色プリズム晶（１３）薄層クロマトグラフィ固定相：ＲＰ−１８ＷＦ₂₅₄ （Ｅ．Ｍｅｒｃｋ社製）移動相：１０％アセトニトリル−１０％メタノール− ０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液Ｒｆ値：０．４２（１４）高速液体クロマトグラフィカラム：ＹＭＣＯＤＳＡＭ３０３−Ｓ−５（φ４．
６×２５０ｍｍ）移動相：１０％アセトニトリル−１０％メタノール− ０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液流速：１ｍｌ／ｍｉｎ検出：ＵＶ２１０ｎｍ保持時間：８分

【０００６】本発明に係るＦＲ１９８２４８物質は、例
えば、メキシコ国で採集した土壌試料から新たに分離さ
れたＮｏ．１３８３０株によって生産される。この微生
物は各種培地上で速やかに生育し、薄い茶色から橙色を
帯びたコロニーをつくる。多種類の培地上でＮｏ．１３
８３０株はテレオモルフを形成しなかったが、膨潤した
先端（頂嚢）に分生子形成細胞を付属した分生子柄と、
円柱状の分生子塊からなるアナモルフを生じた。分生子
形成様式はフィアロ型であった。Ｎｏ．１３８３０株の
菌学的性質を以下に示す。（１）培養的性質種々の寒天培地上における培養的性質は、表１に示し
た。

【表１】＊：麦芽抽出寒天、ツァペック氏液寒天、ＭＹ２０寒天
の組成は、ＪＣＭカタログ（Ｎａｋａｓｅ，Ｔ．，５ｔ
ｈｅｄ．，５０３ｐ．，ＪａｐａｎＣｏｌｌｅｃｔ
ｉｏｎｏｆＭｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓａｎｄ
ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅＲｅｓｅａｒｃｈＩｎ
ｆｏｒｍａｔｉｏｎＳｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅＩ
ｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｈｙｓｉｃａｌａｎｄ
ＣｈｅｍｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｓａｉｔａｍ
ａ，１９９２）に従った。これらのデータは接種後２５
℃で１４日間培養後に観察した。色調の記載はＭｅｔｈ
ｕｅｎＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＣｏｌｏｕｒ（Ｋｏ
ｒｎｅｒｕｐ，Ａ．ａｎｄＪ．Ｈ．Ｗａｎｓｃｈｅ
ｒ，３ｒｄｅｄ．，５２５ｐｐ．，Ｍｅｔｈｕｅｎ，
Ｌｏｎｄｏｎ，１９７８）をもとに行った。ツァペック
氏液寒天上では広く拡大的に生育し、２５℃で２週間培
養後において直径６．０−６．５ｃｍまで拡がる。コロ
ニーの表面は、平坦またはやや皺をつくり、フェルト状
から粉状、灰味橙の色調を示し、周縁部は橙味白であっ
た。アナモルフを豊富に形成した。裏面は茶味橙で、薄
い橙色の可溶性色素が培地中に拡散した。麦芽抽出寒天
上での集落はツァペック氏液寒天上よりも速やかに生育
し、同一条件下で直径７．０−７．５ｃｍに拡がった。
集落表面は平坦で、薄く、粉状、灰味橙を示し、周縁部
は橙味白であった。アナモルフが豊富に形成された。裏
面は灰味橙で、その中心部は茶味橙であった。

【０００７】（２）形態的性質形態的特徴は、ツァペック氏液寒天上での培養をもとに
観察した。Ｎｏ．１３８３０株の分生子柄は栄養菌糸と
明瞭に区別ができる。それらは培地上から直立し、無
色、滑面で、栄養菌糸からの分岐部分には柄足細胞（ｆ
ｏｏｔｃｅｌｌ）と呼ばれる構造がある。分生子柄は
分枝せず、その先端が膨潤して頂嚢となる。頂嚢と柄足
細胞の間（柄部）は、長さが（１００−）１２０−２０
０（−２２０）μｍ、幅は６−８μｍである。頂嚢は、
球形から半球形で、直径は１２−１６．５μｍ、その上
側１／２の部分にメトレとフィアライドによる二層構造
を形成する。メトレは、無色、滑面、円筒形で、大きさ
は５−６．５×１．５−３μｍで、それぞれが２−４個
のフィアライドを輪生する。フィアライドは、無色、滑
面、とっくり形で、大きさは５．５−７．５×１．５−
２．５μｍで、分生子を連続して鎖状に形成する。分生
子は、無色または薄い茶色、滑面で、球形から亜球形、
１細胞で、直径は２−３μｍである。それぞれの分生子
鎖は密集して、円柱状の分生子の塊（分生子頭）が分生
子柄先端に観察される。分生子頭は、茶色から褐色で、
直径が４０−５０μｍ、長さは６５−１００μｍである
が、培養を継続することによってその長さはさらに伸長
する。栄養菌糸は、滑面、隔壁を持ち、無色で分枝す
る。菌糸細胞は、円筒形、幅１−６μｍである。

【０００８】（３）生理学的性質Ｎｏ．１３８３０株は１〜４５℃で生育可能で、好まし
い温度は１３〜４２℃、特に好ましい温度は３２〜３６
℃である。これらのデータはポテトデキストロース寒天
（ニッスイ）上で決定した。（４）同定上記特徴から、Ｎｏ．１３８３０株は不完全菌糸状菌類
の一属アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属
（ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓＭｉｃｈｅｌｅｘＬｉｎ
ｋ）に所属すると思われる。アスペルギルス（Ａｓｐｅ
ｒｇｉｌｌｕｓ）属の分類基準（Ｋ．Ｂ．Ｒａｐｅｒ
＆Ｄ．Ｉ．Ｆｅｎｎｅｌ，ＴｈｅｇｅｎｕｓＡ
ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ，ｐｐ．６８６，Ｗｉｌｉａｍ
ｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，１９６５）に従うと、Ｎｏ．
１３８３０株はＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｔｅｒｒｅｕ
ｓＴｈｏｍａｐｕｄＴｈｏｍ＆Ｃｈｕｒｃｈ
１９１８であると考えられた。また、上記のＮｏ．１３
８３０株の特徴は、Ｒａｐｅｒ＆Ｆｅｎｎｅｌ
（Ｋ．Ｂ．Ｒａｐｅｒ＆Ｄ．Ｉ．Ｆｅｎｎｅｌ，Ｔ
ｈｅｇｅｎｕｓＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ，ｐ．５６
８，Ｗｉｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，１９６
５），Ｄｏｍｓｃｈ，Ｇａｍｓ＆Ａｎｄｅｒｓｏｎ
（Ｋ．Ｈ．Ｄｏｍｓｃｈ，Ｗ．Ｇａｍｓ＆Ｔ．−
Ｈ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍｏｆ
ｓｏｉｌｆｕｎｇｉ，ｐ．１１４，Ａｃａｄｅｍｉ
ｃＰｒｅｓｓ，１９８０）、堀江（宇田川俊一、椿啓
介ら、菌類図鑑、ｐ．１０３９、講談社、１９７５）の
記載とも一致した。従ってＮｏ．１３８３０株をアスペ
ルギルステレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｔｅｒ
ｒｅｕｓ）の一菌株と同定し、アスペルギルステレウ
ス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｔｅｒｒｅｕｓ）Ｎｏ．
１３８３０と命名した。本菌株は工業技術院生命工学工
業技術研究所に受託番号ＦＥＲＭＢＰ−５３７１（受託
日平成８年１月２３日）として寄託されている。

【０００９】ＦＲ１９８２４８物質の生産は、単に説明
を目的として挙げただけの本明細書記載の特定の微生物
の使用に限定されるものではないことを理解するべきで
ある。この発明は、記載の微生物からＸ線照射、紫外線
照射、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニ
ジン、２−アミノプリン等の変異処理により取得できる
人工変異株並びに自然変異株を含めてＦＲ１９８２４８
物質を生産しうる全ての変異株の使用をも包含するもの
である。

【００１０】本発明に係るＦＲ１９８２４８物質は、ア
スペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属に属する該
物質生産菌（例えばアスペルギルステレウス（Ａｓｐ
ｅｒｇｉｌｌｕｓｔｅｒｒｅｕｓ）Ｎｏ．１３８３０
株）を資化しうる炭素及び窒素源を含む栄養培地中に接
種し、好気条件下で培養することにより（例えば、振と
う培養、通気撹拌培養等）、生産せしめることができ
る。

【００１１】炭素源としては、グルコース、ショ糖、コ
ーンスターチ、変性澱粉、フラクトース、グリセロール
その他の炭水化物を使用するのが好ましい。窒素源とし
ては、オートミール、酵母エキス、ペプトン、グルテン
ミール、綿実粉、綿実油粕、大豆粉、コーンスティープ
リカー、乾燥酵母、小麦胚芽、落花生粉、チキンミート
ボーンミール、ファーマメディア（トレーダーズプロテ
イン）等を使用するのが好ましいが、アンモニウム塩
（例えば、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン
酸アンモニウム等）、尿素、アミノ酸等の無機及び有機
の窒素化合物も有利に使用することができる。

【００１２】これらの炭素源及び窒素源は、併用するの
が有利であるが、純粋なものを必らずしも使用する必要
はない。不純なものには生長因子や微量要素が含まれて
いる場合などもあり、有利な場合があるからである。こ
れらの炭素源及び／又は窒素源は放射性同位元素（例え
ば³Ｈ，¹⁴Ｃなど）を含んだものを用いてもよい。この
場合、放射性同位元素で標識された化合物を得ることが
できる。この様な標識化合物は生化学的研究に有用であ
る。必要ある場合には、例えば次のような無機塩類を培
地に添加してもよい：炭酸塩（炭酸ナトリウム、炭酸カ
リウム、炭酸カルシウム等）、リン酸塩（リン酸ナトリ
ウム、リン酸カリウム等）、塩化ナトリウム、塩化カリ
ウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウム、マグネシウ
ム塩、銅塩、コバルト塩等。必要ある場合には、包接化
合物（β−サイクロデキストリン等）や界面活性剤など
を培地に添加してもよい。界面活性剤としては、高級ア
ルコール硫酸エステル、レシチン、ソルビタン脂肪酸エ
ステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステ
ル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等が挙げられる。
特に、培地が強く発泡するのであれば、必要あるときに
は、液体パラフィン、動物油、植物油、鉱物油、シリコ
ーン、アデカノール（商標名：アサヒデンカ社）等の消
泡剤を添加してもよい。

【００１３】目的物質を大量に工業生産するには、他の
発酵生産物の場合と同様に、通気撹拌培養するのが好ま
しい。少量生産の場合は、フラスコを用いる振とう培養
が好適である。また、培養を大きなタンクで行う場合、
ＦＲ１９８２４８物質の生産工程において菌の生育遅延
を防止するため、はじめに比較的少量の培地に生産菌を
接種培養した後、次の培養物を大きな生産タンクに移し
てそこで生産培養するのが好ましい。この場合、前培養
に使用する培地及び生産培養に使用する培地の組成は、
両者ともに同一であってもよいし必要あれば両者を変え
てもよい。

【００１４】培養は通気撹拌条件で行うのが好ましく、
例えばプロペラやその他機械による撹拌、ファーメンタ
ーの回転または振とう、ポンプ処理、空気の吹込み等既
知の方法が適宜使用される。通気用の空気は滅菌したも
のを用いる。培養温度はＦＲ１９８２４８物質生産菌が
本物質を生産する範囲内で適宜変更しうるが、通常は１
〜４５℃、好ましくは１３〜４２℃で、特に好ましくは
２２〜３６℃で培養するのがよい。培養時間は、培養条
件や培養量によっても異なるが通常は約１日〜１週間で
ある。

【００１５】発酵終了後、培養物から目的とするＦＲ１
９８２４８物質を回収する。すなわち、菌体は、直接水
及び／又は有機溶媒による抽出、あるいは、これを機械
的に又は超音波等既知の手段を用いて破壊した後、水及
び／又は有機溶媒で抽出した後、常法にしたがって回
収、精製する。培養液の場合は、直接、常法にしたがっ
て回収、精製すればよい。回収、精製方法としては、例
えば、水、有機溶媒、これらの混合溶媒による溶媒抽
出；クロマトグラフィー；単一溶媒又は混合溶媒からの
再結晶等常法が適宜単独であるいは組合わせて使用でき
る。

【００１６】ＦＲ１９８２４８物質の回収、精製は上記
のような既知の方法を適宜利用して行うが、例えば次の
ようにしてもよい。培養物をアセトンで抽出し、さらに
クロマトグラフィーで精製する。ＦＲ１９８２４８物質
は酸性物質であり、塩基と反応して塩を形成することが
できる。ＦＲ１９８２４８物質は遊離の状態（ＦＲ１９
８２４８物質自体）でも回収、精製することができる
し、またそれらの塩としても回収、精製できる。また、
これらは常法により相互に変換することもできる。ＦＲ
１９８２４８物質は、各種理化学的性質から結晶中では
分子内ヘミアセタール構造を有しているものと推定さ
れ、水溶液中では分子内ヘミアセタールを有する構造と
水酸基とアルデヒド基を有する構造の平衡状態で存在し
ているものと推定される。このため、ＦＲ１９８２４８
物質をアルカノールの存在下に結晶化を行った場合に
は、ＦＲ１９８２４８物質の分子内ヘミアセタール構造
の水酸基が、使用したアルカノールに対応するアルコキ
シ基に変換されたアセタール構造を有すると推定される
物質を与えることもある。結晶化の際に使用しうるアル
カノールとしては、メタノール、エタノール、ブタノー
ル、オクタノール、セチルアルコールなどが挙げられ
る。例えば、メタノールの存在下にＦＲ１９８２４８の
結晶化を行った場合には、各種理化学的性質からアセタ
ール構造を有すると推定されるＦＲ２０２３０６物質を
与える。ＦＲ１９８２４８物質およびＦＲ２０２３０６
物質の好適な塩類は、医薬として許容されるものであっ
て、例えばアルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩
など）ならびにアルカリ土類金属塩（カルシウム塩、マ
グネシウム塩など）などの金属塩、アンモニウム塩、有
機塩基との塩（トリメチルアミン塩、トリエチルアミン
塩、ピリジン塩、ピコリン塩、ジシクロヘキシルアミン
塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、アミノ
酸塩など）との塩などを挙げることができる。ＦＲ１９
８２４８物質もしくはＦＲ２０２３０６物質、またはそ
の塩は、溶媒和物の形でも存在しうる。その溶媒和物も
本発明の範囲に含まれる。好ましい溶媒和物としては、
例えば、水和物、エタノール和物等が挙げられる。更に
放射性同位元素で標識されたＦＲ１９８２４８物質およ
びＦＲ２０２３０６物質も本発明の範囲内に含まれる。
ＦＲ１９８２４８物質またはＦＲ２０２３０６物質また
はその塩の生理学的性質は、以下の試験で詳細に説明さ
れる。

【００１７】試験例［抗ウイルス活性（プラーク形成抑
制活性）］＜方法＞トリプシン１μｇ／ｍｌ含有の培地（Ｅａｇｌ
ｅ’ｓｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｉｎｉｍ
ａｌｅｓｓｅｎｔｉａｌｍｅｄｉｕｍ（ｐＨ７．２
〜７．４））で希釈したインフルエンザウイルスＡ／Ｐ
Ｒ／８／３４（Ｈ１Ｈ１）をＭＤＣＫ（Ｍａｄｉｎ−Ｄ
ａｒｂｙｃａｎｉｎｅｋｉｄｎｅｙ）細胞に３７
℃、１時間吸着後、１％Ｎｏｂｌｅａｇａｒ（Ｓｉ
ｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙ），１μｇ
／ｍｌトリプシン、０．００１％ＤＥＡＥデキストラ
ン、被検薬を含む培地をプレートに重層した。この細胞
を５％ＣＯ ₂下で３７℃、４８時間、インキュベート
した。形成したプラークは、色素（ｎｅｕｔｒａｌｒ
ｅｄ）で細胞を染色することにより可視化し、その数を
測定し、その阻害活性を算出した。＜結果＞ＦＲ１９８２４８物質およびＦＲ２０２３０６
物質は、それぞれ１０μｇ／ｍｌの濃度でウイルスの増
殖を１００％阻害した。

【００１８】本発明に係るＦＲ１９８２４８物質および
ＦＲ２０２３０６物質またはそれらの塩は、試験例から
も明らかなように、すぐれた抗ウイルス作用を有するこ
とが確認され抗ウイルス剤として有用である。ＦＲ１９
８２４８物質およびＦＲ２０２３０６物質、またはそれ
らの塩が有効なウイルスとしては、ＤＮＡ型ウイルス、
ＲＮＡ型ウイルスおよびレトロウイルスなどが挙げられ
る。ＤＮＡ型ウイルスには痘瘡ウイルス、単純ヘルペス
ウイルス、アデノウイルスなどがあげられ、ＲＮＡ型ウ
イルスにはインフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ポ
リオウイルスなどが挙げられ、レトロウイルスにはエイ
ズウイルスなどが挙げられる。また、形態的に大型のウ
イルス、（インフルエンザウイルス）、中型のウイルス
（アデノウイルス）、小型のウイルス（ポリオウイル
ス）などがあり、さらにウイルス粒子が裸のもの（ポリ
オウイルス、アデノウイルスなど）と、粒子の周囲がエ
ンベロープで包まれているもの（インフルエンザウイル
ス、風疹ウイルス、ヘルペス科のウイルスなど）があ
る。ＦＲ１９８２４８物質およびＦＲ２０２３０６物質
またはそれらの塩は、特に、呼吸器ウイルス感染症を起
こすウイルス（インフルエンザウイルス、パラインフル
エンザウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、Ｒ
Ｓウイルスなど）に対して有効である。その中でも、特
に有効なウイルスはインフルエンザウイルスである。

【００１９】本発明に係るＦＲ１９８２４８物質および
ＦＲ２０２３０６物質またはそれらの塩は、ウイルス感
染症の予防もしくは治療目的に用いることができ、その
使用に当っては、経口投与、非経口投与および外用（局
所）投与に適した有機もしくは無機固体状もしくは液状
賦形剤のような、医薬として許容される担体と混合し前
記化合物を有効成分として含有する常用の医薬製剤の形
として使用される。医薬製剤は錠剤、顆粒、粉剤、カプ
セルのような固体状であってもよく、また溶液、懸濁
液、シロップ、エマルジョン、レモネード等のような液
状であってもよい。

【００２０】経口投与のための製剤としては、錠剤、丸
剤、顆粒剤、軟・硬カプセル剤、散剤、細粒剤、粉剤、
乳濁剤、懸濁剤、シロップ剤、ペレット剤、エリキシル
剤、吸入剤等が挙げられる。非経口投与のための製剤と
しては、注射剤、点滴剤、輪液、軟膏、ローション、ト
ニック、スプレー、懸濁剤、油剤、乳剤、坐剤、点鼻
剤、点眼剤等が挙げられる。本発明の有効成分を製剤化
するには、常法にしたがえばよく、界面活性剤、賦形
剤、着色剤、着香料、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁
剤、等張剤その他常用される佐剤を適宜使用する。

【００２１】本発明に係る薬剤組成物の投与量は、その
種類、治療のないし予防対象疾病の種類、投与方法、患
者の年令、患者の症状、処理時間等によって相違する
が、静脈投与の場合は成人ひとり当り１日に有効成分
（ＦＲ１９８２４８物質またはＦＲ２０２３０６物質、
または／およびその塩）を０．０１〜１０００ｍｇ／ｋ
ｇ、好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ投与し、筋肉
投与の場合は同じく０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ、好
ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ投与し、経口投与の
場合も同じく０．５〜２０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは
１〜１０００ｍｇ／ｋｇの範囲内で投与する。

【００２２】以下、本発明を実施例により更に詳しく説
明する。

【実施例】

１．ＦＲ１９８２４８物質の醗酵生産（ａ）種培養（Ｓ₁及びＳ₂；二段培養）ショ糖３．０％ファーマメディア（トレーダーズプロテイン）１．０％乾燥酵母３．０％炭酸カルシウム０．２％アデカノールＬＧ−１０９０．０５％（消泡剤；アサヒデンカ社）シリコーンＫＭ−７００．０５％（消泡剤；シンエツカガク社）（ＰＨ６．３〜６．４に修正）上記組成の培地１６０ｍｌを５００ｍｌのエルレンマイ
ヤーフラスコに分注し、１２０℃、３０分間滅菌した。
次に、傾斜培養したＮｏ．１３８３０株の一部を種培地
に植菌し、毎分２２０回転にセットした回転振盪機で２
５℃において５日間培養した（Ｓ₁）。さらに、上記組
成の滅菌培地１６０ｍｌを分注した５００ｍｌのエルレ
ンマイヤーフラスコに種培養液（Ｓ₁）を１％接種し、
２５℃において２日間回転振盪培養を行った（Ｓ₂）。（ｂ）本培養変性デンプン日食＃３６００３．０％パインデックス（商標名：ミツヤカガク社）６．０％ファーマメディア（トレーダーズプロテイン）１．０％チキンミートボーンミール１．０％乾燥酵母２．０％硫酸アンモニウム０．０５％リン酸水素二ナトリウム・１２水和物０．５％ β−サイクロデキストリン１．０％アデカノールＬＧ−１０９０．０５％（消泡剤；アサヒデンカ社）シリコーンＫＭ−７０（消泡剤；シンエツカガク社）０．０５％上記組成の培地２０Ｌを３０Ｌ−Ｊａｒに注入し、１２
０℃、３０分間滅菌した。次に、種培養液（Ｓ₂）を２
％接種し、撹拌速度２５０ｒｐｍ．通気量２０Ｌ／分に
設定後、２５℃において４日間培養した。

【００２３】２．ＦＲ１９８２４８物質の単離及び精製醗酵ブロス（３０Ｌ）を等量のアセトンにて抽出し、濾
過後、真空下で３５Ｌに濃縮した。この濃縮液をダイア
イオンＳＰ−２０７（三菱化成）のカラム（１０Ｌ）に
供した。このカラムは、水及び２０％メタノール水で洗
浄後、５０％メタノール水で溶出した。この溶出液（４
０Ｌ）を、真空下で１７Ｌに濃縮した。次に、この濃縮
液をＨＰ−２０ＳＳ（三菱化成）カラム（５Ｌ）に供し
た。このカラムを、０．０５％トリフルオロ酢酸を含む
水で洗浄後、トリフルオロ酢酸を含む５％アセトニトリ
ル水で展開溶出した。この溶出液（７．５Ｌ）を、４℃
で一晩放置したところ無色針状晶が析出した。析出した
結晶を濾取し、水、アセトンで十分に洗浄した後、乾燥
させてＦＲ１９８２４８物質の無色針状晶１０．７ｇを
得た。３．ＦＲ２０２３０６物質の単離及び精製ＦＲ１９８２４８物質（１６．６ｇ）を８３０ｍｌのメ
タノールに溶解後、真空下で濃縮した。この濃縮液を４
℃で一晩放置することにより、ＦＲ２０２３０６物質を
微帯黄白色プリズム晶として８．６８ｇ得た。

【００２４】

【発明の効果】本発明に係るＦＲ１９８２４８物質およ
びＦＲ２０２３０６物質またはそれらの塩は、優れた抗
ウイルス作用を有することが確認され、医薬とりわけ抗
ウイルス剤として有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＦＲ１９８２４８物質の臭化カリウム錠での
赤外部吸収スペクトルを示す。

【図２】ＦＲ１９８２４８物質の重メタノール溶液中
での５００ＭＨｚ ¹Ｈ核磁気共鳴スペクトルを示す。

【図３】ＦＲ１９８２４８物質の重メタノール溶液中
での１２５ＭＨｚ ¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトルを示す。

【図４】ＦＲ２０２３０６物質の臭化カリウム錠での
赤外部吸収スペクトルを示す。

【図５】ＦＲ２０２３０６物質の重メタノール溶液中
での５００ＭＨｚ ¹Ｈ核磁気共鳴スペクトルを示す。

【図６】ＦＲ２０２３０６物質の重メタノール溶液中
での１２５ＭＨｚ ¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトルを示す。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 1/02 Ｃ１２Ｒ 1:66） (Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:66） (72)発明者木野亨茨城県土浦市中村南６丁目11−11 (72)発明者橋本正治茨城県つくば市大字大角豆1194−１

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記に示される理化学的性質を有するこ
とを特徴とするＦＲ１９８２４８物質およびＦＲ２０２
３０６物質、ならびにそれらの塩。（１）ＦＲ１９８２４８物質（Ａ）物質の性状酸性物質（Ｂ）分解点 112〜117℃(分解) （Ｃ）赤外吸収スペクトル νmax(KBr) : 3440, 3230, 1640, 1510, 1490, 1430, 1
400, 1300,1110, 1010, 940, 920 cm^-1 （Ｄ）溶剤に対する溶解性溶解：ジメチルスルホキサイド、メタノール難溶：水不溶：ジクロロメタン（Ｅ）呈色反応陽性：硫酸セリウム反応、塩化第二鉄反応、沃素蒸気反
応陰性：ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応（２）ＦＲ２０２３０６物質（Ａ）物質の性状酸性物質（Ｂ）分解点 99〜104℃(分解) （Ｃ）赤外吸収スペクトル νmax(KBr) : 3490, 3340, 2940, 2860, 1640, 1510, 1
500, 1400,1370, 1300, 1260, 1120, 1080 cm^-1 （Ｄ）溶剤に対する溶解性溶解：ジメチルスルホキサイド、メタノール難溶：水不溶：ジクロロメタン（Ｅ）呈色反応陽性：硫酸セリウム反応、塩化第二鉄反応、沃素蒸気反
応陰性：ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応
【請求項２】アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ）属に属するＦＲ１９８２４８物質生産菌を培養して
ＦＲ１９８２４８物質またはその塩を生産せしめ、これ
を採取することを特徴とするＦＲ１９８２４８物質また
はその塩の製造方法。
【請求項３】ＦＲ１９８２４８物質またはその塩をメ
タノールの存在下で結晶化せしめることを特徴とする、
ＦＲ２０２３０６物質またはその塩の製造方法。
【請求項４】有効成分としてＦＲ１９８２４８物質も
しくはＦＲ２０２３０６物質、またはその塩を含有する
医薬。
【請求項５】有効成分としてＦＲ１９８２４８物質も
しくはＦＲ２０２３０６物質、またはその塩を含有する
抗ウイルス剤。