BE513523A - - Google Patents

Description

   <Desc/Clms Page number 1> 
 



  B R E V E' T   D'INVENTION   Procédé de préparation de l'hormone circulatoire Kallikréine 
La présente invention a pour objet un procédé de préparation de l'hormone circulatoire connue sous le nom de Kallikréine, obtenue à partir de glandes contenant de la Kallikréine, procédé consistant à soumettre les glandes, de préférence en suspension aqueuse, à une thermolyse effectuée à une température comprise entre 38 et 65 C, et à éliminer ensuite les fractions insolubles de la phase aqueuse con- tenant la Kallikréine. 



  Le A 1045-B 

 <Desc/Clms Page number 2> 

 Comme matières premières entrent surtout en considération pour la mise en oeuvre du procédé conforme à l'invention les pancréas et les glandes sous-maxillaires, de préférence le pancréas de porc. 



  Pour effectuer la thermolyse, la matière première contenant la Kallikréine et présente de préférence sous la forme de suspension est chauffée, avec agitation, à une température comprise dans la gamme des températures envisagées conformé- ment à l'invention. 



  Pour les pancréas la température optima est située à 55 C environ ; c'est à cette température que la majeure partie de l'albumine se sépare en flocons, tandis que la Kallikréine entre quantitativement en solution. Dans ce cas, la thermolyse est achevée lorsque la température de 55 C est atteinte. A partir de 1 kg de pancréas de porc on obtient de cette façon 25 000 - 44 000 unités Kallikréine, suivant la teneur en graisse des glandes. 



  Lorsque, pour la mise en oeuvre du procédé conforme à 1' invention, on choisit une température plus basse, le rendement 

 <Desc/Clms Page number 3> 

 maximum ne sera atteint qu'après un chauffage de longue durée, pas exemple à 48 C au bout d'une heure seulement. 



  En choisissant une température supérieure à 55 C, on obtient aussi à la température de 60 C encore de bons rendements, alors qu'à une température supérieure à 65 C le rendement tombe pratiquement à zéro. 



  La thermolyse s'effectue opportunément en milieu acide, avantageusement à un pH de 4,6. Si la concentration en ions hydrogène est supérieure à 4,0, le rendement descend à zéro, tandis que dans la zone alcaline, au-delà d'une concentration en ions hydrogène correspondant au   pH   de 8,5, la Kallikréine est déjà en majeure partie détruite. Une fois la thermolyse achevée, on élimine de la solution aqueuse limpide de Kallikréine, par simple essorage ou décantation, les fractions insolubles constituées de graisse, de tissu conjonctif et d' albumine séparée .en flocons. 



  Le procédé conforme à l'invention constitue une méthode très simple pour obtenir en très peu de temps et avec d'excellents rendements des solutions de Kallikréine d'un degré de pureté élevé. Le procédé offre en outre l'avantage que des bactéries 

 <Desc/Clms Page number 4> 

 dont la croissance est inévitable dans d'antres procédés - par exemple dans l'autolyse connue, poursuivie pendant plusieurs jours, de la matière contenant la Kallikréine - ne   parviennent   pas à se développer. Par conséquent, le pro- duit obtenu par le procédé conforme à l'invention est exempt de toxines d'origine bactérienne. 



  On était d'avis, jusqu'à présent, que la préparation de la Kallikréine à partir de glandes n'était possible que par voie fermentative aux températures usuelles comprises entre 20 et 37 C. Il était donc sarprenant de constater que la Kallikréine pouvait s'obtenir à partir de glandes par simple thermolyse à des températures élevées. La découverte de ce nouveau procédé est d'autant plus surprenante que, jusqu'à ce jour, on avait soigneusement évité tout échauffement à des températures élevées en raison de la sensibilité connue de la Kallikréine en solution aqueuse (voir à ce sujet Kraut, Frey et Werle, Zeitschrift physiol. Chemie 189, pages 98 et 104 (1930)). 

 <Desc/Clms Page number 5> 

 



   E x e m p le: 
2 kg de pancréas de porc frais, non préparé, sont finement divisés dans un hache-viande, mélangés avec 5 litres d'eau deux fois distillée, et acidulés au moyen d'acide chlor- hydrique à un pH de 4,6. La suspension obtenue est ensuite chauffée au bain-marie à 55 C, avec agitation. Ceci fait, on fait passer le mélange dans un entonnoir séparateur. La graisse fondue.monte à la surface ensemble'avec les fibres du tissu conjonctif et l'albumine séparée en flocons. La -solution limpide de Kallikréine sous-jacente peut être sou- tirée. On peut aussi centrifuger la solution chaude immé- diatement après la thermolyse. On obtient une solution   aqueuee   jaune clair qui contient environ 70 000 unités 
Kallikréine. 



   Une purification supplémentaire peut s'effectuer au besoin suivant les méthodes ordinairement employées pour la- 
Kallikréine, par exemple celles indiquées par les auteurs 
Frey, Kraut et Werele, "Kàllikréine", Stuttgart 1950, pages      121 - 130.

Claims (1)

1. Résumé: La présente invention a pour objet : -o Procédé de préparation de l'hormone circulatoire Kallikréine à partir de glandes qui la contiennent, procédé consistant à soumettre les glandes, de préférence en eus- pension aqueuse, à une thermolyse à des températures com- prises entre 38 et 65 C et à séparer ensuite les fraction3 insolubles de la phase aqueuse contenant la Kallikréine.

   20 Mode de mise en oeuvre du procédé suivant 1 comprenant les particularités suivantes, considérées séparément ou en combinaison:. a) pour effectuer la thermolyse, on chauffe la matière de départ à 55 C et on interrompt l'opération dès que cette température est atteinte; b) la thermolyse s'effectue à une valeur pH comprise entre 4 et 7.

   (six pages)