ES2925251T3 - Acidos ribonucleicos que contienen N1-metil-pseudoracilos y usos de los mismos - Google Patents

Acidos ribonucleicos que contienen N1-metil-pseudoracilos y usos de los mismos Download PDF

Info

Publication number
ES2925251T3
ES2925251T3 ES19177059T ES19177059T ES2925251T3 ES 2925251 T3 ES2925251 T3 ES 2925251T3 ES 19177059 T ES19177059 T ES 19177059T ES 19177059 T ES19177059 T ES 19177059T ES 2925251 T3 ES2925251 T3 ES 2925251T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
nucleotides
modified
mrna
nucleic acid
cell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES19177059T
Other languages
English (en)
Inventor
Jason P Schrum
Suhaib Siddiqi
Kenechi Ejebe
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
ModernaTx Inc
Original Assignee
ModernaTx Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=45893552&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=ES2925251(T3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by ModernaTx Inc filed Critical ModernaTx Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2925251T3 publication Critical patent/ES2925251T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A61K48/0066—Manipulation of the nucleic acid to modify its expression pattern, e.g. enhance its duration of expression, achieved by the presence of particular introns in the delivered nucleic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/102—Mutagenizing nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1136—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against growth factors, growth regulators, cytokines, lymphokines or hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/67—General methods for enhancing the expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
    • G01N33/559—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody through a gel, e.g. Ouchterlony technique
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/334—Modified C
    • C12N2310/3341—5-Methylcytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/335—Modified T or U

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

La presente divulgación proporciona ARN que contienen uno o más nucleótidos modificados, en los que el 100% de los uracilos se reemplazan con N1-metil-pseudouridina. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Ácidos ribonucleicos que contienen Nl-metil-pseudoracilos y usos de los mismos
REIVINDICACIÓN DE PRIORIDAD
Se reivindica la prioridad de la Solicitud provisional de EE.UU. n.° de serie 61/404.413, depositada el 1 de octubre de 2010.
ANTECEDENTES
Los ARN naturales se sintetizan a partir de cuatro ribonucleótidos básicos: ATP, CTP, UTP y GTP, pero pueden contener nucleótidos modificados postranscripcionalmente. Además, se han identificado aproximadamente cien modificaciones de nucleósidos diferentes en el ARN (Rozenski, J, Crain, P y McCloskey, J. (1999). The RNA Modification Database: 1999 update (La base de datos de modificación de ARN: actualización de 1999). Nucl Acids Res 27: 196-197). Sin embargo, no está claro el papel de las modificaciones de nucleósidos en el potencial inmunoestimulador, la estabilidad y la eficiencia de traducción del ARN, y los consiguientes beneficios para mejorar la expresión de proteínas y producir compuestos terapéuticos.
Existen múltiples problemas con las metodologías anteriores para efectuar la expresión de proteínas. Por ejemplo, el ácido desoxirribonucleico (ADN) heterólogo introducido en una célula puede ser heredado por las células hijas (ya sea que el ADN heterólogo se haya integrado o no en el cromosoma) o por la descendencia. El ADN introducido puede integrarse en el ADN genómico de la célula huésped con cierta frecuencia, lo que resulta en alteraciones y/o daño al ADN genómico de la célula huésped. Además, deben producirse múltiples etapas antes de que se produzca una proteína. Una vez dentro de la célula, el ADN debe transportarse al núcleo donde se transcribe en ARN. El ARN transcrito a partir del ADN debe a continuación entrar en el citoplasma donde se traduce en proteína. Esta necesidad de múltiples etapas de procesamiento crea tiempos de retraso antes de la generación de una proteína de interés. Además, es difícil obtener la expresión de ADN en las células; con frecuencia, el ADN entra en las células pero no se expresa o no se expresa a velocidades o concentraciones razonables. Esto puede ser un problema particular cuando se introduce ADN en células tales como células primarias o líneas celulares modificadas.
Hay una necesidad en la técnica de modalidades biológicas para abordar la modulación de la traducción intracelular de ácidos nucleicos.
El documento WO 2007/024708 A2 se refiere al ARN que comprende determinados nucleósidos modificados, particularmente la pseudouridina, que se descubrió que reduce la inmunogenicidad del ARN.
RESUMEN
La presente invención se define en las reivindicaciones y, por lo tanto, proporciona un procedimiento para sintetizar un ARNm, que comprende las etapas de:
a) proporcionar un ácido desoxirribonucleico complementario (ADNc) que codifica una proteína de interés; b) seleccionar un nucleótido que se sabe que interrumpe la unión de un componente asociado de unión al surco mayor con un ácido nucleico, donde el nucleótido tiene una afinidad de unión disminuida con el componente asociado de unión al surco mayor;
c) poner en contacto el ADNc proporcionado y el nucleótido seleccionado con una ARN polimerasa en condiciones tales que se sintetice el ARNm,
donde el nucleótido comprende N1-metil-pseudouridina, y
donde el 100 % de los nucleótidos que comprenden uracilo en el ARN se reemplazan con nucleótidos que comprenden N1-metil-pseudouridina.
La invención también proporciona un ARNm donde el 100 % de los nucleótidos que comprenden uracilo en el ARNm se reemplazan con nucleótidos que comprenden N1-metil-pseudouridina.
La presente descripción se refiere, entre otras cosas, a nucleósidos modificados, nucleótidos modificados y ácidos nucleicos modificados que pueden mostrar una respuesta inmunitaria innata reducida cuando se introducen en una población de células, tanto in vivo como ex vivo. Además, estos nucleósidos modificados, nucleótidos modificados y ácidos nucleicos modificados descritos en esta invención pueden interrumpir la unión de un componente asociado que interactúa con el surco mayor con el ácido nucleico. Debido a la inmunogenicidad reducida y la disminución de las interacciones del surco mayor, estos nucleósidos modificados, nucleótidos modificados y ácidos nucleicos modificados pueden ser más eficaces durante la producción de proteínas que, por ejemplo, los ácidos nucleicos no modificados.
Por lo tanto, la presente descripción se refiere a compuestos que comprenden nucleótidos que pueden interrumpir la unión de un componente asociado de unión al surco mayor con un ácido nucleico, donde el nucleótido tiene una afinidad de unión disminuida con el componente asociado de unión al surco mayor. La presente descripción se refiere además a compuestos que tienen la Fórmula I:
Figure imgf000003_0001
donde las variables constituyentes se proporcionan en esta invención.
La presente descripción se refiere además a secuencias de ácidos nucleicos de al menos dos nucleótidos que comprenden un compuesto de Fórmula I-d:
Figure imgf000003_0002
donde las variables constituyentes se proporcionan en esta invención.
La presente descripción se refiere además a composiciones que comprenden al menos un compuesto de Fórmula I.
La presente descripción se refiere además a composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmula I.
La presente descripción se refiere además a procedimientos para preparar secuencias de ácidos nucleicos de al menos dos nucleótidos de un compuesto de Fórmula I-d.
La presente descripción se refiere además a procedimientos para amplificar secuencias de ácidos nucleicos de al menos dos nucleótidos de un compuesto de Fórmula I-d.
La presente descripción se refiere además a kits que comprenden un compuesto de Fórmula I.
A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en esta invención tienen el mismo significado que entiende comúnmente un experto en la materia a la que pertenece esta invención. En esta invención se describen procedimientos y materiales para su uso en relación con la presente invención; también pueden utilizarse otros procedimientos y materiales adecuados conocidos en la técnica. Los materiales, procedimientos y ejemplos son sólo ilustrativos y no pretenden ser limitativos.
En caso de conflicto con las referencias mencionadas en esta invención, prevalecerá la presente memoria descriptiva, incluyendo las definiciones.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
Las Fig. 1A y 1B representan imágenes de geles de agarosa no desnaturalizantes de cada ARN modificado transcrito in vitro.
Las Fig. 2A y 2B representan imágenes de un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) para el factor estimulante de colonias de granulocitos humanos (G-CSF) de células de queratinocitos humanos transfectadas in vitro con cada ARNmod indicado que codifica G-CSF humano y la línea indica un nivel de saturación del límite máximo detectable de G-CSF secretado en el ensayo.
Las Fig. 3A-N representan gráficos lineales de una serie de ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA) para el factor estimulante de colonias de granulocitos humanos (G-CSF) secretado a partir de células de queratinocitos humanos transfectadas in vitro en diferentes momentos con cada ARNmod que codifica G-CSF humano indicado en las dosis indicadas. La línea indica un nivel de saturación del límite máximo detectable de G-CSF secretado en el ensayo.
Las Fig. 4A y 4B representan gráficos de barras de una serie de ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA) para el factor de necrosis tumoral a (TNF-a) celular endógeno humano secretado a partir de células de queratinocitos humanos transfectadas in vitro a las 24 horas con cada ARNmod que codifica hu-G-CSF indicado en dosis crecientes.
Las Fig. 4C y 4D representan gráficos de barras de una serie de ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA) para el interferón-p (IFN-p) celular endógeno humano secretado a partir de células de queratinocitos humanos transfectadas in vitro a las 24 horas con cada ARNmod que codifica hu-G-CSF indicado en dosis crecientes.
Las Fig. 4E y 4F representan gráficos de barras de una serie de ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA) para el G-CSF humano secretado a partir de células de queratinocitos humanos transfectadas in vitro a las 24 horas con cada ARNmod que codifica hu-G-CSF indicado en dosis crecientes. La Fig.5A es una tabla que muestra los resultados de un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) para G-CSF humano secretado a partir de células de queratinocitos humanos transfectadas in vitro muestreadas de pocillos individuales en una placa de cultivo tisular de 24 pocillos de cocultivo 42 horas después de la transfección con 750 ng de cada ARNmod que codifica hu-G-CSF indicado.
La Fig.5B representa una imagen de un gel de agarosa de productos de ARNmod de hu-G-CSF por RT-PCR de extractos de células de cocultivo 42 horas después de la transfección de la capa alimentadora de queratinocitos humanos con ARNmod de hu-G-CSG y las células de cultivo de inserción Kasumi-1 y KG-1 no transfectadas.
Las Fig. 5C y 5D representan gráficos de resultados de un ensayo de proliferación celular inducido por hu-G-CSF-ARNmod de células Kasumi-1 (Fig. 5C) y KG-1 (Fig. 5D) normalizadas a células no transfectadas. Se indica la identidad del ARNmod de hu-G-CSF transfectado en células alimentadoras de queratinocitos humanos.
Las Fig. 6A-L representan gráficos de los espectros de absorbancia UV para moléculas de ARNmod ejemplares que incorporan el nucleótido modificado indicado.
DESCRIPCIÓN DETALLADA
La presente descripción se refiere, entre otras cosas, a nucleósidos modificados, nucleótidos modificados y ácidos nucleicos modificados que muestran una respuesta inmunitaria innata reducida cuando se introducen en una población de células. Los nucleósidos modificados, los nucleótidos modificados y los ácidos nucleicos modificados pueden modificarse químicamente en la cara del surco mayor, interrumpiendo así las interacciones de los componentes asociados de unión al surco mayor, que provocan respuestas inmunitarias innatas.
En general, los ácidos nucleicos exógenos no modificados, particularmente los ácidos nucleicos virales, introducidos en las células inducen una respuesta inmunitaria innata, lo que da como resultado la producción de citocinas e interferón (IFN) y la muerte celular. Sin embargo, es de gran interés para la terapia, el diagnóstico, los reactivos y los ensayos biológicos administrar un ácido nucleico, por ejemplo, un ácido ribonucleico (ARN) dentro de una célula, ya sea in vivo o ex vivo, tal como para provocar la traducción intracelular del ácido nucleico y la producción de la proteína codificada. De particular importancia es la entrega y la función de un ácido nucleico no integrador, ya que los ácidos nucleicos caracterizados por la integración en una célula diana son generalmente imprecisos en sus niveles de expresión, perjudicialmente transferibles a la progenie y a las células vecinas, y sufren el riesgo sustancial de causar mutación. En esta invención se describen en parte ácidos nucleicos que codifican polipéptidos útiles capaces de modular la función y/o actividad de una célula, y procedimientos para preparar y usar estos ácidos nucleicos y polipéptidos. Como se describe en esta invención, estos ácidos nucleicos son capaces de reducir la actividad inmunitaria innata de una población de células en la que se introducen, aumentando así la eficacia de la producción de proteínas en esa población celular. Además, se describen una o más actividades y/o propiedades ventajosas adicionales de los ácidos nucleicos y proteínas de la presente descripción.
Además, los nucleósidos modificados, los nucleótidos modificados y los ácidos nucleicos modificados descritos en esta invención pueden modificarse en la cara del surco mayor. Estas modificaciones del surco mayor pueden permitir alteraciones, por.ejemplo, una disminución, en la interacción de los nucleósidos modificados, nucleótidos modificados y ácidos nucleicos modificados con un componente asociado del surco de unión.
En consecuencia, en un primer aspecto, la presente descripción describe compuestos que comprenden un nucleótido que puede interrumpir la unión de un componente asociado que interactúa, por ejemplo, se une al surco mayor con un ácido nucleico, donde el nucleótido tiene una afinidad de unión disminuida con los componentes asociados que interactúan, por ejemplo, se unen al surco mayor.
En otro aspecto, la presente descripción describe compuestos que comprenden un nucleótido que contiene modificaciones químicas, donde el nucleótido puede tener una unión alterada con los componentes asociados que interactúan, por ejemplo, se unen al surco mayor.
En algunos casos, las modificaciones químicas están ubicadas en la cara del surco mayor de la nucleobase, y donde las modificaciones químicas pueden incluir reemplazar o sustituir un átomo de una nucleobase de pirimidina con una amina, un SH, un alquilo (por ejemplo, metilo o etilo), o un halo (por ejemplo, cloro o flúor). En algunos casos, las modificaciones químicas se pueden ubicar en la cara del surco mayor de la nucleobase, y donde la modificación química pueden incluir reemplazar o sustituir un átomo de una nucleobase de pirimidina con una amina, un SH, un metilo o etilo, o un cloro o flúor.
En algunos casos, las modificaciones químicas pueden ubicarse en el resto de azúcar del nucleótido.
En algunos casos, las modificaciones químicas pueden ubicarse en la cadena principal de fosfato del nucleótido. En algunos casos, las modificaciones químicas pueden alterar la electroquímica en la cara del surco mayor del nucleótido.
En otro aspecto, la presente descripción se refiere a nucleótidos que contienen modificaciones químicas, donde el nucleótido reduce la respuesta inmunitaria innata celular, en comparación con la respuesta inmunitaria innata celular inducida por un ácido nucleico no modificado correspondiente.
En otro aspecto, la presente descripción se refiere a secuencias de ácido nucleico que comprenden al menos dos nucleótidos, comprendiendo la secuencia de ácido nucleico un nucleótido que interrumpe la unión de un componente asociado que interactúa con el surco mayor con la secuencia de ácido nucleico, donde el nucleótido tiene una afinidad de unión disminuida con el componente asociado de unión al surco mayor. En otro aspecto, la presente descripción se refiere a composiciones que comprenden un compuesto como se describe en esta invención.
En algunos casos, la composición es una mezcla de reacción.
En algunos casos, la composición es una composición farmacéutica.
En algunos casos, la composición es un cultivo celular.
En algunos casos, las composiciones comprenden además una polimerasa de ARN y una plantilla de ADNc. En algunos casos, las composiciones comprenden además un nucleótido seleccionado de entre el grupo que consiste en adenosina, citosina, guanosina y uracilo.
En un aspecto adicional, la presente descripción se refiere a procedimientos para sintetizar un ácido nucleico farmacéutico, que comprende proporcionar un ácido desoxirribonucleico (ADNc) complementario que codifica una proteína farmacéutica de interés; seleccionar un nucleótido que se sabe que interrumpe la unión de un componente asociado de unión al surco mayor con un ácido nucleico, donde el nucleótido tiene una afinidad de unión disminuida con el componente asociado de unión al surco mayor; y poner en contacto el ADNc proporcionado y el nucleótido seleccionado con una ARN polimerasa, en condiciones tales que se sintetice el ácido nucleico farmacéutico.
En algunos casos, el ácido nucleico farmacéutico es un ácido ribonucleico (ARN).
En un aspecto adicional, la presente descripción se refiere a procedimientos para preparar una formulación farmacéutica que comprende una proteína secretada fisiológicamente activa, que comprende transfectar una primera población de células humanas con un ácido nucleico farmacéutico preparado mediante los procedimientos descritos en esta invención, donde la proteína secretada es activa sobre una segunda población de células humanas.
En algunos casos, la proteína secretada es capaz de interactuar, por ejemplo, unirse, con un receptor en la superficie de al menos una célula presente en la segunda población.
En algunos casos, la proteína secretada es el factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF).
En algunos casos, la segunda población contiene células mieloblásticas que expresan el receptor de G-CSF.
En un aspecto adicional, la presente descripción se refiere a procedimientos para preparar una formulación farmacéutica que comprende células humanas que comprenden una proteína secretada fisiológicamente activa, que comprende transfectar una primera población de células humanas con un ácido nucleico farmacéutico preparado mediante los procedimientos descritos en esta invención, donde la proteína secretada es activa sobre una segunda población de células humanas.
Definiciones
En varios lugares de la presente memoria descriptiva, los sustituyentes de los compuestos de la presente divulgación se describen en grupos o en intervalos. Se pretende específicamente que la presente descripción incluya todas y cada una de las subcombinaciones individuales de los miembros de dichos grupos e intervalos. Por ejemplo, el término "alquilo C W está destinado específicamente a describir individualmente metilo, etilo, alquilo C3 , alquilo C4 , alquilo C5 y alquilo C6.
Se pretende, además, que los compuestos de la presente descripción sean estables. Como se usa en esta invención, el término "estable" se refiere a un compuesto que es lo suficientemente sólido para sobrevivir al aislamiento con un grado útil de pureza a partir de una mezcla de reacción y, preferentemente capaz de formularse como un agente terapéutico eficaz.
Se aprecia, además, que determinadas características de la presente descripción que, con fines de claridad, se describen por separado, también se pueden proporcionar en combinación.
Por el contrario, diversas características de la descripción que a efectos de brevedad se describen en el contexto de un único aspecto, también se pueden proporcionar por separado o en cualquier subcombinación adecuada.
Como se usa en esta invención, el término "alquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo saturado que es de cadena lineal o ramificada. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen metilo (Me), etilo (Et), propilo (por ejemplo, n-propilo e isopropilo), butilo (por ejemplo, n-butilo, isobutilo, t-butilo), pentilo (por ejemplo, n-pentilo, isopentilo, neopentilo), y similares. Un grupo alquilo puede contener de 1 a alrededor de 20, de 2 a alrededor de 20, de 1 a alrededor de 12, de 1 a alrededor de 8, de 1 a alrededor de 6, de 1 a alrededor de 4, o de 1 a alrededor de 3 átomos de carbono.
Como se usa en esta invención, el término "alquenilo" se refiere a un grupo alquilo con uno o más enlaces dobles carbono-carbono. Los grupos alquenilo de ejemplo incluyen etenilo, propenilo, y similares.
Como se usa en esta invención, el término "alcoxi" se refiere a un grupo -O-alquilo. Los grupos alcoxi de ejemplo incluyen metoxi, etoxi, propoxi (por ejemplo, n-propoxi e isopropoxi), t-butoxi, y similares.
Como se usa en esta invención, el término "alquinilo" se refiere a un grupo alquilo con uno o más enlaces triples carbono-carbono. Los grupos alquinilo de ejemplo incluyen etinilo, propinilo, y similares.
Como se usa en esta invención, el término "arilo" se refiere a hidrocarburos aromáticos monocíclicos o policíclicos (por ejemplo, que tienen 2, 3 o 4 anillos fusionados) tales como, por ejemplo, fenilo, naftilo, antracenilo, fenantrenilo, indanilo, indenilo, y similares. En algunos casos, los grupos arilo tienen de 6 a alrededor de 20 átomos de carbono.
Como se usa en esta invención, el término "halo" o "halógeno" incluye flúor, cloro, bromo y yodo.
Como se usa en esta invención, el término "agente terapéutico" se refiere a cualquier agente que, cuando se administra a un sujeto, tiene un efecto terapéutico, de diagnóstico y/o profiláctico y/o provoca un efecto biológico y/o farmacológico deseado.
Como se usa en esta invención, el término "animal" se refiere a cualquier miembro del reino animal. En algunos casos, "animal" se refiere a seres humanos en cualquier etapa de desarrollo. En algunos casos, "animal" se refiere a animales no humanos en cualquier etapa de desarrollo. En determinados casos, el animal no humano es un mamífero (por ejemplo, un roedor, un ratón, una rata, un conejo, un mono, un perro, un gato, una oveja, ganado vacuno, un primate o un cerdo). En algunos casos, los animales incluyen, pero no se limitan a, mamíferos, aves, reptiles, anfibios, peces y gusanos. En algunos casos, el animal es un animal transgénico, un animal modificado genéticamente o un clon.
Como se usa en esta invención, la expresión "aproximadamente" o "alrededor de", según se aplica a uno o más valores de interés, se refiere a un valor que es similar a un valor de referencia establecido. En determinados casos, "aproximadamente" o "alrededor de" se refiere a un intervalo de valores que se encuentra dentro del 25 %, 20 %, 19 %, 18 %, 17 %, 16 %, 15 %, 14 %, 13 %, 12 %, 11 %, 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 % o menos en cualquier dirección (mayor o menor) del valor de referencia establecido, a menos que se indique lo contrario, o resulte evidente de otro modo a partir del contexto (salvo que dicho número exceda el 100 % de un valor posible).
Como se usa en esta invención, las expresiones "asociado con", "conjugado", "enlazado", "unido" y "anclado", cuando se usan con respecto a dos o más restos, significa que los restos están físicamente asociados o conectados entre sí, ya sea directamente o mediante uno o más restos adicionales que sirven como agente de enlace, para formar una estructura que sea suficientemente estable de modo que los restos permanezcan físicamente asociados en las condiciones en las que se usa la estructura, por ejemplo, condiciones fisiológicas.
Como se usa en esta invención, la expresión "biológicamente activo" se refiere a una característica de cualquier sustancia que tenga actividad en un sistema y/u organismo biológico. Por ejemplo, una sustancia que, cuando se administra a un organismo, tiene un efecto biológico sobre ese organismo, se considera biológicamente activa. En casos particulares, en los que un ácido nucleico es biológicamente activo, una porción de ese ácido nucleico que comparte al menos una actividad biológica del ácido nucleico completo se denomina típicamente porción "biológicamente activa".
Como se usa en esta invención, el término "conservado" se refiere a nucleótidos o residuos de aminoácidos de una secuencia de polinucleótidos o secuencia de aminoácidos, respectivamente, que son los que se producen inalterados en la misma posición de dos o más secuencias relacionadas que se comparan. Los nucleótidos o aminoácidos que están relativamente conservados son aquellos que se conservan entre más secuencias relacionadas que los nucleótidos o aminoácidos que aparecen en otras partes de las secuencias. En algunos casos, se dice que dos o más secuencias están "completamente conservadas" si son 100 % idénticas entre sí. En algunos casos, se dice que dos o más secuencias están "altamente conservadas" si son al menos un 70 % idénticas, al menos un 80 % idénticas, al menos un 90 % idénticas, o al menos un 95 % idénticas entre sí. En algunos casos, se dice que dos o más secuencias están "altamente conservadas" si son alrededor de un 70 % idénticas, alrededor de un 80 % idénticas, alrededor de un 90 % idénticas, alrededor de un 95 %, alrededor de un 98 %, o alrededor de un 99 % idénticas entre sí. En algunos casos, se dice que dos o más secuencias están "conservadas" si son al menos un 30 % idénticas, al menos un 40 % idénticas, al menos un 50 % idénticas, al menos un 60 % idénticas, al menos un 70 % idénticas, al menos un 80 % idénticas, al menos un 90 % idénticas, o al menos un 95 % idénticas entre sí. En algunos casos, se dice que dos o más secuencias están "conservadas" si son alrededor de un 30 % idénticas, alrededor de un 40 % idénticas, alrededor de un 50 % idénticas, alrededor de un 60 % idénticas, alrededor de un 70 % idénticas, alrededor de un 80 % idénticas, alrededor de un 90 % idénticas, alrededor de un 95 % idénticas, alrededor de un 98 % idénticas, o alrededor de un 99 % idénticas entre sí.
Como se usa en esta invención, la "expresión" de una secuencia de ácido nucleico se refiere a uno o más de los eventos siguientes: (1) producción de una plantilla de ARN a partir de una secuencia de ADN (por ejemplo, mediante transcripción); (2) procesamiento de un transcrito de ARN (por ejemplo, mediante splicing, edición, formación de cap en 5' y/o procesamiento en el extremo 3'); (3) traducción de un ARN en un polipéptido o proteína; y (4) modificación postraduccional de un polipéptido o proteína.
Como se usa en esta invención, una molécula biológica "funcional" es una molécula biológica en una forma que presenta una propiedad y/o actividad por la cual se caracteriza.
Como se usa en esta invención, la expresión "in vitro" se refiere a eventos que se producen en un ambiente artificial, por ejemplo, en un tubo de ensayo o en un recipiente de reacción, en un cultivo celular, en una placa de Petri, etc., y no dentro de un organismo (por ejemplo, animal, planta o microbio).
Como se usa en esta invención, "in vivo" se refiere a eventos que se producen dentro de un organismo (por ejemplo, animal, planta o microbio).
Como se usa en esta invención, el término "aislado" se refiere a una sustancia o entidad que ha sido (1) separada de al menos algunos de los componentes con los cuales estuvo asociada cuando fue inicialmente producida (ya sea en la naturaleza o en un entorno experimental) y/o (2) producida, preparada y/o fabricada por el ser humano. Las sustancias y/o entidades aisladas pueden separarse de al menos alrededor del 10 %, alrededor del 20 %, alrededor del 30 %, alrededor del 40 %, aproximadamente el 50 %, alrededor del 60 %, alrededor del 70 %, alrededor del 80 %, alrededor del 90 % o más de los otros componentes a los cuales estuvieron inicialmente asociadas. En algunas realizaciones los agentes aislados tienen una pureza de más de alrededor del 80 %, alrededor del 85 %, alrededor del 90 %, alrededor del 91 %, alrededor del 92 %, alrededor del 93 %, alrededor del 94 %, alrededor del 95 %, alrededor del 96 %, alrededor del 97 %, alrededor del 98 %, alrededor del 99 %, o más de alrededor del 99 %. Como se usa en esta invención, una sustancia es "pura” si se encuentra sustancialmente libre de otros componentes.
Como se usa en esta invención, el término “sujeto” o "paciente" se refiere a cualquier organismo al que se pueda administrar una composición según la presente descripción, por ejemplo, con fines experimentales, de diagnóstico, profilácticos y/o terapéuticos. Los sujetos típicos incluyen animales (por ejemplo, mamíferos tales como ratones, ratas, conejos, primates no humanos y humanos) y/o plantas.
Como se usa en esta invención, el término "sustancialmente" se refiere a la condición cualitativa de mostrar una medida o grado total, o casi total, de una característica o propiedad de interés. Un experto en las técnicas biológicas comprenderá que los fenómenos biológicos y químicos en raras ocasiones, si es que se producen, se completan y/o llegan a completarse o logran o evitan un resultado absoluto. Por lo tanto, "sustancialmente" se usa en esta invención para capturar la posible falta de integridad inherente a muchos fenómenos biológicos y químicos.
Un individuo "que padece" una enfermedad, trastorno y/o afección ha sido diagnosticado o presenta uno o más síntomas de una enfermedad, trastorno y/o afección.
Un individuo que es "susceptible" a una enfermedad, trastorno y/o afección no ha sido diagnosticado y/o puede no presentar síntomas de la enfermedad, trastorno y/o afección. En algunas realizaciones, un individuo que es susceptible a una enfermedad, trastorno y/o afección (por ejemplo, cáncer) puede caracterizarse por uno o más de los siguientes: (1) una mutación genética asociada con el desarrollo de la enfermedad, trastorno y/o afección; (2) un polimorfismo genético asociado con el desarrollo de la enfermedad, trastorno y/o afección; (3) expresión y/o actividad aumentada y/o disminuida de una proteína y/o ácido nucleico asociado con la enfermedad, trastorno y/o afección; (4) hábitos y/o estilos de vida asociados con el desarrollo de la enfermedad, trastorno y/o afección; (5) antecedentes familiares de la enfermedad, trastorno y/o afección; y (6) exposición y/o infección con un microbio asociado con el desarrollo de la enfermedad, trastorno y/o afección. En algunos casos, un individuo que es susceptible a una enfermedad, trastorno y/o afección desarrollará la enfermedad, trastorno y/o afección. En algunos casos, un individuo que es susceptible a una enfermedad, trastorno y/o afección no desarrollará la enfermedad, trastorno y/o afección.
Como se usa en esta invención, la expresión "cantidad terapéuticamente efectiva" significa una cantidad de un agente a administrar (por ejemplo, ácido nucleico, fármaco, agente terapéutico, agente de diagnóstico, agente profiláctico, etc.) que es suficiente, cuando se administra. a un sujeto que padece o es susceptible a una enfermedad, trastorno y/o afección, para tratar, mejorar los síntomas, diagnosticar, prevenir y/o retrasar la aparición de la enfermedad, trastorno y/o afección.
Como se usa en esta invención, el término "factor de transcripción" se refiere a una proteína de unión al ADN que regula la transcripción del ADN en ARN, por ejemplo, mediante la activación o represión de la transcripción. Algunos factores de transcripción efectúan la regulación de la transcripción por sí solos, mientras que otros actúan en conjunto con otras proteínas. Algún factor de transcripción puede activar y reprimir la transcripción bajo ciertas condiciones. En general, los factores de transcripción se unen a una secuencia o secuencias diana específicas muy similares a una secuencia consenso específica en una región reguladora de un gen diana. Los factores de transcripción pueden regular la transcripción de un gen diana solos o en un complejo con otras moléculas.
Como se usa en esta invención, el término "tratar" se refiere a aliviar parcial o totalmente, mitigar, mejorar, atenuar, retrasar el inicio de, inhibir la progresión de, reducir la gravedad de, y/o reducir la incidencia de uno o más síntomas o características de una enfermedad, trastorno y/o afección particular. Por ejemplo, "tratar" el cáncer puede referirse a inhibir la supervivencia, el crecimiento y/o la diseminación de un tumor. El tratamiento puede administrarse a un sujeto que no muestra signos de una enfermedad, trastorno y/o afección, y/o a un sujeto que muestra únicamente síntomas iniciales de una enfermedad, trastorno y/o afección, con el fin de disminuir el riesgo de desarrollar una patología asociada con la enfermedad, trastorno y/o afección. En algunos casos, el tratamiento comprende el suministro de una proteína asociada con un ácido nucleico terapéuticamente activo a un sujeto que lo necesite.
Como se usa en esta invención, la expresión "no modificado" se refiere a un ácido nucleico antes de ser modificado, por ejemplo, adenosina, guanosina, citosina, timidina y uracilo, o un aminoácido natural. Los compuestos que se describen en esta invención pueden ser asimétricos (por ejemplo, tener uno o más estereocentros). Todos los estereoisómeros, tales como enantiómeros y diastereómeros, están destinados a menos que se indique lo contrario. Los compuestos de la presente divulgación que contienen átomos de carbono sustituidos asimétricamente pueden aislarse en formas ópticamente activas o racémicas. Se conocen en la técnica procedimientos sobre cómo preparar formas ópticamente activas a partir de materiales de partida ópticamente activos, tales como por resolución de mezclas racémicas o por síntesis estereoselectiva. Muchos isómeros geométricos de olefinas, dobles enlaces C=N, y similares también pueden estar presentes en los compuestos descritos en esta invención, y todos estos isómeros estables se contemplan en la presente descripción. Los isómeros geométricos cis y trans de los compuestos de la presente descripción se describen y pueden aislarse como una mezcla de isómeros o como formas isoméricas separadas.
Los compuestos de la presente descripción también incluyen formas tautoméricas. Las formas tautoméricas son el resultado del intercambio de un enlace simple con un enlace doble adyacente junto con la migración concomitante de un protón. Las formas tautoméricas incluyen tautómeros prototrópicos que son estados de protonación isoméricos que tienen la misma fórmula empírica y carga total. Los tautómeros prototrópicos de ejemplo incluyen pares cetona-enol, pares amida-ácido imídico, pares lactama-lactima, pares amida-ácido imídico, pares enamina-imina y formas anulares donde un protón puede ocupar dos o más posiciones de un sistema heterocíclico, por ejemplo, 1H- y 3H-imidazol, 1H-, 2h - y 4H- 1, 2, 4-triazol, 1H- y 2H- isoindol y 1H- y 2H-pirazol. Las formas tautoméricas pueden estar en equilibrio o bloqueadas estéricamente en una forma mediante una sustitución apropiada.
Los compuestos de la presente descripción también pueden incluir todos los isótopos de los átomos que se encuentran en los compuestos intermedios o finales. Los isótopos incluyen aquellos átomos que tienen el mismo número atómico pero diferentes números de masa. Por ejemplo, los isótopos de hidrógeno incluyen tritio y deuterio.
El término "compuesto", como se usa en esta invención, pretende incluir todos los estereoisómeros, isómeros geométricos, tautómeros e isótopos de las estructuras representadas.
Los compuestos de la presente descripción pueden aislarse sustancialmente. Por "sustancialmente aislado" se entiende que el compuesto está al menos parcial o sustancialmente separado del entorno donde se formó o detectó. La separación parcial puede incluir, por ejemplo, una composición enriquecida en el compuesto de la presente descripción. La separación sustancial puede incluir composiciones que contienen al menos aproximadamente 50 %, al menos aproximadamente 60 %, al menos aproximadamente 70 %, al menos aproximadamente 80 %, al menos aproximadamente 90 %, al menos aproximadamente 95 %, al menos aproximadamente 97 % o al menos aproximadamente el 99 % en peso del compuesto de la presente divulgación, o una sal del mismo. Los procedimientos para aislar compuestos y sus sales son habituales en la técnica.
Los compuestos de la presente descripción, y sales de los mismos, se pueden preparar en combinación con moléculas de agua o disolvente para formar solvatos e hidratos mediante procedimientos habituales.
La presente descripción también incluye las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos descritos en esta invención. Como se usa en esta invención, la expresión "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a derivados de los compuestos descritos donde se modifica el compuesto original al convertir un resto básico o ácido existente en su forma de sal. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sales de ácidos minerales u orgánicos de residuos básicos tales como aminas; sales alcalinas u orgánicas de residuos ácidos tales como ácidos carboxílicos; y similares. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente descripción incluyen las sales no tóxicas convencionales del compuesto original formado, por ejemplo, a partir de ácidos inorgánicos u orgánicos no tóxicos. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente descripción se pueden sintetizar a partir del compuesto principal que contiene un resto ácido o básico mediante procedimientos químicos convencionales. Generalmente, dichas sales se pueden preparar haciendo reaccionar las formas de ácido o base libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o el ácido apropiados en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de los dos; generalmente, se prefieren medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo. En Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418 y Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977) se encuentran listas de sales adecuadas.
La expresión "farmacéuticamente aceptable" se emplea en esta invención para hacer referencia a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que, dentro del alcance del criterio médico sensato, son adecuados para su uso en contacto con tejidos humanos y animales sin provocar una toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, con una relación beneficio/riesgo razonable.
La presente descripción también incluye profármacos de los compuestos descritos en esta invención. Como se usa en esta invención, el término "profármacos" se refiere a cualquier vehículo, típicamente unido covalentemente, que libera el fármaco original activo cuando se administra a un sujeto mamífero. Los profármacos se pueden preparar modificando grupos funcionales presentes en los compuestos de tal forma que las modificaciones se escindan, bien con su manipulación habitual o bien in vivo, de los compuestos originales. Los profármacos incluyen compuestos donde los grupos hidroxilo, amino, sulfhidrilo o carboxilo están unidos a cualquier grupo que, cuando se administra a un sujeto mamífero, se escinde para formar un grupo hidroxilo, amino, sulfhidrilo o carboxilo libre, respectivamente. Los ejemplos de profármacos incluyen, pero no se limitan a, derivados de acetato, formiato y benzoato de grupos funcionales de alcohol y amina en los compuestos de la presente descripción. En T. Higuchi y V. Stella, "Prodrugs as Novel Delivery Systems" vol. 14 de la serie del Simposio ACS, y en Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, Asociación Farmacéutica Americana y Pergamon Press, 1987, se analiza la preparación y uso de profármacos.
Nucleósidos y nucleótidos modificados
La presente descripción se refiere a nucleósidos y nucleótidos modificados. Como se describe en esta invención, el término "nucleósido" se define como un compuesto que contiene una molécula de azúcar de cinco carbonos (una pentosa o ribosa) o un derivado de la misma, y una base orgánica, purina o pirimidina, o un derivado de la misma. Como se describe en esta invención, el término "nucleótido" se define como un nucleósido que consiste en un grupo fosfato. Los nucleósidos y nucleótidos descritos en esta invención generalmente se modifican químicamente en la cara del surco mayor. En algunos casos, las modificaciones químicas del surco mayor pueden incluir un grupo amino, un grupo tiol, un grupo alquilo, o un grupo halo.
La Tabla 1 a continuación identifica las caras químicas de cada nucleótido canónico. Los círculos identifican los átomos que comprenden las respectivas regiones químicas.
Cara de apareamiento
Cara del surco Cara del surco de bases de
Figure imgf000010_0001
Figure imgf000010_0002
Los nucleósidos modificados incluyen piridin-4-ona ribonucleósido, 5-aza-uridina, 2-tio-5-aza-uridina, 2-tiouridina, 4-tio-pseudouridina, 2-tio-pseudouridina, 5-hidroxiuridina, 3-metiluridina, 5-carboximetil-uridina, 1-carboximetil-pseudouridina, 5-propinil-uridina, 1-propinil-pseudouridina, 5-taurinometiluridina, 1-taurinometilpseudouridina, 5-taurinometil-2-tio-uridina, 1-taurinometil-4-tiouridina, 5-metil-uridina, 1-metil-pseudouridina, 4-tio-1-metil-pseudouridina, 2-tio-1-metil-pseudouridina, 1-metil-1-deaza-pseudouridina, 2-tio-1-metil-1-deazapseudouridina, dihidrouridina, dihidropseudouridina, 2-tio-dihidrouridina, 2-tio-dihidropseudouridina, 2-metoxiuridina, 2-metoxi-4-tio-uridina, 4-metoxi-pseudouridina y 4-metoxi-2-tio-pseudouridina.
Los nucleósidos modificados incluyen 5-aza-citidina, pseudoisocitidina, 3-metil-citidina, N4-acetilcitidina, 5-formilcitidina, N4-metilcitidina, 5-hidroximetilcitidina, 1-metil-pseudoisocitidina, pirrolo-citidina, pirrolopseudoisocitidina, 2-tio-citidina, 2-tio-5-metil-citidina, 4-tio-pseudoisocitidina, 4-tio-1-metil-pseudoisocitidina, 4-tio-1-metil-1-deaza-pseudoisocitidina, 1-metil-1-deaza-pseudoisocitidina, zebularina, 5-aza-zebularina, 5-metilzebularina, 5-aza-2-tio-zebularina, 2-tio-zebularina, 2-metoxi-citidina, 2-metoxi-5-metil-citidina, 4-metoxipseudoisocitidina y 4-metoxi-1-metil-pseudoisocitidina.
Los nucleósidos modificados incluyen 2-aminopurina, 2,6-diaminopurina, 7-deaza-adenina, 7-deaza-8-azaadenina, 7-deaza-2-aminopurina, 7-deaza-8-aza-2-aminopurina, 7-deaza-2,6-diaminopurina, 7-deaza-8-aza-2,6-diaminopurina, 1-metiladenosina, N6-metiladenosina, N6-isopenteniladenosina, N6-(cishidroxiisopentenil)adenosina, 2-metiltio-N6-(cis-hidroxiisopentenil) adenosina, N6-glicinilcarbamoiladenosina, N6-treonilcarbamoiladenosina, 2-metiltio-N6-treonil carbamoiladenosina, N6,N6-dimetiladenosina, 7-metiladenina, 2-metiltio-adenina y 2-metoxi-adenina.
Los nucleósidos modificados incluyen inosina, 1-metil-inosina, wyosina, wybutosina, 7-dcaza-guanosinac, 7-deaza-8-aza-guanosina, 6-tio-guanosina, 6-tio-7-deaza-guanosina, 6-tio-7-deaza-8-aza-guanosina, 7-metilguanosina, 6-tio-7-metil-guanosina, 7-metilinosina, 6-metoxi-guanosina, 1-metilguanosina, N2-metilguanosina, N2,N2-dimetilguanosina, 8-oxo-guanosina, 7-metil-8-oxo-guanosina, 1-metil-6-tio-guanosina, N2-metil-6-tioguanosina y N2,N2-dimetil-6-tio-guanosina.
El nucleótido se puede modificar en la cara del surco mayor y puede incluir el reemplazo del hidrógeno en C-5 de uracilo con un grupo metilo o un grupo halo.
El nucleósido y el nucleótido pueden ser un compuesto de Fórmula I:
Figure imgf000011_0001
donde:
Z es O S;
cada uno de Y1 se selecciona independientemente de entre -ORa1, -NRa1Rb1y -SRa1;
cada uno de Y2 se selecciona independientemente de entre O, NRa, S o un enlazador que comprende un átomo seleccionado de entre el grupo que consiste en C, O, N y S;
cada uno de Y3 se selecciona independientemente de entre O y S;
Y4 se selecciona de entre H, -ORa, -SRay -NHRa;
n es 0, 1, 2 o 3;
m es 0, 1,2 o 3;
B es una nucleobase;
Ra es H, alquilo C1-20, alquenilo C2-20, alquinilo C2-20 o arilo C6-20;
cada Ra1 y Rb1 son independientemente H o un contraión; e
-Y3-Rc1 es OH o SH a un pH de alrededor de 1 o -Y3-Rc1 es O- o S- a pH fisiológico;
o -Y3-Rc1 es alcoxi C1-20, O-alquenilo C2-20 u O-alquinilo C1-20;
donde cuando B es una nucleobase no modificada seleccionada de entre citosina, guanina, uracilo y adenina, entonces al menos uno de Z, Y1 o Y2 no es O ni OH.
En algunos casos, B es una nucleobase de Fórmula II-a, II-b o II-c:
Figure imgf000011_0002
donde:
indica un enlace simple o doble;
X es O o S;
cada U y W son independientemente C o N;
V es O, S, C o N;
donde cuando V es C entonces R1 es H, alquilo C1-6 , alquenilo C1-6 , alquinilo C1-6 , halo u -ORc, donde cada alquilo C1-20, alquenilo C2-20, alquinilo C2-20 están opcionalmente sustituidos con -OH, -NRaRb, -SH, -C(O)Rc, -C(O)ORc, -NHC(O)Rc, o -NHC(O)ORc;
y donde cuando V es O, S o N entonces R1 está ausente;
R2 es H, -ORc, -SRc, -NRaRb, o halo;
o cuando V es C entonces R1 y R2 junto con los átomos de carbono a los que están unidos pueden formar un anillo de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido con 1-4 sustituyentes seleccionados de entre halo, -OH, -SH, -NRaRb, alquilo C1-20, alquenilo C2-20, alquinilo C2-20, alcoxi C1-20 o tioalquilo C1-20;
R3 es H o alquilo C1-20;
R4 es H o alquilo C1-20; donde cuando
Figure imgf000012_0001
indica un doble enlace entonces R4 está ausente, o N-R4, en conjunto, forma un N cargado positivamente sustituido con alquilo C1-20;
cada Ra y Rb son independientemente H, alquilo C1-20, alquenilo C2-20, alquinilo C2-20 o arilo C6-20; y Rc es H, alquilo C1-20, alquenilo C2-20, fenilo, bencilo, un grupo polietilenglicol, o un grupo aminopolietilenglicol.
En algunos casos, B es una nucleobase de Fórmula II-a1, II-a2, II-a3, II-a4 o II-a5:
Figure imgf000012_0002
En algunos casos, B es una nucleobase seleccionada de entre el grupo que consiste en citosina, guanina, adenina y uracilo.
En algunos casos, B es una pirimidina o un derivado de la misma.
En algunos casos el nucleótido es un compuesto de Fórmula I-a:
Figure imgf000012_0003
En algunos casos el nucleótido es un compuesto de Fórmula I-b;
Figure imgf000012_0004
Fórmula I-c;
Figure imgf000013_0001
o se selecciona de entre el grupo que consiste en
Figure imgf000013_0002
En algunos casos, el nucleótido se selecciona de entre el grupo que consiste en:
Figure imgf000013_0003
Figure imgf000014_0001
Por ejemplo, el nucleótido modificado puede ser:
Figure imgf000014_0002
En algunos casos, la modificación química del surco mayor puede incluir el reemplazo del grupo C-H en C-5 con un grupo -NH- o un grupo -NH(CH3).
Por ejemplo, el nucleótido modificado puede ser:
Figure imgf000014_0003
En otro caso, la modificación química del surco mayor puede incluir el reemplazo del hidrógeno en C-5 de la citosina con un grupo halo o un grupo metilo.
Por ejemplo, el nucleótido modificado puede ser:
Figure imgf000014_0004
En otro caso adicional más, la modificación química del surco mayor puede incluir un anillo fusionado que está formado por el NH2 en la posición C-4 y el átomo de carbono en la posición C-5.
Por ejemplo, el nucleótido modificado puede ser:
Figure imgf000015_0001
En algunos casos, un nucleótido modificado es 5'-O-(1-Tiofosfato)-Adenosina, 5'-O-(1-Tiofosfato)-Citidina, 5'-O-(1-Tiofosfato)-Guanosina, 5'-O-(1-Tiofosfato)-Uridina o 5'-O-(1-Tiofosfato)-Pseudouridina.
Figure imgf000015_0002
Figure imgf000016_0001
El resto fosfato sustituido con a-tio se proporciona para conferir estabilidad a los polímeros de ARN y ADN a través de los enlaces de la cadena principal de fosforotioato no naturales. El ADN y el ARN de fosforotioato tienen una mayor resistencia a las nucleasas y, posteriormente, una semivida más prolongada en un entorno celular. Se espera que los ácidos nucleicos unidos a fosforotioato también reduzcan la respuesta inmunitaria innata a través de una unión/activación más débil de moléculas inmunitarias innatas celulares.
Los ejemplos de nucleótidos modificados y combinaciones de nucleótidos modificados adicionales se proporcionan a continuación en la Tabla 2.
Tabla 2
Figure imgf000016_0002
Figure imgf000017_0001
Síntesis de nucleótidos modificados
Los nucleósidos y nucleótidos modificados descritos en esta invención se pueden preparar a partir de materiales de partida fácilmente disponibles usando los siguientes procedimientos generales. Se entiende que cuando se dan condiciones de procedimiento típicas o preferidas (es decir, temperaturas de reacción, tiempos, relaciones molares de reactivos, disolventes, presiones, etc.), también se pueden utilizar otras condiciones de procedimiento a menos que se indique lo contrario. Las condiciones de reacción óptimas pueden variar con los reactivos particulares o el disolvente utilizado, pero un experto en la materia puede determinar dichas condiciones mediante procedimientos de optimización habituales.
Los procedimientos descritos en esta invención pueden monitorearse según cualquier procedimiento adecuado conocido en la técnica. Por ejemplo, la formación de productos se puede monitorear por medios espectroscópicos, tal como espectroscopía de resonancia magnética nuclear (por ejemplo, 1H o 13C), espectroscopía infrarroja, espectrofotometría (por ejemplo, UV visible) o espectrometría de masas, o por cromatografía tal como cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) o cromatografía de capa fina.
La preparaciónde nucleósidos y nucleótidos modificados puede implicar la protección y la desprotección de diversos grupos químicos. Un experto en la materia puede determinar fácilmente la necesidad de protección y desprotección y la selección de los grupos protectores apropiados. La química de los grupos protectores se puede encontrar, por ejemplo, en Greene, y col., Protective Groups in Organic Synthesis, 2a. ed., Wiley & Sons, 1991.
Las reacciones de los procedimientos descritos en esta invención se pueden llevar a cabo en disolventes adecuados que un experto en la técnica de la síntesis orgánica puede seleccionar fácilmente. Los disolventes adecuados pueden ser sustancialmente no reactivos con los materiales de partida (reactivos), los compuestos intermedios o los productos a las temperaturas a las que se llevan a cabo las reacciones, es decir, temperaturas que pueden variar entre la temperatura de congelación del disolvente y la temperatura de ebullición del disolvente. Se puede llevar a cabo una determinada reacción en un disolvente o en una mezcla de más de un disolvente. Dependiendo de la etapa de reacción particular, se pueden seleccionar disolventes adecuados para una etapa de reacción particular. La resolución de mezclas racémicas de nucleósidos y nucleótidos modificados se puede llevar a cabo mediante cualquiera de los numerosos procedimientos conocidos en la técnica. Un procedimiento de ejemplo incluye la recristalización fraccionada usando un "ácido de resolución quiral" que es un ácido orgánico formador de sal ópticamente activo. Los agentes de resolución adecuados para los procedimientos de recristalización fraccionada son, por ejemplo, ácidos ópticamente activos, tales como las formas D y L de ácido tartárico, ácido diacetiltartárico, ácido dibenzoiltartárico, ácido mandélico, ácido málico, ácido láctico o los diversos ácidos alcanforsulfónicos ópticamente activos. La resolución de mezclas racémicas también puede llevarse a cabo mediante la elución en una columna empacada con un agente de resolución ópticamente activo (por ejemplo, dinitrobenzoilfenilglicina). Un experto en la materia puede determinar la composición de disolvente de elución adecuada.
A continuación se proporcionan síntesis de nucleótidos modificados ejemplares en los Esquemas 1 y 2.
Figure imgf000018_0001
También se pueden preparar nucleósidos y nucleótidos modificados según los procedimientos sintéticos descritos en Ogata y col., Journal of Organic Chemistry 74:2585-2588, 2009; Purmal y col., Nucleic Acids Research 22(1): 72-78, 1994; Fukuhara y col., Biochemistry, 1(4): 563-568, 1962; y Xu y col., Tetrahedron, 48(9): 1729-1740, 1992.
Ácidos nucleicos modificados
La presente descripción se refiere a ácidos nucleicos, incluidos los ARN, tales como los ARNm que contienen uno o más nucleósidos modificados (denominados "ácidos nucleicos modificados") o nucleótidos como se describe en esta invención, que tienen propiedades útiles, incluida la disminución significativa o la falta de una inducción sustancial de la respuesta inmunitaria innata de una célula en la que se introduce el ARNm, o la supresión de la misma. Debido a que estos ácidos nucleicos modificados mejoran la eficiencia de la producción de proteínas, la retención intracelular de ácidos nucleicos y la viabilidad de las células en contacto, además de poseer una inmunogenicidad reducida, estos ácidos nucleicos en comparación con los ácidos nucleicos no modificados, que tienen estas propiedades se denominan "ácidos nucleicos mejorados" en esta invención.
Además, la presente descripción proporciona ácidos nucleicos, que tienen una afinidad de unión disminuida con un componente asociado que interactúa, por ejemplo, se une al surco mayor. Por ejemplo, los ácidos nucleicos están compuestos por al menos un nucleótido que se ha modificado químicamente en la cara del surco mayor como se describe en esta invención.
El término "ácido nucleico" en su sentido más amplio, incluye cualquier compuesto y/o sustancia que se encuentre o se pueda incorporar en una cadena de oligonucleótidos. Los ácidos nucleicos ejemplares para su uso según la presente descripción incluyen, pero no se limitan a, uno o más de ADN, ARN que incluye ARNm mensajero (ARNm), híbridos de los mismos, agentes inductores de ARNi, agentes de ARNi, ARNpi, ARNhc, miARN, ARN antisentido, ribozimas, ADN catalítico, ARN que inducen la formación de triple hélice, aptámeros, vectores, etc., descritos en detalle en esta invención.
Se describen ácidos nucleicos modificados que contienen una región traducible y una, dos o más de dos modificaciones de nucleósidos diferentes. En algunos casos, el ácido nucleico modificado muestra una degradación reducida en una célula en la que se introduce el ácido nucleico, en relación con un ácido nucleico no modificado correspondiente. Los ácidos nucleicos ejemplares incluyen ácidos ribonucleicos (ARN), ácidos desoxirribonucleicos (ADN), ácidos nucleicos treósicos (TNA), ácidos nucleicos de glicol (GNA), ácidos nucleicos bloqueados (LNA) o un híbridos de los mismos. En la invención, el ácido nucleico modificado es el ARN mensajero (ARNm). Como se describe en esta invención, los ácidos nucleicos de la presente descripción no inducen sustancialmente una respuesta inmunitaria innata de una célula en la que se introduce el ARNm.
En determinados casos, es deseable degradar intracelularmente un ácido nucleico modificado introducido en la célula, por ejemplo, si se desea una sincronización precisa de la producción de proteínas. Por lo tanto, la presente descripción proporciona un ácido nucleico modificado que contiene un dominio de degradación, sobre el que se puede actuar de manera dirigida dentro de una célula.
Otros componentes del ácido nucleico son opcionales y son beneficiosos en algunos casos. Por ejemplo, se describen una región no traducida (UTR) 5' y/o una 3'UTR, donde una o ambas pueden contener independientemente una o más modificaciones de nucleósido diferentes. En dichos casos, las modificaciones de nucleósidos también pueden estar presentes en la región traducible. También se describen ácidos nucleicos que contienen una secuencia Kozak.
Además, se describen ácidos nucleicos que contienen una o más secuencias de nucleótidos intrónicos capaces de escindirse del ácido nucleico.
Además, se describen ácidos nucleicos que contienen un sitio interno de entrada al ribosoma (IRES). Un IRES puede actuar como el único sitio de unión al ribosoma, o puede servir como uno de los múltiples sitios de unión al ribosoma de un ARNm. Un ARNm que contiene más de un sitio de unión al ribosoma funcional puede codificar varios péptidos o polipéptidos que los ribosomas traducen de forma independiente ("ARNm multicistrónico"). Cuando los ácidos nucleicos se proporcionan con un IRES, además se proporciona opcionalmente una segunda región traducible. Los ejemplos de secuencias IRES que se pueden usar según la presente descripción incluyen, sin limitación, aquellas de picornavirus (por ejemplo, FMDv ), virus de plagas (CFFV), virus de la polio (PV), virus de encefalomiocarditis (ECMV), virus de la fiebre aftosa (FMDV), virus de la hepatitis C (HCV), virus de la peste porcina clásica (CSFV), virus de la leucemia murina (MLV), virus de la inmunodeficiencia de los simios (VIS) o virus de la parálisis del grillo (CrPV).
En algunos casos, las secuencias de ácido nucleico comprenden un compuesto de Fórmula I-d:
Figure imgf000020_0001
donde:
Z es O S;
cada uno de Y1 se selecciona independientemente de entre -ORa1, -NRa1Rb1y -SRa1;
cada uno de Y2 se selecciona independientemente de entre O, NRa, S o un enlazador que comprende un átomo seleccionado de entre el grupo que consiste en C, O, N y S;
cada uno de Y3 se selecciona independientemente de entre O y S;
Y4 se selecciona de entre H, -ORa, -SRay -NHRa;
B es una nucleobase;
Ra es H, alquilo C1-20, alquenilo C2-20, alquinilo C2-20 o arilo C6-20;
cada Ra1 y Rb1 son independientemente H o un contraión; y
-Y3-Rc1 es OH o SH a un pH de alrededor de 1 o -Y3-Rc1 es O- o S- a pH fisiológico;
o -Y3-Rc1 es alcoxi C1-20, O-alquenilo C2-20 u O-alquinilo C1-20;
donde cuando B es una nucleobase no modificada seleccionada de entre citosina, guanina, timidina, uracilo y adenina, entonces al menos uno de Z, Y1 o Y2 no es O ni OH.
En algunos casos, B es una nucleobase de Fórmula II-a, II-b o II-c:
Figure imgf000020_0002
donde:
Figure imgf000020_0003
indica un enlace simple o doble;
X es O S;
cada U y W son independientemente C o N;
V es O, S, C o N;
donde cuando V es C entonces R1 es H, alquilo C1-6 , alquenilo C1-6 , alquinilo C1-6 , halo u -ORc, donde cada alquilo C1-20, alquenilo C2-20, alquinilo C2-20 están opcionalmente sustituidos con -OH, -NRaRb, -SH, -C(O)Rc, -C(O)ORc, -NHC(O)Rc, o -NHC(O)ORc;
y donde cuando V es O, S o N entonces R1 está ausente;
R2 es H, -ORc, -SRc, -NRaRb, o halo;
o cuando V es C entonces R1 y R2 junto con los átomos de carbono a los que están unidos pueden formar un anillo de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido con 1-4 sustituyentes seleccionados de entre halo, -OH, -SH, -NRaRb, alquilo C1-20, alquenilo C2-20, alquinilo C2-20, alcoxi C1-20 o tioalquilo C1-20;
R3 es H o alquilo C1-20;
R4 es H o alquilo C1-20; donde cuando
indica un doble enlace entonces R4 está ausente, o N-R4, en conjunto, forma un N cargado positivamente sustituido con alquilo C1-20;
cada Ra y Rb son independientemente H, alquilo C1-20, alquenilo C2-20, alquinilo C2-20 o arilo C6-20; y Rc es H, alquilo C1-20, alquenilo C2-20, fenilo, bencilo, un grupo polietilenglicol, o un grupo aminopolietilenglicol.
En algunos casos, B es una nucleobase de Fórmula II-a1, II-a2, II-a3, II-a4 o II-a5:
Figure imgf000021_0001
En algunos casos, al menos el 25 % de las citosinas se reemplazan por un compuesto de Fórmula I-a (por ejemplo, al menos alrededor del 30 %, al menos alrededor del 35 %, al menos alrededor del 40 %, al menos alrededor del 45 %, al menos alrededor del 50 %, al menos alrededor del 55 %, al menos alrededor del 60 %, al menos alrededor del 65 %, al menos alrededor del 70 %, al menos alrededor del 75 %, al menos alrededor del 80 %, al menos alrededor del 85 %, al menos alrededor del 90 %, al menos alrededor del 95 %, o alrededor del 100 %).
En algunos casos, al menos el 25 % de los uracilos se reemplazan por un compuesto de Fórmula I-a (por ejemplo, al menos alrededor del 30 %, al menos alrededor del 35 %, al menos alrededor del 40 %, al menos alrededor del 45 %, al menos alrededor del 50 %, al menos alrededor del 55 %, al menos alrededor del 60 %, al menos alrededor del 65 %, al menos alrededor del 70 %, al menos alrededor del 75 %, al menos alrededor del 80 %, al menos alrededor del 85 %, al menos alrededor del 90 %, al menos alrededor del 95 %, o alrededor del 100 %).
En algunos casos, al menos el 25 % de las citosinas y el 25 % de los uracilos se reemplazan por un compuesto de Fórmula I-a (por ejemplo, al menos alrededor del 30 %, al menos aproximadamente 35 %, al menos alrededor del 40 %, al menos alrededor del 45 %, al menos alrededor del 50 %, al menos alrededor del 55 %, al menos alrededor del 60 %, al menos alrededor del 65 %, al menos alrededor del 70 %, al menos alrededor del 75 %, al menos alrededor del 80 %, al menos alrededor del 85 %, al menos alrededor del 90 %, al menos alrededor del 95 %, o alrededor del 100 %).
Componentes asociados que interactúan con el surco mayor
Como se describe en esta invención, la expresión "componente asociado que interactúa con el surco mayor" se refiere a receptores de reconocimiento de ARN que detectan y responden a ligandos de ARN a través de interacciones, por ejemplo, unión, con la cara del surco mayor de un nucleótido o ácido nucleico. Como tales, los ligandos de ARN que comprenden nucleótidos o ácidos nucleicos modificados como se describe en esta invención disminuyen las interacciones con los componentes asociados de unión al surco mayor y, por lo tanto, disminuyen una respuesta inmunitaria innata, o la expresión y secreción de citocinas proinflamatorias, o ambas.
Los componentes asociados de queinteractúan, por ejemplo, se unen al surco mayor de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, las siguientes nucleasas y helicasas. Dentro de las membranas, los TLR (receptores tipo Toll) 3, 7 y 8 pueden responder a los ARN monocatenarios y bicatenarios. Dentro del citoplasma, los miembros de la superfamilia 2 clase de DEX(D/H) helicasas y ATPasas pueden detectar ARN para iniciar respuestas antivirales. Estas helicasas incluyen RiG-I (gen I inducible por ácido retinoico) y MDA5 (gen 5 asociado a la diferenciación de melanoma). Otros ejemplos incluyen el laboratorio de genética y fisiología 2 (LGP2), proteínas que contienen el dominio HIN-200 o proteínas que contienen el dominio helicasa.
Prevención o reducción de la activación de la respuesta inmunitaria celular innata utilizando ácidos nucleicos modificados
La expresión "respuesta inmunitaria innata" incluye una respuesta celular a ácidos nucleicos exógenos, incluidos ácidos nucleicos monocatenarios, generalmente de origen viral o bacteriano, que implica la inducción de la expresión y liberación de citocinas, particularmente los interferones, y la muerte celular. La síntesis de proteínas también se reduce durante la respuesta inmunitaria celular innata. Si bien es ventajoso eliminar la respuesta inmunitaria innata en una célula, la presente descripción proporciona ARNm modificados que reducen sustancialmente la respuesta inmunitaria, incluida la señalización de interferón, sin eliminar por completo dicha respuesta. En algunas realizaciones, la respuesta inmunitaria se reduce en un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 99 %, 99,9 % o más de un 99,9 %, en comparación con la respuesta inmunitaria inducida por un ácido nucleico no modificado correspondiente. Dicha reducción se puede medir por la expresión o el nivel de actividad de los interferones de tipo 1 o la expresión de genes regulados por interferones, tales como los receptores tipo toll (por ejemplo, TLR7 y TLR8). La reducción de la respuesta inmunitaria innata también puede medirse por la disminución de la muerte celular después de una o más administraciones de ARN modificados a una población celular; por ejemplo, la muerte celular es un 10 %, 25 %, 50 %, 75 %, 85 %, 90 %, 95 % o más de un 95 % menor que la frecuencia de muerte celular observada con un ácido nucleico no modificado correspondiente. Además, la muerte celular puede afectar a menos del 50 %, 40 %, 30 %, 20 %, 10 %, 5 %, 1 %, 0,1 %, 0,01 % o menos del 0,01 % de células en contacto con los ácidos nucleicos modificados.
En esta invención se describe la introducción repetida (por ejemplo, transfección) de ácidos nucleicos modificados en una población de células diana, por ejemplo, in vitro, ex vivo, o in vivo. La etapa de poner en contacto la población de células puede repetirse una o más veces (tal como dos, tres, cuatro, cinco o más de cinco veces). La etapa de poner en contacto la población de células con los ácidos nucleicos modificados puede repetirse un número de veces suficiente para lograr una eficiencia predeterminada de traducción de proteínas en la población celular. Dada la citotoxicidad reducida de la población de células diana proporcionada por las modificaciones del ácido nucleico, dichas transfecciones repetidas se pueden lograr en una serie diversa de tipos de células.
Variantes de polipéptidos
Se describen ácidos nucleicos que codifican polipéptidos variantes, que tienen una determinada identidad con una secuencia polipeptídica de referencia. El término "identidad", como se conoce en la técnica, se refiere a una relación entre las secuencias de dos o más péptidos, según se determina comparando las secuencias. En la técnica, identidad también significa el grado de relación de secuencia entre péptidos según lo determinado por el número de coincidencias entre cadenas de dos o más residuos de aminoácidos. La identidad mide el porcentaje de coincidencias idénticas entre la menor de dos o más secuencias con alineaciones de espacios (si los hubiera) conforme a un modelo matemático o programa informático particular (es decir, "algoritmos"). La identidad de los péptidos relacionados se puede calcular fácilmente mediante procedimientos conocidos. Dichos procedimientos incluyen, pero no se limitan a, los descritos en Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part 1, Griffin, A. M., y Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. y Devereux, J., eds., M. Stockton Press, New York, 1991; y Carillo y col., SIAM J. Applied Math. 48, 1073 (1988).
En algunos casos, la variante de polipéptido tiene la misma actividad o similar que el polipéptido de referencia. Alternativamente, la variante puede tiene una actividad alterada (por ejemplo, aumentada o disminuida) con respecto a un polipéptido de referencia. En general, las variantes de un polinucleótido o polipéptido particular de la presente descripción tendrán al menos alrededor del 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o más de identidad de secuencia con las del polinucleótido o polipéptido de referencia particular, según se determina mediante parámetros y programas de alineación de secuencia descritos en esta invención y conocidos por los expertos en la materia.
También se describen fragmentos de proteína, dominios de proteínas funcionales y proteínas homólogas, por ejemplo, cualquier fragmento de proteína de una proteína de referencia (es decir, una secuencia de polipéptidos al menos un residuo de aminoácido más corta que una secuencia de polipéptidos de referencia, pero de cualquier otro modo idéntica) de 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 o más de 100 aminoácidos de longitud. En otro ejemplo, cualquier proteína que incluya un tramo de alrededor de 20, alrededor de 30, alrededor de 40, alrededor de 50 o alrededor de 100 aminoácidos que sean alrededor del 40 %, alrededor del 50 %, alrededor del 60 %, alrededor del 70 %, alrededor del 80 %, alrededor del 90 %, alrededor del 95 % o alrededor del 100 % idénticos a cualquiera de las secuencias descritas en esta invención se puede utilizar según la presente descripción. En determinados casos, una secuencia de proteína para ser utilizada según la presente descripción incluye 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más mutaciones, según se muestra en cualquiera de las secuencias que se proporcionan o a las que se hace referencia en esta invención.
Bibliotecas de polipéptidos
También se describen bibliotecas de polinucleótidos que contienen modificaciones de nucleósidos, donde los polinucleótidos contienen individualmente una primera secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido, tal como un anticuerpo, un componente asociado de unión a proteínas, una proteína estructural y otros polipéptidos conocidos en la técnica. Preferentemente, los polinucleótidos son ARNm de la invención, en una forma adecuada para la introducción directa en una célula huésped diana, que a su vez sintetiza el polipéptido codificado.
Se pueden producir y probar múltiples variantes de una proteína, cada una con diferentes modificaciones de aminoácidos, para determinar la mejor variante en términos de farmacocinética, estabilidad, biocompatibilidad y/o actividad biológica, o una propiedad biofísica tal como el nivel de expresión. Dicha biblioteca puede contener 10, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, o más de 109 variantes posibles (incluyendo sustituciones, eliminaciones de uno o más residuos e inserción de uno o más residuos).
Complejos polipéptido-ácido nucleico
La traducción adecuada de proteínas implica la agregación física de varios polipéptidos y ácidos nucleicos asociados con el ARNm. En esta invención se describen complejos de proteína-ácido nucleico que contienen un ARNm traducible que tiene una o más modificaciones de nucleósidos (por ejemplo, al menos dos modificaciones de nucleósidos diferentes) y uno o más polipéptidos unidos al ARNm. Generalmente, las proteínas se proporcionan en una cantidad efectiva para evitar o reducir una respuesta inmunitaria innata de una célula en la que se introduce el complejo.
Ácidos nucleicos modificados no traducibles
También se describen en esta invención ARNm que tienen secuencias que sustancialmente no son traducibles. Dicho ARNm es eficaz como vacuna cuando se administra a un sujeto mamífero.
También se describen ácidos nucleicos modificados que contienen una o más regiones no codificantes. Dichos ácidos nucleicos modificados generalmente no se traducen, pero son capaces de unirse y secuestrar uno o más componentes de la maquinaria de traducción, tal como una proteína ribosómica o un a Rn de transferencia (ARNt), reduciendo así de manera efectiva la expresión de proteínas en la célula. El ácido nucleico modificado puede contener un ARN nucleolar pequeño (ARNnop), micro ARN (miARN), ARN pequeño de interferencia (ARNpi) o ARN que interactúa con Piwi (ARNip).
Síntesis de ácidos nucleicos modificados
Los ácidos nucleicos para su uso según la presente descripción pueden prepararse según cualquier técnica disponible, incluyendo, pero sin limitación, síntesis química, síntesis enzimática, que generalmente se denomina transcripción in vitro, escisión enzimática o química de un precursor más largo, etc. Los procedimientos para sintetizar ARN son conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Gait, M.J. (cd.) Oligonucleotide synthesis: a practical approach, Oxford [Oxfordshire], Washington, DC: IRL Press, 1984; y Herdewijn, P. (ed.) Oligonucleotide synthesis: methods and applications, Methods in Molecular Biology, v. 288 (Clifton, N.J.) Totowa, N.J.: Humana Press, 2005).
Los nucleósidos y nucleótidos modificados descritos en esta invención se pueden preparar a partir de materiales de partida fácilmente disponibles usando los siguientes procedimientos generales. Se entiende que cuando se dan condiciones de procedimiento típicas o preferidas (es decir, temperaturas de reacción, tiempos, relaciones molares de reactivos, disolventes, presiones, etc.), también se pueden utilizar otras condiciones de procedimiento a menos que se indique lo contrario. Las condiciones de reacción óptimas pueden variar con los reactivos particulares o el disolvente utilizado, pero un experto en la materia puede determinar dichas condiciones mediante procedimientos de optimización habituales.
Los procedimientos descritos en esta invención pueden monitorearse según cualquier procedimiento adecuado conocido en la técnica. Por ejemplo, la formación de productos se puede monitorear por medios espectroscópicos, tal como espectroscopía de resonancia magnética nuclear (por ejemplo, 1H o 13C), espectroscopía infrarroja, espectrofotometría (por ejemplo, UV visible) o espectrometría de masas, o por cromatografía tal como cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) o cromatografía de capa fina.
La preparación de nucleósidos y nucleótidos modificados puede implicar la protección y la desprotección de diversos grupos químicos. Un experto en la materia puede determinar fácilmente la necesidad de protección y desprotección y la selección de los grupos protectores apropiados. La química de los grupos protectores se puede encontrar, por ejemplo, en Greene, y col., Protective Groups in Organic Synthesis, 2a ed., Wiley & Sons, 1991.
Las reacciones de los procedimientos descritos en esta invención se pueden llevar a cabo en disolventes adecuados que un experto en la técnica de la síntesis orgánica puede seleccionar fácilmente. Los disolventes adecuados pueden ser sustancialmente no reactivos con los materiales de partida (reactivos), los compuestos intermedios o los productos a las temperaturas a las que se llevan a cabo las reacciones, es decir, temperaturas que pueden variar entre la temperatura de congelación del disolvente y la temperatura de ebullición del disolvente. Se puede llevar a cabo una determinada reacción en un disolvente o en una mezcla de más de un disolvente. Dependiendo de la etapa de reacción particular, se pueden seleccionar disolventes adecuados para una etapa de reacción particular.
La resolución de mezclas racémicas de nucleósidos y nucleótidos modificados se puede llevar a cabo mediante cualquiera de los numerosos procedimientos conocidos en la técnica. Un procedimiento de ejemplo incluye la recristalización fraccionada usando un "ácido de resolución quiral" que es un ácido orgánico formador de sal ópticamente activo. Los agentes de resolución adecuados para los procedimientos de recristalización fraccionada son, por ejemplo, ácidos ópticamente activos, tales como las formas D y L de ácido tartárico, ácido diacetiltartárico, ácido dibenzoiltartárico, ácido mandélico, ácido málico, ácido láctico o los diversos ácidos alcanforsulfónicos ópticamente activos. La resolución de mezclas racémicas también puede llevarse a cabo mediante la elución en una columna empacada con un agente de resolución ópticamente activo (por ejemplo, dinitrobenzoilfenilglicina). Un experto en la materia puede determinar la composición adecuada del disolvente de elución. No es necesario que los ácidos nucleicos modificados se modifiquen uniformemente a lo largo de toda la longitud de la molécula. Pueden existir diferentes modificaciones de nucleótidos y/o estructuras principales en diversas posiciones en el ácido nucleico. Un experto en la materia apreciará que los análogos de nucleótidos u otra modificación o modificaciones se pueden encontrar en cualquier posición o posiciones de un ácido nucleico de manera que la función del ácido nucleico no se vea sustancialmente disminuida. Una modificación también puede ser una modificación terminal en 5' o 3'. Los ácidos nucleicos descritos en esta invención pueden contener un mínimo de uno y como máximo el 100 % de nucleótidos modificados, o cualquier porcentaje intermedio, tal como al menos el 5 % de nucleótidos modificados, al menos el 10 % de nucleótidos modificados, al menos el 25 % de nucleótidos modificados, al menos el 50 % de nucleótidos modificados, al menos el 80 % de nucleótidos modificados, o al menos el 90 % de nucleótidos modificados. Por ejemplo, los ácidos nucleicos pueden contener una pirimidina modificada, tal como uracilo o citosina. En la invención, el 100 % del uracilo en el ácido nucleico se reemplaza con un uracilo modificado, concretamente usando N1-metil-pseudouridina.
En algunas realizaciones, al menos el 5 %, al menos el 10 %, al menos el 25 %, al menos el 50 %, al menos el 80 %, al menos el 90 % o el 100 % de la citosina en el ácido nucleico se reemplaza con una citosina modificada. La citosina modificada se puede reemplazar por un compuesto que tiene una estructura única simple o se puede reemplazar por una pluralidad de compuestos que tienen diferentes estructuras (por ejemplo, 2, 3, 4 o más estructuras únicas).
Generalmente, la longitud más corta de un ARNm modificado de la presente descripción puede ser la longitud de una secuencia de ARNm que sea suficiente para codificar un dipéptido. En otra realización, la longitud de la secuencia de ARNm es suficiente para codificar un tripéptido. En otra realización, la longitud de una secuencia de ARNm es suficiente para codificar un tetrapéptido. En otra realización, la longitud de una secuencia de ARNm es suficiente para codificar un pentapéptido. En otra realización, la longitud de una secuencia de ARNm es suficiente para codificar un hexapéptido. En otra realización, la longitud de una secuencia de un ARNm es suficiente para codificar un heptapéptido. En otra realización, la longitud de una secuencia de ARNm es suficiente para codificar un octapéptido. En otra realización, la longitud de una secuencia de ARNm es suficiente para codificar un nonapéptido. En otra realización, la longitud de una secuencia de ARNm es suficiente para codificar un decapéptido.
Los ejemplos de dipéptidos que las secuencias de ácido nucleico modificadas pueden codificar incluyen, pero no se limitan a, carnosina y anserina.
En una realización adicional, el ARNm tiene más de 30 nucleótidos de longitud. En otra realización, la molécula de ARN tiene más de 35 nucleótidos de longitud. En otra realización, la longitud es de al menos 40 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 45 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 55 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 60 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 60 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 80 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 90 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 100 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 120 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 140 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 160 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 180 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 200 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 250 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 300 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 350 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 400 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 450 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 500 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 600 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 700 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 800 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 900 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1000 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1100 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1200 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1300 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1400 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1500 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1600 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1800 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 2000 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 2500 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 3000 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 4000 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 5000 nucleótidos o mayor que 5000 nucleótidos.
La presente descripción se refiere a procedimientos para preparar una secuencia de ácido nucleico que comprende un nucleótido que interrumpe la unión de un componente asociado que interactúa con el surco mayor con la secuencia de ácido nucleico, donde la secuencia de ácido nucleico comprende un compuesto de Fórmula I-d:
Figure imgf000025_0001
donde:
Z es O S;
cada uno de Y1 se selecciona independientemente de entre -ORa1, -NRa1Rb1y -SRa1;
cada uno de Y2 se selecciona independientemente de entre O, NRa, S o un enlazador que comprende un átomo seleccionado de entre el grupo que consiste en C, O, N y S;
cada uno de Y3 se selecciona independientemente de entre O y S;
Y4 se selecciona de entre H, -ORa, -SRay -NHRa;
B es una nucleobase;
Ra es H, alquilo C1-20, alquenilo C2-20, alquinilo C2-20 o arilo C6-20;
cada Ra1 y Rb1 son independientemente H o un contraión; y
-Y3-Rc1 es OH o SH a un pH de alrededor de 1 o -Y3-Rc1 es O- o S- a pH fisiológico;
o -Y3-Rc1 es alcoxi C1-20, O-alquenilo C2-20 u O-alquinilo C1-20;
donde cuando B es una nucleobase no modificada seleccionada de entre citosina, guanina, uracilo y adenina, entonces al menos uno de Z, Y1 o Y2 no es O ni OH;
comprendiendo el procedimiento:
hacer reaccionar un compuesto de Fórmula I-c:
Figure imgf000025_0002
con una polimerasa de ARN y una plantilla de ADNc.
En algunas realizaciones, la reacción se repite de 1 a alrededor de 7000 veces.
En algunas realizaciones, B es una nucleobase de Fórmula II-a, II-b o II-c:
Figure imgf000025_0003
donde:
indica un enlace simple o doble;
X es O S;
cada U y W son independientemente C o N;
V es O, S, C o N;
donde cuando V es C entonces R1 es H, alquilo C1-6 , alquenilo C1-6 , alquinilo C1-6 , halo u -ORc, donde cada alquilo C1-20, alquenilo C2-20, alquinilo C2-20 están opcionalmente sustituidos con -OH, -NRaRb, -SH, -C(O)Rc, -C(O)ORc, -NHC(O)Rc, o -NHC(O)ORc;
y donde cuando V es O, S o N entonces R1 está ausente;
R2 es H, -ORc, -SRc, -NRaRb, o halo;
o cuando V es C entonces R1 y R2 junto con los átomos de carbono a los que están unidos pueden formar un anillo de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido con 1-4 sustituyentes seleccionados de entre halo, -OH, -SH, -NRaRb, alquilo C1 -20, alquenilo C2-20, alquinilo C2-20, alcoxi C1-20 o tioalquilo C1-20;
R3 es H o alquilo C1-20;
R4 es H o alquilo C1-20; donde cuando
Figure imgf000026_0001
indica un doble enlace entonces R4 está ausente, o N-R4, en conjunto, forma un N cargado positivamente sustituido con alquilo C1-20;
cada Ra y Rb son independientemente H, alquilo C1-20, alquenilo C2-20, alquinilo C2-20 o arilo C6-20; y Rc es H, alquilo C1-20, alquenilo C2-20, fenilo, bencilo, un grupo polietilenglicol, o un grupo aminopolietilenglicol.
En algunos casos, B es una nucleobase de Fórmula II-a1, II-a2, II-a3, II-a4 o II-a5:
Figure imgf000026_0002
En algunos casos, los procedimientos comprenden además un nucleótido seleccionado de entre el grupo que consiste en adenosina, citosina, guanosina y uracilo.
En algunos casos, la nucleobase es una pirimidina o un derivado de la misma.
En un aspecto adicional, la presente descripción incluye procedimientos para amplificar una secuencia de ácido nucleico que comprende un nucleótido que interrumpe la unión de un componente asociado de unión al surco mayor con la secuencia de ácido nucleico, comprendiendo el procedimiento:
hacer reaccionar un compuesto de Fórmula I-c:
Figure imgf000026_0003
Z es O o S;
cada uno de Y1 se selecciona independientemente de entre -ORa1, -NRa1Rb1y -SRa1;
cada uno de Y2 se selecciona independientemente de entre O, NRa, S o un enlazador que comprende un átomo seleccionado de entre el grupo que consiste en C, O, N y S;
cada uno de Y3 se selecciona independientemente de entre O y S;
Y4 se selecciona de entre H, -ORa, -SRay -NHRa;
B es una nucleobase;
Ra es H, alquilo C1-20, alquenilo C2-20, alquinilo C2-20 o arilo C6-20;
cada Ra1 y Rb1 son independientemente H o un contraión; y
-Y3-Rc1 es OH o SH a un pH de alrededor de 1 o -Y3-Rc1 es O- o S- a pH fisiológico;
o -Y3-Rc1 es alcoxi C1-20, O-alquenilo C2-20 u O-alquinilo C1-20;
donde cuando B es una nucleobase no modificada seleccionada de entre citosina, guanina, uracilo y adenina, entonces al menos uno de Z, Y1 o Y2 no es O ni OH;
con un cebador, una plantilla de ADNc y una polimerasa de ARN.
En algunos casos, B es una nucleobase de Fórmula II-a, II-b o II-c:
Figure imgf000027_0001
donde:
Figure imgf000027_0002
indica un enlace simple o doble;
X es O o S;
cada U y W son independientemente C o N;
V es O, S, C o N;
donde cuando V es C entonces R1 es H, alquilo C1-6 , alquenilo C1-6 , alquinilo C1-6 , halo u -ORc, donde cada alquilo C1-20, alquenilo C2-20, alquinilo C2-20 están opcionalmente sustituidos con -OH, -NRaRb, -SH, -C(O)Rc, -C(O)ORc, -NHC(O)Rc, o -NHC(O)ORc;
y donde cuando V es O, S o N entonces R1 está ausente;
R2 es H, -ORc, -SRc, -NRaRb, o halo;
o cuando V es C entonces R1 y R2 junto con los átomos de carbono a los que están unidos pueden formar un anillo de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido con 1-4 sustituyentes seleccionados de entre halo, -OH, -SH, -NRaRb, alquilo C1-20, alquenilo C2-20, alquinilo C2-20, alcoxi C1-20 o tioalquilo C1-20;
R3 es H o alquilo C1-20;
R4 es H o alquilo C1-20; donde cuando
indica un doble enlace entonces R4 está ausente, o N-R4, en conjunto, forma un N cargado positivamente sustituido con alquilo C1-20;
cada Ra y Rb son independientemente H, alquilo C1-20, alquenilo C2-20, alquinilo C2-20 o arilo C6-20; y Rc es H, alquilo C1-20, alquenilo C2-20, fenilo, bencilo, un grupo polietilenglicol, o un grupo aminopolietilenglicol.
En algunos casos, B es una nucleobase de Fórmula II-a1, II-a2, II-a3, II-a4 o II-a5:
Figure imgf000027_0003
En algunas realizaciones, los procedimientos comprenden además un nucleótido seleccionado de entre el grupo que consiste en adenosina, citosina, guanosina y uracilo.
En algunas realizaciones, la nucleobase es una pirimidina o un derivado de la misma.
Usos de los ácidos nucleicos modificados
Agentes terapéuticos
El ARNm modificado de la invención y las proteínas traducidas a partir del mismo pueden usarse como agentes terapéuticos. Por ejemplo, se puede administrar a un sujeto un ARNm modificado de la invención, donde el ácido nucleico modificado se traduce in vivo para producir un péptido terapéutico en el sujeto. En consecuencia, el ARNm puede usarse en composiciones, procedimientos, kits y reactivos para el tratamiento o la prevención de enfermedad o afecciones en seres humanos y otros mamíferos. Los agentes terapéuticos activos de la presente descripción incluyen ARNm modificado, células que contienen ARNm modificado o polipéptidos traducidos del ARNm modificado, polipéptidos traducidos del ARNm modificado, y células en contacto con células que contienen ARNm modificado o polipéptidos traducidos del ARNm modificado.
Se describen terapias de combinación que contienen uno o más ARNm modificado que contienen regiones traducibles que codifican una proteína o proteínas que potencian la inmunidad de un sujeto mamífero junto con una proteína que induce toxicidad celular dependiente de anticuerpos. Por ejemplo, compuestos terapéuticos que contienen uno o más ARNm que codifican trastuzumab y factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF). En particular, dichas terapias de combinación son útiles en pacientes con cáncer de mama Her2+ que desarrollan resistencia inducida a trastuzumab. (Véase, por ejemplo, Albrecht, Immunotherapy. 2(6):795-8 (2010)). El ARNm de la invención es útil en procedimientos para inducir la traducción de un polipéptido recombinante en una población celular. Dicha traducción puede ser in vivo, ex vivo, en cultivo, o in vitro. La población celular se pone en contacto con una cantidad efectiva de una composición que contiene el ARNm que codifica el polipéptido recombinante. La población se pone en contacto en condiciones tales que el ARNm se localiza en una o más células de la población celular y el polipéptido recombinante se traduce en la célula a partir del ácido nucleico.
Se proporciona una cantidad efectiva de la composición en función, al menos en parte, del tejido diana, el tipo de célula diana, los medios de administración, las características físicas del ácido nucleico (por ejemplo, el tamaño y la extensión de los nucleósidos modificados) y otros determinantes. En general, una cantidad efectiva de la composición proporciona una producción eficaz de proteínas en la célula, más eficaz que una composición que contiene un ácido nucleico no modificado correspondiente. El aumento de la eficacia puede demostrarse mediante el aumento de la transfección celular (es decir, el porcentaje de células transfectadas con el ácido nucleico), el aumento de la traducción de proteínas del ácido nucleico, la disminución de la degradación del ácido nucleico (como se demuestra, por ejemplo, mediante el aumento de la duración de la traducción de proteínas de un ácido nucleico modificado), o la respuesta inmunitaria innata reducida de la célula huésped.
También se describen procedimientos para inducir la traducción in vivo de un polipéptido recombinante en un sujeto mamífero que lo necesita. Allí, se administra al sujeto una cantidad efectiva de una composición que contiene un ácido nucleico que tiene al menos una modificación de nucleósido y una región traducible que codifica el polipéptido recombinante usando los procedimientos de administración descritos en esta invención. El ácido nucleico se proporciona en una cantidad y en otras condiciones tales que el ácido nucleico se localiza en una célula del sujeto y el polipéptido recombinante se traduce en la célula a partir del ácido nucleico. La célula en la que se localiza el ácido nucleico, o el tejido en el que está presente la célula, puede ser alcanzada con una o más rondas de administración de ácido nucleico.
Otros aspectos de la presente descripción se refieren al trasplante de células que contienen ácidos nucleicos modificados a un sujeto mamífero. La administración de células a sujetos mamíferos es conocida por los expertos en la materia, tales como la implantación local (por ejemplo, administración tópica o subcutánea), el suministro de órganos o inyección sistémica (por ejemplo, inyección intravenosa o inhalación), al igual que la formulación de células en un vehículo farmacéuticamente aceptable. Las composiciones que contienen ácidos nucleicos modificados se formulan para la administración por vía intramuscular, transarterial, intraperitoneal, intravenosa, intranasal, subcutánea, endoscópica, transdérmica o intratecal. En algunos casos, la composición se formula para una liberación prolongada.
El sujeto al que se administra el agente terapéutico padece o corre el riesgo de desarrollar una enfermedad, trastorno o afección deletérea.
El ácido nucleico modificado administrado puede dirigir la producción de uno o más polipéptidos recombinantes que proporcionan una actividad funcional que está sustancialmente ausente en la célula en la que se traduce el polipéptido recombinante. Por ejemplo, la actividad funcional faltante puede ser de naturaleza enzimática, estructural o reguladora de genes.
En otros casos, el ácido nucleico modificado administrado dirige la producción de uno o más polipéptidos recombinantes que reemplazan un polipéptido (o múltiples polipéptidos) que está sustancialmente ausente en la célula en la que se traduce el polipéptido recombinante. Dicha ausencia puede deberse a una mutación genética del gen codificante o vía reguladora del mismo. Alternativamente, el polipéptido recombinante sirve para antagonizar la actividad de una proteína endógena presente en, sobre la superficie de, o secretada de la célula. Generalmente, la actividad de la proteína endógena es perjudicial para el sujeto, por ejemplo, debido a la mutación de la proteína endógena que da como resultado una actividad o localización alterada. Además, el polipéptido recombinante antagoniza, directa o indirectamente, la actividad de un resto biológico presente en, sobre la superficie de, o secretado de la célula. Los ejemplos de restos biológicos antagonizados incluyen lípidos (por ejemplo, colesterol), una lipoproteína (por ejemplo, lipoproteína de baja densidad), un ácido nucleico, un carbohidrato o una toxina de molécula pequeña.
Las proteínas recombinantes descritas en esta invención están diseñadas para la localización dentro de la célula, potencialmente dentro de un compartimento específico tal como el núcleo, o están diseñadas para la secreción de la célula o la translocación a la membrana plasmática de la célula.
Como se describe en esta invención, una característica útil del ARN modificado de la presente invención es la capacidad de reducir la respuesta inmunitaria innata de una célula a un ácido nucleico exógeno. Esto permite realizar la titulación, reducción o eliminación de la respuesta inmunitaria en una célula o una población de células. En algunos casos, la célula se pone en contacto con una primera composición que contiene una primera dosis de un primer ácido nucleico exógeno que incluye una región traducible y al menos una modificación de nucleósido, y se determina el nivel de la respuesta inmunitaria innata de la célula al primer ácido nucleico exógeno. Posteriormente, la célula se pone en contacto con una segunda composición, que incluye una segunda dosis del primer ácido nucleico exógeno, conteniendo la segunda dosis una cantidad menor del primer ácido nucleico exógeno en comparación con la primera dosis. Alternativamente, la célula se pone en contacto con una primera dosis de un segundo ácido nucleico exógeno. El segundo ácido nucleico exógeno puede contener uno o más nucleósidos modificados, que pueden ser iguales o diferentes del primer ácido nucleico exógeno o, alternativamente, el segundo ácido nucleico exógeno puede no contener nucleósidos modificados. Las etapas de poner en contacto la célula con la primera composición y/o la segunda composición pueden repetirse una o más veces. Además, la eficiencia de la producción de proteínas (por ejemplo, traducción de proteínas) en la célula se determina opcionalmente, y la célula se puede volver a transfectar con la primera y/o segunda composición repetidamente hasta que se logre una eficiencia de producción de proteína diana.
Tratamiento para enfermedades y afecciones
El ARNm de la invención, como se define en las reivindicaciones, puede usarse en procedimientos para tratar o prevenir un síntoma de enfermedades caracterizadas por una actividad proteica faltante o aberrante, reemplazando la actividad proteica faltante o superando la actividad proteica aberrante. Debido al rápido inicio de la producción de proteínas tras la introducción de ARNm modificados, en comparación con los vectores de ADN viral, los compuestos de la presente descripción son particularmente ventajosos en el tratamiento de enfermedades agudas tales como sepsis, accidente cerebrovascular e infarto de miocardio. Además, la falta de regulación transcripcional de los ARNm modificados de la presente descripción es ventajosa porque se puede lograr una titulación precisa de la producción de proteínas.
Las enfermedades caracterizadas por una actividad proteica disfuncional o aberrante incluyen, pero sin limitación, cáncer y enfermedades proliferativas, enfermedades genéticas (por ejemplo, fibrosis quística), enfermedades autoinmunes, diabetes, enfermedades neurodegenerativas, enfermedades cardiovasculares y enfermedades metabólicas. El ARNm de la invención, como se define en las reivindicaciones, se puede usar en un procedimiento para tratar dichas afecciones o enfermedades en un sujeto mediante la introducción de ácidos nucleicos o terapias basadas en células que contienen el ARNm modificado que se proporciona en esta invención, donde los ácidos nucleicos modificados codifican una proteína que antagoniza o supera de otro modo la actividad proteica aberrante presente en la célula del sujeto. Los ejemplos específicos de una proteína disfuncional son las variantes de mutación sin sentido del gen regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR), que producen una variante proteica disfuncional de la proteína CFTR, que provoca la fibrosis quística.
Múltiples enfermedades se caracterizan por la ausencia (o disminución sustancial de tal manera que no se produce la función proteica adecuada) de la actividad proteica. Dichas proteínas pueden no estar presentes o ser esencialmente no funcionales. El ARNm de la invención, como se define en las reivindicaciones, se puede usar en un procedimiento para tratar dichas afecciones o enfermedades en un sujeto introduciendo el ARNm o terapias basadas en células que contienen el ARNm, donde el ARNm codifica una proteína que reemplaza la actividad de la proteína que falta en las células diana del sujeto. Los ejemplos específicos de una proteína disfuncional son las variantes de mutación sin sentido del gen regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR), que producen una variante proteica disfuncional de la proteína CFTR, que provoca la fibrosis quística.
Por lo tanto, los procedimientos para tratar la fibrosis quística en un sujeto mamífero pueden incluir poner en contacto una célula del sujeto con un ARNm modificado que tenga una región traducible que codifique un polipéptido CFTR funcional, en condiciones tales que una cantidad efectiva del polipéptido CFTR está presente en la célula. Las células diana preferidas son las células epiteliales, tales como las de pulmón, y los procedimientos de administración se determinan teniendo en cuenta el tejido diana; es decir, para la administración pulmonar, las moléculas de ARN se formulan para administración por inhalación.
También se describe un procedimiento para tratar la hiperlipidemia en un sujeto, introduciendo en una población celular del sujeto una molécula de ARNm modificada que codifica sortilina, una proteína recientemente caracterizada por estudios genómicos, mejorando así la hiperlipidemia en un sujeto. El gen SORT1 codifica una proteína transmembrana de la red trans-Golgi (TGN) llamada sortilina. Los estudios genéticos han demostrado que uno de cada cinco individuos tiene un polimorfismo de un solo nucleótido, rs12740374, en el locus lpl3 del gen SORT1 que los predispone a tener niveles bajos de lipoproteínas de baja densidad (LDL) y lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) . Cada copia del alelo menor, presente en alrededor del 30 % de las personas, altera el colesterol LDL en 8 mg/dl, mientras que dos copias del alelo menor, presente en alrededor del 5 % de la población, reduce el colesterol LDL 16 mg/dl. También se ha demostrado que los vehículos del alelo menor tienen un 40 % menos de riesgo de infarto de miocardio. Los estudios funcionales in vivo en ratones describen que la sobreexpresión de SORT1 en tejido hepático de ratón condujo a niveles de colesterol LDL significativamente más bajos, hasta un 80 % más bajos, y que silenciar SORT1 aumentó el colesterol LDL aproximadamente en un 200 % (Musunuru K y col. From noncoding variant to phenotype via SORT1 at the 1p13 cholesterol locus (De la variante no codificante al fenotipo a través de SORT1 en el locus de colesterol 1p13). Nature 2010; 466: 714-721).
Procedimientos de suministro de ácido nucleico celular
Los procedimientos descritos en esta invención mejoran el suministro de ácido nucleico a una población celular, in vivo, ex vivo, o en cultivo. Por ejemplo, un cultivo celular que contiene una pluralidad de células huésped (por ejemplo, células eucariotas tales como levaduras o células de mamífero) se pone en contacto con una composición que contiene un ácido nucleico mejorado que tiene al menos una modificación de nucleósido y, opcionalmente, una región traducible. La composición también contiene generalmente un reactivo de transfección u otro compuesto que aumenta la eficacia de la captación de ácido nucleico mejorado en las células huésped. El ácido nucleico mejorado presenta una retención mejorada en la población celular, en relación con un ácido nucleico no modificado correspondiente. La retención del ácido nucleico mejorado es mayor que la retención del ácido nucleico no modificado. En algunas realizaciones, es de al menos alrededor del 50 %, 75 %, 90 %, 95 %, 100 %, 150 %, 200 % o más del 200 % mayor que la retención del ácido nucleico no modificado. Dicha ventaja de retención puede lograrse mediante una ronda de transfección con el ácido nucleico mejorado, o puede obtenerse después de repetidas rondas de transfección.
En algunos casos, el ácido nucleico mejorado se administra a una población de células diana con uno o más ácidos nucleicos adicionales. Dicha administración puede ser al mismo tiempo, o el ácido nucleico mejorado se administra antes de la administración del uno o más ácidos nucleicos adicionales. El uno o más ácidos nucleicos adicionales pueden ser ácidos nucleicos modificados o ácidos nucleicos no modificados. Se entiende que la presencia inicial de los ácidos nucleicos mejorados no induce sustancialmente una respuesta inmunitaria innata de la población celular y, además, que la respuesta inmunitaria innata no se activará por la presencia posterior de los ácidos nucleicos no modificados. A este respecto, el ácido nucleico mejorado puede no contener por sí mismo una región traducible, si la proteína que se desea que esté presente en la población de células diana se traduce a partir de los ácidos nucleicos no modificados.
Restos de direccionamiento
En algunos casos, se proporcionan ácidos nucleicos modificados para expresar un componente asociado de unión a proteínas o un receptor en la superficie de la célula, que funciona para dirigir la célula a un espacio de tejido específico o para interactuar con un resto específico, ya sea in vivo o in vitro. Los componentes asociados de unión a proteínas adecuados incluyen anticuerpos y fragmentos funcionales de los mismos, proteínas estructurales o péptidos. Además, se pueden emplear ácidos nucleicos modificados para dirigir la síntesis y la localización extracelular de lípidos, carbohidratos u otros restos biológicos.
Silenciamiento permanente de la expresión génica
Un procedimiento para silenciar epigenéticamente la expresión génica en un sujeto mamífero, que comprende un ácido nucleico en el que la región traducible codifica un polipéptido o polipéptidos capaces de dirigir la metilación de la histona H3 específica de secuencia para iniciar la formación de heterocromatina y reducir la transcripción génica alrededor de genes específicos con el fin de silenciar el gen. Por ejemplo, una mutación de ganancia de función en el gen Janus Kinase 2 es responsable de la familia de enfermedades mieloproliferativas.
Composiciones farmacéuticas
Las proteínas se pueden generar a partir de ARNm modificados. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender opcionalmente una o más sustancias terapéuticamente activas adicionales. Se describe un procedimiento para administrar composiciones farmacéuticas que comprenden una o más proteínas para administrarlas a un sujeto que lo necesita. En algunos casos, las composiciones se administran a seres humanos. A los efectos de la presente descripción, la expresión "ingrediente activo" se refiere, en general, a una proteína o un complejo que contiene proteínas como se describe en esta invención.
Aunque las descripciones de las composiciones farmacéuticas proporcionadas en esta invención se refieren principalmente a composiciones farmacéuticas que son adecuadas para su administración a seres humanos, el experto en la materia entenderá que dichas composiciones son generalmente adecuadas para su administración a animales de todo tipo. La modificación de las composiciones farmacéuticas adecuadas para su administración a seres humanos con el fin de hacer las composiciones adecuadas para su administración a diversos animales es bien conocida, y el farmacólogo veterinario con experiencia habitual puede diseñar y/o realizar dicha modificación con experimentación, si es que la hay, meramente habitual. Los sujetos para los cuales se contempla la administración de las composiciones farmacéuticas incluyen, pero no se limitan a, seres humanos y/u otros primates; mamíferos, incluyendo mamíferos pertinentes en términos comerciales, tales como ganado vacuno, cerdos, caballos, ovejas, gatos, perros, ratones y/o ratas; y/o aves, incluyendo aves pertinentes en términos comerciales, tales como pollos, patos, gansos y/o pavos.
Las formulaciones de las composiciones farmacéuticas descritas en esta invención se pueden preparar mediante cualquier procedimiento conocido o que se desarrolle posteriormente en la técnica de la farmacología. En general, dichos procedimientos de preparación incluyen la etapa de asociar el ingrediente activo con un excipiente y/o uno o más de otros ingredientes adicionales, y a continuación, si es necesario y/o deseable, conformar y/o envasar el producto en una unidad de dosis única o múltiple deseada.
Una composición farmacéutica según la presente descripción puede prepararse, empaquetarse y/o venderse a granel, como una dosis unitaria individual y/o como una pluralidad dosis unitarias individuales. Como se usa en esta invención una "dosis unitaria" es una cantidad discreta de la composición farmacéutica que comprende una cantidad predeterminada del ingrediente activo. La cantidad del ingrediente activo es generalmente igual a la dosificación del ingrediente activo que se administraría a un sujeto y/o una fracción conveniente de dicha dosificación tal como, por ejemplo, la mitad o un tercio de dicha dosificación.
Las cantidades relativas del ingrediente activo, el excipiente farmacéuticamente aceptable y/o cualquier ingrediente adicional en una composición farmacéutica según la presente descripción variarán conforme a la identidad, el tamaño y/o la condición del sujeto tratado y adicionalmente según la vía por la que se va a administrar la composición. A modo de ejemplo, la composición puede comprender entre el 0,1 % y el 100 % (p/p) de ingrediente activo.
Las formulaciones farmacéuticas pueden comprender adicionalmente un excipiente farmacéuticamente aceptable, el cual, como se usa en esta invención, incluye todos y cada uno de los disolventes, medios de dispersión, diluyentes u otros vehículos líquidos, auxiliares de dispersión o suspensión, agentes tensioactivos, agentes isotónicos, agentes espesantes o emulsionantes, conservantes, aglutinantes sólidos, lubricantes, y similares, según se adapte a la forma de dosificación particular deseada. Remington the Science and Practice of Pharmacy, 21.a edición, A.R. Gennaro (Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006)
describe diversos excipientes utilizados en la formulación de composiciones farmacéuticas y técnicas conocidas para la preparación de los mismos. Salvo en la medida en que cualquier medio excipiente convencional sea incompatible con una sustancia o sus derivados, tal como al producir cualquier efecto biológico no deseado o en la interacción de otro modo de forma nociva con cualquier otro componente o componentes de la composición farmacéutica, su uso está contemplado en la presente descripción.
Un excipiente farmacéuticamente aceptable puede tener una pureza de al menos el 95 %, al menos el 96 %, al menos el 97 %, al menos el 98 %, al menos el 99 %, o el 100 %. En algunos casos, un excipiente se aprueba para su uso en seres humanos y para uso veterinario. En algunos casos, un excipiente está aprobado por la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA, por sus siglas en inglés) de los Estados Unidos. En algunos casos, un excipiente tiene un grado farmacéutico. En algunos casos, un excipiente cumple con los estándares de la Farmacopea de los Estados Unidos (USP), la Farmacopea europea (EP), la Farmacopea británica y/o la Farmacopea internacional.
Los excipientes farmacéuticamente aceptables utilizados en la fabricación de composiciones farmacéuticas incluyen, pero no se limitan a, diluyentes inertes, agentes dispersantes y/o granulantes, agentes tensioactivos y/o emulsionantes, agentes desintegrantes, agentes aglutinantes, conservantes, agentes tamponadores, agentes lubricantes y/o aceites. Dichos excipientes pueden incluirse opcionalmente en formulaciones farmacéuticas. Los excipientes tales como manteca de cacao y ceras de supositorios, agentes colorantes, agentes de recubrimiento, agentes edulcorantes, saborizantes y/o perfumantes pueden estar presentes en la composición, según el criterio del formulador.
Los diluyentes ejemplares incluyen, pero no se limitan a, carbonato de calcio, carbonato de sodio, fosfato de calcio, fosfato de dicalcio, sulfato de calcio, hidrogenofosfato de calcio, fosfato de sodio, lactosa, sacarosa, celulosa, celulosa microcristalina, caolín, manitol, sorbitol, inositol, cloruro de sodio, almidón seco, almidón de maíz, azúcar en polvo, etc., y/o combinaciones de los mismos.
Los agentes de granulación y/o dispersión ejemplares incluyen, pero no se limitan a, almidón de patata, almidón de maíz, almidón de tapioca, glicolato de almidón de sodio, arcillas, ácido algínico, goma guar, pulpa de cítricos, agar, bentonita, celulosa y productos de madera, esponja natural, resinas de intercambio de cationes, carbonato de calcio, silicatos, carbonato de sodio, poli(vinil-pirrolidona) reticulada (crospovidona), almidón de carboximetilo de sodio (glicolato de almidón de sodio), carboximetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio reticulada (croscarmelosa), metilcelulosa, almidón pregelatinizado (almidón 1500), almidón microcristalino, almidón insoluble en agua, carboximetilcelulosa de calcio, aluminosilicato de magnesio (Veegum®), laurilsulfato de sodio, compuestos de amonio cuaternario, etc., y/o combinaciones de los mismos.
Los agentes tensioactivos y/o emulsionantes ejemplares incluyen, pero no se limitan a, emulsionantes naturales (por ejemplo, acacia, agar, ácido algínico, alginato de sodio, tragacanto, chondrux, colesterol, xantana, pectina, gelatina, yema de huevo, caseína, lanolina, colesterol, cera y lecitina), arcillas coloidales (por ejemplo, bentonita [silicato de aluminio] y Veegum® [aluminiosilicato de magnesio]), derivados de aminoácidos de cadena larga, alcoholes de peso molecular alto (por ejemplo, alcohol estearílico, alcohol cetílico, alcohol oleílico, monoestearato de triacetina, diestearato de etilenglicol, monoestearato de glicerilo y monoestearato de propilenglicol, alcohol polivinílico), carbómeros (por ejemplo, carboxipolimetileno, ácido poliacrílico, polímero de ácido acrílico y polímero de carboxivinilo), carragenano, derivados de celulosa (por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, celulosa en polvo, hidroximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, metilcelulosa), ésteres de ácidos grasos de sorbitán (por ejemplo, monolaurato de sorbitán polioxietileno [Tween®20], polioxietileno de sorbitán [Tween®60], monooleato de sorbitán polioxietileno [Tween®80], monopalmitato de sorbitán [Span®40], monoestearato de sorbitán [Span®60], triestearato de sorbitán [Span®65], monooleato de glicerilo, monooleato de sorbitán [Span®80]), ésteres de polioxietileno (por ejemplo, monoestearato de polioxietileno [Myr®45], aceite de ricino hidrogenado de polioxietileno, estearato de polioximetileno y Solutol®), ésteres de ácido graso de sacarosa, ésteres de ácido graso de polietilenglicol (por ejemplo, Cremophor®), éteres de polioxietileno (por ejemplo, lauril éter de polioxietileno [Brij®30]), poli(vinilpirrolidona), monolaurato de dietilenglicol, oleato de trietanolamina, oleato de sodio, oleato de potasio, oleato de etilo, ácido oleico, laurato de etilo, lauril sulfato de sodio, Pluronic®F 68, Poloxamer®188, bromuro de cetrimonio, cloruro de cetilpiridinio, cloruro de benzalconio, docusato de sodio, etc., y/o combinaciones de los mismos.
Los agentes aglutinantes ejemplares incluyen, pero no se limitan a, almidón (por ejemplo, almidón de maíz y pasta de almidón), gelatina; azúcares (por ejemplo, sacarosa, glucosa, dextrosa, dextrina, melaza, lactosa, lactitol, manitol,); gomas naturales y sintéticas (por ejemplo, acacia, alginato de sodio, extracto de musgo irlandés, goma panwar, goma ghatti, mucílago de cáscara de isapol, carboximetilcelulosa, metilcelulosa, etilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, celulosa microcristalina, acetato de celulosa, poli(vinil-pirrolidona), aluminosilicato de magnesio (Veegum®), y arabogalactano de lárice); alginatos; óxido de polietileno; polietilenglicol; sales inorgánicas de calcio; ácido silícico; polimetacrilatos; ceras; agua; alcohol; etc.; y combinaciones de los mismos.
Los conservantes ejemplares pueden incluir, pero no se limitan a, antioxidantes, agentes quelantes, conservantes antimicrobianos, conservantes antifúngicos, conservantes de alcohol, conservantes ácidos, y/u otros conservantes. Los antioxidantes ejemplares incluyen, pero no se limitan a, alfa tocoferol, ácido ascórbico, palmitato de acorbilo, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, monotioglicerol, metabisulfito de potasio, ácido propiónico, galato de propilo, ascorbato de sodio, bisulfito de sodio, metabisulfito de sodio y/o sulfito de sodio. Los agentes quelantes ejemplares incluyen ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), ácido cítrico monohidrato, edetato disódico, edetato dipotásico, ácido edético, ácido fumárico, ácido málico, ácido fosfórico, edetato sódico, ácido tartárico y/o edetato trisódico. Los conservantes antimicrobianos ejemplares incluyen, pero no se limitan a, cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, alcohol bencílico, bronopol, cetrimida, cloruro de cetilpiridinio, clorhexidina, clorobutanol, clorocresol, cloroxilenol, cresol, alcohol etílico, glicerina, fenetidina, fenetidina, imidureaxidinio, alcohol feniletílico, nitrato fenilmercúrico, propilenglicol y/o timerosal. Conservantes antifúngicos ejemplares incluyen, pero no se limitan a, butil paraben, metil paraben, etil paraben, propil paraben, ácido benzoico, ácido hidroxibenzoico, benzoato de potasio, sorbato de potasio, benzoato de sodio, propionato de sodio y/o ácido sórbico. Los conservantes de alcohol ejemplares incluyen, pero no se limitan a, etanol, polietilenglicol, fenol, compuestos fenólicos, bisfenol, clorobutanol, hidroxibenzoato y/o alcohol feniletílico. Los conservantes ácidos ejemplares incluyen, pero no se limitan a, vitamina A, vitamina C, vitamina E, beta-caroteno, ácido cítrico, ácido acético, ácido deshidroacético, ácido ascórbico, ácido sórbico y/o ácido fítico. Otros conservantes incluyen, pero no se limitan a, tocoferol, acetato de tocoferol, mesilato de deteroxima, cetrimida, hidroxianisol butilado (b Ha ), hidroxitoluenado butilado (BHT), etilendiamina, lauril sulfato de sodio (SLS), lauril éter sulfato de sodio (SLES), bisulfito de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de potasio, metabisulfito de potasio, Glydant Plus®, Phenonip®, metilparabeno, Germall®115, Germaben®II, Neolone™, Kathon™ y/o Euxyl®.
Los agentes tamponadores ejemplares incluyen, pero no se limitan a, soluciones tampón de citrato, soluciones tampón de acetato, soluciones tampón de fosfato, cloruro de amonio, carbonato de calcio, cloruro de calcio, citrato de calcio, glubionato de calcio, gluceptato de calcio, gluconato de calcio, ácido d-glucónico, glicerofosfato de calcio, lactato de calcio, ácido propanoico, levulinato de calcio, ácido pentanoico, fosfato de calcio dibásico, ácido fosfórico, fosfato de calcio tribásico, hidróxido fosfato de calcio, acetato de potasio, cloruro de potasio, gluconato de potasio, mezclas de potasio, fosfato de potasio dibásico, fosfato de potasio monobásico, mezclas de fosfato de potasio, acetato de sodio, bicarbonato de sodio, cloruro de sodio, citrato de sodio, lactato de sodio, fosfato de sodio dibásico, fosfato de sodio monobásico, mezclas de fosfato de sodio, trometamina, hidróxido de magnesio, hidróxido de aluminio, ácido algínico, agua sin pirógenos, solución salina isotónica, solución de Ringer, alcohol etílico, etc., y/o combinaciones de los mismos.
Los agentes lubricantes ejemplares incluyen, pero no se limitan a, estearato de magnesio, estearato de calcio, ácido esteárico, sílice, talco, malta, behenato de glicerilo, aceites vegetales hidrogenados, polietilenglicol, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio, leucina, lauril sulfato de magnesio, lauril sulfato de sodio, etc., y combinaciones de los mismos.
Los aceites ejemplares incluyen, pero no se limitan a, aceites de almendra, semilla de albaricoque, aguacate, babasú, bergamota, semilla de grosella negra, borraja, cade, manzanilla, canola, alcaravea, carnauba, ricino, canela, manteca de cacao, coco, hígado de bacalao, café, maíz, semilla de algodón, emú, eucalipto, onagra, pescado, linaza, geraniol, calabaza, semilla de uva, avellana, hisopo, miristato de isopropilo, jojoba, nuez kukui, lavandina, lavanda, limón, litsea cubeba, nuez de macademia, malva, semilla de mango, semilla de espuma de prado, visón, nuez moscada, aceituna, naranja, reloj anaranjado, palma, almendra de palma, almendra de melocotón, cacahuete, semilla de amapola, semilla de calabaza, colza, salvado de arroz, romero, cártamo, sándalo, sasquana, savoury (summer savoury), espino amarillo, sésamo, manteca de karité, silicona, soja, girasol, árbol de té, cardo, tsubaki, vetiver, nuez y germen de trigo. Los aceites ejemplares incluyen, pero no se limitan a, estearato de butilo, triglicérido caprílico, triglicérido cáprico, ciclometicona, sebacato de dietilo, dimeticona 360, miristato de isopropilo, aceite mineral, octildodecanol, alcohol oleílico, aceite de silicona, y/o combinaciones de los mismos.
Las formas de dosificación líquidas para administración oral y parenteral incluyen, pero no se limitan a, emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y/o elixires farmacéuticamente aceptables. Además de los ingredientes activos, las formas de dosificación líquidas pueden comprender diluyentes inertes comúnmente usados en la técnica, tales como, por ejemplo, agua u otros disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, dimetilformamida, aceites (en particular aceites de semilla de algodón, cacahuete, maíz, germen, oliva, ricino y sésamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurfu rílico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitán, y mezclas de los mismos. Además de diluyentes inertes, las composiciones orales pueden incluir adyuvantes tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, agentes edulcorantes, saborizantes y/o perfumantes. En determinadas realizaciones, para administración parenteral, las composiciones se mezclan con agentes solubilizantes tales como Cremophor®, alcoholes, aceites, aceites modificados, glicoles, polisorbatos, ciclodextrinas, polímeros, y/o combinaciones de los mismos.
Se pueden formular las preparaciones inyectables, por ejemplo, suspensiones acuosas u oleaginosas inyectables estériles, según la técnica conocida utilizando agentes dispersantes, agentes humectantes y/o agentes de suspensión adecuados. Las preparaciones inyectables estériles pueden ser soluciones, suspensiones y/o emulsiones inyectables estériles en diluyentes y/o disolventes parenteralmente aceptables no tóxicos, por ejemplo, como una solución en 1,3-butanodiol. Entre los solventes y vehículos aceptables que pueden ser empleados se encuentran agua, solución de Ringer, U.S.P. y solución isotónica de cloruro de sodio. Se emplean convencionalmente aceites no volátiles estériles como un solvente o medio de suspensión. A tales efectos, se puede emplear cualquier aceite no volátil insípido, inclusive mono o diglicéridos sintéticos. Los ácidos grasos tales como el ácido oleico se pueden usar en la preparación de inyectables.
Las formulaciones inyectables se pueden esterilizar, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro de retención de bacterias, y/o mediante la incorporación de agentes esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que se puedan disolver o dispersar en agua estéril u otro medio inyectable estéril antes de su uso.
Para prolongar el efecto de un ingrediente activo, a menudo es deseable retardar la absorción del ingrediente activo por inyección subcutánea o intramuscular. Esto se puede lograr mediante el uso de una suspensión líquida de material cristalino o amorfo con una escasa solubilidad en agua. Entonces, la velocidad de absorción del fármaco depende de su velocidad de disolución, la que, a su vez, puede depender del tamaño del cristal y de la forma cristalina. De manera alternativa, la absorción retardada de una forma de fármaco administrado parenteralmente se logra al disolver o suspender el fármaco en un vehículo oleoso. Las formas de depósito inyectables se preparan formando matrices de microcápsulas de los fármacos en polímeros biodegradables tales como polilactida-poliglicólido. En función de la relación del fármaco respecto al polímero y de la naturaleza del polímero particular utilizado se puede controlar la velocidad de liberación del fármaco. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli(ortoésteres) y poli(anhídridos). Las formulaciones de depósito inyectables se preparan atrapando el fármaco en liposomas o microemulsiones que son compatibles con los tejidos corporales.
Las composiciones para la administración rectal o vaginal son típicamente supositorios que pueden prepararse mezclando las composiciones con excipientes no irritantes adecuados, tales como manteca de cacao, polietilenglicol o una cera de supositorio, los cuales son sólidos a temperatura ambiente pero líquidos a temperatura corporal y, por lo tanto, se derriten en el recto o cavidad vaginal y liberan el ingrediente activo.
Las formas de dosificación sólidas para administración oral incluyen cápsulas, comprimidos, pastillas, polvos y gránulos. En dichas formas de dosificación sólidas, un ingrediente activo se mezcla con al menos un excipiente inerte farmacéuticamente aceptable, tal como citrato de sodio o fosfato dicálcico y/o cargas o diluyentes (por ejemplo, almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y ácido silícico), aglutinantes (por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidinona, sacarosa y acacia), humectantes (por ejemplo, glicerol), agentes desintegrantes (por ejemplo, agar, carbonato de calcio, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, determinados silicatos y carbonato de sodio), agentes retardantes de la solución (por ejemplo,parafina), aceleradores de absorción (por ejemplo, compuestos de amonio cuaternario), agentes humectantes (por ejemplo, alcohol cetílico y monoestearato de glicerol), absorbentes (por ejemplo, caolín y arcilla de bentonita) y lubricantes (por ejemplo, talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, laurilsulfato de sodio), y mezclas de los mismos. En el caso de las cápsulas, comprimidos y pastillas, las formas de dosificación pueden comprender agentes tamponadores.
Las composiciones sólidas de un tipo similar se pueden emplear como cargas en cápsulas de gelatina rellenas duras y blandas usando excipientes tales como lactosa o azúcar de la leche así como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares. Las formas de dosificación sólidas de comprimidos, grageas, cápsulas, píldoras y gránulos se pueden preparar con recubrimientos y cubiertas tales como recubrimientos entéricos y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de formulación farmacéutica. Opcionalmente pueden comprender agentes opacificantes y pueden ser de una composición que liberen el ingrediente o ingredientes activos solo, o preferentemente, en una determinada parte del tracto intestinal, opcionalmente, de manera retardada. Los ejemplos de composiciones de inclusión que se pueden usar incluyen sustancias poliméricas y ceras. Las composiciones sólidas de un tipo similar se pueden emplear como cargas en cápsulas de gelatina rellenas duras y blandas usando excipientes tales como lactosa o azúcar de la leche así como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares.
Las formas de dosificación para administración tópica y/o transdérmica de una composición pueden incluir ungüentos, pastas, cremas, lociones, geles, polvos, soluciones, atomizadores, inhaladores y/o parches. Generalmente, un ingrediente activo se mezcla en condiciones estériles con un excipiente farmacéuticamente aceptable y/o cualquier conservante y/o tampón necesario, según sea necesario. Además, la presente descripción contempla el uso de parches transdérmicos, que a menudo tienen la ventaja adicional de proporcionar una administración controlada de un compuesto al cuerpo. Dichas formas de dosificación pueden prepararse, por ejemplo, disolviendo y/o dispersando el compuesto en el medio apropiado. Como alternativa o adicionalmente, la velocidad se puede controlar ya sea proporcionando una membrana de control de velocidad y/o mediante la dispersión del compuesto en un gel y/o una matriz polimérica.
Los dispositivos adecuados para usar en la administración de composiciones farmacéuticas intradérmicas descritas en esta invención incluyen dispositivos de aguja corta, tales como los que se describen en las Patentes de EE.UU 4.886.499; 5.190.521; 5.328.483; 5.527.288; 4.270.537; 5.015.235; 5.141.496; y 5.417.662. Las composiciones intradérmicas se pueden administrar mediante dispositivos que limitan la extensión de penetración efectiva de una aguja en la piel, tales como los que se describen en la publicación PCT WO99/34850 y equivalentes funcionales del mismo. Son adecuados los dispositivos de inyección a chorro que administran las composiciones líquidas a la dermis mediante un inyector a chorro de líquidos y/o mediante una aguja que perfora la capa córnea y que produce un chorro que alcanza la dermis. Se describen dispositivos de inyección a chorro, por ejemplo, en las Patentes de EE.UU. 5.480.381; 5.599.302; 5.334.144; 5.993.412; 5.649.912; 5.569.189; 5.704.911; 5.383.851; 5.893.397; 5.466.220; 5.339.163; 5.312.335; 5.503.627; 5.064.413; 5.520.639; 4.596.556; 4.790.824; 4.941.880; 4.940.460; y las publicaciones PCT WO 97/37705 y WO 97/13537. Son adecuados los dispositivos balísticos de administración de polvo/partículas que utilizan gas comprimido para acelerar la vacuna en forma de polvo a través de las capas externas de la piel hasta la dermis. Como alternativa o adicionalmente, se pueden usar jeringas convencionales en el procedimiento clásico de administración intradérmica de mantoux.
Las formulaciones adecuadas para la administración tópica incluyen, pero no se limitan a, preparaciones líquidas y/o semilíquidas tales como linimentos, lociones, emulsiones de aceite en agua y/o de agua en aceite tales como cremas, ungüentos y/o pastas y/o soluciones y/o suspensiones. Las formulaciones administrables tópicamente pueden comprender, por ejemplo, de alrededor del 1 % a alrededor del 10 % (p/p) de ingrediente activo, aunque la concentración de ingrediente activo puede ser tan alta como el límite de solubilidad del ingrediente activo en el disolvente. Las formulaciones para administración tópica pueden comprender además uno o más de los ingredientes adicionales descritos en esta invención.
Se puede preparar, empaquetar y/o vender una composición farmacéutica en una formulación adecuada para administración pulmonar a través de la cavidad bucal. Dicha formulación puede comprender partículas secas que comprenden el ingrediente activo y que tienen un diámetro en el intervalo de alrededor de 0,5 nm a alrededor de 7 nm o de alrededor de 1 nm a alrededor de 6 nm. De manera conveniente, dichas composiciones se encuentran en forma de polvos secos para su administración con un dispositivo que comprende un depósito de polvo seco al que es posible dirigir una corriente de propulsor para dispersar el polvo y/o utilizar un recipiente dispensador de disolvente/polvo autopropulsor tal como un dispositivo que comprende el ingrediente activo disuelto y/o suspendido en un propulsor de bajo punto de ebullición en un recipiente sellado. Dichos polvos comprenden partículas donde al menos el 98 % de las partículas en peso tienen un diámetro superior a 0,5 nm y al menos el 95 % de las partículas en número tienen un diámetro inferior a 7 nm. Alternativamente, al menos el 95 % de las partículas en peso tienen un diámetro mayor de 1 nm y al menos el 90 % de las partículas en número tienen un diámetro menor de 6 nm. Las composiciones de polvo seco pueden incluir un diluyente de polvo fino sólido tal como azúcar y se proporcionan convenientemente en forma de dosis unitaria.
Los propulsores de bajo punto de ebullición generalmente incluyen propulsores líquidos que tienen un punto de ebullición por debajo de 65 °F a presión atmosférica. Generalmente, el propulsor puede constituir del 50 % al 99,9 % (p/p) de la composición, y el ingrediente activo puede constituir del 0,1 % al 20 % (p/p) de la composición. Un propulsor puede comprender además ingredientes adicionales tales como un tensioactivo líquido no iónico y/o aniónico sólido y/o un diluyente sólido (que puede tener un tamaño de partícula del mismo orden que las partículas que comprenden el ingrediente activo).
Las composiciones farmacéuticas formuladas para administración pulmonar pueden proporcionar un ingrediente activo en forma de gotitas de una solución y/o suspensión. Dichas formulaciones pueden prepararse, empaquetarse y/o venderse como soluciones y/o suspensiones acuosas y/o alcohólicas diluidas, opcionalmente estériles, que comprenden ingrediente activo, y pueden administrarse convenientemente usando cualquier dispositivo de nebulización y/o atomización. Dichas formulaciones pueden comprender además uno o más ingredientes adicionales que incluyen, pero no se limitan a, un agente aromatizante como sacarina sódica, un aceite volátil, un agente tamponador, un agente tensioactivo y/o un conservante como metilhidroxibenzoato. Las gotitas proporcionadas por esta vía de administración pueden tener un diámetro promedio en el intervalo de alrededor de 0,1 nm a alrededor de 200 nm.
Las formulaciones descritas en esta invención como útiles para la administración pulmonar son útiles para la administración intranasal de una composición farmacéutica. Otra formulación adecuada para la administración intranasal es un polvo grueso que comprende el ingrediente activo y que tiene una partícula promedio de alrededor de 0,2 pm a 500 pm. Dicha formulación se administra de la manera en que se toma el rapé, es decir, mediante inhalación rápida a través de las fosas nasales desde un recipiente del polvo que se mantiene cerca de la nariz.
Las formulaciones adecuadas para la administración nasal pueden comprender, por ejemplo, desde alrededor de tan solo un 0,1 % (p/p) hasta un 100 % (p/p) de ingrediente activo, y pueden comprender uno o más de los ingredientes adicionales descritos en esta invención. Se puede preparar, empaquetar y/o vender una composición farmacéutica en una formulación adecuada para administración bucal. Tales formulaciones pueden, por ejemplo, estar en forma de comprimidos y/o pastillas preparadas usando procedimientos convencionales, y pueden, por ejemplo, de 0,1 % a 20 % (p/p) de ingrediente activo, comprendiendo el resto un ingrediente activo que se disuelve por vía oral y/o composición degradable y, opcionalmente, uno o más de los ingredientes adicionales descritos en esta invención. Alternativamente, las formulaciones adecuadas para la administración bucal pueden comprender un polvo y/o una solución y/o suspensión aerosolizada y/o atomizada que comprende un ingrediente activo. Dichas formulaciones en polvo, aerosolizadas y/o en aerosol, cuando se dispersan, pueden tener un tamaño promedio de partículas y/o gotas en el intervalo de alrededor de 0,1 nm a alrededor de 200 nm, y pueden comprender además uno o más de cualquiera de los ingredientes adicionales descritos en esta invención.
Se puede preparar, empaquetar y/o vender una composición farmacéutica en una formulación adecuada para administración oftálmica. Dichas formulaciones pueden estar, por ejemplo, en forma de gotas para los ojos que incluyen, por ejemplo, una solución y/o suspensión al 0,1/1,0 % (p/p) del ingrediente activo en un excipiente líquido acuoso u oleoso. Dichas gotas pueden comprender además agentes tamponadores, sales y/o uno o más de cualquiera de los ingredientes adicionales descrito en esta invención. Otras formulaciones que se pueden administrar de forma oftálmica útiles incluyen aquellas que comprenden el ingrediente activo en forma microcristalina y/o en una preparación liposomal. Se contempla que las gotas para los oídos y/o las gotas oftálmicas quedan comprendidas en el alcance de la presente descripción.
Es posible encontrar consideraciones generales de la formulación y/o fabricación de agentes farmacéuticos, por ejemplo, en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21a ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005.
La administración de proteínas o complejos según la presente descripción puede usarse en procedimientos que comprenden la administración de proteínas o complejos según la presente descripción a un sujeto que lo necesite. Las proteínas o complejos, o composiciones farmacéuticas, de formación de imágenes, de diagnóstico o profilácticas de los mismos se pueden administrar a un sujeto usando cualquier cantidad y cualquier vía de administración efectiva para prevenir, tratar, diagnosticar u obtener imágenes de una enfermedad, trastorno y/o afección (por ejemplo, una enfermedad, trastorno y/o afección relacionada con déficits de memoria de trabajo). La cantidad exacta requerida variará de un sujeto a otro, dependiendo de la especie, la edad y el estado general del sujeto, la gravedad de la enfermedad, la composición particular, su modo de administración, su modo de actividad, y similares. Las composiciones se formulan típicamente en forma de dosificación unitaria para facilitar la administración y la uniformidad de la dosificación. Se entenderá, sin embargo, que el uso diario total de las composiciones de la presente descripción lo decidirá el médico responsable dentro del alcance del buen criterio médico. El nivel de dosis de formación de imágenes específico terapéuticamente efectivo, profilácticamente efectivo o apropiado para cualquier paciente particular dependerán de una variedad de factores que incluyen el trastorno que se está tratando y la gravedad del trastorno; la actividad del compuesto específico empleado; la composición específica empleada; la edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del paciente; el tiempo de administración, vía de administración y velocidad de excreción del compuesto específico empleado; la duración del tratamiento; fármacos utilizados en combinación o coincidentes con el compuesto específico empleado; y factores similares bien conocidos en las técnicas médicas.
Las proteínas a suministrar y/o las composiciones farmacéuticas, profilácticas, de diagnóstico o de formación de imágenes de las mismas pueden administrarse a animales, tales como mamíferos (por ejemplo, seres humanos, animales domésticos, gatos, perros, ratones, ratas, etc.). Las composiciones farmacéuticas, profilácticas, de diagnóstico o de formación de imágenes de las mismas pueden administrarse a seres humanos.
Las proteínas a suministrar y/o las composiciones farmacéuticas, profilácticas, de diagnóstico o de formación de imágenes de las mismas pueden administrarse por cualquier vía. Las proteínas y/o las composiciones farmacéuticas, profilácticas, de diagnóstico o de formación de imágenes de las mismas pueden administrarse por una o más de una variedad de vías, que incluyen oral, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intramedular, intratecal, subcutánea, intraventricular, transdérmica, interdérmica, rectal, intravaginal, intraperitoneal, tópica (por ejemplo, en polvos, ungüentos, cremas, geles, lociones y/o gotas), mucosas, nasales, bucales, enterales, vítreas, intratumorales, sublinguales; por instilación intratraqueal, instilación bronquial y/o inhalación; como pulverización oral, pulverización nasal, y/o aerosol, y/o a través de un catéter en la vena porta. En algunos casos, las proteínas o complejos, y/o las composiciones farmacéuticas, profilácticas, de diagnóstico o de formación de imágenes de las mismas se administran mediante inyección intravenosa sistémica. En casos específicos, las proteínas o complejos y/o las composiciones farmacéuticas, profilácticas, de diagnóstico o de formación de imágenes de las mismas pueden administrarse por vía intravenosa y/u oral. En casos específicos, las proteínas o complejos, y/o las composiciones farmacéuticas, profilácticas, de diagnóstico o de formación de imágenes de las mismas pueden administrarse de una manera que permita que la proteína o el complejo atraviese la barrera hematoencefálica, la barrera vascular u otra barrera epitelial.
Sin embargo, la presente descripción se refiere a la administración de proteínas o complejos, y/o composiciones farmacéuticas, profilácticas, de diagnóstico o de formación de imágenes de las mismas por cualquier vía apropiada teniendo en cuenta los posibles avances en las ciencias de la administración de fármacos.
En general, la vía de administración más apropiada dependerá de una variedad de factores, incluida la naturaleza de la proteína o del complejo que comprende proteínas asociadas con al menos un agente que se administrará (por ejemplo, su estabilidad en el entorno del tracto gastrointestinal, torrente sanguíneo, etc.), la condición del paciente (por ejemplo, si el paciente es capaz de tolerar determinadas vías de administración), etc. La presente descripción se refiere a la administración de las composiciones farmacéuticas, profilácticas, de diagnóstico o de formación de imágenes por cualquier vía apropiada teniendo en cuenta los posibles avances en las ciencias de la administración de fármacos.
Las composiciones según la presente descripción pueden administrarse en niveles de dosificación suficientes para administrar de alrededor de 0,0001 mg/kg a alrededor de 100 mg/kg, de alrededor de 0,01 mg/kg a alrededor de 50 mg/kg, de alrededor de 0,1 mg/kg a alrededor de 40 mg/kg, de alrededor de 0,5 mg/kg a alrededor de 30 mg/kg, de alrededor de 0,01 mg/kg a alrededor de 10 mg/kg, de alrededor de 0,1 mg/kg a alrededor de 10 mg/kg, o de larededor de 1 mg/kg a alrededor de 25 mg/kg del peso corporal del sujeto por día, una o más veces al día, para obtener el efecto terapéutico, de diagnóstico, profiláctico o de formación de imágenes deseado. La dosis deseada se puede administrar tres veces al día, dos veces al día, una vez al día, cada dos días, cada tercer día, semanalmente, cada dos semanas, cada tres semanas o cada cuatro semanas.
La dosis deseada se puede administrar usando múltiples administraciones (por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece, catorce, o más administraciones).
Las proteínas o los complejos se pueden usar en combinación con uno o más agentes terapéuticos, profilácticos, de diagnóstico o de formación de imágenes. Por "en combinación con", no se pretende implicar que los agentes deben administrarse al mismo tiempo y/o que deben formularse para su administración conjunta, aunque estos procedimientos de administración están dentro del alcance de la presente descripción. Las composiciones se pueden administrar simultáneamente con, antes o después de, uno o más de otros procedimientos terapéuticos o médicos deseados. En general, cada agente se administrará en una dosis y/o según un calendario determinado para ese agente. En algunos casos, la presente descripción abarca la administración de composiciones farmacéuticas, profilácticas, de diagnóstico o de formación de imágenes en combinación con agentes que mejoran su biodisponibilidad, reducen y/o modifican su metabolismo, inhiben su excreción y/o modifican su distribución dentro del cuerpo.
Se apreciará además que los agentes activos terapéuticos, profilácticos, de diagnóstico o de formación de imágenes utilizados en combinación pueden administrarse juntos en una sola composición o administrarse por separado en diferentes composiciones. En general, se espera que los agentes utilizados en combinación se utilicen en niveles que no excedan los niveles en los que se utilizan individualmente. En algunos casos, los niveles utilizados en combinación serán inferiores a los utilizados individualmente.
La combinación particular de terapias (productos terapéuticos o procedimientos) para emplear en un régimen de combinación deberá tener en cuenta la compatibilidad de los productos terapéuticos y/o los procedimientos deseados y el efecto terapéutico deseado a conseguir. También se apreciará que las terapias empleadas pueden alcanzar un efecto deseado para el mismo trastorno (por ejemplo, se puede administrar una composición útil para tratar el cáncer según la presente descripción simultáneamente con un agente quimioterapéutico), o pueden alcanzar efectos diferentes (por ejemplo, control de cualquier efecto adverso).
Kits
También se describen una variedad de kits para llevar a cabo de manera conveniente y/o efectiva los procedimientos de la presente descripción. Típicamente, los kits comprenderán números y/o cantidades suficientes de componentes para permitir que un usuario realice múltiples tratamientos de un sujeto o sujetos y/o realice múltiples experimentos.
En un aspecto, se describen kits para la producción de proteínas, que comprenden un primer ácido nucleico aislado que comprende una región traducible y una modificación del ácido nucleico, donde el ácido nucleico es capaz de evadir una respuesta inmunitaria innata de una célula en la que se introduce el primer ácido nucleico aislado, y empaque e instrucciones.
En un aspecto, se describen kits para la producción de proteínas, que comprenden: un primer ácido nucleico aislado que comprende una región traducible, proporcionado en una cantidad efectiva para producir una cantidad deseada de una proteína codificada por la región traducible cuando se introduce en una célula diana; un segundo ácido nucleico que comprende un ácido nucleico inhibidor, proporcionado en una cantidad efectiva para inhibir sustancialmente la respuesta inmunitaria innata de la célula; y empaque e instrucciones.
En un aspecto, se describen kits para la producción de proteínas, que comprenden un primer ácido nucleico aislado que comprende una región traducible y una modificación de nucleósido, donde el ácido nucleico presenta una degradación reducida por una nucleasa celular, y empaque e instrucciones.
En un aspecto, se describen kits para la producción de proteínas, que comprenden un primer ácido nucleico aislado que comprende una región traducible y al menos dos modificaciones de nucleósidos diferentes, donde el ácido nucleico presenta una degradación reducida por una nucleasa celular, y empaque e instrucciones.
En un aspecto, se describen kits para la producción de proteínas, que comprenden un primer ácido nucleico aislado que comprende una región traducible y al menos una modificación de nucleósido, donde el ácido nucleico presenta una degradación reducida por una nucleasa celular; un segundo ácido nucleico que comprende un ácido nucleico inhibidor; y empaque e instrucciones.
El primer ácido nucleico aislado puede comprender ARN mensajero (ARNm). El ARNm puede comprender al menos un nucleósido seleccionado de entre el grupo que consiste en piridin-4-ona ribonucleósido, 5-azauridina, 2-tio-5-aza-uridina, 2-tiouridina, 4-tio-pseudouridina, 2-tio-pseudouridina, 5-hidroxiuridina, 3-metiluridina, 5-carboximetil-uridina, 1-carboximetil-pseudouridina, 5-propinil-uridina, 1-propinil-pseudouridina, 5-taurinometiluridina, 1-taurinometil-pseudouridina, 5-taurinometil-2-tio-uridina, 1 -taurinometil-4-tiouridina, 5-metil-uridina, 1-metil-pseudouridina, 4-tio-1-metil-pseudouridina, 2-tio-1-metil-pseudouridina, 1-metil-1-deazapseudouridina, 2-tio-1-metil-1-deaza-pseudouridina, dihidrouridina, dihidropseudouridina, 2-tio-dihidrouridina, 2-tio-dihidropseudouridina, 2-metoxiuridina, 2-metoxi-4-tio-uridina, 4-metoxi-pseudouridina y 4-metoxi-2-tiopseudouridina.
El ARNm puede comprender al menos un nucleósido seleccionado de entre el grupo que consiste en 5-azacitidina, pseudoisocitidina, 3-metil-citidina, N4-acetilcitidina, 5-formilcitidina, N4-metilcitidina, 5-hidroximetilcitidina, 1-metil-pseudoisocitidina, pirrolo-citidina, pirrolo-pseudoisocitidina, 2-tio-citidina, 2-tio-5-metil-citidina, 4-tio-pseudoisocitidina, 4-tio-1-metil-pseudoisocitidina, 4-tio-1-metil-1-deaza-pseudoisocitidina, 1-metil-1-deaza-pseudoisocitidina, zebularina, 5-aza-zebularina, 5-metil-zebularina, 5-aza-2-tio-zebularina, 2-tio-zebularina, 2-metoxi-citidina, 2-metoxi-5-metil-citidina, 4-metoxi-pseudoisocitidina y 4-metoxi-1-metilpseudoisocitidina.
El ARNm puede comprender al menos un nucleósido seleccionado de entre el grupo que consiste en 2-aminopurina, 2,6-diaminopurina, 7-deaza-adenina, 7-deaza-8-aza-adenina, 7-deaza-2-aminopurina, 7-deaza-8-aza-2-aminopurina, 7-deaza-2,6-diaminopurina, 7-deaza-8-aza-2,6-diaminopurina, 1-metiladenosina, N6-metiladenosina, N6-isopenteniladenosina, N6-(cis-hidroxiisopentenil)adenosina, 2-metiltio-N6-(cishidroxiisopentenil) adenosina, N6-glicinilcarbamoiladenosina, N6-treonilcarbamoiladenosina, 2-metiltio-N6-treonil carbamoiladenosina, N6,N6-dimetiladenosina, 7-metiladenina, 2-metiltio-adenina y 2-metoxi-adenina.
El ARNm puede comprender al menos un nucleósido seleccionado de entre el grupo que consiste en inosina, 1-metil-inosina, wyosina, wybutosina, 7-deaza-guanosina, 7-deaza-8-aza-guanosina, 6-tio-guanosina, 6-tio-7-deaza-guanosina, 6-tio-7-deaza-8-aza-guanosina, 7-metil-guanosina, 6-tio-7-metil-guanosina, 7-metilinosina, 6-metoxi-guanosina, 1-metilguanosina, N2-metilguanosina, N2,N2-dimetilguanosina, 8-oxo-guanosina, 7-metil-8-oxo-guanosina, 1-metil-6-tio-guanosina, N2-metil-6-tio-guanosina y N2,N2-dimetil-6-tio-guanosina.
En otro aspecto, se describen composiciones para la producción de proteínas, que comprenden un primer ácido nucleico aislado que comprende una región traducible y una modificación de nucleósido, donde el ácido nucleico presenta una degradación reducida por una nucleasa celular, y una célula de mamífero adecuada para la traducción de la región traducible del primer ácido nucleico. La invención proporciona un ARNm donde el 100 % de los nucleótidos que comprenden uracilo se reemplazan con nucleótidos que comprenden N1-metilpseudouridina.
EJEMPLOS
Ejemplo 1. Transcripción in vitro de ARNm modificado
Materiales y procedimientos
Los ARNm modificados (ARNmod) se fabricaron utilizando procedimientos y materiales de laboratorio estándar para la transcripción in vitro, con la excepción de que la mezcla de nucleótidos contenía nucleótidos modificados. El marco de lectura abierto (ORF) del gen de interés está flanqueado por una región no traducida (UTR) 5' que contiene una fuerte señal de iniciación de la traducción Kozak y una UTR 3' de globina alfa que termina con una secuencia de oligo(dT) para la adición moldeada de una cola poliA para ARNmod que no incorporan análogos de adenosina. Los ARNmod que contienen adenosina se sintetizaron sin una secuencia de oligo (dT) para permitir la formación de cola poli(A) de poli(A) polimerasa posterior a la transcripción. Los ARNmod se modificaron mediante la incorporación de nucleótidos modificados químicamente indicados en la Tabla 3 (a continuación) durante la transcripción in vitro con el 100 % de sustitución del nucleótido natural correspondiente o la sustitución parcial del nucleótido natural correspondiente en el porcentaje indicado.
La Tabla 3 indica la identidad química de cada nucleótido modificado químicamente distinto incorporado en un ARNm modificado con el número de designación química dado.
Tabla 3
Figure imgf000038_0001
Figure imgf000039_0001
Electroforesis en gel de agarosa de ARNmod: se cargaron ARNmod individuales (200-400 ng en un volumen de 20 |jl) en un pocilio de agarosa E-Gel al 1,2 % no desnaturalizante (Invitrogen, Carlsbad, CA) y se corrieron durante 12-15 minutos según el protocolo del fabricante (Fig. 1A). Las Tablas 4 y 5 a continuación indican el nucleótido modificado (Tabla 4) o el ácido nucleico (Tabla 5) cargado en cada carril. Estos datos indican qué nucleótidos modificados químicamente se transcribieron en ARNm modificados químicamente y la calidad de cada ARNmod individual. Estos datos demuestran que los nucleótidos con modificaciones químicas en la cara del surco mayor y del surco menor del nucleótido eran capaces de transcribirse en un ARNmod.
Tabla 4
Figure imgf000040_0001
Tabla 5
Figure imgf000041_0001
Electroforesis en gel de agarosa de productos de RT-PCR: se cargaron productos de PCR de la transcripción inversa individual (200-400 ng) en un pocilio de agarosa E-Gel al 1,2 % no desnaturalizante (Invitrogen, Carlsbad, CA) y se corrieron durante 12-15 minutos según el protocolo del fabricante (Fig. 1B). La Tabla 5 a continuación indica el nucleótido modificado cargado en cada carril.
Cuantificación de ARNmod con Nanodrop y datos espectrales UV: los ARNmod en tampón TE (1 pl) se utilizaron para las lecturas de absorbancia UV de Nanodrop para cuantificar el rendimiento de cada ARNmod a partir de una reacción de transcripción in vitro (las trazas de absorbancia de UV se muestran en las Figuras 6A-6L). Estos datos indican qué nucleótidos modificados químicamente se transcribieron en ARNm modificados químicamente. Estos datos también demuestran que los nucleótidos con modificaciones químicas en la cara del surco mayor y del surco menor del nucleótido eran capaces de transcribirse en un ARNmod. Estos datos demuestran además que los nucleótidos de la presente invención son aptos para la transcripción y compatibles con la incorporación en un ARNmod, que puede tener espectros Uv alterados debido a la presencia de un nucleótido modificado dado. Por ejemplo, los ARNmod que contienen Pirrolo-C tienen un aumento en la absorbancia UV a una longitud de onda más baja debido a la presencia del anillo de pirrolo del nucleótido C modificado. En otro ejemplo, los ARNmod que contienen nucleótidos de 2-amino-adenina tienen un aumento en la absorbancia UV a una longitud de onda más alta debido a la presencia de una amina exocíclica fuera del anillo de purina. Los nucleótidos que no son aptos para la transcripción y no pueden incorporarse en un ARNmod tienen un espectro UV mezclado que indica que no hay producto de la reacción de transcripción.
Ejemplo 2. Transfección de ARN modificado
Transfección inversa: para los experimentos realizados en una placa de cultivo de tejidos recubierta de colágeno de 24 pocillos, se sembraron queratinocitos a una densidad celular de 1 x 105. Para los experimentos realizados en una placa de cultivo de tejidos recubierta de colágeno de 96 pocillos, se sembraron queratinocitos a una densidad celular de 0,5 x 105. Para cada ARNmod a transfectar, se preparó ARNmod: RNAiMAX como se ha descrito y se mezcló con las células en la placa multipocillo dentro de un período de tiempo, por ejemplo, 6 horas, desde la siembra celular antes de que las células se adhirieran a la placa de cultivo de tejido.
Transfección directa: en una placa de cultivo de tejidos recubierta de colágeno de 24 pocillos, se sembraron queratinocitos a una densidad celular de 0,7 x 105. Para los experimentos realizados en una placa de cultivo de tejidos recubierta de colágeno de 96 pocillos, se sembraron queratinocitos a una densidad celular de 0,3 x 105. A continuación, los queratinocitos se cultivaron hasta una confluencia de >70 % durante más de 24 horas. Para cada ARNmod a transfectar, se preparó ARNmod: RNAiMAX como se ha descrito y se transfectó en las células de la placa de múltiples pocillos durante 24 horas después de la siembra celular y la adherencia a la placa de cultivo de tejidos.
Cribado de traducción de ARNmod: G-CSF ELISA
Las Fig. 2A y 2B muestran un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) para el factor estimulante de colonias de granulocitos humanos (hu-G-CSF) de células de queratinocitos humanos transfectadas in vitro. Los queratinocitos se cultivaron en medio EpiLife con Suplemento S7 de Invitrogen en una confluencia de >70 %. Fig. 2A Los queratinocitos se transfectaron inversamente con 300 ng del ARNm modificado químicamente indicado en complejo con RNAiMAX de Invitrogen. Fig. 2B Los queratinocitos se transfectaron directamente con 300 ng de ARNmod en complejo con RNAiMAX de Invitrogen. El complejo ARN:RNAiMAX se formó incubando primero el ARN con medios EpiLife sin suplemento en una dilución volumétrica 5X durante 10 minutos a temperatura ambiente. En un segundo vial, el reactivo RNAiMAX se incubó con medios EpiLife sin suplemento en una dilución volumétrica 10X durante 10 minutos a temperatura ambiente. A continuación, el vial de ARN se mezcló con el vial de RNAiMAX y se incubó durante 20-30 a temperatura ambiente antes de añadirlo a las células gota a gota. La concentración de huG-CSF secretada en el medio de cultivo se midió 18 horas después de la transfección para cada uno de los ARNm modificados químicamente por triplicado. La secreción del factor estimulante de colonias de granulocitos humanos (G-CSF) de queratinocitos humanos transfectados se cuantificó utilizando un kit ELISA de Invitrogen o R&D Systems (Minneapolis, MN) siguiendo las instrucciones recomendadas por los fabricantes. Estos datos muestran que los ARNmod de huG-CSF compuestos por análogos de nucleótidos químicamente distintos (SEQ ID NO: 2) pueden traducirse en células de queratinocitos humanos y que huG-CSF se transporta fuera de las células y se libera en el entorno extracelular. Estos datos indican qué nucleótidos modificados se tradujeron en proteína cuando se incorporaron a un ARNm modificado químicamente. Estos datos muestran que los nucleótidos que contienen ARN modificado con modificaciones químicas en la cara del surco mayor de los análogos de pirimidina tienen los niveles más altos de hu-G-CSF secretado en el medio de cultivo celular.
Dosis y duración de ARNmod: G-CSF ELISA
Las Fig. 3A-N muestran ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA) para el factor estimulante de colonias de granulocitos humanos (G-CSF) de células de queratinocitos humanos transfectadas in vitro. Los queratinocitos se cultivaron en medio EpiLife con Suplemento S7 de Invitrogen en una confluencia de >70 %. Los queratinocitos se transfectaron inversamente con 0 ng, 46,875 ng, 93,75 ng, 187,5 ng, 375 ng, 750 ng o 1500 ng de ARNmod en complejo con RNAiMAX de Invitrogen. El complejo ARNmod:RNAiMAX se formó como se describe. La concentración de huG-CSF secretada en el medio de cultivo se midió a las 0, 6, 12, 24 y 48 horas después de la transfección para cada concentración de cada ARNmod por triplicado. La secreción del factor estimulante de colonias de granulocitos humanos (G-CSF) de queratinocitos humanos transfectados se cuantificó utilizando un kit ELISA de Invitrogen o R&D Systems siguiendo las instrucciones recomendadas por los fabricantes. Estos datos muestran que los ARNmod de huG-CSF compuestos por análogos de nucleótidos químicamente distintos (SEQ ID NO: X y Tabla 6) secretaron la proteína hu-G-CSF de una manera dependiente de la dosis de ARNmod de las células de queratinocitos humanos y que huG-CSF se transporta fuera de las células y se libera al medio extracelular. Estos datos indican qué ARN modificados que contienen análogos de nucleótidos modificados mantienen la expresión de hu-G-CSF durante más tiempo y en los niveles más altos. Estos datos muestran que el ARN modificado que contiene nucleótidos modificados con modificaciones químicas en la cara del surco mayor de los análogos de pirimidina tiene los niveles más altos de hu-G-CSF secretado en el medio de cultivo celular y que 750 ng de ARNmod provocan el nivel más alto de hu-G-CSF secretado.
Ejemplo 3. Respuesta inmunItaria innata celular a ARNmod
IFN-p ELISA y TNF-a ELISA:
Las Fig. 4A-F muestran un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) para el factor de necrosis tumoral humano-a (TNF-a) (Fig. 4a y 4B); interferón-p humano (IFN-p) (Fig. 4C y 4D); y el factor estimulante de colonias de granulocitos humanos (G-CSF) (Fig. 4e y 4F) secretado a partir de células de queratinocitos humanos transfectadas in vitro. Los queratinocitos se cultivaron en medio EpiLife con suplemento de crecimiento de queratinocitos humanos en ausencia de hidrocortisona de Invitrogen en una confluencia de >70 %. En las Fig. 4A y 4B, los queratinocitos se transfectaron inversamente con 0 ng, 93,75 ng, 187,5 ng, 375 ng, 750 ng, 1500 ng o 3000 ng del ARNm modificado químicamente indicado en complejo con RNAiMAX de Invitrogen como se describe por triplicado. El TNF-a secretado en el medio de cultivo se midió 24 horas después de la transfección para cada uno de los ARNm modificados químicamente usando un kit ELISA de Invitrogen según los protocolos del fabricante.
En las Fig. 4C y 4D, el IFN-p secretado en el medio de cultivo se midió 24 horas después de la transfección para cada uno de los ARNm modificados químicamente usando un kit ELISA de Invitrogen según los protocolos del fabricante. En las Fig. 4E y 4F, se midió la concentración de hu-G-CSF secretada en el mismo medio de cultivo 24 horas después de la transfección para cada uno de los ARNm modificados químicamente. La secreción del factor estimulante de colonias de granulocitos humanos (G-CSF) de queratinocitos humanos transfectados se cuantificó utilizando un kit ELISA de Invitrogen o R&D Systems (Minneapolis, MN) siguiendo las instrucciones recomendadas por los fabricantes. Estos datos indican qué ARN modificados que contienen nucleótidos modificados fueron capaces de provocar una respuesta inmunitaria innata celular reducida en comparación con los nucleótidos naturales y otros modificados químicamente midiendo las citocinas de tipo I ejemplares TNF-a e IFN-p. Estos datos muestran que los ARN modificados que contienen nucleótidos modificados con modificaciones químicas en la cara del surco mayor de los análogos de pirimidina tienen los niveles más bajos de TNF-a e IFN-p secretados en el medio de cultivo celular mientras mantienen altos niveles de ARNmod que codifica la secreción de hu-G-CSF en el medio de cultivo celular.
Ejemplo 4. Ensayo de proliferación celular inducida por ARN modificado con factor estimulante de colonias de granulocitos humanos
Las Fig. 5A-D muestran que el ARNmod que codifica hu-G-CSF producido por una capa de células alimentadoras de queratinocitos humanos indujo la proliferación de células mieloblásticas humanas KG-1 y Kasumi-1 que expresan el receptor de G-CSF donde las poblaciones celulares están separadas por una membrana semipermeable.
Se cultivaron queratinocitos humanos en medio EpiLife con Suplemento S7 de Invitrogen en una confluencia de >70 % en una placa de cultivo de tejidos de cocultivo Transwell® (Corning, Lowell, MA) recubierta de colágeno de 24 pocillos. Los queratinocitos se transfectaron inversamente con 750 ng del ARNm modificado químicamente indicado en complejo con RNAiMAX de Invitrogen como se describe por triplicado. El complejo ARNmod:RNAiMAX se formó como se describe. El medio de queratinocitos se intercambió 6-8 horas después de la transfección. 42 horas después de la transfección, se colocó el inserto de placa Transwell® de 24 pocillos con una membrana de poliéster semipermeable de poro de 0,4 pm en la placa de cultivo que contenía queratinocitos transfectados con ARNmod de hu-G-CSF. La Fig. 5A es una tabla que muestra los resultados de un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) para G-CSF humano secretado a partir de células de queratinocitos humanos transfectadas in vitro muestreadas de pocillos individuales en una placa de cultivo tisular de 24 pocillos de cocultivo 42 horas después de la transfección con 750 ng de cada ARNmod que codifica hu-G-CSF indicado.
Se sembraron células de mieloblastos humanos, células Kasumi-1 (Fig. 5C) o KG-1 (Fig. 5D) (0,2 x 105 células), en el pocillo del inserto y se cuantificó la proliferación celular 42 horas después del inicio del cocultivo utilizando el ensayo de proliferación celular directa CyQuant (Invitrogen) en un volumen de 100-120 pl en una placa de 96 pocillos. La proliferación de células mieloblásticas inducida por ARNmod que codifica hu-G-CSF se expresó como un porcentaje de proliferación celular normalizada a pocillos de control de cocultivo de queratinocitos/mieloblastos no transfectados. La concentración de hu-G-CSF secretada en los pocillos de cocultivo del inserto de queratinocitos y mieloblastos se midió 42 horas después del inicio del cocultivo para cada ARNmod por duplicado. La secreción del factor estimulante de colonias de granulocitos humanos (G-CSF) se cuantificó utilizando un kit ELISA de Invitrogen siguiendo las instrucciones recomendadas por los fabricantes.
El ARNmod de hu-G-CSF transfectado en células alimentadoras de queratinocitos humanos y células mieloblásticas humanas no transfectadas se detectaron mediante RT-PCR. El ARN total de las células de muestra se extrajo y lisó utilizando el kit RNeasy (Qiagen, Valencia, CA) según las instrucciones del fabricante. El ARN total extraído se envió a RT-PCR para la amplificación específica de ARNmod-G-CSF usando el kit ProtoScript® M-MuLV Taq RT-PCR (New England BioLabs, Ipswich, MA) según las instrucciones del fabricante con cebadores específicos hu-G-CSF (véase más abajo). Los productos de RT-PCR se visualizaron mediante electroforesis en gel de agarosa al 1,2 % (Fig. 5B). La Tabla 6 a continuación muestra qué ARNmod se corrieron en el gel de agarosa.
Figure imgf000044_0001
Figure imgf000044_0003
Figure imgf000044_0002
Estos datos muestran que las células de queratinocitos humanos que contienen ARNmod de hu-G-CSF compuestos por análogos de nucleótidos químicamente distintos secretaron proteína hu-G-CSF y que el hu-G-CSF secretado fue fisiológicamente activo en la inducción de la proliferación de células mieloblásticas humanas que expresan el receptor de G-CSF. Estos datos también muestran que la proteína hu-G-CSF secretada era permeable a través de una membrana semipermeable y actuaba sobre una población celular diferente que no producía G-CSF. Además, estos datos muestran que el ARNmod de hu-G-CSF transfectado en células de queratinocitos humanos en un entorno de cocultivo estaba presente solo en las células de queratinocitos transfectadas y no en las células de mieloblastos no transfectadas. Además, estos datos muestran que la composición química de nucleótidos modificada de ARNmod de hu-G-CSF no afectó a la actividad de la proteína resultante.
Ejemplo 5. El efecto de ARNmod en la viabilidad celular
Citotoxicidad y apoptosis:
Este experimento demuestra la viabilidad celular, la citotoxicidad y la apoptosis para distintas células de queratinocitos humanos transfectadas in vitro con ARNmod. Los queratinocitos se cultivan en medio EpiLife con suplemento de crecimiento de queratinocitos humanos en ausencia de hidrocortisona de Invitrogen a una confluencia de >70 %. Los queratinocitos se transfectaron inversamente con 0 ng, 46,875 ng, 93,75 ng, 187,5 ng, 375 ng, 750 ng, 1500 ng, 3000 ng o 6000ng de ARNmod en complejo con RNAiMAX de Invitrogen. Se forma el complejo ARNmod:RNAiMAX. La concentración de huG-CSF secretada en el medio de cultivo se mide a las 0, 6, 12, 24 y 48 horas después de la transfección para cada concentración de cada ARNmod por triplicado. La secreción del factor estimulante de colonias de granulocitos humanos (G-CSF) de queratinocitos humanos transfectados se cuantifica utilizando un kit ELISA de Invitrogen o R&D Systems siguiendo las instrucciones recomendadas por los fabricantes. La viabilidad celular, la citotoxicidad y la apoptosis se miden a las 0, 12, 48, 96 y 192 horas después de la transfección utilizando el kit ApoToxGlo de Promega (Madison, WI) según las instrucciones del fabricante.
Ejemplo 6. Cocultivo
El ARNm modificado compuesto por nucleótidos modificados químicamente distintos que codifican el factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) humano puede estimular la proliferación celular de una célula no apta para la transfección en un entorno de cocultivo. El cocultivo incluye un tipo celular altamente transfectable tal como un queratinocito humano y un tipo celular no apto para la transfección tal como un glóbulo blanco (WBC). El ARNm modificado que codifica G-CSF puede transfectarse en la célula altamente transfectable, lo que permite la producción y secreción de la proteína G-CSF en el entorno extracelular donde G-CSF actúa de manera paracrina para estimular los glóbulos blancos que expresan el receptor de G-CSF para proliferar. La población de WBC ampliada se puede usar para tratar pacientes inmunocomprometidos o reconstituir parcialmente la población de WBC de un paciente inmunodeprimido y así reducir el riesgo de infecciones oportunistas.
Otro ejemplo, una célula altamente transfectable tal como un fibroblasto puede transfectarse con determinados factores de crecimiento para apoyar y simular el crecimiento, mantenimiento o diferenciación de células madre embrionarias mal transfectables o células madre pluripotentes inducidas.
Ejemplo 7. Capping de 5'-guanosina en ácidos nucleicos modificados (ARNmod)
La clonación, síntesis de genes y secuenciación de vectores fue realizada por DNA2.0 Inc. (Menlo Park, CA). La secuencia y la secuencia de inserción se exponen en esta invención. El ORF se digirió por restricción usando Xbal y se usó para la síntesis de ADNc usando PCR con cola o sin cola. El producto de ADNc de PCR con cola se usó como plantilla para la reacción de síntesis de ARNm modificado usando una mezcla de 25 mM para cada nucleótido modificado (todos los nucleótidos modificados se sintetizaron a medida o se adquirieron en TriLink Biotech, San Diego, CA, excepto el trifosfato de pirrolo-C adquirido en Glen Research, Sterling VA; los nucleótidos no modificados se adquirieron de Epicenter Biotechnologies, Madison, WI) y el kit completo de síntesis de ARNm de CellScript MegaScript™ (Epicenter Biotechnologies, Madison, WI). La reacción de transcripción in vitro se llevó a cabo durante 4 horas a 37 °C. Los ARNmod que incorporaban análogos de adenosina se acoplaron con poli (A) utilizando poli (A) polimerasa de levadura (Affymetrix, Santa Clara, CA). La reacción de PCR utilizó HiFi p Cr 2X Master Mix™ (Kapa Biosystems, Woburn, MA). Los ARNmod se sometieron a capping postranscripcionalmente usando la enzima de capping del virus Vaccinia recombinante (New England BioLabs, Ipswich, MA) y una 2'-O-metiltransferasa recombinante (Epicenter Biotechnologies, Madison, WI) para generar la estructura Cap1 de 5'-guanosina. La estructura Cap 2 y las estructuras Cap 3 se pueden generar usando 2'-O-metiltransferasas adicionales. El producto de ARNm transcrito in vitro se corrió en un gel de agarosa y se visualizó. El ARNmod se purificó con el kit de purificación MEGAClear RNA™ de Ambion/Applied Biosystems (Austin, TX). La PCR utilizó el kit de purificación de PCR PureLink™ (Invitrogen, Carlsbad, CA). El producto se cuantificó en Nanodrop™ UV Absorbance (ThermoFisher, Waltham, MA). La calidad, la calidad de la absorbancia UV y la visualización del producto se realizaron en un gel de agarosa al 1,2 %. El producto se resuspendió en tampón TE.
Estructura de ácido nucleico modificado (ARNm) con capping en 5':
El capping de 5'-ARNmod se puede completar de manera concomitante durante la reacción de transcripción in vitro usando los siguientes análogos químicos de cap de ARN para generar la estructura de cap de 5'-guanosina según los protocolos del fabricante: 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G; G(5')ppp(5')A; G(5')ppp(5')G; m7G(5')ppp(5')A; m7G(5')ppp(5')G (New England BioLabs, Ipswich, Ma ). El capping de 5'-ARNmod puede completarse después de la transcripción utilizando una enzima de capping del virus Vaccinia para generar la estructura "Cap 0": m7G(5')ppp(5')G (New England BioLabs, Ipswich, MA). La estructura Cap 1 puede generarse usando tanto la enzima de capping del virus Vaccinia como una 2'-O metil-transferasa para generar: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-metilo. La estructura Capa 2 puede generarse a partir de la estructura Capa 1 seguida de la 2'-O-metilación del nucleótido 5'-antepenúltimo usando una 2'-O metiltransferasa. La estructura Capa 3 puede generarse a partir de la estructura Capa 2 seguida de la 2'-O-metilación del nucleótido 5'-antepenúltimo usando una 2'-O metiltransferasa. Las enzimas se derivan preferentemente de una fuente recombinante. Secuencias:
ADNc de G-CSF:
a g cttttg g a ccctcg ta ca g a a g cta a ta cg a ctca cta ta g g g a a a ta a g a g a g a a a a g a a g a g ta a g a a g a a a ta ta a g a g cc a cc a tg g c c g g tc c c g c g a c c c a a a g c c c c a tg a a a c tta tg g c c c tg c a g ttg c tg c tttg g c a c tc g g c c c tc tg g a c a g tc c a a g a a g cg a c tcc tc tc g g a cc tg c c tca tcg ttg c cg c a g tc a ttcc ttttg a a g tg tc tg g a g ca g g tg cg a a a g a ttc a g g g cg a tg g a g cc g ca c tcca a g a g a a g c tc tg c g c g a c a ta c a a a c tttg c c a tc c c g a g g a g c tc g ta c tg c tc g g g c a c a g c ttg g g g a ttc c c tg g g c tc c tc tc tcg tcc tg tcc g tc g ca g g c tttg ca g ttg g c a g g g tg c c tttc cc a g c tcca c tccg g tttg ttc ttg ta tc a g g g a c tg c tg ca a g c cc ttg a g g g a a tc tc g c c a g a a ttg g g c c c g a c g c tg g a c a c g ttg c a g c tc g a c g tg g c g g a tttc g c a a c a a c c a tc tg g c a g c a g a tg g a g g a a c tg g g g a tg g c a c c c g c g c tg c a g c c c a c g c a g g g g g c a a tg c c g g c c tt tg c g tc c g c g tt tc a g c g c a g g g c g g g tg g a g t cc tcg ta g cg a g cc a cc ttc a a tc a tttttg g a a g tc tc g ta c cg g g tg c tg a g a ca tc ttg cg c a g cc g tg a a g c g c tg cc ttc tg cg g g g c t tg c c ttc tg g c ca tg cc c ttc ttc tc tc cc ttg ca c c tg ta cc tc ttg g tc tttg a a ta a a g c c tg a g ta g g a a g g c g g cc g c tcg a g c a tg c a tc ta g a g g g cc ca a ttc g cc c ta ttcg a a g tcg (S E Q ID N O : 1)
ARNm de G-CSF:
a g cu u u u g g a cccu cg u a ca g a a g cu a a u a cg a cu ca cu a u a g g g a a a u a a g a g a g a a a a g a a g a g u a a g a a g a a a u a u a a g a g c c a c c a u g g c c g g u c c c g c g a c c c a a a g c c c c a u g a a a c u u a u g g c c c u g c a g u u g c u g c u u u g g c a c u c g g c c c u c u g g a c a g u c c a a g a a g c g a c u c c u c u c g g a c c u g c c u c a u c g u u g c c g c a g u c a u u c c u u u u g a a g u g u c u g g a g c a g g u g cg a a a g a u u c a g g g c g a u g g a g c c g c a c u c c a a g a g a a g c u c u g c g c g a c a u a c a a a c u u u g c c a u c c c g a g g a g c u c g u a c u g c u c g g g c a c a g c u u g g g g a u u c c c u g g g c u c c u c u c u c g u c c u g u c c g u c g c a g g c u u u g c a g u u g g c a g g g u g c c u u u c c c a g c u c c a c u c c g g u u u g u u c u u g u a u c a g g g a c u g c u g c a a g c c c u u g a g g g a a u c u c g c c a g a a u u g g g c c c g a c g c u g g a ca c g u u g c a g c u c g a c g u g g c g g a u u u c g c a a c a a c c a u c u g g c a g c a g a u g g a g g a a c u g g g g a u g g c a c c c g c g c u g c a g c c c a c g c a g g g g g c a a u g c c g g c c u u u g c g u c c g c g u u u c a g c g c a g g g c g g g u g g a g u c c u c g u a g c g a g c c a c c u u c a a u c a u u u u u g g a a g u c u c g u a c c g g g u g c u g a g a c a u c u u g c g c a g c c g u g a a g c g c u g c c u u c u g c g g g g c u u g c c u u c u g g cc a u g c c c u u c u u c u c u c c c u u g c a c c u g u a c c u c u u g g u c u u u g a a u a a a g c c u g a g u a g g a a g g c g g c c g c u c g a g c a u g ca u c u a g a g g g c c c a a u u c g c c c u a u u c g a a g u c g (S E Q ID N O : 2 )
Proteína G-CSF:
M A G P A T Q S P M K L M A L Q L L L W H S A L W T Y Q E A T P L G P A S S L P Q S F L L K C L E Q V R K I
Q G D G A A L Q E K L V S E C A T Y K L C H P E E L V L L G H S L G IP W A P L S S C P S Q A L Q L A G C L S Q L H S
G L F L Y Q G L L Q A L E G IS P E L G P T L D T L Q L D V A D F A T T IW Q Q M E E L G M A P A L Q P T Q G A M P A
F A S A F Q R R A G G V F V A S H F Q S F F E V S Y R V F R H F A Q P (S E Q ID N O : 3 )

Claims (7)

REIVINDICACIONES
1. Un procedimiento de síntesis de un ARNm, que comprende las etapas de:
a) proporcionar un ácido desoxirribonucleico complementario (ADNc) que codifica una proteína de interés; b) seleccionar un nucleótido que se sabe que interrumpe la unión de un componente asociado de unión al surco mayor con un ácido nucleico, donde el nucleótido tiene una afinidad de unión disminuida con el componente asociado de unión al surco mayor;
c) poner en contacto el ADNc proporcionado y el nucleótido seleccionado con una ARN polimerasa en condiciones tales que se sintetice el ARNm,
donde el nucleótido comprende N1-metil-pseudouridina, y
donde el 100% de los nucleótidos que comprenden uracilo en el ARN se reemplazan con nucleótidos que comprenden N1-metil-pseudouridina.
2. Un procedimiento según la reivindicación 1, donde el componente asociado de unión al surco mayor se selecciona de entre el grupo que consiste en el receptor tipo toll (TLR) 3, TLR7, TLR8, gen I inducible por ácido retinoico (RIG-I), el gen 5 asociado a la diferenciación de melanoma (MDA5) y el laboratorio de genética y fisiología 2 (LGP2).
3. Un ARNm, donde el 100% de los nucleótidos que comprenden uracilo en el ARNm se reemplazan con nucleótidos que comprenden N1-metil-pseudouridina.
4. Un ARNm según la reivindicación 3, donde el ARNm tiene una longitud de al menos 300 nucleótidos.
5. Un ARNm según cualquiera de las reivindicaciones 3 ó 4 que comprende una cola poliA.
6. Un ARNm según cualquiera de las reivindicaciones 3-5, donde el componente asociado de unión al surco mayor es RIG-I, MDA5 o LGP2.
7. Un ARNm según cualquiera de las reivindicaciones 3-5, donde el componente asociado de unión al surco mayor es TLR3, TLR7 o TLR8.
ES19177059T 2010-10-01 2011-10-03 Acidos ribonucleicos que contienen N1-metil-pseudoracilos y usos de los mismos Active ES2925251T3 (es)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US40441310P 2010-10-01 2010-10-01

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2925251T3 true ES2925251T3 (es) 2022-10-14

Family

ID=45893552

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES19177059T Active ES2925251T3 (es) 2010-10-01 2011-10-03 Acidos ribonucleicos que contienen N1-metil-pseudoracilos y usos de los mismos
ES11830061T Active ES2737960T3 (es) 2010-10-01 2011-10-03 Nucleósidos, nucleótidos y ácidos nucleicos modificados y sus usos
ES18179157T Active ES2862955T5 (en) 2010-10-01 2011-10-03 Engineered nucleic acids and methods of use thereof
ES22173763T Active ES3005233T3 (en) 2010-10-01 2011-10-03 Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof

Family Applications After (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES11830061T Active ES2737960T3 (es) 2010-10-01 2011-10-03 Nucleósidos, nucleótidos y ácidos nucleicos modificados y sus usos
ES18179157T Active ES2862955T5 (en) 2010-10-01 2011-10-03 Engineered nucleic acids and methods of use thereof
ES22173763T Active ES3005233T3 (en) 2010-10-01 2011-10-03 Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof

Country Status (27)

Country Link
US (12) US20120237975A1 (es)
EP (8) EP2625189B1 (es)
JP (1) JP2013543381A (es)
CN (3) CN103429606A (es)
AU (2) AU2011308496A1 (es)
BR (1) BR112013007862A2 (es)
CA (3) CA3162352A1 (es)
CY (1) CY1125421T1 (es)
DE (1) DE19177059T1 (es)
DK (2) DK4108671T3 (es)
ES (4) ES2925251T3 (es)
FI (1) FI4108671T3 (es)
HR (2) HRP20220796T1 (es)
HU (2) HUE069586T2 (es)
IL (1) IL225493A0 (es)
LT (2) LT4108671T (es)
MX (1) MX2013003681A (es)
NZ (1) NZ608972A (es)
PL (2) PL3590949T3 (es)
PT (2) PT4108671T (es)
RS (2) RS66304B1 (es)
RU (1) RU2013120302A (es)
SG (2) SG10201508149TA (es)
SI (2) SI3590949T1 (es)
SM (2) SMT202200321T1 (es)
WO (2) WO2012045075A1 (es)
ZA (2) ZA201303161B (es)

Families Citing this family (252)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE10347710B4 (de) 2003-10-14 2006-03-30 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Rekombinante Impfstoffe und deren Verwendung
US9012219B2 (en) 2005-08-23 2015-04-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania RNA preparations comprising purified modified RNA for reprogramming cells
DE102005046490A1 (de) 2005-09-28 2007-03-29 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Modifikationen von RNA, die zu einer erhöhten Transkriptstabilität und Translationseffizienz führen
EP3318248B1 (en) 2009-12-01 2019-04-10 Translate Bio, Inc. Delivery of mrna for the augmentation of proteins and enzymes in human genetic diseases
US8808982B2 (en) 2009-12-07 2014-08-19 Cellscript, Llc Compositions and methods for reprogramming eukaryotic cells
US9006417B2 (en) 2010-06-30 2015-04-14 Protiva Biotherapeutics, Inc. Non-liposomal systems for nucleic acid delivery
ES2646669T3 (es) 2010-07-06 2017-12-14 Glaxosmithkline Biologicals Sa Procedimientos de aumento de una respuesta inmunitaria mediante el suministro de ARN
EP2591114B1 (en) 2010-07-06 2016-06-08 GlaxoSmithKline Biologicals SA Immunisation of large mammals with low doses of rna
ES2557382T3 (es) 2010-07-06 2016-01-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa Liposomas con lípidos que tienen un valor de pKa ventajoso para el suministro de ARN
WO2012019168A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
LT4226941T (lt) 2010-08-31 2025-01-10 Glaxosmithkline Biologicals Sa Pegilintos liposomos, skirtos imunogeną koduojančios rnr pristatymui
EP2625189B1 (en) 2010-10-01 2018-06-27 ModernaTX, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2012051211A2 (en) 2010-10-11 2012-04-19 Novartis Ag Antigen delivery platforms
US8853377B2 (en) 2010-11-30 2014-10-07 Shire Human Genetic Therapies, Inc. mRNA for use in treatment of human genetic diseases
TWI719112B (zh) * 2011-03-16 2021-02-21 賽諾菲公司 雙重ｖ區類抗體蛋白質之用途
AU2012236099A1 (en) 2011-03-31 2013-10-03 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
PL3892295T3 (pl) 2011-05-24 2023-07-24 BioNTech SE Zindywidualizowane szczepionki przeciwnowotworowe
RU2013154295A (ru) 2011-06-08 2015-07-20 Шир Хьюман Дженетик Терапис, Инк. КОМПОЗИЦИИ ЛИПИДНЫХ НАНОЧАСТИЦ И СПОСОБЫ ДЛЯ ДОСТАВКИ мРНК
EP2729165B1 (en) 2011-07-06 2017-11-08 GlaxoSmithKline Biologicals SA Immunogenic combination compositions and uses thereof
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
DE19216461T1 (de) 2011-10-03 2021-10-07 Modernatx, Inc. Modifizierte nukleoside, nukleotide und nukleinsäuren und verwendungen davon
AU2012347919B2 (en) 2011-12-05 2017-02-02 Factor Bioscience Inc. Methods and products for transfecting cells
US8497124B2 (en) 2011-12-05 2013-07-30 Factor Bioscience Inc. Methods and products for reprogramming cells to a less differentiated state
JP6407028B2 (ja) 2011-12-12 2018-10-17 ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア ＭＲＳＡのＰＢＰ２ａ及びその断片を含むタンパク質、それをコードする核酸、並びにＭＲＳＡ感染を予防する及び治療するための組成物及びそれらの使用
CA3018046A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
WO2013143555A1 (en) 2012-03-26 2013-10-03 Biontech Ag Rna formulation for immunotherapy
US9254311B2 (en) 2012-04-02 2016-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
WO2013151665A2 (en) 2012-04-02 2013-10-10 modeRNA Therapeutics Modified polynucleotides for the production of proteins associated with human disease
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
WO2013185067A1 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Nuclease resistant polynucleotides and uses thereof
EP2858679B2 (en) 2012-06-08 2024-06-05 Translate Bio, Inc. Pulmonary delivery of mrna to non-lung target cells
WO2014028429A2 (en) 2012-08-14 2014-02-20 Moderna Therapeutics, Inc. Enzymes and polymerases for the synthesis of rna
WO2014093924A1 (en) 2012-12-13 2014-06-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleic acid molecules and uses thereof
KR102121086B1 (ko) 2012-11-01 2020-06-09 팩터 바이오사이언스 인크. 세포에서 단백질을 발현시키는 방법들과 생성물들
PL2922554T3 (pl) 2012-11-26 2022-06-20 Modernatx, Inc. Na zmodyfikowany na końcach
EP3417874B1 (en) 2012-11-28 2024-09-11 BioNTech SE Individualized vaccines for cancer
AU2013374345A1 (en) 2013-01-17 2015-08-06 Moderna Therapeutics, Inc. Signal-sensor polynucleotides for the alteration of cellular phenotypes
US10066238B2 (en) * 2013-02-11 2018-09-04 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Methods for producing antibodies
EP2968391A1 (en) 2013-03-13 2016-01-20 Moderna Therapeutics, Inc. Long-lived polynucleotide molecules
JP6586075B2 (ja) 2013-03-14 2019-10-02 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド メッセンジャーｒｎａの精製方法
BR112015022855A2 (pt) 2013-03-14 2017-11-07 Shire Human Genetic Therapies composições e método para produção de um anticorpo in vitro
WO2014152211A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
RS57739B1 (sr) 2013-03-14 2018-12-31 Translate Bio Inc Kompozicije cftr irnk i postupci i upotrebe u vezi sa njima
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
US10590161B2 (en) 2013-03-15 2020-03-17 Modernatx, Inc. Ion exchange purification of mRNA
WO2014152031A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Ribonucleic acid purification
EP3388834B1 (en) 2013-03-15 2020-04-15 Translate Bio, Inc. Synergistic enhancement of the delivery of nucleic acids via blended formulations
WO2014152027A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Manufacturing methods for production of rna transcripts
EP2971165A4 (en) 2013-03-15 2016-11-23 Moderna Therapeutics Inc DISSOLUTION OF DNA FRAGMENTS IN MRNA MANUFACTURING METHODS
DE102013005361A1 (de) 2013-03-28 2014-10-02 Eberhard Karls Universität Tübingen Medizinische Fakultät Polyribonucleotid
WO2014180490A1 (en) 2013-05-10 2014-11-13 Biontech Ag Predicting immunogenicity of t cell epitopes
CA2917348A1 (en) 2013-07-11 2015-01-15 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions comprising synthetic polynucleotides encoding crispr related proteins and synthetic sgrnas and methods of use
WO2015034925A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
EP3052511A4 (en) 2013-10-02 2017-05-31 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
EP3052521A1 (en) 2013-10-03 2016-08-10 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
ES3032935T3 (en) 2013-10-22 2025-07-29 Translate Bio Inc Lipid formulations for delivery of messenger rna
AU2014340149B2 (en) 2013-10-22 2020-12-24 Shire Human Genetic Therapies, Inc. CNS delivery of mRNA and uses thereof
JP6506749B2 (ja) 2013-10-22 2019-04-24 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド フェニルケトン尿症のためのｍＲＮＡ療法
CN106413811A (zh) 2013-10-22 2017-02-15 夏尔人类遗传性治疗公司 精氨基琥珀酸合成酶缺乏症的mrna疗法
JP2017500865A (ja) 2013-12-19 2017-01-12 ノバルティス アーゲー レプチンｍＲＮＡの組成物および製剤
EP3099801B1 (en) 2014-01-31 2020-03-18 Factor Bioscience Inc. Synthetic rna for use in the treatment of dystrophic epidermolysis bullosa
PL4023249T3 (pl) 2014-04-23 2025-03-10 Modernatx, Inc. Szczepionki z kwasem nukleinowym
US9850269B2 (en) 2014-04-25 2017-12-26 Translate Bio, Inc. Methods for purification of messenger RNA
JP6557722B2 (ja) 2014-05-30 2019-08-07 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド 核酸の送達のための生分解性脂質
WO2015196128A2 (en) 2014-06-19 2015-12-23 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
KR102559979B1 (ko) 2014-06-24 2023-07-25 샤이어 휴먼 지네틱 테라피즈 인크. 핵산의 전달용 입체화학적으로 풍부한 조성물
BR112016030852A2 (pt) 2014-07-02 2018-01-16 Shire Human Genetic Therapies encapsulação de rna mensageiro
US10407683B2 (en) 2014-07-16 2019-09-10 Modernatx, Inc. Circular polynucleotides
WO2016045732A1 (en) 2014-09-25 2016-03-31 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Stable formulations of lipids and liposomes
GB201418965D0 (es) * 2014-10-24 2014-12-10 Ospedale San Raffaele And Fond Telethon
WO2016077125A1 (en) 2014-11-10 2016-05-19 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules containing reduced uracil content and uses thereof
JP6767976B2 (ja) 2014-12-05 2020-10-14 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド 関節疾患の治療のためのメッセンジャーｒｎａ治療法
WO2016128060A1 (en) 2015-02-12 2016-08-18 Biontech Ag Predicting t cell epitopes useful for vaccination
US10758558B2 (en) 2015-02-13 2020-09-01 Translate Bio Ma, Inc. Hybrid oligonucleotides and uses thereof
CA2976376A1 (en) 2015-02-13 2016-08-18 Factor Bioscience Inc. Nucleic acid products and methods of administration thereof
WO2016149508A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Mrna therapy for pompe disease
WO2016180430A1 (en) 2015-05-08 2016-11-17 Curevac Ag Method for producing rna
EP4660315A3 (en) 2015-05-29 2026-03-18 CureVac Manufacturing GmbH A method for producing and purifying rna, comprising at least one step of tangential flow filtration
MA42502A (fr) 2015-07-21 2018-05-30 Modernatx Inc Vaccins contre une maladie infectieuse
US11364292B2 (en) 2015-07-21 2022-06-21 Modernatx, Inc. CHIKV RNA vaccines
MA42543A (fr) 2015-07-30 2018-06-06 Modernatx Inc Arn épitope peptidiques concatémériques
US11564893B2 (en) 2015-08-17 2023-01-31 Modernatx, Inc. Methods for preparing particles and related compositions
EP3350333B2 (en) 2015-09-17 2025-08-06 ModernaTX, Inc. Polynucleotides containing a stabilizing tail region
WO2017049286A1 (en) 2015-09-17 2017-03-23 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides containing a morpholino linker
EP3359670B2 (en) 2015-10-05 2024-02-14 ModernaTX, Inc. Methods for therapeutic administration of messenger ribonucleic acid drugs
WO2017059902A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh 3' utr sequences for stabilization of rna
JP6997704B2 (ja) 2015-10-14 2022-02-04 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド 生産性向上のためのｒｎａ関連酵素の修飾
WO2017070601A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Nucleic acid vaccines for varicella zoster virus (vzv)
AU2016342045A1 (en) 2015-10-22 2018-06-07 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
AU2016341309A1 (en) 2015-10-22 2018-06-07 Modernatx, Inc. Cancer vaccines
AU2016342376A1 (en) 2015-10-22 2018-06-07 Modernatx, Inc. Sexually transmitted disease vaccines
EP4011451A1 (en) 2015-10-22 2022-06-15 ModernaTX, Inc. Metapneumovirus mrna vaccines
WO2017070624A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Tropical disease vaccines
EP3368089B1 (en) 2015-10-26 2025-11-05 Translate Bio Ma, Inc. Nanoparticle formulations for delivery of nucleic acid complexes
ES2763822T3 (es) 2015-12-09 2020-06-01 Novartis Ag Análisis exento de marcas de la eficacia de la adición de caperuzas al arn utilizando rnasa h, sondas y cromatografía líquida/espectrometría de masas
PL3386484T3 (pl) 2015-12-10 2022-07-25 Modernatx, Inc. Kompozycje i sposoby dostarczania środków terapeutycznych
US10465190B1 (en) 2015-12-23 2019-11-05 Modernatx, Inc. In vitro transcription methods and constructs
EP3405579A1 (en) 2016-01-22 2018-11-28 Modernatx, Inc. Messenger ribonucleic acids for the production of intracellular binding polypeptides and methods of use thereof
TW201738256A (zh) * 2016-04-04 2017-11-01 日產化學工業股份有限公司 蛋白質產生方法
EP3825400B1 (en) 2016-04-08 2024-12-25 Translate Bio, Inc. Multimeric coding nucleic acid and uses thereof
US20180126003A1 (en) * 2016-05-04 2018-05-10 Curevac Ag New targets for rna therapeutics
EP3241905A1 (en) * 2016-05-06 2017-11-08 Miltenyi Biotec GmbH Method for introducing nucleic acids into a cell
WO2017201342A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding jagged1 for the treatment of alagille syndrome
IL263079B2 (en) 2016-05-18 2024-05-01 Modernatx Inc Polynucleotides encoding relaxin
EP3469074B1 (en) 2016-06-13 2020-12-09 Translate Bio, Inc. Messenger rna therapy for the treatment of ornithine transcarbamylase deficiency
WO2017223176A1 (en) 2016-06-24 2017-12-28 Modernatx, Inc. Methods and apparatus for filtration
MX2019000205A (es) 2016-07-07 2019-09-23 Rubius Therapeutics Inc Composiciones y metodos relacionados con sistemas celulares terapeuticos que expresan arn exogeno.
CA3033867A1 (en) 2016-08-17 2018-02-22 Solstice Biologics, Ltd. Polynucleotide constructs
IL308824A (en) 2016-08-17 2024-01-01 Factor Bioscience Inc Nucleic acid products and methods of administration thereof
CA3036831A1 (en) 2016-09-14 2018-03-22 Modernatx, Inc. High purity rna compositions and methods for preparation thereof
US11390899B2 (en) * 2016-09-26 2022-07-19 SOLA Biosciences, LLC Cell-associated secretion-enhancing fusion proteins
EP3528821A4 (en) 2016-10-21 2020-07-01 ModernaTX, Inc. HUMAN CYTOMEGALOVIRUS VACCINE
CN110402145A (zh) 2016-10-26 2019-11-01 莫得纳特斯公司 用于增强免疫应答的信使核糖核酸及其使用方法
MA46766A (fr) 2016-11-11 2019-09-18 Modernatx Inc Vaccin antigrippal
WO2018107088A2 (en) 2016-12-08 2018-06-14 Modernatx, Inc. Respiratory virus nucleic acid vaccines
US11384352B2 (en) 2016-12-13 2022-07-12 Modernatx, Inc. RNA affinity purification
US11993645B2 (en) 2017-01-11 2024-05-28 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Compositions comprising R-Spondin (RSPO) surrogate molecules
WO2018140821A1 (en) 2017-01-26 2018-08-02 Surrozen, Inc. Tissue-specific wnt signal enhancing molecules and uses thereof
US10093706B2 (en) 2017-01-30 2018-10-09 Indiana University Research And Technology Corporation Dominant positive hnRNP-E1 polypeptide compositions and methods
BR112019015797A2 (pt) 2017-02-01 2020-03-17 Modernatx, Inc. Composições de mrna terapêuticas imunomoduladoras que codificam peptídeos de mutação de oncogene de ativação
MA47515A (fr) 2017-02-16 2019-12-25 Modernatx Inc Compositions immunogènes très puissantes
EA201991747A1 (ru) 2017-02-27 2020-06-04 Транслейт Био, Инк. НОВАЯ КОДОН-ОПТИМИЗИРОВАННАЯ мРНК CFTR
TW202428301A (zh) 2017-02-28 2024-07-16 法商賽諾菲公司 治療性rna
EP3595713A4 (en) 2017-03-15 2021-01-13 ModernaTX, Inc. RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS Vaccine
WO2018170245A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Broad spectrum influenza virus vaccine
WO2018170256A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Herpes simplex virus vaccine
WO2018170270A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Varicella zoster virus (vzv) vaccine
EP3595676A4 (en) 2017-03-17 2021-05-05 Modernatx, Inc. RNA VACCINES AGAINST ZOONOSES
US11905525B2 (en) 2017-04-05 2024-02-20 Modernatx, Inc. Reduction of elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins
CN106929513A (zh) * 2017-04-07 2017-07-07 东南大学 mRNA编码的纳米抗体及其应用
MX2019013752A (es) 2017-05-16 2020-07-20 Translate Bio Inc Tratamiento de la fibrosis quística mediante el suministro de arnm que codifica cftr optimizado en codones.
US11485972B2 (en) 2017-05-18 2022-11-01 Modernatx, Inc. Modified messenger RNA comprising functional RNA elements
WO2018217897A1 (en) * 2017-05-23 2018-11-29 David Weiner Compositions and method for inducing an immune response
WO2018224166A1 (en) 2017-06-09 2018-12-13 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Methods for predicting the usefulness of disease specific amino acid modifications for immunotherapy
MA49421A (fr) 2017-06-15 2020-04-22 Modernatx Inc Formulations d'arn
US11597744B2 (en) 2017-06-30 2023-03-07 Sirius Therapeutics, Inc. Chiral phosphoramidite auxiliaries and methods of their use
JP2020530280A (ja) * 2017-07-03 2020-10-22 トルク セラピューティクス， インコーポレイテッド 免疫刺激性融合分子およびその使用
EP3668979A4 (en) 2017-08-18 2021-06-02 Modernatx, Inc. METHOD OF HPLC ANALYSIS
WO2019036682A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Modernatx, Inc. RNA VARIANTS POLYMERASE
MA49914A (fr) 2017-08-18 2021-04-21 Modernatx Inc Procédés analytiques par hplc
EP3675817A1 (en) 2017-08-31 2020-07-08 Modernatx, Inc. Methods of making lipid nanoparticles
WO2019055807A1 (en) 2017-09-14 2019-03-21 Modernatx, Inc. RNA VACCINES AGAINST ZIKA VIRUS
EP3704245A1 (en) 2017-11-01 2020-09-09 Novartis AG Synthetic rnas and methods of use
US11167043B2 (en) 2017-12-20 2021-11-09 Translate Bio, Inc. Composition and methods for treatment of ornithine transcarbamylase deficiency
MA51523A (fr) 2018-01-05 2020-11-11 Modernatx Inc Polynucléotides codant pour des anticorps anti-virus du chikungunya
EP3746090A4 (en) 2018-01-29 2021-11-17 ModernaTX, Inc. RSV RNA Vaccines
US20190314291A1 (en) 2018-01-30 2019-10-17 Modernatx, Inc. Compositions and methods for delivery of agents to immune cells
EP3773745A1 (en) 2018-04-11 2021-02-17 ModernaTX, Inc. Messenger rna comprising functional rna elements
JP7366057B2 (ja) 2018-04-19 2023-10-20 チェックメイト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 合成ｒｉｇ－ｉ様受容体アゴニスト
CA3104868A1 (en) 2018-07-09 2020-01-16 Surrozen, Inc. Tissue-specific wnt signal enhancing molecules and uses thereof
KR102950141B1 (ko) 2018-08-24 2026-04-07 트랜슬레이트 바이오 인코포레이티드 전령 rna의 정제 방법
JP7450945B2 (ja) 2018-08-30 2024-03-18 テナヤ セラピューティクス， インコーポレイテッド ミオカルディンおよびａｓｃｌ１を用いた心細胞リプログラミング
JP7556848B2 (ja) 2018-09-14 2024-09-26 モデルナティエックス インコーポレイテッド ｍＲＮＡ治療薬を使用したがんを治療するための方法及び組成物
CA3113025A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. Peg lipids and uses thereof
WO2020061295A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. High-purity peg lipids and uses thereof
WO2020061457A1 (en) 2018-09-20 2020-03-26 Modernatx, Inc. Preparation of lipid nanoparticles and methods of administration thereof
US12331320B2 (en) 2018-10-10 2025-06-17 The Research Foundation For The State University Of New York Genome edited cancer cell vaccines
WO2020097409A2 (en) 2018-11-08 2020-05-14 Modernatx, Inc. Use of mrna encoding ox40l to treat cancer in human patients
WO2020106946A1 (en) 2018-11-21 2020-05-28 Translate Bio, Inc. TREATMENT OF CYSTIC FIBROSIS BY DELIVERY OF NEBULIZED mRNA ENCODING CFTR
US11351242B1 (en) 2019-02-12 2022-06-07 Modernatx, Inc. HMPV/hPIV3 mRNA vaccine composition
AU2020224103A1 (en) 2019-02-20 2021-09-16 Modernatx, Inc. Rna polymerase variants for co-transcriptional capping
US11851694B1 (en) 2019-02-20 2023-12-26 Modernatx, Inc. High fidelity in vitro transcription
CN113874502A (zh) 2019-03-11 2021-12-31 摩登纳特斯有限公司 补料分批体外转录方法
US12070495B2 (en) 2019-03-15 2024-08-27 Modernatx, Inc. HIV RNA vaccines
MA55887A (fr) 2019-05-07 2022-03-16 Modernatx Inc Microarn de cellules immunitaires exprimés de manière différentielle pour la régulation de l'expression de protéines
MA55896A (fr) 2019-05-07 2022-03-16 Modernatx Inc Polynucléotides servant à perturber l'activité de cellule immunitaire et procédés pour les utiliser
EP3987027A1 (en) 2019-06-24 2022-04-27 ModernaTX, Inc. Endonuclease-resistant messenger rna and uses thereof
US20220387628A1 (en) 2019-06-24 2022-12-08 Modernatx, Inc. Messenger rna comprising functional rna elements and uses thereof
CA3145425A1 (en) 2019-07-03 2021-01-07 Factor Bioscience Inc. Cationic lipids and uses thereof
EP3997226A1 (en) 2019-07-11 2022-05-18 Tenaya Therapeutics, Inc. Cardiac cell reprogramming with micrornas and other factors
US10501404B1 (en) 2019-07-30 2019-12-10 Factor Bioscience Inc. Cationic lipids and transfection methods
WO2021050986A1 (en) 2019-09-11 2021-03-18 Modernatx, Inc. Lnp-formulated mrna therapeutics and use thereof for treating human subjects
EP4031662A1 (en) 2019-09-20 2022-07-27 Translate Bio, Inc. Mrna encoding engineered cftr
JP7707161B2 (ja) 2019-10-23 2025-07-14 チェックメイト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 合成ｒｉｇ－ｉ様受容体アゴニスト
US12194089B2 (en) 2020-02-04 2025-01-14 CureVac SE Coronavirus vaccine
US11241493B2 (en) 2020-02-04 2022-02-08 Curevac Ag Coronavirus vaccine
US20230103731A1 (en) 2020-03-02 2023-04-06 Tenaya Therapeutics, Inc. Gene vector control by cardiomyocyte-expressed micrornas
BR112022017713A2 (pt) * 2020-03-04 2022-11-16 Flagship Pioneering Innovations Vi Llc Métodos e composições para modular um genoma
US12194157B2 (en) 2020-04-09 2025-01-14 Finncure Oy Carrier for targeted delivery to a host
FI20215508A1 (en) 2020-04-09 2021-10-10 Niemelae Erik Johan Mimetic nanoparticles to prevent the spread of new coronaviruses and reduce the rate of infection
IL297419B2 (en) 2020-04-22 2025-02-01 BioNTech SE Coronavirus vaccine
EP4157319A1 (en) 2020-05-28 2023-04-05 Modernatx, Inc. Use of mrnas encoding ox40l, il-23 and il-36gamma for treating cancer
CA3187138A1 (en) * 2020-06-26 2021-12-30 Carisma Therapeutics Inc. Mrna transfection of immune cells
MA71659A (fr) 2020-08-06 2025-05-30 Modernatx, Inc. Compositions pour l'administration de molécules de charge utile à l'épithélium des voies respiratoires
US11406703B2 (en) 2020-08-25 2022-08-09 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
US12419948B2 (en) 2020-08-31 2025-09-23 The Broad Institute, Inc. Immunogenic compositions and use thereof
EP4228658A4 (en) 2020-10-14 2025-02-19 George Mason Research Foundation, Inc. IONIZABLE LIPIDS AND METHODS FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF
JP2023549854A (ja) 2020-11-16 2023-11-29 スロゼン オペレーティング， インコーポレイテッド 肝臓特異的Ｗｎｔシグナル増強分子およびその使用
WO2022115645A1 (en) 2020-11-25 2022-06-02 Akagera Medicines, Inc. Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids, and related methods of use
AU2021395736A1 (en) 2020-12-09 2023-07-27 BioNTech SE Rna manufacturing
US11918643B2 (en) 2020-12-22 2024-03-05 CureVac SE RNA vaccine against SARS-CoV-2 variants
EP4274607A1 (en) 2021-01-11 2023-11-15 ModernaTX, Inc. Seasonal rna influenza virus vaccines
WO2022155404A1 (en) * 2021-01-14 2022-07-21 Translate Bio, Inc. Methods and compositions for delivering mrna coded antibodies
MX2023007788A (es) 2021-01-24 2023-11-17 Michael David Forrest Inhibidores de la atp sintasa, usos cosmeticos y terapeuticos.
US12343375B2 (en) 2021-02-09 2025-07-01 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Spray dried formulation of a cholera toxin B subunit variant
US11524023B2 (en) 2021-02-19 2022-12-13 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same
CA3213107A1 (en) 2021-03-23 2022-09-29 Mirko HENNIG Polynucleotide compositions, related formulations, and methods of use thereof
WO2022212191A1 (en) * 2021-04-01 2022-10-06 Modernatx, Inc. Mucosal expression of antibody structures and isotypes by mrna
US20220363937A1 (en) 2021-05-14 2022-11-17 Armstrong World Industries, Inc. Stabilization of antimicrobial coatings
WO2023009422A1 (en) 2021-07-26 2023-02-02 Modernatx, Inc. Processes for preparing lipid nanoparticle compositions for the delivery of payload molecules to airway epithelium
WO2023009421A1 (en) 2021-07-26 2023-02-02 Modernatx, Inc. Processes for preparing lipid nanoparticle compositions
CN113736768B (zh) * 2021-08-18 2023-06-23 新发药业有限公司 假尿苷合成酶突变体、突变基因及其在制备维生素b2中的应用
WO2023025404A1 (en) 2021-08-24 2023-03-02 BioNTech SE In vitro transcription technologies
WO2023064469A1 (en) 2021-10-13 2023-04-20 Modernatx, Inc. Compositions of mrna-encoded il15 fusion proteins and methods of use thereof
EP4419716A1 (en) 2021-10-21 2024-08-28 CureVac Netherlands B.V. Cancer neoantigens
US20250295755A1 (en) 2021-10-22 2025-09-25 Sail Biomedicines, Inc. Mrna vaccine composition
CN118829423A (zh) 2021-11-12 2024-10-22 摩登纳特斯有限公司 用于将有效载荷分子递送至气道上皮的组合物
CA3238764A1 (en) 2021-11-23 2023-06-01 Siddharth Patel A bacteria-derived lipid composition and use thereof
US12186387B2 (en) 2021-11-29 2025-01-07 BioNTech SE Coronavirus vaccine
EP4452239A1 (en) 2021-12-20 2024-10-30 Sail Biomedicines, Inc. Compositions comprising mrna and lipid reconstructed plant messenger packs
US12529047B1 (en) 2021-12-21 2026-01-20 Modernatx, Inc. mRNA quantification methods
EP4475882A1 (en) 2022-02-09 2024-12-18 ModernaTX, Inc. Mucosal administration methods and formulations
WO2023196898A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Beta globin mimetic peptides and their use
WO2023196988A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Modernatx, Inc. Methods of use of mrnas encoding il-12
JP2025512066A (ja) 2022-04-15 2025-04-16 スマートセラ ソリューションズ エービー エキソソームを介したｍＲＮＡ剤の送達のための組成物及び方法
CA3256897A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Akagera Medicines, Inc. Lipid nanoparticles for the administration of nucleic acids and their methods of use
WO2024002985A1 (en) 2022-06-26 2024-01-04 BioNTech SE Coronavirus vaccine
CN119855910A (zh) 2022-07-06 2025-04-18 美国微哲默理有限责任公司 用于治疗胰腺癌的组合物和方法
CN120129688A (zh) * 2022-08-26 2025-06-10 垂林克生物技术有限公司 用于制备高度纯化的5′-加帽寡核苷酸的高效方法
WO2024083345A1 (en) 2022-10-21 2024-04-25 BioNTech SE Methods and uses associated with liquid compositions
EP4608442A1 (en) 2022-10-28 2025-09-03 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Nucleic acid based vaccine
WO2024102434A1 (en) 2022-11-10 2024-05-16 Senda Biosciences, Inc. Rna compositions comprising lipid nanoparticles or lipid reconstructed natural messenger packs
WO2024107827A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 The Broad Institute, Inc. Therapeutic exploitation of sting channel activity
CN120380160A (zh) * 2022-12-23 2025-07-25 赛诺菲巴斯德有限公司 信使rna的优化加尾
WO2024158824A1 (en) 2023-01-23 2024-08-02 Yale University Antibody oligonucleotide conjugates
CN121057577A (zh) 2023-01-27 2025-12-02 赛欧生物医药股份有限公司 经修饰的脂质组合物及其用途
JP2026505178A (ja) 2023-01-31 2026-02-12 セキラス インコーポレイテッド キャップ形成アッセイ
WO2024178305A1 (en) 2023-02-24 2024-08-29 Modernatx, Inc. Compositions of mrna-encoded il-15 fusion proteins and methods of use thereof for treating cancer
JP2026509481A (ja) 2023-03-15 2026-03-19 京都府公立大学法人 ペプチド発現コンストラクトおよびその使用
EP4683665A1 (en) 2023-03-23 2026-01-28 ModernaTX, Inc. Peg targeting compounds for delivery of therapeutics
EP4683666A1 (en) 2023-03-23 2026-01-28 ModernaTX, Inc. Peg targeting compounds for delivery of therapeutics
WO2024197310A1 (en) 2023-03-23 2024-09-26 Modernatx, Inc. Peg targeting compounds for delivery of therapeutics
WO2024220625A1 (en) 2023-04-19 2024-10-24 Sail Biomedicines, Inc. Delivery of polynucleotides from lipid nanoparticles comprising rna and ionizable lipids
WO2024220712A2 (en) 2023-04-19 2024-10-24 Sail Biomedicines, Inc. Vaccine compositions
WO2024220752A2 (en) 2023-04-19 2024-10-24 Sail Biomedicines, Inc. Rna therapeutic compositions
WO2024238723A1 (en) 2023-05-16 2024-11-21 Omega Therapeutics, Inc. Methods and compositions for modulating pcsk9 expression
EP4713027A1 (en) 2023-05-16 2026-03-25 Omega Therapeutics, Inc. Methods and compositions for modulating methylation of a target gene
WO2025019742A1 (en) 2023-07-19 2025-01-23 Omega Therapeutics, Inc. Methods and compositions for modulating ctnnb1 expression
WO2025059215A1 (en) 2023-09-12 2025-03-20 Aadigen, Llc Methods and compositions for treating or preventing cancer
WO2025072383A1 (en) 2023-09-25 2025-04-03 The Broad Institute, Inc. Viral open reading frames, uses thereof, and methods of detecting the same
WO2025068553A1 (en) 2023-09-28 2025-04-03 Universität Basel Catalytic moieties for treating cancer
WO2025076013A1 (en) 2023-10-01 2025-04-10 Vaccine Company, Inc. Engineered middle east respiratory syndrome proteins and related methods
WO2025097055A2 (en) 2023-11-02 2025-05-08 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods of use of t cells in immunotherapy
WO2025129158A1 (en) 2023-12-15 2025-06-19 The Broad Institute, Inc. Engineered arc delivery vesicles and uses thereof
WO2025144938A1 (en) 2023-12-26 2025-07-03 Emmune, Inc. Systems for nucleic acid transfer
WO2025194138A1 (en) 2024-03-14 2025-09-18 Tessera Therapeutics, Inc. St1cas9 compositions and methods for modulating a genome
WO2025224710A1 (en) 2024-04-26 2025-10-30 Vaccine Company, Inc. Engineered orthopoxvirus proteins and related methods
WO2025235563A1 (en) 2024-05-07 2025-11-13 Omega Therapeutics, Inc. Epigenetic modulation for upregulation of genes
WO2025250843A1 (en) 2024-05-29 2025-12-04 Vaccine Company, Inc. Self-assembling escrt recruiting domains (erd) and methods of use thereof
WO2026036000A1 (en) 2024-08-08 2026-02-12 Invaio Sciences, Inc. Nature-derived lipid particles for use in agriculture

Family Cites Families (1163)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2008526A (en) 1932-11-03 1935-07-16 Wappler Frederick Charles Method and means for treating living tissue
US3467096A (en) 1966-04-12 1969-09-16 Ferrell S Horn Multiple hypodermic syringe arrangement
BE757653A (fr) 1969-10-21 1971-04-16 Ugine Kuhlmann Nouveaux medicaments derives d'acides nucleiques et procedes pour leur preparation
BE786542A (fr) 1971-07-22 1973-01-22 Dow Corning Dispositif d'aspiration permettant d'obtenir des echantillons de cellules
US3906092A (en) 1971-11-26 1975-09-16 Merck & Co Inc Stimulation of antibody response
US4270537A (en) 1979-11-19 1981-06-02 Romaine Richard A Automatic hypodermic syringe
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5132418A (en) 1980-02-29 1992-07-21 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4500707A (en) 1980-02-29 1985-02-19 University Patents, Inc. Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides
US4411657A (en) 1980-05-19 1983-10-25 Anibal Galindo Hypodermic needle
US4973679A (en) 1981-03-27 1990-11-27 University Patents, Inc. Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
US4668777A (en) 1981-03-27 1987-05-26 University Patents, Inc. Phosphoramidite nucleoside compounds
US4401796A (en) 1981-04-30 1983-08-30 City Of Hope Research Institute Solid-phase synthesis of polynucleotides
US4373071A (en) 1981-04-30 1983-02-08 City Of Hope Research Institute Solid-phase synthesis of polynucleotides
US4474569A (en) 1982-06-28 1984-10-02 Denver Surgical Developments, Inc. Antenatal shunt
US4588585A (en) 1982-10-19 1986-05-13 Cetus Corporation Human recombinant cysteine depleted interferon-β muteins
US4737462A (en) 1982-10-19 1988-04-12 Cetus Corporation Structural genes, plasmids and transformed cells for producing cysteine depleted muteins of interferon-β
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4579849A (en) 1984-04-06 1986-04-01 Merck & Co., Inc. N-alkylguanine acyclonucleosides as antiviral agents
US4957735A (en) 1984-06-12 1990-09-18 The University Of Tennessee Research Corporation Target-sensitive immunoliposomes- preparation and characterization
US4959314A (en) 1984-11-09 1990-09-25 Cetus Corporation Cysteine-depleted muteins of biologically active proteins
US5036006A (en) 1984-11-13 1991-07-30 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor
US5116943A (en) 1985-01-18 1992-05-26 Cetus Corporation Oxidation-resistant muteins of Il-2 and other protein
CA1288073C (en) 1985-03-07 1991-08-27 Paul G. Ahlquist Rna transformation vector
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
EP0204401A1 (en) 1985-04-09 1986-12-10 Biogen, Inc. Method of improving the yield of polypeptides produced in a host cell by stabilizing mRNA
US5017691A (en) 1986-07-03 1991-05-21 Schering Corporation Mammalian interleukin-4
US5153319A (en) 1986-03-31 1992-10-06 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4879111A (en) 1986-04-17 1989-11-07 Cetus Corporation Treatment of infections with lymphokines
CA1283827C (en) 1986-12-18 1991-05-07 Giorgio Cirelli Appliance for injection of liquid formulations
GB8704027D0 (en) 1987-02-20 1987-03-25 Owen Mumford Ltd Syringe needle combination
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4940460A (en) 1987-06-19 1990-07-10 Bioject, Inc. Patient-fillable and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
US6090591A (en) 1987-07-31 2000-07-18 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Selective amplification of target polynucleotide sequences
WO1989001050A1 (en) 1987-07-31 1989-02-09 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Selective amplification of target polynucleotide sequences
ATE92538T1 (de) 1988-01-21 1993-08-15 Genentech Inc Verstaerkung und nachweis von nukleinsaeuresequenzen.
CA1340807C (en) 1988-02-24 1999-11-02 Lawrence T. Malek Nucleic acid amplification process
JP2650159B2 (ja) 1988-02-24 1997-09-03 アクゾ・ノベル・エヌ・ベー 核酸増幅方法
EP0403559A1 (en) 1988-03-04 1990-12-27 Cancer Research Campaign Technology Limited Improvements relating to antigens
US5339163A (en) 1988-03-16 1994-08-16 Canon Kabushiki Kaisha Automatic exposure control device using plural image plane detection areas
WO1989009622A1 (en) 1988-04-15 1989-10-19 Protein Design Labs, Inc. Il-2 receptor-specific chimeric antibodies
US5168038A (en) 1988-06-17 1992-12-01 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University In situ transcription in cells and tissues
US5021335A (en) 1988-06-17 1991-06-04 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University In situ transcription in cells and tissues
US5130238A (en) 1988-06-24 1992-07-14 Cangene Corporation Enhanced nucleic acid amplification process
US5759802A (en) 1988-10-26 1998-06-02 Tonen Corporation Production of human serum alubumin A
FR2638359A1 (fr) 1988-11-03 1990-05-04 Tino Dalto Guide de seringue avec reglage de la profondeur de penetration de l'aiguille dans la peau
US5047524A (en) 1988-12-21 1991-09-10 Applied Biosystems, Inc. Automated system for polynucleotide synthesis and purification
US5262530A (en) 1988-12-21 1993-11-16 Applied Biosystems, Inc. Automated system for polynucleotide synthesis and purification
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US6673776B1 (en) 1989-03-21 2004-01-06 Vical Incorporated Expression of exogenous polynucleotide sequences in a vertebrate, mammal, fish, bird or human
US5693622A (en) 1989-03-21 1997-12-02 Vical Incorporated Expression of exogenous polynucleotide sequences cardiac muscle of a mammal
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
CA2489769A1 (en) 1989-03-21 1990-10-04 Philip L. Felgner Expression of exogenous polynucleotide sequences in a vertebrate
US6867195B1 (en) 1989-03-21 2005-03-15 Vical Incorporated Lipid-mediated polynucleotide administration to reduce likelihood of subject's becoming infected
US6214804B1 (en) 1989-03-21 2001-04-10 Vical Incorporated Induction of a protective immune response in a mammal by injecting a DNA sequence
US5012818A (en) 1989-05-04 1991-05-07 Joishy Suresh K Two in one bone marrow surgical needle
IE66597B1 (en) 1989-05-10 1996-01-24 Akzo Nv Method for the synthesis of ribonucleic acid (RNA)
US5240855A (en) 1989-05-12 1993-08-31 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Particle gun
US5332671A (en) 1989-05-12 1994-07-26 Genetech, Inc. Production of vascular endothelial cell growth factor and DNA encoding same
CA2020958C (en) 1989-07-11 2005-01-11 Daniel L. Kacian Nucleic acid sequence amplification methods
US5545522A (en) 1989-09-22 1996-08-13 Van Gelder; Russell N. Process for amplifying a target polynucleotide sequence using a single primer-promoter complex
FR2740360B1 (fr) 1995-10-25 1997-12-26 Rhone Poulenc Chimie Granules redispersables dans l'eau comprenant une matiere active sous forme liquide
NO904633L (no) 1989-11-09 1991-05-10 Molecular Diagnostics Inc Amplifikasjon av nukleinsyrer ved transkriberbar haarnaalsprobe.
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
US5215899A (en) 1989-11-09 1993-06-01 Miles Inc. Nucleic acid amplification employing ligatable hairpin probe and transcription
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5633076A (en) 1989-12-01 1997-05-27 Pharming Bv Method of producing a transgenic bovine or transgenic bovine embryo
US5697901A (en) 1989-12-14 1997-12-16 Elof Eriksson Gene delivery by microneedle injection
US5194370A (en) 1990-05-16 1993-03-16 Life Technologies, Inc. Promoter ligation activated transcription amplification of nucleic acid sequences
AU649066B2 (en) 1990-07-25 1994-05-12 Syngene, Inc. Circular extension for generating multiple nucleic acid complements
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5190521A (en) 1990-08-22 1993-03-02 Tecnol Medical Products, Inc. Apparatus and method for raising a skin wheal and anesthetizing skin
US6140496A (en) 1990-10-09 2000-10-31 Benner; Steven Albert Precursors for deoxyribonucleotides containing non-standard nucleosides
US5527288A (en) 1990-12-13 1996-06-18 Elan Medical Technologies Limited Intradermal drug delivery device and method for intradermal delivery of drugs
US6100024A (en) 1991-02-08 2000-08-08 Promega Corporation Methods and compositions for nucleic acid detection by target extension and probe amplification
EP1857553A1 (en) 1991-03-18 2007-11-21 New York University Monoclonal and chimeric antibodies specific for human tumor necrosis factor
US5426180A (en) 1991-03-27 1995-06-20 Research Corporation Technologies, Inc. Methods of making single-stranded circular oligonucleotides
US5795965A (en) 1991-04-25 1998-08-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Reshaped human to human interleukin-6 receptor
US5169766A (en) 1991-06-14 1992-12-08 Life Technologies, Inc. Amplification of nucleic acid molecules
US5199441A (en) 1991-08-20 1993-04-06 Hogle Hugh H Fine needle aspiration biopsy apparatus and method
GB9118204D0 (en) 1991-08-23 1991-10-09 Weston Terence E Needle-less injector
SE9102652D0 (sv) 1991-09-13 1991-09-13 Kabi Pharmacia Ab Injection needle arrangement
US5298422A (en) 1991-11-06 1994-03-29 Baylor College Of Medicine Myogenic vector systems
US5824307A (en) 1991-12-23 1998-10-20 Medimmune, Inc. Human-murine chimeric antibodies against respiratory syncytial virus
JPH07503372A (ja) 1992-01-23 1995-04-13 バイカル・インコーポレイテッド 生体外遺伝子導入
US5328483A (en) 1992-02-27 1994-07-12 Jacoby Richard M Intradermal injection device with medication and needle guard
JP3368603B2 (ja) 1992-02-28 2003-01-20 オリンパス光学工業株式会社 遺伝子治療用処置具
US6174666B1 (en) 1992-03-27 2001-01-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of eliminating inhibitory/instability regions from mRNA
US6132419A (en) 1992-05-22 2000-10-17 Genetronics, Inc. Electroporetic gene and drug therapy
US5514545A (en) 1992-06-11 1996-05-07 Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for characterizing single cells based on RNA amplification for diagnostics and therapeutics
US6670178B1 (en) 1992-07-10 2003-12-30 Transkaryotic Therapies, Inc. In Vivo production and delivery of insulinotropin for gene therapy
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
ES2104160T3 (es) 1992-07-31 1997-10-01 Behringwerke Ag Metodo para introducir secuencias definidas en el extremo 3' de polinucleotidos.
US5273525A (en) 1992-08-13 1993-12-28 Btx Inc. Injection and electroporation apparatus for drug and gene delivery
US5240885A (en) 1992-09-21 1993-08-31 Corning Incorporated Rare earth-doped, stabilized cadmium halide glasses
US5569189A (en) 1992-09-28 1996-10-29 Equidyne Systems, Inc. hypodermic jet injector
US5334144A (en) 1992-10-30 1994-08-02 Becton, Dickinson And Company Single use disposable needleless injector
AU5665694A (en) 1992-11-04 1994-05-24 Denver Biomaterials Inc. Apparatus for removal of pleural effusion fluid
DK0752248T3 (da) 1992-11-13 2000-11-13 Idec Pharma Corp Terapeutisk anvendelse af kimæriske og radioaktivt mærkede antistoffer mod humant B-lymfocytbegrænset differentieringsantig
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
DE69419721T2 (de) 1993-01-12 2000-04-27 Biogen, Inc. Rekombinante anti-vla4 antikörpermoleküle
FR2703253B1 (fr) 1993-03-30 1995-06-23 Centre Nat Rech Scient Applicateur d'impulsions electriques pour traitement de tissus biologiques.
US7135312B2 (en) 1993-04-15 2006-11-14 University Of Rochester Circular DNA vectors for synthesis of RNA and DNA
US5773244A (en) 1993-05-19 1998-06-30 Regents Of The University Of California Methods of making circular RNA
US5851829A (en) 1993-07-16 1998-12-22 Dana-Farber Cancer Institute Method of intracellular binding of target molecules
US5672491A (en) 1993-09-20 1997-09-30 The Leland Stanford Junior University Recombinant production of novel polyketides
US6432711B1 (en) 1993-11-03 2002-08-13 Diacrin, Inc. Embryonic stem cells capable of differentiating into desired cell lines
US6096503A (en) 1993-11-12 2000-08-01 The Scripps Research Institute Method for simultaneous identification of differentially expresses mRNAs and measurement of relative concentrations
US5840299A (en) 1994-01-25 1998-11-24 Athena Neurosciences, Inc. Humanized antibodies against leukocyte adhesion molecule VLA-4
US7435802B2 (en) 1994-01-25 2008-10-14 Elan Pharaceuticals, Inc. Humanized anti-VLA4 immunoglobulins
DK0668350T4 (da) 1994-02-16 2009-02-23 Us Gov Health & Human Serv Melanomassocieret antigen, epitoper deraf samt vacciner mod melanom
WO1995024176A1 (en) 1994-03-07 1995-09-14 Bioject, Inc. Ampule filling device
IL112820A0 (en) 1994-03-07 1995-05-26 Merck & Co Inc Coordinate in vivo gene expression
US5466220A (en) 1994-03-08 1995-11-14 Bioject, Inc. Drug vial mixing and transfer device
CZ274596A3 (en) 1994-03-18 1997-03-12 Lynx Therapeutics Oligonucleotide n3 - p5 phosphoramidates and process of their synthesis and hybridization
WO1995026204A1 (en) 1994-03-25 1995-10-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs
US5457041A (en) 1994-03-25 1995-10-10 Science Applications International Corporation Needle array and method of introducing biological substances into living cells using the needle array
US6074642A (en) 1994-05-02 2000-06-13 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Use of antibodies specific to human complement component C5 for the treatment of glomerulonephritis
DE69535543T2 (de) 1994-05-18 2008-04-30 Bayer Bioscience Gmbh Für enzyme, die die fähigkeit besitzen lineare alpha 1,4-glucane in pflanzen, pilzen und mikroorganismen zu synthesieren, kodierende dna sequenzen
US6355247B1 (en) 1994-06-02 2002-03-12 Chiron Corporation Nucleic acid immunization using a virus-based infection/transfection system
GB9412230D0 (en) 1994-06-17 1994-08-10 Celltech Ltd Interleukin-5 specific recombiant antibodies
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
DE69534530T2 (de) 1994-08-12 2006-07-06 Immunomedics, Inc. Für b-zell-lymphom und leukämiezellen spezifische immunkonjugate und humane antikörper
US5641665A (en) 1994-11-28 1997-06-24 Vical Incorporated Plasmids suitable for IL-2 expression
US5665545A (en) 1994-11-28 1997-09-09 Akzo Nobel N.V. Terminal repeat amplification method
US5588960A (en) 1994-12-01 1996-12-31 Vidamed, Inc. Transurethral needle delivery device with cystoscope and method for treatment of urinary incontinence
US5807718A (en) 1994-12-02 1998-09-15 The Scripps Research Institute Enzymatic DNA molecules
PT795018E (pt) 1995-01-06 2007-12-21 Plant Res Int Bv Sequências de adn codificando enzimas de síntese de polímeros de hidratos de carbono e método para a produção de plantas transgénicas
US5599302A (en) 1995-01-09 1997-02-04 Medi-Ject Corporation Medical injection system and method, gas spring thereof and launching device using gas spring
US5795587A (en) 1995-01-23 1998-08-18 University Of Pittsburgh Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production
US5824497A (en) 1995-02-10 1998-10-20 Mcmaster University High efficiency translation of mRNA molecules
DE69629326D1 (de) 1995-02-15 2003-09-11 Joseph Eldor Spinalnadel mit mehreren Löchern
DE69621507T2 (de) 1995-03-28 2003-01-09 Japan Science And Technology Corp., Kawaguchi Verfahren zur molekularen Indexierung von Genen unter Verwendung von Restriktionsenzymen
US5869230A (en) 1995-03-30 1999-02-09 Beth Israel Hospital Association Gene transfer into the kidney
US5986054A (en) 1995-04-28 1999-11-16 The Hospital For Sick Children, Hsc Research And Development Limited Partnership Genetic sequences and proteins related to alzheimer's disease
FR2733762B1 (fr) 1995-05-02 1997-08-01 Genset Sa Methode de couplage specifique de la coiffe de l'extremite 5' d'un fragment d'arnm et preparation d'arnm et d'adnc complet
US5700642A (en) 1995-05-22 1997-12-23 Sri International Oligonucleotide sizing using immobilized cleavable primers
US5730723A (en) 1995-10-10 1998-03-24 Visionary Medical Products Corporation, Inc. Gas pressured needle-less injection device and method
US6051429A (en) 1995-06-07 2000-04-18 Life Technologies, Inc. Peptide-enhanced cationic lipid transfections
US6111095A (en) 1995-06-07 2000-08-29 Merck & Co., Inc. Capped synthetic RNA, analogs, and aptamers
US5889136A (en) 1995-06-09 1999-03-30 The Regents Of The University Of Colorado Orthoester protecting groups in RNA synthesis
US5766903A (en) 1995-08-23 1998-06-16 University Technology Corporation Circular RNA and uses thereof
US6265389B1 (en) 1995-08-31 2001-07-24 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Microencapsulation and sustained release of oligonucleotides
AU7073096A (en) 1995-09-19 1997-04-09 University Of Massachusetts Inhibited biological degradation of oligodeoxynucleotides
US5830879A (en) 1995-10-02 1998-11-03 St. Elizabeth's Medical Center Of Boston, Inc. Treatment of vascular injury using vascular endothelial growth factor
US6265387B1 (en) 1995-10-11 2001-07-24 Mirus, Inc. Process of delivering naked DNA into a hepatocyte via bile duct
US6132988A (en) 1995-10-27 2000-10-17 Takeda Chemical Industries, Ltd. DNA encoding a neuronal cell-specific receptor protein
CU22584A1 (es) 1995-11-17 1999-11-03 Centro Inmunologia Molecular Composiciones farmacéuticas que contienen un anticuerpo monoclonal que reconoce el antígeno de diferenciación leucocitario humano cd6 y sus usos para el diagnóstico y tratamiento de la psoriasis
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
US5962271A (en) 1996-01-03 1999-10-05 Cloutech Laboratories, Inc. Methods and compositions for generating full-length cDNA having arbitrary nucleotide sequence at the 3'-end
US5893397A (en) 1996-01-12 1999-04-13 Bioject Inc. Medication vial/syringe liquid-transfer apparatus
US6395292B2 (en) 1996-02-02 2002-05-28 Alza Corporation Sustained delivery of an active agent using an implantable system
US6261584B1 (en) 1996-02-02 2001-07-17 Alza Corporation Sustained delivery of an active agent using an implantable system
AU1874397A (en) 1996-02-16 1997-09-02 Stichting Rega Vzw Hexitol containing oligonucleotides and their use in antisense strategies
US6534312B1 (en) 1996-02-22 2003-03-18 Merck & Co., Inc. Vaccines comprising synthetic genes
US6090391A (en) 1996-02-23 2000-07-18 Aviron Recombinant tryptophan mutants of influenza
SE9601245D0 (sv) 1996-03-29 1996-03-29 Pharmacia Ab Chimeric superantigens and their use
US6300487B1 (en) 1996-03-19 2001-10-09 Cell Therapuetics, Inc. Mammalian lysophosphatidic acid acyltransferase
TW517061B (en) 1996-03-29 2003-01-11 Pharmacia & Amp Upjohn Ab Modified/chimeric superantigens and their use
GB9607549D0 (en) 1996-04-11 1996-06-12 Weston Medical Ltd Spring-powered dispensing device
US5712127A (en) 1996-04-29 1998-01-27 Genescape Inc. Subtractive amplification
US5853719A (en) 1996-04-30 1998-12-29 Duke University Methods for treating cancers and pathogen infections using antigen-presenting cells loaded with RNA
WO1997046680A1 (en) 1996-06-05 1997-12-11 Chiron Corporation Dna encoding dp. 75 and a process for its use
US7329741B2 (en) 1996-06-05 2008-02-12 Chiron Corporation Polynucleotides that hybridize to DP-75 and their use
CA2258568A1 (en) 1996-06-21 1997-12-24 Merck & Co., Inc. Vaccines comprising synthetic genes
JP2002515786A (ja) 1996-06-28 2002-05-28 ソントラ メディカル，エル．ピー． 経皮輸送の超音波増強
US5677124A (en) 1996-07-03 1997-10-14 Ambion, Inc. Ribonuclease resistant viral RNA standards
US5939262A (en) 1996-07-03 1999-08-17 Ambion, Inc. Ribonuclease resistant RNA preparation and utilization
US7288266B2 (en) 1996-08-19 2007-10-30 United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Liposome complexes for increased systemic delivery
US5849546A (en) 1996-09-13 1998-12-15 Epicentre Technologies Corporation Methods for using mutant RNA polymerases with reduced discrimination between non-canonical and canonical nucleoside triphosphates
US6114148C1 (en) 1996-09-20 2012-05-01 Gen Hospital Corp High level expression of proteins
EP0932678B2 (en) 1996-09-24 2010-03-10 Genentech, Inc. A family of genes encoding apoptosis-related peptides, peptides encoded thereby and methods of use thereof
US6214966B1 (en) 1996-09-26 2001-04-10 Shearwater Corporation Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution
ATE292980T1 (de) 1996-10-11 2005-04-15 Univ California Immunostimulierende oligonucleotidekonjugate
EP0839912A1 (en) 1996-10-30 1998-05-06 Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof
GB9623051D0 (en) 1996-11-06 1997-01-08 Schacht Etienne H Delivery of DNA to target cells in biological systems
US5980887A (en) 1996-11-08 1999-11-09 St. Elizabeth's Medical Center Of Boston Methods for enhancing angiogenesis with endothelial progenitor cells
US6143559A (en) * 1996-11-18 2000-11-07 Arch Development Corporation Methods for the production of chicken monoclonal antibodies
US5759179A (en) 1996-12-31 1998-06-02 Johnson & Johnson Medical, Inc. Needle and valve assembly for use with a catheter
ATE332368T1 (de) 1997-01-21 2006-07-15 Gen Hospital Corp Selektion von proteinen mittels rns-protein fusionen
EP0855184A1 (en) 1997-01-23 1998-07-29 Grayson B. Dr. Lipford Pharmaceutical composition comprising a polynucleotide and an antigen especially for vaccination
EE9900343A (et) 1997-02-07 2000-02-15 Merck & Co., Inc. Sünteetiline polünukleotiid, immuunvastuste tekitamise meetod, immunogeenne kompositsioon, anti-HIV immuunvastuste indutseerimise meetod, meetod antigeeni tekitava raku indutseerimiseks ja farmatseutiline kompositsioon
US6696291B2 (en) 1997-02-07 2004-02-24 Merck & Co., Inc. Synthetic HIV gag genes
US6251665B1 (en) 1997-02-07 2001-06-26 Cem Cezayirli Directed maturation of stem cells and production of programmable antigen presenting dentritic cells therefrom
US6228640B1 (en) 1997-02-07 2001-05-08 Cem Cezayirli Programmable antigen presenting cell of CD34 lineage
US6406705B1 (en) 1997-03-10 2002-06-18 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
US6261281B1 (en) 1997-04-03 2001-07-17 Electrofect As Method for genetic immunization and introduction of molecules into skeletal muscle and immune cells
US5914269A (en) 1997-04-04 1999-06-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide inhibition of epidermal growth factor receptor expression
WO1998047913A2 (en) 1997-04-18 1998-10-29 The University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Inhibition of hiv-1 replication by a tat rna-binding domain peptide analog
US5958688A (en) 1997-04-28 1999-09-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Characterization of mRNA patterns in neurites and single cells for medical diagnosis and therapeutics
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US5989911A (en) 1997-05-09 1999-11-23 University Of Massachusetts Site-specific synthesis of pseudouridine in RNA
US5993412A (en) 1997-05-19 1999-11-30 Bioject, Inc. Injection apparatus
US6124091A (en) 1997-05-30 2000-09-26 Research Corporation Technologies, Inc. Cell growth-controlling oligonucleotides
US6589940B1 (en) 1997-06-06 2003-07-08 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
EP1003850B1 (en) 1997-06-06 2009-05-27 The Regents of the University of California Inhibitors of dna immunostimulatory sequence activity
CA2294988C (en) 1997-07-01 2015-11-24 Isis Pharmaceuticals Inc. Compositions and methods for the delivery of oligonucleotides via the alimentary canal
US5994511A (en) 1997-07-02 1999-11-30 Genentech, Inc. Anti-IgE antibodies and methods of improving polypeptides
BR9815493A (pt) 1997-07-21 2000-10-31 Pharmacia & Upjohn Ab Citólise dirigida de células-alvo, agentes e composições que causam citólise, e compostos que podem ser usados para produzir os agentes
JP2001511462A (ja) 1997-07-31 2001-08-14 セント エリザベス メディカル センター オブ ボストン インク． 移植片処置法
ES2389519T3 (es) 1997-09-18 2012-10-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Casetes de inmunización de ADN de vif atenuados para vacunas genéticas
US20030083272A1 (en) 1997-09-19 2003-05-01 Lahive & Cockfield, Llp Sense mrna therapy
US6004573A (en) 1997-10-03 1999-12-21 Macromed, Inc. Biodegradable low molecular weight triblock poly(lactide-co-glycolide) polyethylene glycol copolymers having reverse thermal gelation properties
EP1021548A1 (en) 1997-10-07 2000-07-26 University Of Maryland Biotechnology Institute Method for introducing and expressing rna in animal cells
EP1025244A2 (en) 1997-10-20 2000-08-09 Genzyme Transgenics Corporation NOVEL MODIFIED MSP-1 NUCLEIC ACID SEQUENCES AND METHODS FOR INCREASING mRNA LEVELS AND PROTEIN EXPRESSION IN CELL SYSTEMS
US6019747A (en) 1997-10-21 2000-02-01 I-Flow Corporation Spring-actuated infusion syringe
US6303378B1 (en) 1997-10-24 2001-10-16 Valentis, Inc. Methods for preparing polynucleotide transfection complexes
ATE550042T1 (de) 1997-11-20 2012-04-15 Vical Inc Behandlung von krebs mithilfe cytokin- exprimierender polynukleotide und zusammensetzungen dafür
US7655777B2 (en) 1997-11-24 2010-02-02 Monsanto Technology Llc Nucleic acid molecules associated with the tocopherol pathway
AU1819499A (en) 1997-12-12 1999-06-28 Samyang Corporation Positively-charged poly{alpha-(omega-aminoalkyl)glycolic acid} for the delivery of a bioactive agent via tissue and cellular uptake
US6517869B1 (en) 1997-12-12 2003-02-11 Expression Genetics, Inc. Positively charged poly(alpha-(omega-aminoalkyl)lycolic acid) for the delivery of a bioactive agent via tissue and cellular uptake
WO1999033982A2 (en) 1997-12-23 1999-07-08 Chiron Corporation Human genes and gene expression products i
US6383811B2 (en) 1997-12-30 2002-05-07 Mirus Corporation Polyampholytes for delivering polyions to a cell
DE69941447D1 (de) 1998-01-05 2009-11-05 Univ Washington Erhöhter transport unter benutzung membranzerstörender stoffe
IT1298087B1 (it) 1998-01-08 1999-12-20 Fiderm S R L Dispositivo per il controllo della profondita' di penetrazione di un ago, in particolare applicabile ad una siringa per iniezioni
EP1045714A1 (en) 1998-01-08 2000-10-25 Sontra Medical, L.P. Sonophoretic enhanced transdermal transport
US8287483B2 (en) 1998-01-08 2012-10-16 Echo Therapeutics, Inc. Method and apparatus for enhancement of transdermal transport
US6365346B1 (en) 1998-02-18 2002-04-02 Dade Behring Inc. Quantitative determination of nucleic acid amplification products
US5955310A (en) 1998-02-26 1999-09-21 Novo Nordisk Biotech, Inc. Methods for producing a polypeptide in a bacillus cell
US6432925B1 (en) 1998-04-16 2002-08-13 John Wayne Cancer Institute RNA cancer vaccine and methods for its use
US6429301B1 (en) 1998-04-17 2002-08-06 Whitehead Institute For Biomedical Research Use of a ribozyme to join nucleic acids and peptides
GB9808327D0 (en) 1998-04-20 1998-06-17 Chiron Spa Antidiotypic compounds
AU3534199A (en) 1998-04-23 1999-11-08 Takara Shuzo Co., Ltd. Method For Synthesizing DNA
US6395253B2 (en) 1998-04-23 2002-05-28 The Regents Of The University Of Michigan Microspheres containing condensed polyanionic bioactive agents and methods for their production
US20020064517A1 (en) 1998-04-30 2002-05-30 Stewart A. Cederholm-Williams Fibrin sealant as a transfection/transformation vehicle for gene therapy
US20090208418A1 (en) 2005-04-29 2009-08-20 Innexus Biotechnology Internaltional Ltd. Superantibody synthesis and use in detection, prevention and treatment of disease
DE69939740D1 (de) 1998-05-20 2008-11-27 Expression Genetics Inc Laktose oder galaktose-polyethylen glykol-gepfropfte poly-l-lysin als genträger
US6503231B1 (en) 1998-06-10 2003-01-07 Georgia Tech Research Corporation Microneedle device for transport of molecules across tissue
US7091192B1 (en) 1998-07-01 2006-08-15 California Institute Of Technology Linear cyclodextrin copolymers
EP1117720A4 (en) 1998-07-13 2001-11-14 Expression Genetics Inc POLYESTER POLY-L-LYSINE ANALOG USED AS A BIODEGRADABLE SOLUBLE GENE CONVEYOR
US6222030B1 (en) 1998-08-03 2001-04-24 Agilent Technologies, Inc. Solid phase synthesis of oligonucleotides using carbonate protecting groups and alpha-effect nucleophile deprotection
PT1974747E (pt) 1998-08-11 2012-09-05 Biogen Idec Inc Terapias de combinação para linfomas de células b compreendendo a administração de anticorpo anti-cd20
GB9817662D0 (en) 1998-08-13 1998-10-07 Crocker Peter J Substance delivery
US20090148906A1 (en) 1998-09-29 2009-06-11 Shire Human Genetic Therapies, Inc. A Delaware Corporation Optimized messenger rna
US6924365B1 (en) 1998-09-29 2005-08-02 Transkaryotic Therapies, Inc. Optimized messenger RNA
EP1133513A4 (en) 1998-11-03 2002-07-03 Univ Yale MULTI-DOMAIN POLYNUCLEOTIDE MOLECULAR DETECTORS
ES2543819T3 (es) 1998-11-09 2015-08-24 Biogen Inc. Tratamiento de neoplasias hematológicas asociadas con células tumorales circulantes utilizando anticuerpo quimérico dirigido contra CD20
HK1041811A1 (zh) 1998-11-09 2002-07-26 Idec药物公司 接受bmt或pbsc移植患者的抗cd20嵌合抗体治疗
WO2000027340A2 (en) 1998-11-12 2000-05-18 The Children's Medical Center Corporation USE OF t-RNA AND FRAGMENTS FOR INHIBITING ANGIOGENESIS AND COMPOSITIONS THEREOF
US6210931B1 (en) 1998-11-30 2001-04-03 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Ribozyme-mediated synthesis of circular RNA
US20040171980A1 (en) 1998-12-18 2004-09-02 Sontra Medical, Inc. Method and apparatus for enhancement of transdermal transport
JP2002533134A (ja) 1998-12-23 2002-10-08 ヒューマン ジノーム サイエンシーズ， インコーポレイテッド ペプチドグリカン認識タンパク質
WO2000050586A2 (en) 1999-02-22 2000-08-31 European Molecular Biology Laboratory In vitro translation system
US6255476B1 (en) 1999-02-22 2001-07-03 Pe Corporation (Ny) Methods and compositions for synthesis of labelled oligonucleotides and analogs on solid-supports
US7629311B2 (en) 1999-02-24 2009-12-08 Edward Lewis Tobinick Methods to facilitate transmission of large molecules across the blood-brain, blood-eye, and blood-nerve barriers
EP1156781B1 (en) 1999-02-26 2005-06-08 Chiron Corporation Microemulsions with adsorbed macromolecules and microparticles
WO2000029561A2 (en) 1999-03-29 2000-05-25 Statens Serum Institut Nucleotide construct with optimised codons for an hiv genetic vaccine based on a primary, early hiv isolate and synthetic envelope
US7217762B1 (en) 1999-04-09 2007-05-15 Invitrogen Corporation Process for the preparation of monodisperse polymer particles
US8663692B1 (en) 1999-05-07 2014-03-04 Pharmasol Gmbh Lipid particles on the basis of mixtures of liquid and solid lipids and method for producing same
WO2000067796A1 (en) 1999-05-07 2000-11-16 Genentech, Inc. Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to b cell surface markers
US6346382B1 (en) 1999-06-01 2002-02-12 Vanderbilt University Human carbamyl phosphate synthetase I polymorphism and diagnostic methods related thereto
US6743211B1 (en) 1999-11-23 2004-06-01 Georgia Tech Research Corporation Devices and methods for enhanced microneedle penetration of biological barriers
US6611707B1 (en) 1999-06-04 2003-08-26 Georgia Tech Research Corporation Microneedle drug delivery device
WO2000075356A1 (en) 1999-06-04 2000-12-14 Lin Shi Lung Rna polymerase chain reaction
US6303573B1 (en) 1999-06-07 2001-10-16 The Burnham Institute Heart homing peptides and methods of using same
EP1196558A1 (fr) 1999-06-08 2002-04-17 Aventis Pasteur Oligonucleotide immunostimulant
DE60042785D1 (de) 1999-06-09 2009-10-01 Immunomedics Inc Immuntherapie von autoimmunerkrankungen durch die verwendung von b-zell spezifischen antikörpern
US6949245B1 (en) 1999-06-25 2005-09-27 Genentech, Inc. Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies
AU782286B2 (en) 1999-06-30 2005-07-14 Advanced Cell Technology, Inc. Cytoplasmic transfer to de-differentiate recipient cells
US6514948B1 (en) 1999-07-02 2003-02-04 The Regents Of The University Of California Method for enhancing an immune response
BR0012325A (pt) 1999-07-09 2002-05-21 American Home Prod Métodos e composições para prevenção da formação de rna anormal durante a transcrição de uma sequência de plasmìdeo
US8557244B1 (en) 1999-08-11 2013-10-15 Biogen Idec Inc. Treatment of aggressive non-Hodgkins lymphoma with anti-CD20 antibody
EP1212422B1 (en) 1999-08-24 2007-02-21 Medarex, Inc. Human ctla-4 antibodies and their uses
US20050112141A1 (en) 2000-08-30 2005-05-26 Terman David S. Compositions and methods for treatment of neoplastic disease
US20040106567A1 (en) 1999-09-07 2004-06-03 Hagstrom James E. Intravascular delivery of non-viral nucleic acid
ES2238799T3 (es) 1999-09-09 2005-09-01 Curevac Gmbh Transferencia de arn-m.
AU7398200A (en) 1999-09-17 2001-04-24 Aventis Pasteur Limited Chlamydia antigens and corresponding dna fragments and uses thereof
US6623457B1 (en) 1999-09-22 2003-09-23 Becton, Dickinson And Company Method and apparatus for the transdermal administration of a substance
WO2002064799A2 (en) 1999-09-28 2002-08-22 Transkaryotic Therapies, Inc. Optimized messenger rna
US6528262B1 (en) 1999-10-06 2003-03-04 Quark Biotech, Inc. Method for enrichment of natural antisense messenger RNA
US7060291B1 (en) 1999-11-24 2006-06-13 Transave, Inc. Modular targeted liposomal delivery system
US6613026B1 (en) 1999-12-08 2003-09-02 Scimed Life Systems, Inc. Lateral needle-less injection apparatus and method
US6277974B1 (en) 1999-12-14 2001-08-21 Cogent Neuroscience, Inc. Compositions and methods for diagnosing and treating conditions, disorders, or diseases involving cell death
US6245929B1 (en) 1999-12-20 2001-06-12 General Electric Company Catalyst composition and method for producing diaryl carbonates, using bisphosphines
ATE280188T1 (de) 1999-12-22 2004-11-15 Basell Poliolefine Spa Alpha-olefin enthaltendes polymerisationskatalysatorsystem, das ein aromatisches silan enthält
US7737108B1 (en) 2000-01-07 2010-06-15 University Of Washington Enhanced transport using membrane disruptive agents
EP1276901A2 (en) 2000-01-13 2003-01-22 Amsterdam Support Diagnostics B.V. A universal nucleic acid amplification system for nucleic acids in a sample
CA2398756A1 (en) 2000-01-31 2001-08-02 Eyal Raz Immunomodulatory polynucleotides in treatment of an infection by an intracellular pathogen
WO2001055306A2 (en) 2000-01-31 2001-08-02 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
US6602498B2 (en) 2000-02-22 2003-08-05 Shearwater Corporation N-maleimidyl polymer derivatives
DE1257584T1 (de) 2000-02-24 2003-05-28 Lilly Co Eli Humanisierte antikörper, die amyloid beta peptid demarkieren
ATE511400T1 (de) 2000-03-03 2011-06-15 Genetronics Inc Nukleinsäure-fomulierungen zur genverabreichung
WO2001075166A2 (en) 2000-03-31 2001-10-11 Genentech, Inc. Compositions and methods for detecting and quantifying gene expression
WO2001074388A1 (en) 2000-03-31 2001-10-11 Idec Pharmaceuticals Corporation Combined use of anti-cytokine antibodies or antagonists and anti-cd20 for the treatment of b cell lymphoma
US6565572B2 (en) 2000-04-10 2003-05-20 Sdgi Holdings, Inc. Fenestrated surgical screw and method
EP2213743A1 (en) 2000-04-12 2010-08-04 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
US6368801B1 (en) 2000-04-12 2002-04-09 Molecular Staging, Inc. Detection and amplification of RNA using target-mediated ligation of DNA by RNA ligase
US20010046496A1 (en) 2000-04-14 2001-11-29 Brettman Lee R. Method of administering an antibody
US6375972B1 (en) 2000-04-26 2002-04-23 Control Delivery Systems, Inc. Sustained release drug delivery devices, methods of use, and methods of manufacturing thereof
US7871598B1 (en) 2000-05-10 2011-01-18 Novartis Ag Stable metal ion-lipid powdered pharmaceutical compositions for drug delivery and methods of use
US20040229271A1 (en) 2000-05-19 2004-11-18 Williams Richard B. Compositions and methods for the identification and selection of nucleic acids and polypeptides
WO2001092523A2 (en) 2000-05-30 2001-12-06 Curagen Corporation Human polynucleotides and polypeptides encoded thereby
WO2001093902A2 (en) 2000-06-07 2001-12-13 Biosynexus Incorporated Immunostimulatory rna/dna hybrid molecules
ATE343589T1 (de) 2000-06-23 2006-11-15 Wyeth Corp Modofiziertes morbillivirus v proteine
JP2004502415A (ja) 2000-07-03 2004-01-29 カイロン　エセ．ピー．アー． Ｃｈｌａｍｙｄｉａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対する免疫化
US6440096B1 (en) 2000-07-14 2002-08-27 Becton, Dickinson And Co. Microdevice and method of manufacturing a microdevice
HK1056195B (en) 2000-07-21 2007-06-22 Glaxo Group Limited Codon-optimized papilloma virus sequences
US6902734B2 (en) 2000-08-07 2005-06-07 Centocor, Inc. Anti-IL-12 antibodies and compositions thereof
US6696038B1 (en) 2000-09-14 2004-02-24 Expression Genetics, Inc. Cationic lipopolymer as biocompatible gene delivery agent
US20040142474A1 (en) 2000-09-14 2004-07-22 Expression Genetics, Inc. Novel cationic lipopolymer as a biocompatible gene delivery agent
WO2002024873A1 (en) 2000-09-20 2002-03-28 Christopher Ralph Franks Stem cell therapy
AU2002211490A1 (en) 2000-10-04 2002-04-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods of using capsid protein from flaviviruses and pestiviruses
US6998115B2 (en) 2000-10-10 2006-02-14 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable poly(β-amino esters) and uses thereof
US7202226B2 (en) 2000-10-23 2007-04-10 Detroit R & D Augmentation of wound healing by elF-4E mRNA and EGF mRNA
US20030077604A1 (en) 2000-10-27 2003-04-24 Yongming Sun Compositions and methods relating to breast specific genes and proteins
US20020132788A1 (en) 2000-11-06 2002-09-19 David Lewis Inhibition of gene expression by delivery of small interfering RNA to post-embryonic animal cells in vivo
AU2002226930A1 (en) 2000-11-17 2002-05-27 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Reduction of the nonspecific animal toxicity of immunotoxins by mutating the framework regions of the fv to lower the isoelectric point
JP2004535765A (ja) 2000-12-07 2004-12-02 カイロン コーポレイション 前立腺癌においてアップレギュレートされた内因性レトロウイルス
US7708915B2 (en) 2004-05-06 2010-05-04 Castor Trevor P Polymer microspheres/nanospheres and encapsulating therapeutic proteins therein
US20020130430A1 (en) 2000-12-29 2002-09-19 Castor Trevor Percival Methods for making polymer microspheres/nanospheres and encapsulating therapeutic proteins and other products
EP1224943A1 (en) 2001-01-19 2002-07-24 Crucell Holland B.V. Fibronectin as a tumor marker detected by phage antibodies
KR20040002853A (ko) 2001-01-19 2004-01-07 비로노바티브 비.브이. 감응성 포유류에서 호흡계 질환을 유발하는 바이러스
US20040110191A1 (en) 2001-01-31 2004-06-10 Winkler Matthew M. Comparative analysis of nucleic acids using population tagging
WO2002065093A2 (en) 2001-02-14 2002-08-22 Baylor College Of Medicine Methods and compositions of amplifying rna
US6652886B2 (en) 2001-02-16 2003-11-25 Expression Genetics Biodegradable cationic copolymers of poly (alkylenimine) and poly (ethylene glycol) for the delivery of bioactive agents
DE10109897A1 (de) 2001-02-21 2002-11-07 Novosom Ag Fakultativ kationische Liposomen und Verwendung dieser
US7232425B2 (en) 2001-03-02 2007-06-19 Sorenson Development, Inc. Apparatus and method for specific interstitial or subcutaneous diffusion and dispersion of medication
JP2004530425A (ja) 2001-03-09 2004-10-07 ジーン ストリーム プロプライエトリー リミティッド 新規な発現ベクター
JP2002262882A (ja) 2001-03-12 2002-09-17 Nisshinbo Ind Inc Ｒｎａの増幅法
FR2822164B1 (fr) 2001-03-19 2004-06-18 Centre Nat Rech Scient Polypeptides derives des arn polymerases, et leurs utilisations
US6520949B2 (en) 2001-04-02 2003-02-18 Martin St. Germain Method and apparatus for administering fluid to animals subcutaneously
DE10119005A1 (de) 2001-04-18 2002-10-24 Roche Diagnostics Gmbh Verfahren zur Proteinexpression ausgehend von stabilisierter linearer kurzer DNA in zellfreien in vitro-Transkription/Translations-Systemen mit Exonuklease-haltigen Lysaten oder in einem zellulären System enthaltend Exonukleasen
US20030171253A1 (en) 2001-04-19 2003-09-11 Averil Ma Methods and compositions relating to modulation of A20
CN1302115C (zh) 2001-04-23 2007-02-28 埃麦克萨有限公司 电穿孔用缓冲溶液及上述溶液的使用方法
US7560424B2 (en) 2001-04-30 2009-07-14 Zystor Therapeutics, Inc. Targeted therapeutic proteins
US6777187B2 (en) 2001-05-02 2004-08-17 Rubicon Genomics, Inc. Genome walking by selective amplification of nick-translate DNA library and amplification from complex mixtures of templates
EP1392587A4 (en) 2001-05-08 2009-03-18 Magnatech International L P WIRE RUNNING SYSTEM AND METHOD WITH ELECTRONIC LENGTH CONTROL
US20050137155A1 (en) 2001-05-18 2005-06-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of Parkinson disease using short interfering nucleic acid (siNA)
US8137911B2 (en) 2001-05-22 2012-03-20 Cellscript, Inc. Preparation and use of single-stranded transcription substrates for synthesis of transcription products corresponding to target sequences
RU2294192C2 (ru) 2001-05-30 2007-02-27 Дзе Скриппс Рисерч Инститьют Система доставки нуклеиновых кислот
ES2340499T3 (es) 2001-06-05 2010-06-04 Curevac Gmbh Arnm de antigeno tumoral estabilizado con un contenido de g/c aumentado.
US20040175787A1 (en) 2001-06-18 2004-09-09 Klemens Kaupmann Novel g-protein coupled receptors and dna sequences thereof
US7547551B2 (en) 2001-06-21 2009-06-16 University Of Antwerp. Transfection of eukaryontic cells with linear polynucleotides by electroporation
US7785610B2 (en) 2001-06-21 2010-08-31 Dynavax Technologies Corporation Chimeric immunomodulatory compounds and methods of using the same—III
US20040175789A1 (en) 2001-06-26 2004-09-09 Umesh Bhatia G protein coupled receptors and dna sequences thereof
SE0102327D0 (sv) 2001-06-28 2001-06-28 Active Biotech Ab A novel engineered superantigen for human therapy
AU2002359236A1 (en) 2001-07-13 2003-04-14 Advanced Research And Technology Institute Peptidoglycan recognition protein encoding nucleic acids and methods of use thereof
US6586524B2 (en) 2001-07-19 2003-07-01 Expression Genetics, Inc. Cellular targeting poly(ethylene glycol)-grafted polymeric gene carrier
EP1430140B1 (en) 2001-08-01 2010-09-15 University of Utah N-terminally truncated isoforms of pde3a cyclic phosphodiesterases
US20050106659A1 (en) 2001-08-27 2005-05-19 Klemens Kaupmann Novel g-protein coupled receptor and dna sequences thereof
US20040142325A1 (en) 2001-09-14 2004-07-22 Liat Mintz Methods and systems for annotating biomolecular sequences
AR045702A1 (es) 2001-10-03 2005-11-09 Chiron Corp Composiciones de adyuvantes.
DE10148886A1 (de) 2001-10-04 2003-04-30 Avontec Gmbh Inhibition von STAT-1
US7276489B2 (en) 2002-10-24 2007-10-02 Idera Pharmaceuticals, Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5′ ends
ATE427992T1 (de) 2001-11-14 2009-04-15 Toyo Boseki Dna-synthesepromotoren, mit dna-polymerase assoziierte faktoren und nutzung davon
AU2002361642A1 (en) 2001-11-16 2003-06-10 The University Of Tennessee Research Corporation Recombinant antibody fusion proteins and methods for detection of apoptotic cells
US20050032062A1 (en) 2001-11-29 2005-02-10 Salah-Dine Chibout Methods for the assessment and prognosis of sarcoidosis
CA2409775C (en) 2001-12-03 2010-07-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Reversibly modified thermostable enzymes for dna synthesis and amplification in vitro
US20070037147A1 (en) 2001-12-07 2007-02-15 Pablo Garcia Endogenous retrovirus polypeptides linked to oncogenic transformation
US20060275747A1 (en) 2001-12-07 2006-12-07 Hardy Stephen F Endogenous retrovirus up-regulated in prostate cancer
DE60235413D1 (de) 2001-12-07 2010-04-01 Novartis Vaccines & Diagnostic Bei prostatakrebs hochreguliertes endogenes retrovirus
JP2005520498A (ja) 2001-12-17 2005-07-14 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト 新規ｇタンパク質共役受容体およびそのｄｎａ配列
DE10162480A1 (de) 2001-12-19 2003-08-07 Ingmar Hoerr Die Applikation von mRNA für den Einsatz als Therapeutikum gegen Tumorerkrankungen
EP1474109B1 (en) 2001-12-21 2010-08-25 Alcon, Inc. Use of synthetic inorganic nanoparticles as carriers for ophthalmic drugs
WO2003059381A2 (en) 2002-01-18 2003-07-24 Curevac Gmbh Immunogenic preparations and vaccines on the basis of mrna
WO2003066649A1 (en) 2002-02-04 2003-08-14 Biomira Inc. Immunostimulatory, covalently lipidated oligonucleotides
CA2473144C (en) 2002-02-05 2013-05-28 Genentech, Inc. Protein purification
FR2835749B1 (fr) 2002-02-08 2006-04-14 Inst Nat Sante Rech Med Composition pharmaceutique ameliorant le transfert de gene in vivo
DE10207178A1 (de) 2002-02-19 2003-09-04 Novosom Ag Komponenten für die Herstellung amphoterer Liposomen
AR038568A1 (es) 2002-02-20 2005-01-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-a beta y su uso
US7354742B2 (en) 2002-02-22 2008-04-08 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Method for generating amplified RNA
US7476390B2 (en) 2002-02-26 2009-01-13 Maxygen, Inc. Flavivirus antigens
EP2298346A3 (en) 2002-03-04 2011-11-16 Imclone LLC Human antibodies specific to kdr and uses thereof
US20050152980A1 (en) 2002-03-13 2005-07-14 Michael Ausborn Pharmeutical microparticles
US7074596B2 (en) 2002-03-25 2006-07-11 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Synthesis and use of anti-reverse mRNA cap analogues
EP3006043B1 (en) 2002-04-04 2019-05-29 Zoetis Belgium S.A. Immunostimulatory g,u-containing oligoribonucleotides
JP2005529590A (ja) 2002-04-17 2005-10-06 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト ＡＲＥ含有ｍＲＮＡとＨｕＲタンパク質の結合のインヒビターの同定方法
GB0209539D0 (en) 2002-04-26 2002-06-05 Avecia Ltd Monomer Polymer and process
EP1361277A1 (en) 2002-04-30 2003-11-12 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Optimization of transgene expression in mammalian cells
SG187991A1 (en) 2002-05-02 2013-03-28 Wyeth Corp Calicheamicin derivative-carrier conjugates
US20040018525A1 (en) 2002-05-21 2004-01-29 Bayer Aktiengesellschaft Methods and compositions for the prediction, diagnosis, prognosis, prevention and treatment of malignant neoplasma
US7374930B2 (en) 2002-05-21 2008-05-20 Expression Genetics, Inc. GLP-1 gene delivery for the treatment of type 2 diabetes
DE10224200C1 (de) 2002-05-31 2003-08-21 Artus Ges Fuer Molekularbiolog Vermehrung von Ribonukleinsäuren
AU2003237367A1 (en) 2002-06-03 2003-12-19 Chiron Corporation Use of nrg4, or inhibitors thereof, in the treatment of colon and pancreatic cancer
SE0201907D0 (sv) 2002-06-19 2002-06-19 Atos Medical Ab Plaster for tracheostoma valves
EP1519714B1 (en) 2002-06-28 2010-10-20 Protiva Biotherapeutics Inc. Method and apparatus for producing liposomes
EP1552298A4 (en) 2002-07-01 2006-11-08 Kenneth S Warren Inst Inc RECOMBINANT TISSUE-PROOFING CYTOKINS AND NUCLEIC ACIDS COORDINATING THEREOF FOR THE PROTECTION, RECOVERY AND IMPROVEMENT OF CELLS, TISSUE AND ORGANS THEREOF
DE10229872A1 (de) 2002-07-03 2004-01-29 Curevac Gmbh Immunstimulation durch chemisch modifizierte RNA
GB0215509D0 (en) 2002-07-04 2002-08-14 Novartis Ag Marker genes
AU2003249208B2 (en) 2002-07-16 2010-03-04 Vgx Pharmaceuticals, Llc Codon optimized synthetic plasmids
AU2003252136A1 (en) 2002-07-24 2004-02-09 Ptc Therapeutics, Inc. METHODS FOR IDENTIFYING SMALL MOLEDULES THAT MODULATE PREMATURE TRANSLATION TERMINATION AND NONSENSE MEDIATED mRNA DECAY
EP1393745A1 (en) 2002-07-29 2004-03-03 Hybridon, Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5'ends
US6653468B1 (en) 2002-07-31 2003-11-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Universal support media for synthesis of oligomeric compounds
EP1386925A1 (en) 2002-07-31 2004-02-04 Girindus AG Method for preparing oligonucleotides
EP1873180B1 (en) 2002-08-14 2014-05-07 Novartis AG Ophthalmic device made from a radiation-curable prepolymer
ES2377318T3 (es) 2002-09-06 2012-03-26 Cerulean Pharma Inc. Polímeros a base de ciclodextrina para el suministro de los agentes terapéuticos enlazados covalentemente a ellos
ATE412684T1 (de) 2002-09-09 2008-11-15 Nektar Therapeutics Al Corp Verfahren zur herstellung von wasserlöslichen polymerderivaten mit terminalen carboxylgruppen
US7534872B2 (en) 2002-09-27 2009-05-19 Syngen, Inc. Compositions and methods for the use of FMOC derivatives in DNA/RNA synthesis
BRPI0315295C1 (pt) 2002-10-17 2021-05-25 Genmab As anticorpo monoclonal humano isolado, célula hospedeira procariótica, composição farmacêutica, molécula biespecífica, usos de um anticorpo, métodos in vitro de detectar a presença de antígeno de cd20 ou uma célula que expressa cd20 em uma amostra, kit, e, vetor de expressão
ATE492636T1 (de) 2002-10-22 2011-01-15 Eisai R&D Man Co Ltd Spezifisch in postmitotischen dopamin- produzierenden neuronalen vorläuferzellen exprimiertes gen
WO2004048594A2 (en) 2002-11-21 2004-06-10 Epicentre Technologies Preparation and use of single-stranded transcription substrates for synthesis of transcription products corresponding to target sequences
US7491234B2 (en) 2002-12-03 2009-02-17 Boston Scientific Scimed, Inc. Medical devices for delivery of therapeutic agents
TWI335821B (en) 2002-12-16 2011-01-11 Genentech Inc Immunoglobulin variants and uses thereof
WO2004058159A2 (en) 2002-12-23 2004-07-15 Dynavax Technologies Corporation Branched immunomodulatory compounds and methods of using the same
US7169892B2 (en) 2003-01-10 2007-01-30 Astellas Pharma Inc. Lipid-peptide-polymer conjugates for long blood circulation and tumor specific drug delivery systems
US20080227085A1 (en) 2003-01-17 2008-09-18 Pellegrini Matthew C Methods and Systems for the Identification of Rna Regulatory Sequences and Compounds that Modulate their Function
US8426194B2 (en) 2003-01-21 2013-04-23 Ptc Therapeutics, Inc. Methods and agents for screening for compounds capable of modulating VEGF expression
US8460864B2 (en) 2003-01-21 2013-06-11 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for identifying compounds that modulate untranslated region-dependent gene expression and methods of using same
US9068234B2 (en) 2003-01-21 2015-06-30 Ptc Therapeutics, Inc. Methods and agents for screening for compounds capable of modulating gene expression
US20040147027A1 (en) 2003-01-28 2004-07-29 Troy Carol M. Complex for facilitating delivery of dsRNA into a cell and uses thereof
DK2236154T3 (en) 2003-02-10 2018-06-25 Biogen Ma Inc IMMUNOGLOBULIN INFORMATION AND METHOD OF PREPARING IT
US20040167090A1 (en) 2003-02-21 2004-08-26 Monahan Sean D. Covalent modification of RNA for in vitro and in vivo delivery
CA2450289A1 (en) 2003-03-20 2005-05-19 Imclone Systems Incorporated Method of producing an antibody to epidermal growth factor receptor
US7320961B2 (en) 2003-03-24 2008-01-22 Abbott Laboratories Method for treating a disease, disorder or adverse effect caused by an elevated serum concentration of an UGT1A1 substrate
AU2004225520A1 (en) 2003-03-25 2004-10-14 Stratagene DNA polymerase fusions and uses thereof
WO2004092329A2 (en) 2003-04-08 2004-10-28 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Semi-synthetic saponin analogs with carrier and immune stimulatory activities for dna and rna vaccines
EP1613350B1 (en) 2003-04-09 2009-03-18 Genentech, Inc. Therapy of autoimmune disease in a patient with an inadequate response to a tnf-alpha inhibitor
KR101180896B1 (ko) 2003-05-05 2012-09-07 벤-구리온 유니버시티 오브 더 네게브 리서치 앤드 디벨럽먼트 어쏘러티 주사용 가교결합된 폴리머 제제 및 그의 용도
US7348004B2 (en) 2003-05-06 2008-03-25 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
PL2298347T3 (pl) 2003-05-06 2016-03-31 Bioverativ Therapeutics Inc Białka chimeryczne czynnika krzepnięcia do leczenia zaburzenia hemostazy
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US9567591B2 (en) 2003-05-15 2017-02-14 Mello Biotechnology, Inc. Generation of human embryonic stem-like cells using intronic RNA
GB0313132D0 (en) 2003-06-06 2003-07-09 Ich Productions Ltd Peptide ligands
WO2005009346A2 (en) 2003-06-24 2005-02-03 Mirus Corporation Inhibition of gene function by delivery of polynucleotide-based gene expression inhibitors to mammalian cells in vivo
GB0316089D0 (en) 2003-07-09 2003-08-13 Xo Bioscience Ltd Differentiation method
US8592197B2 (en) 2003-07-11 2013-11-26 Novavax, Inc. Functional influenza virus-like particles (VLPs)
US7575572B2 (en) 2003-07-15 2009-08-18 Spinal Generations, Llc Method and device for delivering medicine to bone
US20050013870A1 (en) 2003-07-17 2005-01-20 Toby Freyman Decellularized extracellular matrix of conditioned body tissues and uses thereof
TWI476206B (zh) 2003-07-18 2015-03-11 Amgen Inc 對肝細胞生長因子具專一性之結合劑
DE10335833A1 (de) 2003-08-05 2005-03-03 Curevac Gmbh Transfektion von Blutzellen mit mRNA zur Immunstimulation und Gentherapie
US20050048112A1 (en) 2003-08-28 2005-03-03 Jorg Breitenbach Solid pharmaceutical dosage form
US8668926B1 (en) 2003-09-15 2014-03-11 Shaker A. Mousa Nanoparticle and polymer formulations for thyroid hormone analogs, antagonists, and formulations thereof
US7135010B2 (en) 2003-09-30 2006-11-14 Damage Control Surgical Technologies, Inc. Method and apparatus for rapid deployment chest drainage
ES2367566T3 (es) 2003-10-06 2011-11-04 Novartis Ag Uso de polimorfismos genéticos que se asocian con la eficacia del tratamiento de una enfermedad inflamatoria.
US20050130201A1 (en) 2003-10-14 2005-06-16 Dharmacon, Inc. Splint-assisted enzymatic synthesis of polyribounucleotides
DE10347710B4 (de) 2003-10-14 2006-03-30 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Rekombinante Impfstoffe und deren Verwendung
US9296820B2 (en) 2003-11-05 2016-03-29 Roche Glycart Ag Polynucleotides encoding anti-CD20 antigen binding molecules with increased Fc receptor binding affinity and effector function
WO2005047536A2 (en) 2003-11-13 2005-05-26 Novartis Ag Detection of genomic amplification and deletion in cancer
US20070054278A1 (en) 2003-11-18 2007-03-08 Applera Corporation Polymorphisms in nucleic acid molecules encoding human enzyme proteins, methods of detection and uses thereof
US7699852B2 (en) 2003-11-19 2010-04-20 Zimmer Spine, Inc. Fenestrated bone tap and method
US20050153333A1 (en) 2003-12-02 2005-07-14 Sooknanan Roy R. Selective terminal tagging of nucleic acids
WO2005055945A2 (en) 2003-12-08 2005-06-23 Gel-Del Technologies, Inc. Mucoadhesive drug delivery devices and methods of making and using thereof
US7674884B2 (en) 2003-12-10 2010-03-09 Novimmune S.A. Neutralizing antibodies and methods of use thereof
US8372966B2 (en) 2003-12-19 2013-02-12 University Of Cincinnati Oligonucleotide decoys and methods of use
PL3718564T3 (pl) 2003-12-23 2024-03-18 Genentech, Inc. Nowe przeciwciała anty-IL 13 i ich zastosowania
EP1713514B1 (en) 2004-01-28 2021-11-24 Johns Hopkins University Drugs and gene carrier particles that rapidly move through mucous barriers
DK1716233T3 (da) 2004-01-30 2009-10-26 Maxygen Holdings Ltd Reguleret stopkodongennemlæsning
US7309487B2 (en) 2004-02-09 2007-12-18 George Inana Methods and compositions for detecting and treating retinal diseases
EP3101034A1 (en) 2004-02-12 2016-12-07 Morphotek, Inc. Monoclonal antibodies that specifically bind to folate receptor alpha
US20070265220A1 (en) * 2004-03-15 2007-11-15 City Of Hope Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded RNA
WO2005090405A1 (ja) 2004-03-24 2005-09-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha インターロイキン－６受容体に対するヒト型化抗体のサブタイプ
WO2005098433A2 (en) 2004-04-01 2005-10-20 Novartis Ag Diagnostic assays for alzheimer’s disease
US7850962B2 (en) 2004-04-20 2010-12-14 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against CD20
ES2246694B1 (es) 2004-04-29 2007-05-01 Instituto Cientifico Y Tecnologico De Navarra, S.A. Nanoparticulas pegiladas.
US20080119645A1 (en) 2004-05-05 2008-05-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Amidites and Methods of Rna Synthesis
EP1765294B1 (en) 2004-05-12 2008-09-24 Baxter International Inc. Nucleic acid microspheres, production and delivery thereof
US8012747B2 (en) 2004-06-01 2011-09-06 San Diego State University Foundation Expression system
CA2569664C (en) 2004-06-07 2013-07-16 Protiva Biotherapeutics, Inc. Lipid encapsulated interfering rna
JP4764426B2 (ja) 2004-06-07 2011-09-07 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド カチオン性脂質および使用方法
CA2608862C (en) 2004-06-11 2020-05-05 Trustees Of Tufts College Silk-based drug delivery system
WO2006046978A2 (en) 2004-06-28 2006-05-04 Argos Therapeutics, Inc. Cationic peptide-mediated transformation
CA2571292C (en) 2004-06-30 2013-05-21 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polymer-factor ix moiety conjugates
WO2006093526A2 (en) 2004-07-21 2006-09-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising a modified or non-natural nucleobase
DE102004035227A1 (de) 2004-07-21 2006-02-16 Curevac Gmbh mRNA-Gemisch zur Vakzinierung gegen Tumorerkrankungen
US7603349B1 (en) 2004-07-29 2009-10-13 Yahoo! Inc. User interfaces for search systems using in-line contextual queries
GB0417487D0 (en) 2004-08-05 2004-09-08 Novartis Ag Organic compound
SE0402025D0 (sv) 2004-08-13 2004-08-13 Active Biotech Ab Treatment of hyperproliferative disease with superantigens in combination with another anticancer agent
US7291208B2 (en) 2004-08-13 2007-11-06 Gore Enterprise Holdings, Inc. Grooved active and passive adsorbent filters
CA2478458A1 (en) 2004-08-20 2006-02-20 Michael Panzara Treatment of pediatric multiple sclerosis
HUE024999T2 (en) 2004-08-26 2016-02-29 Engeneic Molecular Delivery Pty Ltd Introducing functional nucleic acids into mammalian cells with bacterial intact minicells
DE102004042546A1 (de) 2004-09-02 2006-03-09 Curevac Gmbh Kombinationstherapie zur Immunstimulation
US7501486B2 (en) 2004-09-07 2009-03-10 Burnham Institute For Medical Research Peptides that selectively home to heart vasculature and related conjugates and methods
US8663599B1 (en) 2004-10-05 2014-03-04 Gp Medical, Inc. Pharmaceutical composition of nanoparticles
JPWO2006041088A1 (ja) 2004-10-12 2008-05-15 株式会社ティッシュターゲティングジャパン 脳移行性骨髄前駆細胞
EP2402323A3 (en) 2004-10-13 2012-05-30 PTC Therapeutics, Inc. Pyrazole or triazole compounds and their use for the manufacture of a medicament for treating somatic mutation-related diseases
US8057821B2 (en) 2004-11-03 2011-11-15 Egen, Inc. Biodegradable cross-linked cationic multi-block copolymers for gene delivery and methods of making thereof
WO2006047842A2 (en) 2004-11-08 2006-05-11 K.U. Leuven Research And Development Modified nucleosides for rna interference
WO2006058088A2 (en) 2004-11-23 2006-06-01 Ptc Therapeutics, Inc. Carbazole, carboline and indole derivatives useful in the inhibition of vegf production
US7964571B2 (en) 2004-12-09 2011-06-21 Egen, Inc. Combination of immuno gene therapy and chemotherapy for treatment of cancer and hyperproliferative diseases
WO2006063249A2 (en) 2004-12-10 2006-06-15 Justin Hanes Functionalized poly (ether-anhydride) block copolymers
US9068969B2 (en) 2004-12-28 2015-06-30 Ptc Therapeutics, Inc. Cell based methods and systems for the identification of RNA regulatory sequences and compounds that modulate their functions
US8535702B2 (en) 2005-02-01 2013-09-17 Boston Scientific Scimed, Inc. Medical devices having porous polymeric regions for controlled drug delivery and regulated biocompatibility
WO2006095259A2 (en) 2005-03-11 2006-09-14 Novartis Ag Biomarkers for cardiovascular side-effects induced by cox-2 inhibitory compounds
US8415325B2 (en) 2005-03-31 2013-04-09 University Of Delaware Cell-mediated delivery and targeted erosion of noncovalently crosslinked hydrogels
CA2604844A1 (en) 2005-04-07 2006-10-19 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Cancer-related genes
EP1865981A2 (en) 2005-04-07 2007-12-19 Chiron Corporation Cacna1e in cancer diagnosis, detection and treatment
WO2006110776A2 (en) 2005-04-12 2006-10-19 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polyethylene glycol cojugates of antimicrobial agents
EP1877075A4 (en) 2005-04-25 2008-07-30 Pfizer ANTIBODY TO MYOSTATIN
AU2006241149A1 (en) 2005-04-26 2006-11-02 Coley Pharmaceutical Gmbh Modified oligoribonucleotide analogs with enhanced immunostimulatory activity
DK2439273T3 (da) 2005-05-09 2019-06-03 Ono Pharmaceutical Co Humane monoklonale antistoffer til programmeret død-1(pd-1) og fremgangsmåder til behandling af cancer ved anvendelse af anti-pd-1- antistoffer alene eller i kombination med andre immunterapeutika
US20070072175A1 (en) 2005-05-13 2007-03-29 Biogen Idec Ma Inc. Nucleotide array containing polynucleotide probes complementary to, or fragments of, cynomolgus monkey genes and the use thereof
US20060265771A1 (en) 2005-05-17 2006-11-23 Lewis David L Monitoring microrna expression and function
DE102005023170A1 (de) 2005-05-19 2006-11-23 Curevac Gmbh Optimierte Formulierung für mRNA
US20090208500A1 (en) 2005-06-03 2009-08-20 Genentech, Inc. Method of producing antibodies with improved function
US7550264B2 (en) 2005-06-10 2009-06-23 Datascope Investment Corporation Methods and kits for sense RNA synthesis
HUE025208T2 (en) 2005-06-16 2016-03-29 Nektar Therapeutics Conjugates with degradable binding and polymer reagents useful in the preparation of such conjugates
US8202835B2 (en) 2005-06-17 2012-06-19 Yitzchak Hillman Disease treatment via antimicrobial peptides or their inhibitors
CN102016814B (zh) 2005-06-17 2013-10-23 北卡罗来纳大学查珀尔希尔分校 纳米粒子制备方法、系统及材料
US8101385B2 (en) 2005-06-30 2012-01-24 Archemix Corp. Materials and methods for the generation of transcripts comprising modified nucleotides
CA2613442C (en) 2005-06-30 2016-08-23 Archemix Corp. Materials and methods for the generation of fully 2'-modified nucleic acid transcripts
US20080220471A1 (en) 2005-07-27 2008-09-11 Genentech, Inc. Vectors and Methods Using Same
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
PL2578685T3 (pl) 2005-08-23 2020-01-31 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Rna zawierający zmodyfikowane nukleozydy i sposoby jego zastosowania
US9012219B2 (en) 2005-08-23 2015-04-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania RNA preparations comprising purified modified RNA for reprogramming cells
US20070048741A1 (en) 2005-08-24 2007-03-01 Getts Robert C Methods and kits for sense RNA synthesis
JP5135220B2 (ja) 2005-09-01 2013-02-06 ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス ゲーエムベーハー アンド カンパニー カーゲー 血清群ｃ髄膜炎菌を含む複数ワクチン接種
PL1928492T3 (pl) 2005-09-01 2011-09-30 Celgene Corp Immunologiczne zastosowania związków immunomodulujących do szczepionki i przeciwzakaźnego leczenia choroby
US8420605B2 (en) 2005-09-07 2013-04-16 The University Of Strathclyde Hydrogel compositions
US20120021042A1 (en) 2005-09-15 2012-01-26 Steffen Panzner Efficient Method For Loading Amphoteric Liposomes With Nucleic Acid Active Substances
DE102005046490A1 (de) 2005-09-28 2007-03-29 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Modifikationen von RNA, die zu einer erhöhten Transkriptstabilität und Translationseffizienz führen
JP5665272B2 (ja) 2005-10-07 2015-02-04 スピーデクス ピーティーワイ リミテッド 多成分核酸酵素およびそれらの使用方法
US20070087437A1 (en) 2005-10-14 2007-04-19 Jifan Hu Methods for rejuvenating cells in vitro and in vivo
NZ568211A (en) 2005-11-04 2011-11-25 Novartis Vaccines & Diagnostic Influenza vaccines including combinations of particulate adjuvants and immunopotentiators
US20070105124A1 (en) 2005-11-08 2007-05-10 Getts Robert C Methods and kits for nucleic acid amplification
US20090170090A1 (en) 2005-11-18 2009-07-02 Bioline Limited Method for Enhancing Enzymatic DNA Polymerase Reactions
CA2631184A1 (en) 2005-11-28 2007-05-31 Genmab A/S Recombinant monovalent antibodies and methods for production thereof
EP1954706B1 (en) 2005-11-30 2012-03-28 Epicentre Technologies Corporation Method using reversibly blocked tagging oligonucleotides
TWI389709B (zh) 2005-12-01 2013-03-21 Novartis Ag 經皮治療系統
CA2631714C (en) 2005-12-02 2014-09-16 Novartis Ag Nanoparticles for use in immunogenic compositions
US8603457B2 (en) 2005-12-02 2013-12-10 University Of Rochester Nonsense suppression and genetic codon alteration by targeted modification
US7579318B2 (en) 2005-12-06 2009-08-25 Centre De La Recherche De La Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
EP1969000A2 (en) 2005-12-06 2008-09-17 Centre National de la Recherche Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
KR20080080525A (ko) 2005-12-08 2008-09-04 노파르티스 아게 유전자 전사에 대한 ｆｇｆｒ３의 억제제의 효과
US8048999B2 (en) 2005-12-13 2011-11-01 Kyoto University Nuclear reprogramming factor
AU2006325030B2 (en) 2005-12-16 2012-07-26 Cellectis Cell penetrating peptide conjugates for delivering nucleic acids into cells
WO2007077042A1 (en) 2006-01-06 2007-07-12 Topotarget Switzerland Sa New method for the treatment of gout or pseudogout
ES2374458T3 (es) 2006-01-13 2012-02-16 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Vacunas y agentes inmunoterapéuticos que utilizan il-15 optimizada en codones, y métodos para utilización de los mismos.
US20070178103A1 (en) 2006-01-30 2007-08-02 Fey Georg H CD19-specific immunotoxin and treatment method
US8476234B2 (en) 2006-02-03 2013-07-02 Prolor Biotech Inc. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US9458444B2 (en) 2006-02-03 2016-10-04 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8946155B2 (en) 2006-02-03 2015-02-03 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
DE102006007433A1 (de) 2006-02-17 2007-08-23 Curevac Gmbh Adjuvanz in Form einer Lipid-modifizierten Nukleinsäure
KR100859972B1 (ko) 2006-02-20 2008-09-25 이화여자대학교 산학협력단 막투과 단백질 도메인 펩타이드
US8309680B2 (en) 2006-02-21 2012-11-13 Nektar Therapeutics Segmented degradable polymers and conjugates made therefrom
WO2007100789A2 (en) 2006-02-24 2007-09-07 Wyeth Gpat3 encodes a mammalian, microsomal acyl-coa:glycerol 3-phosphate acyltransferase
US8431160B2 (en) 2006-02-24 2013-04-30 Novartis Ag Microparticles containing biodegradable polymer and cationic polysaccharide for use in immunogenic compositions
US20070207141A1 (en) 2006-02-28 2007-09-06 Ivan Lieberburg Methods of treating inflammatory and autoimmune diseases with natalizumab
US7910152B2 (en) 2006-02-28 2011-03-22 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Poly(ester amide)-based drug delivery systems with controlled release rate and morphology
GB0605217D0 (en) 2006-03-15 2006-04-26 Novartis Ag Method and compositions for assessing acute rejection
EP2012751A4 (en) 2006-03-21 2010-11-24 Morehouse School Of Medicine NEW NANOPARTICLES FOR THE ACTIVE COMPOSITION
CA2648099C (en) 2006-03-31 2012-05-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc System for targeted delivery of therapeutic agents
WO2007123793A2 (en) 2006-04-04 2007-11-01 Stc.Unm Swellable particles for drug delivery
EP2010659B1 (en) 2006-04-14 2014-06-18 CellScript, Inc. Kits and methods for generating 5' capped RNA
EP1852127A1 (en) 2006-05-02 2007-11-07 Charité - Universitätsmedizin Berlin Use of a B-cell-depleting antibody for treatment of polyoma virus infections
JP5630998B2 (ja) 2006-05-15 2014-11-26 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー 機能的粒子のためのポリマー
WO2007135172A2 (en) 2006-05-24 2007-11-29 Laboratoires Serono S.A. Cladribine regimen for treating multiple sclerosis
EP2030015B1 (en) 2006-06-02 2016-02-17 President and Fellows of Harvard College Protein surface remodeling
CA2656620C (en) 2006-07-04 2018-03-13 Genmab A/S Cd20 binding molecules for the treatment of copd
EP2295045A1 (en) 2006-07-07 2011-03-16 Aarhus Universitet Nanoparticles for nucleic acid delivery
PT2038310E (pt) 2006-07-12 2010-08-25 Novartis Ag Copolímeros reticuláveis por via actínica para o fabrico de lentes de contacto
KR20090039748A (ko) 2006-07-20 2009-04-22 노파르티스 아게 암의 치료, 진단 또는 검출을 위한 ａｍｉｇｏ-2 억제제
JP5571380B2 (ja) 2006-07-24 2014-08-13 ルミナス バイオサイエンシズ，インコーポレイテッド オストワルド熟成を減少させた水不溶性の医薬品物質の固体ナノ粒子処方物
US8304529B2 (en) 2006-07-28 2012-11-06 Life Technologies Corporation Dinucleotide MRNA cap analogs
EP2046954A2 (en) 2006-07-31 2009-04-15 Curevac GmbH NUCLEIC ACID OF FORMULA (I): GIXmGn, OR (II): CIXmCn, IN PARTICULAR AS AN IMMUNE-STIMULATING AGENT/ADJUVANT
DE102006035618A1 (de) 2006-07-31 2008-02-07 Curevac Gmbh Nukleinsäure der Formel (I): GlXmGn, insbesondere als immunstimulierendes Adjuvanz
CN101500595A (zh) 2006-08-07 2009-08-05 健赞股份有限公司 组合治疗
CA2661093A1 (en) 2006-08-18 2008-02-21 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Dicer substrate rna peptide conjugates and methods for rna therapeutics
US8658211B2 (en) 2006-08-18 2014-02-25 Arrowhead Madison Inc. Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
CA2661634C (en) 2006-09-06 2017-03-28 The Regents Of The University Of California Selectively targeted antimicrobial peptides and the use thereof
EP2450377A1 (en) 2006-09-07 2012-05-09 Crucell Holland B.V. Human binding molecules capable of neutralizing influenza virus H5N1 and uses thereof
EP2061433B1 (en) 2006-09-08 2011-02-16 Johns Hopkins University Compositions for enhancing transport through mucus
US8454948B2 (en) 2006-09-14 2013-06-04 Medgenics Medical Israel Ltd. Long lasting drug formulations
GB0619182D0 (en) 2006-09-29 2006-11-08 Leuven K U Res & Dev Oligonucleotide arrays
CA2927045A1 (en) 2006-10-03 2008-04-10 Muthiah Manoharan Lipid containing formulations
US8313777B2 (en) 2006-10-05 2012-11-20 The Johns Hopkins University Water-dispersible oral, parenteral, and topical formulations for poorly water soluble drugs using smart polymeric nanoparticles
DE102006051516A1 (de) * 2006-10-31 2008-05-08 Curevac Gmbh (Basen-)modifizierte RNA zur Expressionssteigerung eines Proteins
US8414927B2 (en) 2006-11-03 2013-04-09 Boston Scientific Scimed, Inc. Cross-linked polymer particles
US7999087B2 (en) 2006-11-15 2011-08-16 Agilent Technologies, Inc. 2′-silyl containing thiocarbonate protecting groups for RNA synthesis
US8242258B2 (en) 2006-12-03 2012-08-14 Agilent Technologies, Inc. Protecting groups for RNA synthesis
US8399007B2 (en) 2006-12-05 2013-03-19 Landec Corporation Method for formulating a controlled-release pharmaceutical formulation
PT2121011E (pt) 2006-12-06 2014-07-31 Novartis Ag Vacinas compreendendo um antigénio a partir de quatro estirpes do vírus da gripe
US9034348B2 (en) 2006-12-11 2015-05-19 Chi2Gel Ltd. Injectable chitosan mixtures forming hydrogels
CN104524548A (zh) 2006-12-18 2015-04-22 阿塞勒隆制药公司 活化素-actrii拮抗剂及在提高红细胞水平中的用途
AU2007339280B2 (en) 2006-12-21 2013-12-05 Stryker Corporation Sustained-release formulations comprising crystals, macromolecular gels, and particulate suspensions of biologic agents
WO2008140615A2 (en) 2006-12-21 2008-11-20 Novozymes, Inc. Modified messenger rna stabilizing sequences for expressing genes in bacterial cells
WO2008078180A2 (en) 2006-12-22 2008-07-03 Archemix Corp. Materials and methods for the generation of transcripts comprising modified nucleotides
DE102006061015A1 (de) 2006-12-22 2008-06-26 Curevac Gmbh Verfahren zur Reinigung von RNA im präparativen Maßstab mittels HPLC
US8338166B2 (en) 2007-01-04 2012-12-25 Lawrence Livermore National Security, Llc Sorting, amplification, detection, and identification of nucleic acid subsequences in a complex mixture
DE102007001370A1 (de) 2007-01-09 2008-07-10 Curevac Gmbh RNA-kodierte Antikörper
WO2008091799A2 (en) 2007-01-22 2008-07-31 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Cell-based methods for identifying inhibitors of parkinson's disease-associated lrrk2 mutants
EP2450368A1 (en) 2007-01-30 2012-05-09 Epivax, Inc. Regulatory t cell epitopes, compositions and uses thereof
TW201803890A (zh) 2007-02-02 2018-02-01 艾瑟勒朗法瑪公司 衍生自ＡｃｔＲＩＩＢ的變體與其用途
WO2008097926A2 (en) 2007-02-02 2008-08-14 Yale University Transient transfection with rna
WO2008096370A2 (en) 2007-02-05 2008-08-14 Natco Pharma Limited An efficient and novel purification method of recombinant hg-csf
US8333799B2 (en) 2007-02-12 2012-12-18 C. R. Bard, Inc. Highly flexible stent and method of manufacture
US8242087B2 (en) 2007-02-27 2012-08-14 K.U.Leuven Research & Development Phosphate modified nucleosides useful as substrates for polymerases and as antiviral agents
EP1964922A1 (en) * 2007-03-02 2008-09-03 Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG Improvement of protein production
NZ580043A (en) * 2007-03-02 2012-04-27 Boehringer Ingelheim Pharma Improvement of protein production through increased expression of mutated start domain protein cert
WO2008109712A2 (en) 2007-03-05 2008-09-12 Washington University Nanoparticle delivery systems for membrane-integrating peptides
US20100297699A1 (en) 2007-03-20 2010-11-25 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic Acids Encoding Humanized Immunoglobulin That Binds Alpha4Beta7 Integrin
NZ580997A (en) 2007-04-27 2011-08-26 Echo Therapeutics Inc Dermal abrasion device with feedback electrode to deliver data on skin thickness and removable abrasion heads
DK2152290T3 (da) 2007-04-30 2014-08-18 Glaxosmithkline Llc Fremgangsmåder til indgivelse af anti-il-5-antistoffer
US8703204B2 (en) 2007-05-03 2014-04-22 Bend Research, Inc. Nanoparticles comprising a cholesteryl ester transfer protein inhibitor and anon-ionizable polymer
HUE040417T2 (hu) 2007-05-04 2019-03-28 Marina Biotech Inc Aminosavlipidek és alkalmazásuk
US7682789B2 (en) 2007-05-04 2010-03-23 Ventana Medical Systems, Inc. Method for quantifying biomolecules conjugated to a nanoparticle
US8728491B2 (en) 2007-05-07 2014-05-20 Alba Therapeutics Corporation Transcutaneous delivery of therapeutic agents
JP5296328B2 (ja) 2007-05-09 2013-09-25 独立行政法人理化学研究所 １本鎖環状ｒｎａおよびその製造方法
DK2476689T3 (en) 2007-05-10 2016-01-18 Agilent Technologies Inc Thiocarbonbeskyttende groups for RNA synthesis
MX376656B (es) 2007-05-14 2025-03-07 Kyowa Kirin Co Ltd Metodos para reducir niveles de basófilos.
WO2008144365A2 (en) 2007-05-17 2008-11-27 Novartis Ag Method for making dry powder compositions containing ds-rna based on supercritical fluid technology
BRPI0812384A2 (pt) 2007-05-22 2014-12-02 Novartis Ag Métodos de tratamento, diagnóstico e detecção de distúrbios associados a fgf21
EP2160464B1 (en) 2007-05-30 2014-05-21 Northwestern University Nucleic acid functionalized nanoparticles for therapeutic applications
EP2164951A2 (en) 2007-05-30 2010-03-24 The General Hospital Corporation Methods of generating pluripotent cells from somatic cells
CN104072561B (zh) 2007-06-19 2017-12-22 路易斯安那州州立大学及农业机械学院管理委员会 信使rna帽的抗‑反向硫代磷酸类似物的合成和用途
US8039214B2 (en) 2007-06-29 2011-10-18 Cellscript, Inc. Synthesis of tagged nucleic acids
US8367318B2 (en) 2007-07-23 2013-02-05 Dharmacon, Inc. Screening of micro-RNA cluster inhibitor pools
US9144546B2 (en) 2007-08-06 2015-09-29 Clsn Laboratories, Inc. Nucleic acid-lipopolymer compositions
US20090042825A1 (en) 2007-08-06 2009-02-12 Majed Matar Composition, method of preparation & application of concentrated formulations of condensed nucleic acids with a cationic lipopolymer
CA2695420A1 (en) 2007-08-23 2009-02-26 Novartis Ag Methods for detecting oligonucleotides
WO2009030254A1 (en) 2007-09-04 2009-03-12 Curevac Gmbh Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation
AU2008295140A1 (en) 2007-09-05 2009-03-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with type I and type II anti-CD20 antibodies
US8506928B2 (en) 2007-09-07 2013-08-13 The Regents Of The University Of California Methods and compounds for targeting tissues
US20110086904A1 (en) 2007-09-17 2011-04-14 The Trustees Of The University Of Pennsylvania GENERATION OF HYPERSTABLE mRNAs
US8394763B2 (en) 2007-09-26 2013-03-12 Oregon Health & Science University Cyclic undecapeptides and derivatives as multiple sclerosis therapies
CA2715078C (en) 2007-09-26 2019-07-23 Intrexon Corporation Synthetic 5'utrs, expression vectors, and methods for increasing transgene expression
EP2042193A1 (en) 2007-09-28 2009-04-01 Biomay AG RNA Vaccines
EP2436376B1 (en) 2007-09-28 2014-07-09 BIND Therapeutics, Inc. Cancer cell targeting using nanoparticles
WO2009046388A1 (en) 2007-10-03 2009-04-09 United States Medical Research & Material Command Cr-2 binding peptide p28 as molecular adjuvant for dna vaccines
WO2009046739A1 (en) 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating prostate cancer (pca)
WO2009046738A1 (en) 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating lung cancer, particularly of non-small lung cancers (nsclc)
JP2011500569A (ja) 2007-10-12 2011-01-06 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー ワクチンナノテクノロジー
US20090098118A1 (en) 2007-10-15 2009-04-16 Thomas Friess Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with an anti-bcl-2 active agent
EP2205277B1 (en) 2007-10-22 2017-07-26 Genmab A/S Novel antibody therapies
CN101965409A (zh) 2007-11-01 2011-02-02 罗切斯特大学 具有增加的稳定性的重组因子viii
MX2010005099A (es) 2007-11-09 2010-05-27 Novartis Ag Usos de anticuerpos anti-cd40.
WO2009062348A1 (en) 2007-11-14 2009-05-22 Institute Of Microbiology, Chinese Academy Of Sciences Methods for inhibiting influenza virus infection and their drugs
US20090148905A1 (en) 2007-11-30 2009-06-11 Claire Ashman Antigen-binding constructs
CA2707042A1 (en) 2007-12-10 2009-06-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of factor vii gene
SG10201408162PA (en) 2007-12-11 2015-01-29 Scripps Research Inst Compositions and methods related to mrna translational enhancer elements
NZ585784A (en) 2007-12-13 2012-09-28 Alnylam Pharmaceuticals Inc siRNAs for the treatment and prevention of respiratory syncytial virus (RSV) infection
EP2072618A1 (en) 2007-12-14 2009-06-24 Johannes Gutenberg-Universität Mainz Use of RNA for reprogramming somatic cells
WO2009086072A2 (en) 2007-12-21 2009-07-09 Genentech, Inc. Therapy of rituximab-refractory rheumatoid arthritis patients
WO2009093703A1 (ja) 2008-01-23 2009-07-30 Ajinomoto Co., Inc. Ｌ-アミノ酸の製造法
WO2009093384A1 (ja) 2008-01-24 2009-07-30 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology ポリヌクレオチド及びポリヌクレオチド類似体並びにこれらを用いた遺伝子発現制御方法
DK2176408T5 (en) 2008-01-31 2015-12-14 Curevac Gmbh Nucleic acids comprising FORMULA (NuGiXmGnNv) a AND DERIVATIVES AS IMMUNE STIMULATING AGENTS / ADJUVANTS.
US20100330677A1 (en) 2008-02-11 2010-12-30 Cambridge Enterprise Limited Improved Reprogramming of Mammalian Cells, and Cells Obtained
CA2726861C (en) 2008-02-13 2014-05-27 Intarcia Therapeutics, Inc. Devices, formulations, and methods for delivery of multiple beneficial agents
DE102008009920A1 (de) 2008-02-15 2009-08-20 Aj Innuscreen Gmbh Mobiles Gerät für die Nukleinsäureisolierung
US20120027813A1 (en) 2008-02-22 2012-02-02 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Adjuvanted influenza vaccines for pediatric use
US8506966B2 (en) 2008-02-22 2013-08-13 Novartis Ag Adjuvanted influenza vaccines for pediatric use
WO2009108891A2 (en) 2008-02-29 2009-09-03 Egen, Inc. Modified poloxamers for gene expression and associated methods
WO2009113083A1 (en) 2008-03-14 2009-09-17 Biocon Limited A monoclonal antibody and a method thereof
WO2009114854A1 (en) 2008-03-14 2009-09-17 Egen, Inc. Biodegradable cross-linked branched poly (alkylene imines)
JP5917143B2 (ja) 2008-03-28 2016-05-11 グラクソスミスクライン・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ ＬＬＣ 処置方法
CA2721333C (en) 2008-04-15 2020-12-01 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for nucleic acid delivery
WO2009127230A1 (en) * 2008-04-16 2009-10-22 Curevac Gmbh MODIFIED (m)RNA FOR SUPPRESSING OR AVOIDING AN IMMUNOSTIMULATORY RESPONSE AND IMMUNOSUPPRESSIVE COMPOSITION
EP2288336B8 (en) 2008-04-25 2017-03-22 Northwestern University Nanostructures suitable for sequestering cholesterol
JP2011523353A (ja) 2008-04-28 2011-08-11 プレジデント アンド フェロウズ オブ ハーバード カレッジ 細胞透過のための過剰に荷電されたタンパク質
AU2009241354B2 (en) 2008-04-30 2014-06-12 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention Chimeric West Nile/Dengue viruses
US9394538B2 (en) 2008-05-07 2016-07-19 Shi-Lung Lin Development of universal cancer drugs and vaccines
US8231608B2 (en) 2008-05-08 2012-07-31 Minipumps, Llc Drug-delivery pumps and methods of manufacture
US8697098B2 (en) 2011-02-25 2014-04-15 South Dakota State University Polymer conjugated protein micelles
CA2972694C (en) 2008-05-13 2020-02-11 University Of Washington Diblock copolymers and polynucleotide complexes thereof for delivery into cells
WO2009141146A1 (en) 2008-05-21 2009-11-26 Gunther Hartmann 5' triphosphate oligonucleotide with blunt end and uses thereof
EP2297197B1 (en) 2008-05-29 2012-03-07 HanAll Biopharma Co., Ltd. Modified erythropoietin (epo)polypeptides that exhibit increased protease resistance and pharmaceutical compositions thereof
FR2931824B1 (fr) 2008-05-29 2014-11-28 Centre Nat Rech Scient Procede de synthese d'arn par voie chimique.
WO2009148528A2 (en) 2008-05-30 2009-12-10 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Assessment of chromosomal alterations to predict clinical outcome of bortezomib treatment
PL215513B1 (pl) 2008-06-06 2013-12-31 Univ Warszawski Nowe boranofosforanowe analogi dinukleotydów, ich zastosowanie, czasteczka RNA, sposób otrzymywania RNA oraz sposób otrzymywania peptydów lub bialka
TWI451876B (zh) 2008-06-13 2014-09-11 Lilly Co Eli 聚乙二醇化之離脯胰島素化合物
WO2010005726A2 (en) 2008-06-16 2010-01-14 Bind Biosciences Inc. Therapeutic polymeric nanoparticles with mtor inhibitors and methods of making and using same
JP2011525180A (ja) 2008-06-16 2011-09-15 バインド バイオサイエンシズ インコーポレイテッド 治療的標的化ナノ粒子の製作に用いるためのジブロックコポリマーで官能化された標的薬の製造方法
EA020954B1 (ru) 2008-06-16 2015-03-31 Бинд Терапьютикс, Инк. Загруженные лекарственным средством полимерные наночастицы, фармацевтическая композиция и способ лечения рака
US20100009424A1 (en) 2008-07-14 2010-01-14 Natasha Forde Sonoporation systems and methods
WO2010009065A2 (en) 2008-07-15 2010-01-21 Novartis Ag Amphipathic peptide compositions
JP5781929B2 (ja) 2008-07-15 2015-09-24 ノバルティス アーゲー 免疫原性の両親媒性ペプチド組成物
US20110172126A1 (en) 2008-09-03 2011-07-14 Xenome Ltd Libraries of peptide conjugates and methods for making them
US8309707B2 (en) 2008-09-06 2012-11-13 Chemgenes Corporation RNA synthesis-phosphoramidites for synthetic RNA in the reverse direction, and application in convenient introduction of ligands, chromophores and modifications of synthetic RNA at the 3′-end
WO2010027903A2 (en) 2008-09-08 2010-03-11 Fred Hutchinson Cancer Research Center Lung cancer diagnosis
US20100087337A1 (en) 2008-09-10 2010-04-08 Bind Biosciences, Inc. High Throughput Fabrication of Nanoparticles
AR073295A1 (es) 2008-09-16 2010-10-28 Genentech Inc Metodos para tratar la esclerosis multiple progresiva. articulo de fabricacion.
US20120021519A1 (en) 2008-09-19 2012-01-26 Presidents And Fellows Of Harvard College Efficient induction of pluripotent stem cells using small molecule compounds
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
WO2010042490A1 (en) 2008-10-06 2010-04-15 Boston Medical Center Corporation A single lentiviral vector system for induced pluripotent (ips) stem cells derivation
CA2740000C (en) 2008-10-09 2017-12-12 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids
US8535655B2 (en) 2008-10-10 2013-09-17 Polyactiva Pty Ltd. Biodegradable polymer—bioactive moiety conjugates
US8343498B2 (en) 2008-10-12 2013-01-01 Massachusetts Institute Of Technology Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics
US8603532B2 (en) 2008-10-20 2013-12-10 Massachusetts Institute Of Technology Nanostructures for drug delivery
US20120015899A1 (en) 2008-10-25 2012-01-19 Plant Bioscience, Limited Modified plant virus particles and uses therefor
EP3269395A1 (en) 2008-11-07 2018-01-17 Massachusetts Institute Of Technology Aminoalcohol lipidoids and uses thereof
CN111808084A (zh) 2008-11-10 2020-10-23 阿布特斯生物制药公司 用于递送治疗剂的新型脂质和组合物
US8734853B2 (en) 2008-11-17 2014-05-27 University Of North Texas Health Science Center At Fort Worth HDL particles for delivery of nucleic acids
EP2191840A1 (en) 2008-11-28 2010-06-02 Sanofi-Aventis Antitumor combinations containing antibodies recognizing specifically CD38 and melphalan
CA2746514C (en) 2008-12-10 2018-11-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Gnaq targeted dsrna compositions and methods for inhibiting expression
EP2196476A1 (en) 2008-12-10 2010-06-16 Novartis Ag Antibody formulation
US8563041B2 (en) 2008-12-12 2013-10-22 Bind Therapeutics, Inc. Therapeutic particles suitable for parenteral administration and methods of making and using same
US8512964B2 (en) 2008-12-12 2013-08-20 The Regents Of The University Of California Targets for treatment of hypercholesterolemia
JP2012512175A (ja) 2008-12-15 2012-05-31 バインド バイオサイエンシズ インコーポレイテッド 治療薬を徐放するための長時間循環性ナノ粒子
EA201170940A1 (ru) 2009-01-16 2012-02-28 ГЛЭКСОСМИТКЛАЙН ЭлЭлСи Лечение рака с использованием комбинации бендамустина и анти-cd20-антитела
WO2010084371A1 (en) 2009-01-26 2010-07-29 Mitoprod Novel circular interfering rna molecules
EP3243504A1 (en) 2009-01-29 2017-11-15 Arbutus Biopharma Corporation Improved lipid formulation
WO2010088927A1 (en) 2009-02-09 2010-08-12 Curevac Gmbh Use of pei for the improvement of endosomal release and expression of transfected nucleic acids, complexed with cationic or polycationic compounds
US20140141089A1 (en) 2009-02-11 2014-05-22 Colorado School Of Mines Nanoparticles, Compositions Thereof, and Methods of Use, and Methods of Making the Same
KR20110126717A (ko) 2009-02-24 2011-11-23 더 스크립스 리서치 인스티튜트 단백질 생성 증강을 위한 ｍｒｎａ １차 구조의 재구조화
TWI541021B (zh) 2009-03-05 2016-07-11 艾伯維有限公司 Ｉｌ－１７結合蛋白
US8685458B2 (en) 2009-03-05 2014-04-01 Bend Research, Inc. Pharmaceutical compositions of dextran polymer derivatives
WO2010141135A2 (en) 2009-03-05 2010-12-09 Trustees Of Boston University Bacteriophages expressing antimicrobial peptides and uses thereof
JP2012520085A (ja) 2009-03-13 2012-09-06 エーゲン、インコーポレイテッド 生物活性ｒｎａの送達のための組成物及び方法
US8460696B2 (en) 2009-03-20 2013-06-11 Egen, Inc. Polyamine derivatives
US20120095077A1 (en) 2009-03-23 2012-04-19 University Of Utah Research Foundation Methods and compositions related to modified guanine bases for controlling off-target effects in rna interference
JP5622254B2 (ja) 2009-03-31 2014-11-12 国立大学法人東京大学 二本鎖リボ核酸ポリイオンコンプレックス
HUE026855T2 (en) 2009-04-03 2016-07-28 Univ Chicago Compositions and methods related to protein a (spa) variants
CN107252489A (zh) 2009-04-13 2017-10-17 法国健康和医学研究院 Hpv颗粒及其用途
JP2013525260A (ja) 2009-04-17 2013-06-20 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド 急性骨髄性白血病を治療するための組成物および方法
WO2010123501A1 (en) 2009-04-22 2010-10-28 Massachusetts Institute Of Technology Innate immune suppression enables repeated delivery of long rna molecules
PE20120532A1 (es) 2009-04-27 2012-05-18 Novartis Ag ANTICUERPOS ANTI-ActRIIB
WO2010129033A2 (en) 2009-04-29 2010-11-11 Calmune Corporation Modified antibodies for passive immunotherapy
US8715736B2 (en) 2009-04-30 2014-05-06 Florida Agricultural And Mechanical University Nanoparticle formulations for skin delivery
US8287910B2 (en) 2009-04-30 2012-10-16 Intezyne Technologies, Inc. Polymeric micelles for polynucleotide encapsulation
SG10201911942UA (en) 2009-05-05 2020-02-27 Muthiah Manoharan Lipid compositions
WO2014066811A1 (en) 2012-10-25 2014-05-01 The Johns Hopkins University Bioreducible poly (b-amino ester)s for sirna delivery
DE202009007116U1 (de) 2009-05-18 2010-10-14 Amoena Medizin-Orthopädie-Technik GmbH Antidekubituskissen
US8574835B2 (en) 2009-05-29 2013-11-05 Life Technologies Corporation Scaffolded nucleic acid polymer particles and methods of making and using
EP2440556A1 (en) 2009-06-10 2012-04-18 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of phosphatidylinositol 3-kinase
KR101766408B1 (ko) 2009-06-10 2017-08-10 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 향상된 지질 조성물
JP5894913B2 (ja) 2009-06-15 2016-03-30 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． Ｐｃｓｋ９遺伝子を標的とする、脂質で製剤化されたｄｓｒｎａ
WO2010151664A2 (en) 2009-06-26 2010-12-29 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for treating cancer and modulating stress granule formation
WO2011000107A1 (en) 2009-07-01 2011-01-06 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for delivery of therapeutic agents to solid tumors
US8569256B2 (en) 2009-07-01 2013-10-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
CA2766907A1 (en) * 2009-07-06 2011-01-13 Novartis Ag Self replicating rna molecules and uses thereof
CA2769670C (en) 2009-07-31 2018-10-02 Ethris Gmbh Rna with a combination of unmodified and modified nucleotides for protein expression
EP2281579A1 (en) 2009-08-05 2011-02-09 BioNTech AG Vaccine composition comprising 5'-Cap modified RNA
US20110053829A1 (en) 2009-09-03 2011-03-03 Curevac Gmbh Disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates for the transfection of nucleic acids
US20110070227A1 (en) 2009-09-18 2011-03-24 Anna-Marie Novotney-Barry Treatment of Autoimmune and Inflammatory Diseases
US8859284B2 (en) 2009-10-22 2014-10-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Navy Delivery of nanoparticles to neurons
US8449916B1 (en) 2009-11-06 2013-05-28 Iowa State University Research Foundation, Inc. Antimicrobial compositions and methods
WO2011060250A1 (en) 2009-11-13 2011-05-19 Bend Research, Inc. Cationic dextran polymer derivatives
US9415113B2 (en) 2009-11-18 2016-08-16 University Of Washington Targeting monomers and polymers having targeting blocks
US8530429B2 (en) 2009-11-24 2013-09-10 Arch Cancer Therapeutics, Inc. Brain tumor targeting peptides and methods
EP3318248B1 (en) 2009-12-01 2019-04-10 Translate Bio, Inc. Delivery of mrna for the augmentation of proteins and enzymes in human genetic diseases
US20110245756A1 (en) 2009-12-03 2011-10-06 Rishi Arora Devices for material delivery, electroporation, sonoporation, and/or monitoring electrophysiological activity
DE102009056884B4 (de) 2009-12-03 2021-03-18 Novartis Ag Impfstoff-Adjuvantien und verbesserte Verfahren zur Herstellung derselben
SI2506868T1 (en) 2009-12-06 2018-04-30 Bioverativ Therapeutics Inc. HYPER AND HYBRID POLYPETTIDES FACTOR VIII-FC AND METHODS FOR THEIR USE
US20130189741A1 (en) 2009-12-07 2013-07-25 Cellscript, Inc. Compositions and methods for reprogramming mammalian cells
EP3296398A1 (en) 2009-12-07 2018-03-21 Arbutus Biopharma Corporation Compositions for nucleic acid delivery
US8808982B2 (en) 2009-12-07 2014-08-19 Cellscript, Llc Compositions and methods for reprogramming eukaryotic cells
WO2011069529A1 (en) 2009-12-09 2011-06-16 Curevac Gmbh Mannose-containing solution for lyophilization, transfection and/or injection of nucleic acids
WO2011069528A1 (en) 2009-12-09 2011-06-16 Curevac Gmbh Lyophilization of nucleic acids in lactate-containing solutions
DK2509634T3 (en) 2009-12-11 2019-04-23 Pfizer Stable formulations for lyophilization of therapeutic particles
EP2515942B1 (en) 2009-12-15 2020-02-12 Pfizer Inc. Therapeutic polymeric nanoparticle compositions with high glass transition temperature or high molecular weight copolymers
EA201290497A1 (ru) 2009-12-15 2013-01-30 Байнд Байосайенсиз, Инк. Терапевтические полимерные наночастицы, включающие кортикостероиды, и способы получения таковых
DE102009058769A1 (de) 2009-12-16 2011-06-22 MagForce Nanotechnologies AG, 10589 Temperaturabhängige Aktivierung von katalytischen Nukleinsäuren zur kontrollierten Wirkstofffreisetzung
IN2012DN05099A (es) 2009-12-16 2015-10-09 Brigham & Womens Hospital
EP3494963A1 (en) 2009-12-18 2019-06-12 The University of British Columbia Methods and compositions for delivery of nucleic acids
EP2338520A1 (de) 2009-12-21 2011-06-29 Ludwig Maximilians Universität Konjugat mit Zielfindungsligand und dessen Verwendung
CA3009891C (en) 2009-12-23 2020-09-15 Novartis Ag Lipids, lipid compositions, and methods of using them
US8846631B2 (en) 2010-01-14 2014-09-30 Regulus Therapeutics Inc. MicroRNA compositions and methods
SI2539451T1 (sl) 2010-02-24 2016-04-29 Arrowhead Research Corporation Sestavki za ciljano dostavo sirna
WO2011106702A2 (en) 2010-02-25 2011-09-01 The Johns Hopkins University Sustained delivery of therapeutic agents to an eye compartment
US20130133483A1 (en) 2010-03-08 2013-05-30 University Of Rochester Synthesis of Nanoparticles Using Reducing Gases
WO2011116107A2 (en) 2010-03-16 2011-09-22 University Of Utah Research Foundation Cleavable modifications to reducible poly (amido ethylenimines)s to enhance nucleotide delivery
WO2011116072A1 (en) 2010-03-16 2011-09-22 Escape Therapeutics, Inc. Hybrid hydrogel scaffold compositions and methods of use
US20110230816A1 (en) 2010-03-18 2011-09-22 Tyco Healthcare Group Lp Gels for Transdermal Delivery
US9149432B2 (en) 2010-03-19 2015-10-06 Massachusetts Institute Of Technology Lipid vesicle compositions and methods of use
GB201005005D0 (en) 2010-03-25 2010-05-12 Angeletti P Ist Richerche Bio New vaccine
EP2553019A1 (en) 2010-03-26 2013-02-06 Mersana Therapeutics, Inc. Modified polymers for delivery of polynucleotides, method of manufacture, and methods of use thereof
WO2011119262A1 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Cerulean Pharma Inc. Methods and systems for generating nanoparticles
US20110247090A1 (en) 2010-04-02 2011-10-06 Intrexon Corporation Synthetic 5'UTRs, Expression Vectors, and Methods for Increasing Transgene Expression
EP2555794A4 (en) 2010-04-05 2014-01-15 Univ Chicago COMPOSITIONS AND METHODS RELATING TO PROTEIN A (SPA) ANTIBODIES AS IMMUNE REACTION AMPLIFIERS
US9744228B2 (en) 2010-04-07 2017-08-29 Norvartis Ag Method for generating a parvovirus B19 virus-like particle
US20130037977A1 (en) 2010-04-08 2013-02-14 Paul A. Burke Preparation of Lipid Nanoparticles
US20130071430A1 (en) 2010-04-09 2013-03-21 The University Of Tokyo Microrna-controlled recombinant vaccinia virus and use thereof
US20110250264A1 (en) 2010-04-09 2011-10-13 Pacira Pharmaceuticals, Inc. Method for formulating large diameter synthetic membrane vesicles
KR101196667B1 (ko) 2010-04-15 2012-11-02 포항공과대학교 산학협력단 피에이치 민감성 금속 나노 입자를 이용한 항암제 전달 시스템
EP2377938A1 (en) 2010-04-16 2011-10-19 Eukarys Capping-prone RNA polymerase enzymes and their applications
EP3540059A1 (en) 2010-04-16 2019-09-18 Nuevolution A/S Bi-functional complexes and methods for making and using such complexes
US8802438B2 (en) 2010-04-16 2014-08-12 Children's Medical Center Corporation Compositions, kits, and methods for making induced pluripotent stem cells using synthetic modified RNAs
WO2011133868A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Conformationally restricted dinucleotide monomers and oligonucleotides
AU2011311255B2 (en) 2010-04-28 2015-10-08 Sorrento Therapeutics, Inc. Method for increasing permeability of an epithelial barrier
US20130156845A1 (en) 2010-04-29 2013-06-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated single stranded rna
US20130052644A1 (en) 2010-04-30 2013-02-28 Baltazar Gomez-Mancilla Predictive Markers Useful in the Treatment of Fragile X Syndrome (FXS)
WO2011143230A1 (en) 2010-05-10 2011-11-17 Alnylam Pharmaceuticals Methods and compositions for delivery of active agents
WO2011141704A1 (en) 2010-05-12 2011-11-17 Protiva Biotherapeutics, Inc Novel cyclic cationic lipids and methods of use
US20130123338A1 (en) 2010-05-12 2013-05-16 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel cationic lipids and methods of use thereof
EP2387999A1 (en) 2010-05-21 2011-11-23 CureVac GmbH Histidine-containing solution for transfection and/or injection of nucleic acids and uses thereof
US8802863B2 (en) 2010-05-24 2014-08-12 Sirna Therapeutics, Inc. Amino alcohol cationic lipids for oligonucleotide delivery
DK2575767T3 (en) 2010-06-04 2017-03-13 Sirna Therapeutics Inc HOWEVER UNKNOWN LOW MOLECULAR CATIONIC LIPIDS TO PROCESS OIGONUCLEOTIDES
RU2556800C2 (ru) 2010-06-14 2015-07-20 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Пептиды, проникающие в клетки, и их применения
US20130236968A1 (en) 2010-06-21 2013-09-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery
AU2011268507B2 (en) 2010-06-25 2014-08-14 Novartis Ag Combinations of meningococcal factor H binding proteins
JP5635690B2 (ja) 2010-07-01 2014-12-03 ポステック アカデミー‐インダストリー ファウンデーション 細菌由来マイクロベシクルを用いた癌治療及び癌診断方法
CA2803298C (en) 2010-07-02 2020-07-14 The University Of Chicago Compositions and methods related to protein a (spa) variants
US9770463B2 (en) 2010-07-06 2017-09-26 Glaxosmithkline Biologicals Sa Delivery of RNA to different cell types
ES2646669T3 (es) 2010-07-06 2017-12-14 Glaxosmithkline Biologicals Sa Procedimientos de aumento de una respuesta inmunitaria mediante el suministro de ARN
ES2557382T3 (es) 2010-07-06 2016-01-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa Liposomas con lípidos que tienen un valor de pKa ventajoso para el suministro de ARN
US9192661B2 (en) 2010-07-06 2015-11-24 Novartis Ag Delivery of self-replicating RNA using biodegradable polymer particles
NZ606591A (en) 2010-07-06 2015-02-27 Novartis Ag Cationic oil-in-water emulsions
EP2591114B1 (en) 2010-07-06 2016-06-08 GlaxoSmithKline Biologicals SA Immunisation of large mammals with low doses of rna
MX342608B (es) 2010-07-06 2016-10-06 Novartis Ag * Particulas de suministro similares a viriones para moleculas de arn de autorreplicacion.
EP3508573A1 (en) 2010-07-09 2019-07-10 Bioverativ Therapeutics Inc. Systems for factor viii processing and methods thereof
PL3552619T3 (pl) 2010-07-09 2025-12-01 Bioverativ Therapeutics Inc. Polipeptydy czynnika ix i sposoby ich zastosowania
US20130177523A1 (en) 2010-07-13 2013-07-11 University Of Utah Research Foundation Gold particles and methods of making and using the same in cancer treatment
GB201012410D0 (en) 2010-07-23 2010-09-08 Medical Res Council Intracellular immunity
KR101761388B1 (ko) 2010-07-30 2017-07-25 큐어백 아게 트랜스펙션 및 면역 자극을 위한 이황화-크로스링크된 양이온 성분 및 핵산의 복합체
WO2012019168A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2012021516A2 (en) 2010-08-09 2012-02-16 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Nanoparticle-oligonucletide hybrid structures and methods of use thereof
WO2012019630A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded protein
WO2012024595A2 (en) 2010-08-20 2012-02-23 University Of Washington Circumferential aerosol device for delivering drugs to olfactory epithelium and brain
WO2012023044A1 (en) 2010-08-20 2012-02-23 Novartis Ag Soluble needle arrays for delivery of influenza vaccines
WO2012024526A2 (en) 2010-08-20 2012-02-23 Cerulean Pharma Inc. Conjugates, particles, compositions, and related methods
JP2013541510A (ja) 2010-08-31 2013-11-14 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション 新規の単一の化学物質、およびオリゴヌクレオチドの送達方法
PT3556396T (pt) 2010-08-31 2022-07-04 Scripps Research Inst Anticorpos neutralizantes do vírus da imunodeficiência humana (vih)
SI4043040T1 (sl) 2010-08-31 2023-04-28 Glaxosmithkline Biologicals Sa Mali liposomi za dostavo imunogen-kodirajoče RNA
LT4226941T (lt) 2010-08-31 2025-01-10 Glaxosmithkline Biologicals Sa Pegilintos liposomos, skirtos imunogeną koduojančios rnr pristatymui
MX2013002332A (es) 2010-08-31 2013-03-18 Novartis Ag Lipidos apropiados para suministro liposomal del arn que codifica la proteina.
US9549901B2 (en) 2010-09-03 2017-01-24 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Lipid-polymer hybrid particles
EP2614074A1 (en) 2010-09-09 2013-07-17 The University of Chicago Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens
WO2012034077A2 (en) 2010-09-09 2012-03-15 The University Of Chicago Compositions and methods related to attenuated staphylococcal strains
US10307372B2 (en) 2010-09-10 2019-06-04 The Johns Hopkins University Rapid diffusion of large polymeric nanoparticles in the mammalian brain
US8466122B2 (en) 2010-09-17 2013-06-18 Protiva Biotherapeutics, Inc. Trialkyl cationic lipids and methods of use thereof
CA2809858C (en) 2010-09-20 2019-11-12 Sirna Therapeutics, Inc. Novel low molecular weight cationic lipids for oligonucleotide delivery
US20130183718A1 (en) 2010-09-21 2013-07-18 RibpxX GmbH Method for Synthesizing RNA using DNA Template
BR112013008697A2 (pt) 2010-09-24 2016-06-21 Massachusetts Inst Technology géis nanoestruturados capazes de liberação controlada de agentes encapsulados
WO2012050975A2 (en) 2010-09-29 2012-04-19 The University Of North Carolina At Chapel Hill Novel circular mammalian rna molecules and uses thereof
CA2811430A1 (en) 2010-09-30 2012-04-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Low molecular weight cationic lipids for oligonucleotide delivery
EP2625189B1 (en) 2010-10-01 2018-06-27 ModernaTX, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2013086505A1 (en) 2011-12-09 2013-06-13 Vanderbilt University Integrated organ-on-chip system and applications of the same
WO2012051211A2 (en) 2010-10-11 2012-04-19 Novartis Ag Antigen delivery platforms
CN103167928B (zh) 2010-10-19 2015-01-21 三菱电机株式会社 激光加工机控制装置及激光加工机控制方法
EP3485913A1 (en) 2010-10-21 2019-05-22 Sirna Therapeutics, Inc. Low molecular weight cationic lipids for oligonucleotide delivery
AU2011367817B2 (en) 2010-10-29 2015-05-28 Merck Sharp & Dohme Corp. Recombinant subunit dengue virus vaccine
WO2012061703A1 (en) 2010-11-05 2012-05-10 The Johns Hopkins University Compositions and methods relating to reduced mucoadhesion
JP2014500867A (ja) 2010-11-09 2014-01-16 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 皮膚浸透性および細胞侵入性（ｓｐａｃｅ）ペプチドとその使用法
JP6077450B2 (ja) 2010-11-12 2017-02-08 ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア コンセンサス前立腺抗原、それをコードする核酸分子、ならびにそれを含むワクチンおよび用途
EP2640426B1 (en) 2010-11-16 2016-02-03 Selecta Biosciences, Inc. Immunostimulatory oligonucleotides
SMT201800444T1 (it) 2010-11-17 2018-09-13 Aduro Biotech Inc Metodi e composizioni per indurre una risposta immunitaria contro egfrviii
JP5813778B2 (ja) 2010-11-19 2015-11-17 イデラ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッドＩｄｅｒａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． トール様受容体に基づく免疫反応を調節するための免疫調節オリゴヌクレオチド（ｉｒｏ）化合物
US8853377B2 (en) 2010-11-30 2014-10-07 Shire Human Genetic Therapies, Inc. mRNA for use in treatment of human genetic diseases
WO2012072096A1 (en) 2010-12-03 2012-06-07 Biontech Ag Method for cellular rna expression
EP2651445A2 (en) 2010-12-16 2013-10-23 SPRNA GmbH Pharmaceutical composition consisting of rna having alkali metal as counter ion and formulated with dications
US8501930B2 (en) 2010-12-17 2013-08-06 Arrowhead Madison Inc. Peptide-based in vivo siRNA delivery system
CA2825370A1 (en) 2010-12-22 2012-06-28 President And Fellows Of Harvard College Continuous directed evolution
CA3131967A1 (en) 2010-12-29 2012-07-05 F. Hoffman-La Roche Ag Small molecule conjugates for intracellular delivery of nucleic acids
WO2012089225A1 (en) 2010-12-29 2012-07-05 Curevac Gmbh Combination of vaccination and inhibition of mhc class i restricted antigen presentation
WO2012094304A1 (en) 2011-01-04 2012-07-12 Brown University Nanotubes as carriers of nucleic acids into cells
WO2012094574A2 (en) 2011-01-06 2012-07-12 The Johns Hopkins University Stabilized polyribonucleotide nanoparticles
WO2012094653A2 (en) 2011-01-07 2012-07-12 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for macromolecular drug delivery
CA2824526C (en) 2011-01-11 2020-07-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Pegylated lipids and their use for drug delivery
WO2012099805A2 (en) 2011-01-19 2012-07-26 Ocean Nanotech, Llc Nanoparticle based immunological stimulation
US20140065172A1 (en) 2011-01-26 2014-03-06 Cenix Bioscience Gmbh Delivery system and conjugates for compound delivery via naturally occurring intracellular transport routes
US10363309B2 (en) 2011-02-04 2019-07-30 Case Western Reserve University Targeted nanoparticle conjugates
WO2012109121A1 (en) 2011-02-07 2012-08-16 Purdue Research Foundation Carbohydrate nanoparticles for prolonged efficacy of antimicrobial peptide
WO2012116715A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in newborns and infants
US20120207840A1 (en) 2011-02-10 2012-08-16 Aura Biosciences, Inc. Virion Derived Protein Nanoparticles For Delivering Diagnostic Or Therapeutic Agents For The Treatment Of Non-Melanoma Skin Cancer
WO2012112582A2 (en) 2011-02-14 2012-08-23 Swift Biosciences, Inc. Polynucleotide primers and probes
WO2012112689A1 (en) 2011-02-15 2012-08-23 The University Of North Carolina At Chapel Hill Nanoparticle, liposomes, polymers, agents and proteins modified with reversible linkers
WO2012112730A2 (en) 2011-02-15 2012-08-23 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for delivering nucleic acid to a cell
EP2489371A1 (en) 2011-02-18 2012-08-22 Instituto Nacional de Investigacion y Tecnologia Agraria y Alimentaria Carrier peptides for drug delivery
WO2012113413A1 (en) 2011-02-21 2012-08-30 Curevac Gmbh Vaccine composition comprising complexed immunostimulatory nucleic acids and antigens packaged with disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates
US8865881B2 (en) 2011-02-22 2014-10-21 California Institute Of Technology Delivery of proteins using adeno-associated virus (AAV) vectors
US8696637B2 (en) 2011-02-28 2014-04-15 Kimberly-Clark Worldwide Transdermal patch containing microneedles
WO2012116714A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in elderly patients
WO2012117377A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Novartis Ag Combination vaccines with lower doses of antigen and/or adjuvant
CN103502436A (zh) 2011-03-07 2014-01-08 麻省理工学院 用核酸转染细胞的方法
WO2012125680A1 (en) 2011-03-16 2012-09-20 Novartis Ag Methods of treating vasculitis using an il-17 binding molecule
WO2012125987A2 (en) 2011-03-17 2012-09-20 Massachusetts Institute Of Technology Delivery system
AU2012229107A1 (en) 2011-03-17 2013-09-19 Novartis Ag FGFR and ligands thereof as biomarkers for breast cancer in HR positive subjects
WO2012129483A1 (en) 2011-03-24 2012-09-27 Novartis Ag Adjuvant nanoemulsions with phospholipids
EP2691443B1 (en) 2011-03-28 2021-02-17 Massachusetts Institute of Technology Conjugated lipomers and uses thereof
US20140005070A1 (en) 2011-03-28 2014-01-02 Novartis Ag Markers associated with cyclin-dependent kinase inhibitors
AU2012236099A1 (en) 2011-03-31 2013-10-03 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
EP3460064B8 (en) 2011-04-03 2024-03-20 The General Hospital Corporation d/b/a Massachusetts General Hospital Efficient protein expression in vivo using modified rna (mod-rna)
EP2694524B1 (en) 2011-04-04 2016-05-18 The U.S.A. As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services 2'-o-aminooxymethyl nucleoside derivatives for use in the synthesis and modification of nucleosides, nucleotides and oligonucleotides
WO2012142132A1 (en) 2011-04-11 2012-10-18 Life Technologies Corporation Polymer particles and methods of making and using same
EP2696855B1 (en) 2011-04-13 2021-06-02 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Coated mesoporous nanoparticles
WO2013158127A1 (en) 2012-04-16 2013-10-24 Molecular Transfer, Inc. Agents for improved delivery of nucleic acids to eukaryotic cells
US20140178894A1 (en) 2011-04-20 2014-06-26 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Culture medium suitable for the culture of undifferentiated cells
JP2014518620A (ja) 2011-04-26 2014-08-07 モレキュラー エクスプレス，インコーポレイテッド リポソーム製剤
AU2012249474A1 (en) 2011-04-28 2013-11-07 Stc.Unm Porous nanoparticle-supported lipid bilayers (protocells) for targeted delivery and methods of using same
EP2702075A4 (en) 2011-04-28 2015-04-22 Jackson H M Found Military Med NEUTRALIZING ANTIBODIES TO NIPAH AND HENDRA VIRUSES
WO2012149246A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 Novartis Ag Methods of treating squamous cell carcinoma related applications
MX374963B (es) 2011-04-29 2025-03-06 Selecta Biosciences Inc Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para reducir las respuestas de anticuerpos.
UA116189C2 (uk) 2011-05-02 2018-02-26 Мілленніум Фармасьютікалз, Інк. КОМПОЗИЦІЯ АНТИ-α4β7 АНТИТІЛА
PL2705143T3 (pl) 2011-05-02 2021-07-19 Wayne State University Technologia indukowanych białkiem komórek pluripotencjalnych, jej zastosowania
US8945588B2 (en) 2011-05-06 2015-02-03 The University Of Chicago Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens, such as EBH polypeptides
EP2707116A1 (de) 2011-05-10 2014-03-19 Basf Se Öl-in-wasser-emulsionen
CN103687624B (zh) 2011-05-11 2018-02-02 雷蒙特亚特特拉维夫大学有限公司 靶向的聚合缀合物和其用途
ES2762224T3 (es) 2011-05-12 2020-05-22 Yissum Res Dev Co Of Hebrew Univ Jerusalem Ltd Liposomas que comprenden lípidos conjugados con polímero y usos relacionados
US20140072657A1 (en) 2011-05-12 2014-03-13 Helmut Vockner Novel pharmaceutical formulation
CA2835644C (en) 2011-05-13 2021-06-15 Novartis Ag Pre-fusion rsv f antigens
US8691750B2 (en) 2011-05-17 2014-04-08 Axolabs Gmbh Lipids and compositions for intracellular delivery of biologically active compounds
CA2835428A1 (en) 2011-05-17 2012-11-22 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof for non-human vertebrates
WO2012162174A1 (en) 2011-05-20 2012-11-29 Kohler Co. Toilet installation system and method
PL3892295T3 (pl) 2011-05-24 2023-07-24 BioNTech SE Zindywidualizowane szczepionki przeciwnowotworowe
MX340453B (es) 2011-05-25 2016-07-08 Novartis Ag Biomarcadores para cancer de pulmon.
US20140308363A1 (en) 2011-05-31 2014-10-16 Bind Therapeutics, Inc. Drug loaded polymeric nanoparticles and methods of making and using same
SG194800A1 (en) 2011-06-02 2013-12-30 Novartis Ag Biomarkers for hedgehog inhibitor therapy
EP2714017B1 (en) 2011-06-02 2018-08-01 The Regents of The University of California Membrane encapsulated nanoparticles and method of use
US9181553B2 (en) 2011-06-06 2015-11-10 Novartis Forschungsstiftung Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Method of treatment of breast cancers over-expressing the SHP2 signature genes
ES2795110T3 (es) 2011-06-08 2020-11-20 Translate Bio Inc Lípidos escindibles
RU2013154295A (ru) 2011-06-08 2015-07-20 Шир Хьюман Дженетик Терапис, Инк. КОМПОЗИЦИИ ЛИПИДНЫХ НАНОЧАСТИЦ И СПОСОБЫ ДЛЯ ДОСТАВКИ мРНК
WO2012170607A2 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Novartis Ag Use of pcsk9 antagonists
US8636696B2 (en) 2011-06-10 2014-01-28 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Transdermal device containing microneedles
WO2012168491A1 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Novartis Ag Pharmaceutical formulations of pcsk9 antagonists
PE20140576A1 (es) 2011-06-10 2014-05-24 Novartis Ag Vacunas bovinas y metodos
US8916696B2 (en) 2011-06-12 2014-12-23 City Of Hope Aptamer-mRNA conjugates for targeted protein or peptide expression and methods for their use
WO2012172495A1 (en) 2011-06-14 2012-12-20 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting tem8
CN103717249B (zh) 2011-06-15 2017-03-22 克洛恩泰克制药股份公司 注射针和装置
BR112013031762A2 (pt) 2011-06-16 2016-09-13 Novartis Ag proteínas solúveis para utilização como terapêuticos
US9580475B2 (en) 2011-06-20 2017-02-28 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Computationally optimized broadly reactive antigens for H1N1 influenza
WO2013003475A1 (en) 2011-06-27 2013-01-03 Cellscript, Inc. Inhibition of innate immune response
CA2837214C (en) 2011-06-28 2021-06-01 Inovio Pharmaceuticals, Inc. A minimally invasive dermal electroporation device
JP6472999B2 (ja) 2011-07-01 2019-02-20 ノバルティス アーゲー 代謝障害を治療するための方法
WO2013003887A1 (en) 2011-07-04 2013-01-10 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Nucleic acid complex
MX350258B (es) 2011-07-06 2017-08-31 Novartis Ag Emulsiones cationicas de aceite en agua.
EP4115875A1 (en) 2011-07-06 2023-01-11 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Liposomes having useful n:p ratio for delivery of rna molecules
CA2841047A1 (en) 2011-07-06 2013-01-10 Novartis Ag Immunogenic compositions and uses thereof
EP2729165B1 (en) 2011-07-06 2017-11-08 GlaxoSmithKline Biologicals SA Immunogenic combination compositions and uses thereof
JP6059220B2 (ja) 2011-07-06 2017-01-18 ノバルティス アーゲー 核酸を含む水中油型エマルジョン
EP2729501A2 (en) 2011-07-07 2014-05-14 Life Technologies Corporation Polymer particles, nucleic acid polymer particles and methods of making and using the same
WO2013009717A1 (en) 2011-07-10 2013-01-17 Elisabet De Los Pinos Virion derived protein nanoparticles for delivering diagnostic or therapeutic agents for the treatment of skin-related diseases
US9617392B2 (en) 2011-07-10 2017-04-11 President And Fellows Of Harvard College Compositions and methods for self-assembly of polymers with complementary macroscopic and microscopic scale units
US20130012566A1 (en) 2011-07-10 2013-01-10 Aura Biosciences, Inc. Virion Derived Protein Nanoparticles For Delivering Diagnostic Or Therapeutic Agents For The Treatment of Alopecia
GB2492999A (en) 2011-07-20 2013-01-23 Univ Central Lancashire Neutron detector
US20140148503A1 (en) 2011-07-20 2014-05-29 University Of Iowa Research Foundation Nucleic acid aptamers
WO2013012476A2 (en) 2011-07-21 2013-01-24 Arizona Chemical Company, Llc Branched polyether-polyamide block copolymers and methods of making and using the same
ES2687129T3 (es) 2011-07-25 2018-10-23 Glaxosmithkline Biologicals Sa Composiciones y métodos para evaluar la inmunogenicidad funcional de vacunas contra parvovirus
US9493549B2 (en) 2011-07-25 2016-11-15 The Rockefeller University Antibodies directed toward the HIV-1 GP120 CD4 binding site with increased potency and breadth
KR20140050698A (ko) 2011-07-29 2014-04-29 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. 체액성 및 세포독성 t 림프구(ctl) 면역 반응을 발생시키는 합성 나노운반체
BR112014003315A2 (pt) 2011-08-15 2017-03-01 Univ Chicago composições e métodos relacionados a anticorpos para a proteína a estafilocócica
WO2013032829A1 (en) 2011-08-26 2013-03-07 Arrowhead Research Corporation Poly(vinyl ester) polymers for in vivo nucleic acid delivery
MX366055B (es) 2011-08-31 2019-06-26 Novartis Ag Liposomas pegilados para admistracion de acido ribonucleico (arn) que codifica para inmunogeno.
US9126966B2 (en) 2011-08-31 2015-09-08 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods of use thereof
JP2014527071A (ja) 2011-08-31 2014-10-09 マリンクロッド エルエルシー Ｈ−ホスホネートによるナノ粒子ｐｅｇの改変
WO2013033620A1 (en) 2011-09-01 2013-03-07 Irm Llc Compounds and compositions as pdgfr kinase inhibitors
CA3185394A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Organic compositions to treat hsf1-related diseases
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2013039861A2 (en) 2011-09-12 2013-03-21 modeRNA Therapeutics Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP2755986A4 (en) 2011-09-12 2015-05-20 Moderna Therapeutics Inc MANIPULATED NUCLEIC ACIDS AND METHOD OF APPLICATION THEREFOR
US9358284B2 (en) 2011-09-14 2016-06-07 Glaxosmithkline Biologicals Sa Methods for making saccharide-protein glycoconjugates
CN103946952A (zh) 2011-09-16 2014-07-23 宾夕法尼亚大学董事会 用于治疗癌症的rna改造的t细胞
EP2747761A1 (en) 2011-09-22 2014-07-02 Bind Therapeutics, Inc. Methods of treating cancers with therapeutic nanoparticles
WO2013072929A2 (en) 2011-09-23 2013-05-23 Indian Institute Of Technology Nanop article based cosmetic composition
TWI593708B (zh) 2011-09-26 2017-08-01 諾華公司 治療代謝病症之融合蛋白質
UY34347A (es) 2011-09-26 2013-04-30 Novartis Ag Proteínas de función dual para tratar trastornos metabólicos
EP3456317B1 (en) 2011-09-27 2025-09-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Di-aliphatic substituted pegylated lipids
WO2013045505A1 (en) 2011-09-28 2013-04-04 Novartis Ag Biomarkers for raas combination therapy
DE19216461T1 (de) 2011-10-03 2021-10-07 Modernatx, Inc. Modifizierte nukleoside, nukleotide und nukleinsäuren und verwendungen davon
WO2013055971A1 (en) 2011-10-11 2013-04-18 Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University Polymers for delivering a substance into a cell
RU2014118727A (ru) 2011-10-11 2015-11-20 Новартис Аг Рекомбинантные самореплицирующиеся полицистронные молекулы рнк
WO2013055331A1 (en) 2011-10-12 2013-04-18 The Curators Of The University Of Missouri Pentablock polymers
EP2765997A4 (en) 2011-10-14 2015-06-24 Stc Unm POROUS NANOPARTICLE-SUPPORTED LIPID DOUBLE LAYERS (PROTOCOLS) FOR THE TARGETED RELEASE BY TRANSDERMAL RELEASE AND USE METHOD THEREFOR
WO2013054307A2 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Novartis Ag Antibodies and methods for wnt pathway-related diseases
AU2012326010B2 (en) 2011-10-18 2017-05-11 Micell Technologies, Inc. Drug delivery medical device
CN107266391B (zh) 2011-10-18 2020-04-17 迪克纳制药公司 胺阳离子脂质及其用途
EP2768528A1 (en) 2011-10-20 2014-08-27 Novartis AG Adjuvanted influenza b virus vaccines for pediatric priming
ES2776996T3 (es) 2011-10-20 2020-08-03 Novartis Ag Biomarcadores predictivos de la sensibilidad al tratamiento por el activador del receptor de la acetilcolina nicotínico alfa 7
WO2013059922A1 (en) 2011-10-25 2013-05-02 The University Of British Columbia Limit size lipid nanoparticles and related methods
WO2013061290A1 (en) 2011-10-26 2013-05-02 Nanopass Technologies Ltd. Microneedle intradermal drug delivery device with auto-disable functionality
BR112014009713A2 (pt) 2011-10-27 2017-04-18 Kimberly Clark Co administração transdérmica de agentes bioativos de alta viscosidade
PE20181541A1 (es) 2011-10-27 2018-09-26 Massachusetts Inst Technology Derivados de aminoacidos funcionalizados en la terminal n capaces de formar microesferas encapsuladoras de farmaco
WO2013062140A1 (en) 2011-10-28 2013-05-02 Kyoto University Method for efficiently inducing differentiation of pluripotent stem cells into hepatic lineage cells
CN108771655A (zh) 2011-10-28 2018-11-09 诚信生物公司 含有氨基酸的蛋白质制剂
EP2771043A4 (en) 2011-10-28 2015-04-29 Presage Biosciences Inc ACTIVE RELEASE PROCEDURE
CN104023793B (zh) 2011-10-31 2017-11-24 马林克罗特有限公司 用于治疗癌症的联合脂质体组合物
ES2936387T3 (es) 2011-10-31 2023-03-16 Hoffmann La Roche Formulaciones de anticuerpos anti-il13
EP3485875A1 (en) 2011-11-04 2019-05-22 Nitto Denko Corporation Single use system for sterelily producing lipid-nucleic acid particles
ES2666856T3 (es) 2011-11-04 2018-05-08 Novartis Ag Proteína 6 relacionada con lipoproteínas de baja densidad (LRP6) - constructos extensores de la vida media
US9872870B2 (en) 2011-11-04 2018-01-23 University Of Notre Dame Du Lac Multifunctional micellar nanoparticle-based drug and targeting agent system
JP6143269B2 (ja) 2011-11-04 2017-06-07 エージェンシー フォー サイエンス，テクノロジー アンド リサーチ 自己組織化複合超小型ペプチドポリマーヒドロゲル
US9579338B2 (en) 2011-11-04 2017-02-28 Nitto Denko Corporation Method of producing lipid nanoparticles for drug delivery
US20130115247A1 (en) 2011-11-05 2013-05-09 Aura Biosciences, Inc. Virion Derived Protein Nanoparticles For Delivering Radioisotopes For The Diagnosis And Treatment Of Malignant And Systemic Disease And The Monitoring Of Therapy
US20130116408A1 (en) 2011-11-05 2013-05-09 Aura Biosciences, Inc. Virion Derived Protein Nanoparticles For Delivering Radioisotopes For The Diagnosis And Treatment Of Malignant And Systemic Disease And The Monitoring Of Therapy
US20140294732A1 (en) 2011-11-08 2014-10-02 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute Early diagnostic of neurodegenerative diseases
EP2776459A1 (en) 2011-11-08 2014-09-17 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Rod cell-specific promoter
US9849087B2 (en) 2011-11-08 2017-12-26 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Methods and compositions for X-ray induced release from pH sensitive liposomes
US20140314787A1 (en) 2011-11-08 2014-10-23 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute Treatment for neurodegenerative diseases
WO2013070653A1 (en) 2011-11-09 2013-05-16 Board Of Trustees Michigan State University Metallic nanoparticle synthesis with carbohydrate capping agent
CA2889659C (en) 2011-11-11 2023-03-14 Variation Biotechnologies Inc. Compositions and methods for treatment of cytomegalovirus
WO2013071047A1 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Children's Medical Center Corporation Compositions and methods for in vitro transcription of rna
CN104271155A (zh) 2011-11-14 2015-01-07 诺华股份有限公司 聚阴离子卡波姆和Env多肽的免疫原性复合物及其制造方法和用途
US20140343128A1 (en) 2011-11-15 2014-11-20 Novartis Ag Combination of a phosphoinositide 3-kinase inhibitor and a modulator of the Janus Kinase 2 - Signal Transducer and Activator of Transcription 5 pathway
ES2985784T3 (es) 2011-11-18 2024-11-07 Regeneron Pharma Micropartículas de proteínas recubiertas con polímeros para formulaciones de liberación prolongada para su uso en el humor vítreo del ojo para tratar trastornos oculares vasculares
EP2783014A1 (en) 2011-11-21 2014-10-01 Novartis AG Methods of treating psoriatic arthritis (psa) using il-17 antagonists and psa response or non- response alleles
WO2013078199A2 (en) 2011-11-23 2013-05-30 Children's Medical Center Corporation Methods for enhanced in vivo delivery of synthetic, modified rnas
WO2013082111A2 (en) 2011-11-29 2013-06-06 The University Of North Carolina At Chapel Hill Geometrically engineered particles and methods for modulating macrophage or immune responses
KR102143482B1 (ko) 2011-11-30 2020-08-11 쓰리엠 이노베이티브 프로퍼티즈 컴파니 펩티드 치료제 및 아미노산을 포함하는 마이크로니들 장치, 이의 제조 및 사용 방법
US9364549B2 (en) 2011-11-30 2016-06-14 Andreas Voigt Hydrophobic drug-delivery material, method for manufacturing thereof and methods for delivery of a drug-delivery composition
US20130142781A1 (en) 2011-12-02 2013-06-06 Invivo Therapeutics Corporation Peg based hydrogel for peripheral nerve injury applications and compositions and method of use of synthetic hydrogel sealants
JP2015500241A (ja) 2011-12-02 2015-01-05 ペガサス ラボラトリーズ インコーポレイテッド 両親媒性脂質をベースとする徐放性組成物
WO2013082529A1 (en) 2011-12-02 2013-06-06 Yale University Enzymatic synthesis of poly(amine-co-esters) and methods of use thereof for gene delivery
AU2012347919B2 (en) 2011-12-05 2017-02-02 Factor Bioscience Inc. Methods and products for transfecting cells
US9814867B2 (en) 2011-12-05 2017-11-14 Nano Precision Medical, Inc. Device having titania nanotube membrane for drug delivery
US8497124B2 (en) 2011-12-05 2013-07-30 Factor Bioscience Inc. Methods and products for reprogramming cells to a less differentiated state
GB201121070D0 (en) 2011-12-07 2012-01-18 Isis Innovation composition for delivery of biotherapeutics
AU2012347605B2 (en) 2011-12-07 2017-09-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Branched alkyl and cycloalkyl terminated biodegradable lipids for the delivery of active agents
WO2013086373A1 (en) 2011-12-07 2013-06-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipids for the delivery of active agents
WO2013086354A1 (en) 2011-12-07 2013-06-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Biodegradable lipids for the delivery of active agents
US9725687B2 (en) 2011-12-09 2017-08-08 President And Fellows Of Harvard College Integrated human organ-on-chip microphysiological systems
US10087422B2 (en) 2011-12-09 2018-10-02 President And Fellows Of Harvard College Organ chips and uses thereof
EP2787977A4 (en) 2011-12-09 2015-05-06 Univ California LIPOSOMAL ACTIVE INVERTING
JP6182457B2 (ja) 2011-12-12 2017-08-16 協和発酵キリン株式会社 カチオン性脂質を含有するドラックデリバリーシステムのための脂質ナノ粒子
KR20140111272A (ko) 2011-12-12 2014-09-18 교와 핫꼬 기린 가부시키가이샤 양이온성 지질의 조합을 함유하는 지질 나노 입자
JP6407028B2 (ja) 2011-12-12 2018-10-17 ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア ＭＲＳＡのＰＢＰ２ａ及びその断片を含むタンパク質、それをコードする核酸、並びにＭＲＳＡ感染を予防する及び治療するための組成物及びそれらの使用
US20150000936A1 (en) 2011-12-13 2015-01-01 Schlumberger Technology Corporation Energization of an element with a thermally expandable material
EP2604253A1 (en) 2011-12-13 2013-06-19 Otto Glatter Water-in-oil emulsions and methods for their preparation
RU2664698C2 (ru) 2011-12-13 2018-08-21 Энджинеик Молекьюлар Деливери Пти Лтд Полученные из бактерий интактные мини-клетки для доставки лекарственных средств к опухолям мозга
WO2013130161A1 (en) 2011-12-14 2013-09-06 modeRNA Therapeutics Methods of responding to a biothreat
WO2013090186A1 (en) 2011-12-14 2013-06-20 modeRNA Therapeutics Modified nucleic acids, and acute care uses thereof
WO2013090897A1 (en) 2011-12-15 2013-06-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Using adaptive immunity to detect drug resistance
WO2013087083A1 (en) 2011-12-15 2013-06-20 Biontech Ag Particles comprising single stranded rna and double stranded rna for immunomodulation
AU2012351948A1 (en) 2011-12-16 2014-07-10 Allergan, Inc. Ophthalmic compositions comprising polyvinyl capralactam - polyvinyl acetate - polyethylene glycol graft copolymer
EP2791170A1 (en) 2011-12-16 2014-10-22 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Compounds and methods for treating inflammatory diseases
IN2014DN05912A (es) 2011-12-16 2015-06-05 Massachusetts Inst Technology
CA3018046A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
WO2013090601A2 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Massachusetts Institute Of Technology Compact nanoparticles for biological applications
RU2615076C2 (ru) 2011-12-16 2017-04-03 Новартис Аг Устройство аэрозолизации для независимой от профиля вдоха доставки лекарственного средства
EP2794701B1 (en) 2011-12-19 2017-03-08 The University Of Sydney A peptide-hydrogel composite
US9241829B2 (en) 2011-12-20 2016-01-26 Abbott Medical Optics Inc. Implantable intraocular drug delivery apparatus, system and method
CN104968354A (zh) 2011-12-21 2015-10-07 现代治疗公司 增加器官或器官外植体的活力或寿命的方法
US20130195851A1 (en) 2011-12-23 2013-08-01 Genentech, Inc. Articles of manufacture and methods for co-administration of antibodies
KR101963230B1 (ko) 2011-12-26 2019-03-29 삼성전자주식회사 복수개의 단일 항체를 포함하는 단백질 복합체
WO2013101908A1 (en) 2011-12-27 2013-07-04 Massachusetts Institute Of Technology Microneedle devices and uses thereof
WO2013101690A1 (en) 2011-12-29 2013-07-04 modeRNA Therapeutics Modified mrnas encoding cell-penetrating polypeptides
JP2015505309A (ja) 2011-12-29 2015-02-19 ノバルティス アーゲー 髄膜炎菌ｈ因子結合タンパク質のアジュバントされた組み合わせ
EP3144389B1 (en) 2011-12-30 2018-05-09 Cellscript, Llc Making and using in vitro-synthesized ssrna for introducing into mammalian cells to induce a biological or biochemical effect
MX367352B (es) 2012-01-06 2019-08-16 Gemphire Therapeutics Inc Metodos para reducir el riesgo de padecer una enfermedad cardiovascular.
US20150030576A1 (en) 2012-01-10 2015-01-29 Moderna Therapeutics, Inc. Methods and compositions for targeting agents into and across the blood-brain barrier
KR20140128966A (ko) 2012-01-26 2014-11-06 라이프 테크놀로지스 코포레이션 바이러스의 감염성을 증가시키는 방법
AU2013212068B2 (en) 2012-01-26 2018-02-15 Life Technologies Corporation Methods for increasing the infectivity of viruses
EP2623121A1 (en) 2012-01-31 2013-08-07 Bayer Innovation GmbH Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and an antigen
WO2013113325A1 (en) 2012-01-31 2013-08-08 Curevac Gmbh Negatively charged nucleic acid comprising complexes for immunostimulation
WO2013113326A1 (en) 2012-01-31 2013-08-08 Curevac Gmbh Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and at least one protein or peptide antigen
CN104245745B (zh) 2012-02-09 2017-03-29 生命技术公司 亲水性聚合物颗粒及其制备方法
US20140037573A1 (en) 2012-02-22 2014-02-06 Cerulean Pharma Inc. Conjugates, particles, compositions, and related methods
US20130243867A1 (en) 2012-02-23 2013-09-19 University Of South Florida (A Florida Non-Profit Corporation) Micelle compositions and methods for their use
US20130224268A1 (en) 2012-02-27 2013-08-29 Newgen Biopharma Corp. Topical delivery of hormonal and non hormonal nano formulations, methods of making and using the same
MX353382B (es) 2012-03-01 2018-01-10 Amgen Res Munich Gmbh Moleculas de union polipeptido de larga duracion.
CN104271149B (zh) 2012-03-13 2016-03-16 夸祖鲁-纳塔尔大学 经皮递送装置
US10322089B2 (en) 2012-03-14 2019-06-18 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Nanoparticles, nanoparticle delivery methods, and systems of delivery
US8962577B2 (en) 2012-03-16 2015-02-24 The Johns Hopkins University Controlled release formulations for the delivery of HIF-1 inhibitors
AU2013231638B2 (en) 2012-03-16 2017-10-12 Merck Patent Gmbh Targeting aminoacid lipids
JP6138904B2 (ja) 2012-03-16 2017-05-31 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー 活性剤の送達のための非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲート
US9610346B2 (en) 2012-03-23 2017-04-04 International Aids Vaccine Initiative Recombinant viral vectors
WO2013142349A1 (en) 2012-03-23 2013-09-26 University Of Chicago Compositions and methods related to staphylococcal sbi
WO2013143555A1 (en) 2012-03-26 2013-10-03 Biontech Ag Rna formulation for immunotherapy
US9717685B2 (en) 2012-03-26 2017-08-01 President And Fellows Of Harvard College Lipid-coated nucleic acid nanostructures of defined shape
AU2013240051B2 (en) 2012-03-27 2017-11-30 Sirna Therapeutics, Inc. Diether based biodegradable cationic lipids for siRNA delivery
SG11201405542UA (en) 2012-03-27 2014-10-30 Curevac Gmbh Artificial nucleic acid molecules
MX362981B (es) 2012-03-27 2019-02-28 Curevac Ag Moleculas artificiales de acido nucleico para la expresion mejorada de proteina o peptido.
WO2013143700A2 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Curevac Gmbh Artificial nucleic acid molecules comprising a 5'top utr
AU2013237874B2 (en) 2012-03-29 2018-01-18 Translate Bio, Inc. Lipid-derived neutral nanoparticles
CN104411338A (zh) 2012-04-02 2015-03-11 现代治疗公司 用于产生与人类疾病相关的生物制剂和蛋白质的修饰多核苷酸
WO2013151665A2 (en) 2012-04-02 2013-10-10 modeRNA Therapeutics Modified polynucleotides for the production of proteins associated with human disease
US9254311B2 (en) 2012-04-02 2016-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
US20150050354A1 (en) 2012-04-02 2015-02-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the treatment of otic diseases and conditions
US20140275229A1 (en) 2012-04-02 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides encoding udp glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide a1
WO2013151650A1 (en) 2012-04-05 2013-10-10 University Of Florida Research Foundation, Inc. Neurophilic nanoparticles
JP6375289B2 (ja) 2012-04-05 2018-08-15 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー 免疫刺激組成物およびその使用方法
WO2013152351A2 (en) 2012-04-06 2013-10-10 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Fusion polypeptides and methods of use thereof
RU2635466C2 (ru) 2012-04-08 2017-11-13 Теракоат Лтд Препараты термообратимого гидрогеля для применения при лечении нарушений уротелия
NZ700397A (en) 2012-04-11 2016-02-26 Intezyne Technologies Inc Block copolymers for stable micelles
CA2869748C (en) 2012-04-12 2017-10-24 Yale University Vehicles for controlled delivery of different pharmaceutical agents
US11001797B2 (en) 2012-04-13 2021-05-11 President And Fellows Of Harvard College Devices and methods for in vitro aerosol delivery
WO2013154766A1 (en) 2012-04-13 2013-10-17 New York University Microrna control of ldl receptor pathway
CA2842041A1 (en) 2012-04-18 2013-10-24 Arrowhead Research Corporation Poly(acrylate) polymers for in vivo nucleic acid delivery
AU2013249548A1 (en) 2012-04-19 2014-11-06 Sirna Therapeutics, Inc. Novel diester and triester based low molecular weight, biodegradable cationic lipids for oligonucleotide delivery
EP2841056A4 (en) 2012-04-23 2015-09-16 Massachusetts Inst Technology STABLE LAYER COATED PARTICLES
EA030211B1 (ru) 2012-04-25 2018-07-31 Регьюлэс Терапьютикс Инк. Соединения на основе микрорнк и способы модулирования активности mir-21
JP6360039B2 (ja) 2012-05-03 2018-07-18 カラ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 複数の被覆された粒子を含む組成物、医薬組成物、医薬製剤、及び当該粒子の形成方法
AU2013256008B2 (en) 2012-05-04 2016-02-25 The Johns Hopkins University Lipid-based drug carriers for rapid penetration through mucus linings
WO2013173657A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Micell Technologies, Inc. Low burst sustained release lipophilic and biologic agent compositions
US9399672B2 (en) 2012-05-17 2016-07-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Hepatitis C virus neutralizing antibody
WO2013173693A1 (en) 2012-05-18 2013-11-21 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Nanoparticles with enhanced entry into cancer cells
EP2852380A4 (en) 2012-05-23 2016-01-20 Univ Ohio State LIPID-COATED ALBUMIN NANOPARTICLE COMPOSITIONS AND METHOD FOR THE PREPARATION AND METHOD OF USE THEREOF
WO2013174409A1 (en) 2012-05-25 2013-11-28 Curevac Gmbh Reversible immobilization and/or controlled release of nucleic acid containing nanoparticles by (biodegradable) polymer coatings
WO2013184945A1 (en) 2012-06-06 2013-12-12 Loma Vista Medical, Inc. Inflatable medical devices
US20150126589A1 (en) 2012-06-08 2015-05-07 Ethris Gmbh Pulmonary Delivery of Messenger RNA
EP2858679B2 (en) 2012-06-08 2024-06-05 Translate Bio, Inc. Pulmonary delivery of mrna to non-lung target cells
HRP20181855T1 (hr) 2012-06-08 2018-12-28 Nitto Denko Corporation Lipidi za formulacije namijenjene unosu terapijskog sredstva
US20150218252A1 (en) 2012-06-20 2015-08-06 President And Fellows Of Harvard College Self-assembling peptides, peptide nanostructures and uses thereof
US9993439B2 (en) 2012-06-20 2018-06-12 University Of Waterloo Mucoadhesive nanoparticle delivery system
ES2729603T3 (es) 2012-06-27 2019-11-05 Merck Sharp & Dohme Anticuerpos IL-23 antihumanos cristalinos
US9150841B2 (en) 2012-06-29 2015-10-06 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Cells for producing recombinant iduronate-2-sulfatase
WO2014008334A1 (en) 2012-07-06 2014-01-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Stable non-aggregating nucleic acid lipid particle formulations
US9956291B2 (en) 2012-07-10 2018-05-01 Shaker A. Mousa Nanoformulation and methods of use of thyroid receptor beta1 agonists for liver targeting
EP2872120B1 (en) 2012-07-16 2017-05-03 Nanoderm Sciences, Inc. Therapeutic nanoparticles with a polymyxin b as targeting agent
EP2687252A1 (en) 2012-07-17 2014-01-22 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Drug delivery device
EP2687251A1 (en) 2012-07-17 2014-01-22 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Drug delivery device
CN112587671A (zh) 2012-07-18 2021-04-02 博笛生物科技有限公司 癌症的靶向免疫治疗
WO2014015334A1 (en) 2012-07-20 2014-01-23 Brown University System and methods for nanostructure protected delivery of treatment agent and selective release thereof
WO2014018675A1 (en) 2012-07-24 2014-01-30 President And Fellows Of Harvard College Self-assembly of nucleic acid nanostructures
GB201213624D0 (en) 2012-07-27 2012-09-12 Univ Ulster The Method and system for production of conjugated nanoparticles
WO2014015422A1 (en) 2012-07-27 2014-01-30 Ontario Institute For Cancer Research Cellulose-based nanoparticles for drug delivery
WO2014025795A1 (en) 2012-08-07 2014-02-13 Northeastern University Compositions for the delivery of rna and drugs into cells
WO2014024193A1 (en) 2012-08-07 2014-02-13 Prodel Pharma Ltd. Compositions and methods for rapid transmucosal delivery of pharmaceutical ingredients
EP2882474A4 (en) 2012-08-08 2016-05-11 Presage Biosciences Inc EXTRUSION METHODS AND DEVICES FOR ACTIVE INGREDIENT RELIEF
SG11201500188YA (en) 2012-08-08 2015-02-27 Univ Nanyang Tech Methods of manufacturing hydrogel microparticles having living cells, and compositions for manufacturing a scaffold for tissue engineering
CN104736181A (zh) 2012-08-10 2015-06-24 北德克萨斯大学健康科学中心 包含靶向聚氨基酸与脂肪酸之缀合物的药物递送载剂
WO2014028487A1 (en) 2012-08-13 2014-02-20 Massachusetts Institute Of Technology Amine-containing lipidoids and uses thereof
WO2014027006A1 (en) 2012-08-13 2014-02-20 Edko Pazarlama Tanitim Ticaret Limited Sirketi Bioadhesive formulations for use in drug delivery
US9827321B2 (en) 2012-08-14 2017-11-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Stabilizing shear-thinning hydrogels
CA2881605A1 (en) 2012-08-14 2014-02-20 Aaron FROESE Internal structured self assembling liposomes
WO2014028429A2 (en) 2012-08-14 2014-02-20 Moderna Therapeutics, Inc. Enzymes and polymerases for the synthesis of rna
JP2015524849A (ja) 2012-08-15 2015-08-27 ザ・ユニバーシティ・オブ・シカゴＴｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｃｈｉｃａｇｏ 神経変性疾患に対するエキソソームに基づく治療法
WO2014039185A1 (en) 2012-09-05 2014-03-13 Creighton University Polymeric nanoparticles in a thermosensitive gel for coital-independent vaginal prophylaxis of hiv
US8703197B2 (en) 2012-09-13 2014-04-22 International Business Machines Corporation Branched polyamines for delivery of biologically active materials
WO2014043618A1 (en) 2012-09-17 2014-03-20 Bind Therapeutics, Inc. Process for preparing therapeutic nanoparticles
WO2014047649A1 (en) 2012-09-24 2014-03-27 The Regents Of The University Of California Methods for arranging and packing nucleic acids for unusual resistance to nucleases and targeted delivery for gene therapy
US20150246137A1 (en) 2012-09-27 2015-09-03 The University Of North Carolina At Chapel Hill Lipid coated nanoparticles containing agents having low aqueous and lipid solubilities and methods thereof
WO2014093924A1 (en) 2012-12-13 2014-06-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleic acid molecules and uses thereof
EP2716655A1 (en) 2012-10-04 2014-04-09 Institut Pasteur Neutralizing antibodies directed against Hepatitis C virus ectodomain glycoprotein E2
US20140100178A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Aslam Ansari Composition and methods for site-specific drug delivery to treat malaria and other liver diseases
WO2014053879A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Centre National De La Recherche Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
WO2014053881A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Centre National De La Recherche Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
US20150202153A1 (en) 2012-10-04 2015-07-23 University Of The Witwatersrand, Johannesburg Liposomal drug delivery system
WO2014053882A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Centre National De La Recherche Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
WO2014053880A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Centre National De La Recherche Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
EP2716689A1 (en) 2012-10-05 2014-04-09 National University of Ireland, Galway Polymer comprising a plurality of branches having at least one disulfide group and/or at least one vinyl group
WO2014064534A2 (en) 2012-10-05 2014-05-01 Chrontech Pharma Ab Injection needle, device, immunogenic compositions and method of use
WO2014059022A1 (en) 2012-10-09 2014-04-17 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Nanoparticles for targeted delivery of multiple therapeutic agents and methods of use
US20140106260A1 (en) 2012-10-11 2014-04-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Core-shell nanoparticulate compositions and methods
BR112015008365A2 (pt) 2012-10-16 2017-07-04 Endocyte Inc composto da fórmula b-l(d)x, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, composição farmacêutica, uso de um composto, composição de forma de dosagem unitária ou dose unitária, composição para tratar um câncer em um paciente, e método para tratar um câncer em um paciente
CN118955699A (zh) 2012-10-18 2024-11-15 洛克菲勒大学 广泛中和性抗hiv抗体
AU2013336237A1 (en) 2012-10-22 2015-06-11 Sabag-Rfa Ltd A system for delivering therapeutic agents into living cells and cells nuclei
US10172956B2 (en) 2012-10-26 2019-01-08 Vanderbilt University Polymeric nanoparticles
WO2014066898A1 (en) 2012-10-26 2014-05-01 The Johns Hopkins University A layer-by-layer approach to co-deliver dna and sirna via aunps: a potential platform for modifying release kinetics
AU2013336582A1 (en) 2012-10-26 2015-06-11 Nlife Therapeutics, S.L. Compositions and methods for selective delivery of oligonucleotide molecules to cell types
US20150376581A1 (en) 2012-10-29 2015-12-31 Technische Universitaet Dortmund T7 rna polymerase variants and methods of using the same
KR102121086B1 (ko) 2012-11-01 2020-06-09 팩터 바이오사이언스 인크. 세포에서 단백질을 발현시키는 방법들과 생성물들
WO2014071072A2 (en) 2012-11-02 2014-05-08 Pungente Michael D Novel cationic carotenoid-based lipids for cellular nucleic acid uptake
EP2914723B1 (en) 2012-11-05 2018-06-13 Fondazione Centro San Raffaele Novel targets in multiple myeloma and other disorders
US8852648B2 (en) 2012-11-06 2014-10-07 Rochal Industries, Llp Delivery of biologically-active agents using volatile, hydrophobic solvents
WO2014074597A1 (en) 2012-11-06 2014-05-15 President And Fellows Of Harvard College Compositions and methods relating to complex nucleic acid nanostructures
US9669104B2 (en) 2012-11-07 2017-06-06 Council Of Scientific And Industrial Research Nanocomplex containing amphipathic peptide useful for efficient transfection of biomolecules
EP2916874B1 (en) 2012-11-07 2018-08-29 Council of Scientific and Industrial Research Nanocomplex containing cationic peptide for biomolecule delivery
TW201428101A (zh) 2012-11-08 2014-07-16 Inviragen Inc 登革熱病毒血清型４型之建構物的組成物、方法及用途
MX2015005363A (es) 2012-11-08 2015-11-06 Novozymes Biopharma Dk As Variantes de albumina.
CN104903349B (zh) 2012-11-08 2018-10-19 十一生物治疗股份有限公司 Il-6拮抗剂及其应用
MX373894B (es) 2012-11-08 2020-07-09 Clearside Biomedical Inc Métodos y dispositivos para el tratamiento de trastornos oculares en sujetos humanos.
TR201809547T4 (tr) 2012-11-09 2018-07-23 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Hücresel RNA ifadesine yönelik yöntem.
EP2916853B1 (en) 2012-11-09 2020-05-06 Velin-Pharma A/S Compositions for pulmonary delivery
WO2014071963A1 (en) 2012-11-09 2014-05-15 Biontech Ag Method for cellular rna expression
US9200119B2 (en) 2012-11-09 2015-12-01 Momentive Performance Materials Inc. Silicon-containing zwitterionic linear copolymer composition
AU2013341711A1 (en) 2012-11-12 2015-05-21 Redwood Bioscience, Inc. Compounds and methods for producing a conjugate
WO2014075047A2 (en) 2012-11-12 2014-05-15 Genvec, Inc. Malaria antigens and methods of use
GB201220354D0 (en) 2012-11-12 2012-12-26 Medpharm Ltd Dermal compositions
US9943608B2 (en) 2012-11-13 2018-04-17 Baylor College Of Medicine Multi-arm biodegradable polymers for nucleic acid delivery
US9310374B2 (en) 2012-11-16 2016-04-12 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate
WO2014078636A1 (en) 2012-11-16 2014-05-22 President And Fellows Of Harvard College Nucleic acid hydrogel self-assembly
CN104853747B (zh) 2012-11-19 2020-06-19 理工研究与开发基金公司 用于体内递送的脂质体
EP2732825B1 (en) 2012-11-19 2015-07-01 Invivogen Conjugates of a TLR7 and/or TLR8 agonist and a TLR2 agonist
WO2014081849A1 (en) 2012-11-20 2014-05-30 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Formulations of active agents for sustained release
US20140141037A1 (en) 2012-11-20 2014-05-22 Novartis Ag Rsv f prefusion trimers
FI2922574T3 (fi) 2012-11-22 2023-08-11 Tagworks Pharmaceuticals B V Kemiallisesti pilkkoutuva ryhmä
WO2014081300A1 (en) 2012-11-22 2014-05-30 Tagworks Pharmaceuticals B.V. Channel protein activatable liposomes
WO2014081299A1 (en) 2012-11-22 2014-05-30 Tagworks Pharmaceuticals B.V. Activatable liposomes
PL2922554T3 (pl) 2012-11-26 2022-06-20 Modernatx, Inc. Na zmodyfikowany na końcach
WO2014093574A1 (en) 2012-12-13 2014-06-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for altering cell phenotype
CN109045294A (zh) 2013-01-10 2018-12-21 思齐乐 流感病毒免疫原性组合物及其应用
AU2013374345A1 (en) 2013-01-17 2015-08-06 Moderna Therapeutics, Inc. Signal-sensor polynucleotides for the alteration of cellular phenotypes
US20160022840A1 (en) 2013-03-09 2016-01-28 Moderna Therapeutics, Inc. Heterologous untranslated regions for mrna
US20160022774A1 (en) 2013-03-12 2016-01-28 Moderna Therapeutics, Inc. Diagnosis and treatment of fibrosis
EP2968391A1 (en) 2013-03-13 2016-01-20 Moderna Therapeutics, Inc. Long-lived polynucleotide molecules
WO2014152211A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
WO2014152031A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Ribonucleic acid purification
US10590161B2 (en) 2013-03-15 2020-03-17 Modernatx, Inc. Ion exchange purification of mRNA
EP2971165A4 (en) 2013-03-15 2016-11-23 Moderna Therapeutics Inc DISSOLUTION OF DNA FRAGMENTS IN MRNA MANUFACTURING METHODS
US20160017313A1 (en) 2013-03-15 2016-01-21 Moderna Therapeutics, Inc. Analysis of mrna heterogeneity and stability
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
WO2014152027A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Manufacturing methods for production of rna transcripts
WO2014144039A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Characterization of mrna molecules
CA2917348A1 (en) 2013-07-11 2015-01-15 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions comprising synthetic polynucleotides encoding crispr related proteins and synthetic sgrnas and methods of use
WO2015034925A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
EP3041934A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
WO2015038892A1 (en) 2013-09-13 2015-03-19 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide compositions containing amino acids
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
EP3052521A1 (en) 2013-10-03 2016-08-10 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
AU2014337156A1 (en) 2013-10-18 2016-05-12 Modernatx, Inc. Compositions and methods for tolerizing cellular systems
EP3092250A4 (en) 2014-01-08 2017-05-24 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides for the in vivo production of antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
PL3590949T3 (pl) 2022-08-29
EP2622064A4 (en) 2014-04-16
EP4108671A1 (en) 2022-12-28
ES2737960T3 (es) 2020-01-17
US12357708B2 (en) 2025-07-15
US20240033379A1 (en) 2024-02-01
WO2012045082A3 (en) 2012-06-07
AU2011308496A2 (en) 2014-10-02
FI4108671T3 (fi) 2024-12-27
CN104531812A (zh) 2015-04-22
SMT202200321T1 (it) 2022-09-14
WO2012045082A2 (en) 2012-04-05
CN104531671A (zh) 2015-04-22
US20130102034A1 (en) 2013-04-25
EP3431485A1 (en) 2019-01-23
HUE058896T2 (hu) 2022-09-28
EP4435100A3 (en) 2025-01-15
US20170239374A1 (en) 2017-08-24
CN103429606A (zh) 2013-12-04
US20210236655A1 (en) 2021-08-05
CA2813466A1 (en) 2012-04-05
HUE069586T2 (hu) 2025-03-28
RS66304B1 (sr) 2025-01-31
CY1125421T1 (el) 2025-05-09
RS63430B1 (sr) 2022-08-31
US20250090692A1 (en) 2025-03-20
US20180112221A1 (en) 2018-04-26
SG190679A1 (en) 2013-07-31
US20150064725A1 (en) 2015-03-05
EP4435100A2 (en) 2024-09-25
US10064959B2 (en) 2018-09-04
EP2857413A1 (en) 2015-04-08
MX2013003681A (es) 2013-11-20
US9334328B2 (en) 2016-05-10
PL4108671T3 (pl) 2025-02-24
AU2011308496A1 (en) 2013-05-02
EP2622064A1 (en) 2013-08-07
LT3590949T (lt) 2022-07-25
SMT202400513T1 (it) 2025-01-14
CA3162352A1 (en) 2012-04-05
SG10201508149TA (en) 2015-10-29
DK3590949T3 (da) 2022-07-11
JP2013543381A (ja) 2013-12-05
HRP20220796T1 (hr) 2022-10-14
US20160264975A1 (en) 2016-09-15
ES2862955T5 (en) 2025-01-29
EP4108671B1 (en) 2024-11-20
US20130244282A1 (en) 2013-09-19
NZ608972A (en) 2015-09-25
PT3590949T (pt) 2022-08-02
AU2017202958A1 (en) 2017-05-25
LT4108671T (lt) 2025-01-10
US9657295B2 (en) 2017-05-23
HRP20241701T1 (hr) 2025-02-14
EP3431485B2 (en) 2024-09-04
EP2622064B1 (en) 2019-05-29
US9701965B2 (en) 2017-07-11
US20130203115A1 (en) 2013-08-08
EP2625189A4 (en) 2014-04-30
ES2862955T3 (es) 2021-10-08
EP2625189A2 (en) 2013-08-14
CA2821992A1 (en) 2012-04-05
SI3590949T1 (sl) 2022-09-30
RU2013120302A (ru) 2014-11-20
DE19177059T1 (de) 2021-10-07
EP2625189B1 (en) 2018-06-27
ZA201403666B (en) 2016-03-30
EP3431485B1 (en) 2020-12-30
US20190160185A1 (en) 2019-05-30
WO2012045075A1 (en) 2012-04-05
EP3590949B1 (en) 2022-05-18
EP2857499A1 (en) 2015-04-08
US12496358B2 (en) 2025-12-16
BR112013007862A2 (pt) 2019-09-24
PT4108671T (pt) 2024-12-23
US20120237975A1 (en) 2012-09-20
ZA201303161B (en) 2014-10-29
IL225493A0 (en) 2013-06-27
EP3590949A1 (en) 2020-01-08
DK4108671T3 (da) 2025-01-06
ES3005233T3 (en) 2025-03-14
SI4108671T1 (sl) 2025-02-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2925251T3 (es) Acidos ribonucleicos que contienen N1-metil-pseudoracilos y usos de los mismos
JP7019639B2 (ja) 修飾型のヌクレオシド、ヌクレオチドおよび核酸、ならびにそれらの使用方法
JP2022160454A (ja) 安定化尾部領域を含むポリヌクレオチド
EP3041948A1 (en) Alternative nucleic acid molecules containing reduced uracil content and uses thereof
HK40086418B (en) Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
HK40086418A (en) Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof