JPS58149679A - 固定化酵素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は固定化酵素に関する。

酵素反応は医薬品、食品等の製造の過程で一部工業的に
も行なわれているか、従来は酵素を基質の水溶液に溶解
させて、水溶液中で反応を行なわせている。しかし、こ
のような方法によれば、反応条件を一定に維持しつつ、
新鮮な酵素を補給したり、また、反応後に酵素を失活さ
せることなく、生成物と酵素を分離することが非常に困
難であり、酵素が不経済に消費される。そのうえ、反応
か回分式であるから生産性に劣る。

このような問題を解決するため、既に種々の方法にて酵
素を担体に固定化し、この固定化酵素に基質を反応させ
ることが提案されている。このような酵素の固定化方法
の一つとして、水不溶性の担体に酵素を共有結合、イオ
ン結合又は物理吸着にて結合させる担体結合法が知られ
ている。しかし、従来、この方法にネいて用いられてい
る担体は、通常、セルロース、デキストラン、アガロー
ス等の多糖類の誘導体、ポリアクリルアミドゲル、多孔
性ガラス等の径１ｍ乃至数−の粒子であり、このような
粒子に酵素が固定化された固定化酵素は通常、カラムに
充填され、固定されて、基質溶液と接触されるので、基
質が高分子量の場合、固定化酵素表面に拡散し難（、反
応に長時間を要すると共に反応収率が低いという問題が
ある。

本発明は上記した問題を解決するためになされたもので
あって、反応系において遊離の酵素と同様に自′由に移
動でき、従って、固定化酵素表面への基質の拡散が殆ど
問題にならない高活性の固定化酵素を提供することを目
的とする。

本発明による固定化酵素は、（１）カルボキシル基を有
するラジカル重合性単量体０．２〜１０１１景％、（６
）この単量体と共重合し得る第一のラジカル重合性単量
体ｌＧ〜９５重量襲、（Ｃ）多官能性内部架橋用単量体
１〜２０重量２．及び（ｄ）第二のラジカル共重合性単
量体としてのアクリロニトリル又はメタクリロートリル
１〜６０重量２を乳化共重合させて得られる水分散型高
分子重合体粒子に酵素が共有結合によって固定化されて
いることを特徴とする。

本発明において用いるカルボキシル基を有するラジカル
重合性単量体は、好ましくは一般弐Ｒ’０Ｈ＝ＯＲ”０
（Ｘ旧 （但し　Ｂｌは水素、低級アルキ・ル基、好ましくはメ
チル基又はカルボキシル基、Ｐは水素又は低級アルキル
基、好ましくはメチル基を示し、Ｒ１か水素又は低級ア
ルキル基のときはＲ１はカルボ低級アルコキシ基であっ
てもよい。） で表わされ、好ましい具体例としてはアクリル酸、メタ
クリル酸、イタコン酸、クロトン酸、マレイン酸、フマ
ル酸、モノアルキルマレイン酸、モノアルキルフマル酸
１．モノアルキルイタコン酸等を挙げることかできるが
、特にアクリル酸、メタクリル駿及びイタコン酸の一種
又は二種以上の混合物か好ましく用いられる。

上記カルボキシル基を有する単量体と共重合される第一
のラジカル重合性単量体は、後述する第二のラジカル重
合性単量であるアクリロニトリル及びメタクリロニトサ
ルを除いて、カルボキシル基を有する単量体と共重合性
を有する限りは特に制限されないが、好ましくはエチレ
ン、プロピレン、塩化ビニル、酢酸ビニル、プロピオン
酸ビニル、アクリル酸エステル、メタクリル酸エステル
、スチレン、メチルスチレン、ビニルトルエン、ブタジ
ェン、イソプレン、アクリルＴ之ド、メタクダルア之ド
等の一種又は二種以上が用いられる。

特Ｋ、アクリル酸エステル、メタクリル酸エステル又は
スチレンか好ましく用いられる。これらの共重合性単量
体は、得られる共重合体が酵素反応の行なわれる温度よ
り高いガラス転移点を有するように選ばれる。

また、多官能性内部架橋用ラジカル重合性単量体として
は多価アルコールのポリ（メタノアクリレートが好まし
く、具−的にはエチレングリコールジメタクリレート、
トリエチレングリコールジアクリレート、ジプロピレン
グリコールジメタクリレート、ｌ、３−ブチレングリコ
ールジメタクリレート、トリエチレングリコールジアク
リレート、トリメチロールプロパントリメタクリレート
、トリメチロールプロパントリアクリレート、テトラメ
チロールメタンテトラアクリレート等が用いられる。ジ
ビニルベンゼンも用いられる。

更に、本発明においては、水分散型高分子重合体粒子は
、前記したように、第二の共重合性単量体成分としてア
クリロニトリル及び／又はメタクリロニトリルを含有す
ることが必須である。

本発明において用いる水分散型高分子重合体粒子は上記
各単量体を水媒体中にて通常の方法で乳化共重合させる
ことにより得ることかできるが、得られる重合体粒子中
に乳化剤が混在すると、酵素が失活する等の有害な影響
があられれることがあるので、乳化重合に際しては乳化
剤を用いないのが好ましい。本発明における単量体組成
によれば、特に乳化剤を要せずして安定に乳化共重合さ
せることができるからである。但し、乳化剤が酵素に対
して有害な影響を与えなければ乳化剤を必要に応じて用
いてもよい。

本発明において乳化共重合させる単量体結成は、カルボ
キシル基を有する単量体０．２〜１０重量外、好ましく
は０．５〜８重量襲、第一の単量体１０〜９５重量襲、
好ましくは２０〜９０重量外、内部架橋剤１〜２０重量
襲、好ましくは２〜１０重量襲、及びアクリロニトリル
又はメタクリロニトリル１〜６０重量囁、好ましくは５
〜４０重量囁である。

カルボキシル基を有する単量体の量は、得られる共重合
体粒子への酵素の固定化量とも開運し、少なすぎるとき
は酵素を十分な量にて固定化することができず、一方、
多すぎるときは、得られる重合体粒子に酵素を固定化す
る際に酵素の失活が起こりやすくなるので好ましくない
。

次に、一般に、カルボキシル基を有する単量体とこれに
共重合性を有する単量体とを乳化共重合すると、前者の
単量体の親水性が高いために水媒体相中に遊離の水溶性
重合体が生じることが多い。

このような水溶性重合体か生じると、一部は水不溶性の
高分子重合体粒子の表面に吸着されて残り、これを担体
として酵素を固定化すると、この水溶性重合体にも酵素
が固定化される。このように水溶性重合体を含む担体に
酵素が固定化された固定化酵素は、酵素反応の際に水不
溶性の水分散型高分子重合体粒子から溶出し、固定化酵
素自体の活性の経時低下が著しいうえに、基質や反応生
成物と混合するので、反応後にその分離を要する等の種
々の不都合が生じる。

しかしながら、本発明に従って、カルボキシル基を有す
る単量体と内部架橋用単量体とアクリロニトリル及び／
又はメタクリロニトリ、ルとを乳化共重合させることに
より、重合の安定性か確保されると共に、望ましくない
水溶性重合体の生成が抑止される。このような糖果が得
られる理由は明確ではないが、重合初期に生じるカルボ
キシル基を有する単量体を主成分とする水溶性低分子量
重合体にアクリロニトリル又はメタクリロニトリルと内
部架橋用単量体が有効に共重合して水不溶化すると共に
、重合が安定化するのであろう。従って、アクリロニト
リル又はメタクリロニトリルの量か上記範囲より少なす
ぎるとき、又は多すぎるときは、重合の安定性か損なわ
れる。また、内部架橋用単量体か少なすぎるときは水溶
性重合体の副生が多（なり、一方、多すぎるときは重合
か安定性に欠けるようになる。

本発明において水分散型高分子重合体粒子の平均粒径は
０．０３〜２μ、好ましくは０．０７〜１μである。粒
径か小さすぎると、固定化酵素を水中に分散させて酵素
反応を行なわせた後の回収が困難となり、一方、粒径が
大きすぎると、単位体積当りの粒子表面積か小さくなり
、酵素の固定化量が少なくなると共に、水中に分散させ
るのか困難となるので好ましくない。

水分散型高分子粒子に酵素を共有結合するには、特に制
限されることなく、従来より知られている任意の方法に
よることができる。例えは、一つの方法として、水溶性
カルボジイミドを用いて、酵素のアミノ基と水分散型高
分子重合体粒子表面のカルボキシル基とを直接アミド結
合を形成させることにより結合させることかできる。水
溶性カルボジイミドとしては、例えば１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩
、１−シクロへキシル−３−（２−モルホリノエチルフ
カルポジイミドーメトーｐ−トルエンスルホン酸等を挙
げることかできる。このような　　　゛水溶性カルボジ
イミドを用いる酵素固定化は従来知られている通常の条
件の下で行なわれ、例えば水分散型高分子重合体粒子の
有するカルボキシル基の３〜５０倍当量のカルボジイミ
ドを用い、５℃程度の温度、ｐＨを４．５〜６．０に保
持して酵素を−夜混合反応させればよい。

第二の方法として、水分散型高分子重合体粒子表面のカ
ルボキシル基にＮ−ヒドロキシスクシンイミドをカルボ
ジイミドの存在下に反応させた後、酵素のアミノ基を反
応させ、共有結合を形成させることができる。更に、第
三の方法として、水分散型高分子重合体粒子表面のカル
ボキシル基にジアミンを作用させて、重合体粒子表面に
アミノ基を導入し、このアミノ基により酵素を共有結合
で固定化することもできる。例えば、前記したカルボジ
イミドを用いて、酵素のカルボキシル基を重合体粒子表
面のアミノ基に反応させることができ、また、グルタル
アルデヒドのような架橋試薬を用いて、酵素のアミノ基
を重合体粒子に結合させることができる。ジアルデヒド
を架橋試薬として用いる場合には、重合体粒子の有する
アミノ基に対して過剰量を反応させ、重合体粒子に一方
のアルデヒド基により結合したジアルデヒドの他方の遊
離アルデヒド基に酵素のアミノ結合を反応させる。

また、第四の方法としてジアゾカフプリング法によるこ
ともできる。例えば、アミノ基を導入した重合体粒子に
ｐ−ニトロベンズアルデヒドを反応、結合させ、改番こ
ニトロ基を通常の方法、例えば水素化ホウ素ナトリウム
と亜ニチオン酸ナトリウムによってアミノ基に還元し、
このアミノ基を亜硝酸ナトリウムによってジアゾニウム
基とし、これを酵素のアミ７基とジアゾカフプリングさ
せるのである。

以上のようにして酵素を重合体粒子°に共有結合させた
後、用いた反応試薬や固定化されていない酵素を遠心分
離、膜分離等によって除去すれば、本発明の固定化酵素
が得られる。

本発明の固定化酵素は分散液として用いられ、基質と接
触される。固定化酵素の使用量は、固定化酵素の粒径や
酵素の固定化量、必要とする反応速度、基質濃度等によ
り適宜に決定される。

本発明において固定化される酵素は菌体内酵素でよ（、
菌体外酵素でもよい。また、酵素は必らずしも高度に精
製されている必要はな（、抽出液や部分精製品も用いら
れる。更に、本発明に従うて単一の酵素を固定化しても
よいか、複数の酵素を固定化してもよい。酵素の具体例
としては、アミノ駿オ牛シダーゼ、カタラーゼ、キサン
チンオキシダーゼ、グルコース−オキシダーゼ、グルコ
ース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルタミン酸デヒ
ドロゲナーゼ、チトクロム０オキシダーゼ、チロシナー
ゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、ペルオキシダーゼ、６−ホ
スルグルコン酸デヒドロゲナーゼ、リンゴ酸デヒドロゲ
ナーゼのような酸化還元酵素、アスパラギン駿アセチル
トランスフェラーゼ、アスパラギン酸アミノトランスフ
ェラーゼ、グリシンアミノトランスフェラーゼ、グルタ
ミン酸−オキザロ酢酸アミノトランスフェラーゼ、グル
タミン峻−ピルピン酸ア文ノドランスフェラーゼ、クレ
アチンホスホキナーゼ、ヒスタミンメチルトランスフェ
ラーゼ、ピルビン綾牛ナーゼ、フラクトキナーゼ、ヘキ
ソキナーゼ、−一リジンアセチルトランスフェラーゼ、
ロイシンアミノペプチダーゼのような転移酵素、アスパ
ラギナーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、アミノアシ
ラーゼ、アミラーゼ、アルギナーゼ、Ｌ−アルギニンデ
イミナーゼ、インベルターゼ、ウレアーゼ、ウリカーゼ
、ウロキナーゼ、エステラーゼ、β−ガラクトシダーゼ
、カリクレイン、キモトリプシン、トリプシン、トロン
ビン、ナリンギナーゼ、ヌクレオチダーゼ、パパイン、
ヒヤウロニダーゼ、プラスミン、ペクチナーゼ、ヘキソ
キナーゼ、ペプシン、ペクチナーゼ、ペニシリンアミダ
ーゼ、ホスホリパーゼ、ホスファターゼ、う゛クターゼ
、リパーゼ、リボヌクレアーゼ、レンニンのような加水
分解酵素、アスパラギン酸デカルボキシラーゼ、アスパ
ルターゼ、クエン酸リアーゼ、グルタミン酸デカルボキ
シラーゼ、ヒスチジンアンモニアリアーゼ、フェニルア
ラニンアンモニアリアーゼ、フマラーゼ、フマール酸ヒ
ドラターゼ、リンゴ酸シンテターゼのようなリアーゼ、
アスパラギナーゼ、グルコースイソメラーゼ、グルコー
スホスフェートイソメラーゼ、グルタミン酸ラセマーゼ
、乳酸ラセマーゼ、メチオニンラセマーゼのような異性
化酵素、アスパラギンシンターゼ、グルタチオンシンタ
ーゼ、ピルビン酸シンターゼのようなりガーゼ等を挙げ
ることかできる。

本発明による固定化酵素は、以上のように、カルボキシ
ル基を有する水分散型高分子重合体粒子に酵素か共有結
合にて固定化されており、従来のセルロース誘導体担体
粒子等の場合と興なり、固定化酵素自体が遊離の酵素と
同様に反応系内を自由に移動できるため、基質の拡散が
反応に殆ど影響を与えず、従って、高分子量の基質の場
合にも遊離の酵素と同様の高い反応速度で酵素反応を行
なわせることができる。しかも、酵素は担体に固定化さ
れているため、酵素反応後には遠心分離、塩析、凝集剤
を用いる凝集沈殿、多孔性膜による膜分離等によって容
暴く回収でき、長期間にわたつて繰返して使用すること
ができる。

更に、本発明に審いて用いる担体としての水分散性高分
子重合体粒子は、その製造面からみれば、乳化剤を用い
ることな（、且つ、望ましくない水溶性重合体の生成な
（、安定に乳化共重合にて得ることができる。また、ア
クリロニトリル又はメタクリレートリルと内部架橋用単
量体を併用することにより、得られる水分散型高分子重
合体粒子は強度が大きいと共に、粒子相互の粘着も起ら
ない。

実施例１ アクリル酸３１１メチルメタクリレ−）　８０．　。

トリエチレングリコールジメタクリレート２ｆ　及びア
クリロニトリル１５ｙを蒸留水２３０ｆに加え、過硫酸
カリウム０．３ｇを水１０ｙに溶解、した重合開始剤水
溶液を７０°Ｃの温度で窒素気流下に加え、１２０ｒｐ
ｍで攪拌しつつ８時間前合させて、固形分３０％、平均
粒径０．３０μの重合体粒子の水分散液を得た。重合は
非常に安定馨こ行なわれて、凝集物は０．０２％であっ
た。また、分散液を遠心分離し、上澄について調べたと
ころ、仕込み量の５％のカルボキシル基しか定量されず
、水溶性重合体の副生は僅かであった。

次に、上記の分散液１００ｄに１−シクロへ牟シル−３
−（２−モルホリノエチル）カルボジイミド−メト−ｐ
−トルエンスルホンＭ　２Ｏｆヲ水２００−に溶解した
水溶液を加え、攪拌しつつ、ｐＨを５．０に調整した。

α−アミラーゼ２．５ｆ　を、水５００　ｓａｇに溶解
してｐＨを５．ＯＫ−調整した酵素水溶液を上記分散液
に加え、攪拌下にｐＨを５．０に調整しながら、５℃の
温度で２４時間、酵素の固定化反応を行なわせた。

この後、遠心分離によって沈降した重合体粒子を緩衝液
で洗滌し、未固定のａ−アミラーゼ、未反応のカルボジ
イミド及び反応副生物を除去し、再び緩衝液中に分散さ
せて、本発明による固定化α−アミラーゼを得た。

この固定化酵素のα−アミラーゼ固定化量は、重合体粒
子１１当り４０■であり、また、１％デンプン水溶液を
基質として測定した活性収率は４゜襲であつた。

尚、活性収率とは固定化された酵素の活性の理論量に対
する実際の活性の割合を意味する。ここでは、１％デン
プン水溶液を基質として固定化酵素を３５℃で１０分間
反応さ曽、葺つ素デンプン反応からデンプンの分解量を
求めることにより、固定化酵素の活性、デンプン分解速
度（ｓ９／分）を得、これと等しい活性を有する遊離の
酵素量を酵素固定化量で除して求めた。

比較例１ アクリル酸３ｇ、メチルメタクリレート８２ｆ及びアク
リロニトリル１５ｙを実施例１と同様にして乳化共重合
させ、固形分２９％、平均粒径０．３０μの重合体粒子
の水分散液を得た。凝集物は１％であった。この分散液
を遠心分離し、上澄について調べたところ、仕込量の４
０％のカルボキシル基が定量され、多量の水溶性重合体
の副生が認められた。

比較例２ アクリル酸３　、メチルメタクリレート９５ｙ及びトリ
エチレングリコールジメタクリレート２１を実施例１と
同様に乳化共重合させ、固形分２８２、平均粒径０．３
２μの重合体粒子の水分散液を得た０重合は不安定であ
って、凝集物は６襲でありた。また、この分散液を遠心
骨醜し、上澄を調べたところ、仕込量の２０％のカルボ
キシル基が定量された。

実施例２ 実施例１で得られた重合体粒子水分散液１００　ｄに１
−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カル
ボジイミド−メト−９−）ルエンスルホン＃２０Ｆを水
２００ｍに溶解した水溶波を加え、攪拌しつつ、ｐＨを
５．０Ｋｍｍ整した。メタキシリレンシア電ン３．Ｏｙ
　　を水３０　ｗ７に溶解したｐＨ５，０の水溶液を上
記分散液に加え、攪拌下にｐＨを５．０に調整しつつ、
室温で２４時間反応させた。この後、遠心分離して沈降
した重合体粒子を水で洗滌し、未反応のカルボジイミド
、メタキシリレンシア之ン、反応副生物等を除去し、ア
ミノ基を有する水分散型高分子重合体粒子を得た。

この重合体粒子を水１００−に再分散させ、グルタルア
ルデヒドの５襲水溶液６０　ｍを加え、室温で２４時間
反応させた後、遠心分離により精製し、アルデヒド基を
有する水分散型高分子重合体粒子を得た。

次に、０．１Ｍリン峻水素二カリウム及び０．１Ｍリン
酸二水素カリウムから調整した緩衝液（ｐＨ７，０３１
００ｄｉζ上記重合体粒子を分散させ、これにウレアー
ゼ３ｆを緩衝液３０−に溶解した酵素水溶液を加え、５
℃の温度で２００時間反応せて、ウレアーゼを重合体粒
子に固定化した。反応後、遠心分離して沈降した重合体
粒子を緩衝液で洗滌し、緩衝液に再分散させて本発明に
よる固定化ウレアーゼを得た。

この固定化酵素のウレアーゼの固定化量は重合体粒子ｌ
ｆ　当り３０　ｗｑであり、活性収率は５０％であった
。活性収率は、０．０３Ｍの尿素水溶液を基質とし、３
５℃で１０分間固定化酵素を反応させ、生成したアンモ
ニア量（μモル／分］を塩酸滴定で求めて活性を測定し
、これと等しい活性を有する遊離の酵素量を酵素固定化
量で除して求めた。

実施例３ 実施例２で得られたアミノ基を有する水分散型高分子重
合体の水分散液ＩＱＱａｊにｐ−ニトロベンズアルデヒ
ドの１襲エタノール溶液２００−を加え、室温で３時間
反応させた後、遠心分離、洗滌し、ニトロ基を有する水
分散型高分子重合体粒子を得た。

この重合体粒子を水１００ｍに再分散させ、これに０．
１Ｍ亜ユニチオン酸ナトリウム０．５Ｍ炭酸水素ナトリ
ウムを含有する水溶液１００　ＷＬｌを加え、室温で２
時間反応させて、重合体粒子の有するニトロ基をアミノ
基に還元した。遠心分離後、十分に洗滌し、アミノ基を
有する水分散型高分子重合体粒子を得た。

この重合体粒子を水１００１１７に分散させ、これに０
．１Ｍの亜硝酸ナトリウムの０．５　Ｎ塩酸水溶液５０
ｄを加えて室温で１時間反応させ、重合体粒子の有する
アミノ基をジアゾニウム基に変えた。遠心分離後、十分
に洗滌して、ジアゾニウム基を有する水分散型重合体粒
子を得た。

この重合体粒子を水１００１ｄに再分散させ、これにト
リプシン３ｔを緩衝液３０ｄに分散した酵素分散液を加
え、５℃の温度１２４時間反応させた後、遠心分離して
沈降した重合体粒子を緩衝液で洗滌、未固定のトリプシ
ンを除去した。これを再び緩衝液に分散させて、本発明
による固定化トリプシンを得た。

この固定化酵素におけるトリプシンの固定化量は重合体
粒子１１当り２０■であり、活性収率は４０％であつた
。尚、１％カゼイン水溶液を基質として酵素を３５℃で
１０分間反応させた後、５襲トリクロル酢酸により高分
子量タンパク質を沈殿させ、遊離の非タンパク性分解質
量を２８０　ｎｍの吸光度から求め、この吸光度を１分
間に１．０増加させる活性を１単位として、活性収率を
求めた。

実施例４ メタクリル酸５ｇ　、メチルメタクリレート２３１１ス
チレン４０ｙ、ジビニルベンゼン２１及びアクリロニト
リル３０ｙを蒸留水２３０ｆに加え、実施例１と同様に
重合し、固形分３０％、平均粒径０．２５１’の重合体
粒子の水分散液を得た。重合は非常に安定に行なわれて
、凝集物は０．０２％であった。

上記分子ｌｔ液１ｏｏｙに１−シクロヘキシル−３−（
２−モルホリノエチル）カルボジイミド−メト−ｐ−ト
ルエンスルホン酸２０ｔｔを水Ｃ００ｗｔに溶解した水
溶液を加え、攪拌しつつ、ｐＨを５．０に調整した。ウ
レアーゼ３．Ｏｆ　　を水５００Ｗｌｌに溶解してｐＨ
を５．０に一瞥した酵素水溶液に上記分散液を加え、攪
拌下にｐＨを５．０Ｋｌｌ整しながら、２４時間酵素の
固定化反応を行なわせた。

この後、遠心分離にて重合体粒子を洗滌し、緩衝液に分
散させて、本発明による固定化ウレアーゼを得た。

この固定化酵素のウレアーゼ固定化量は、重合体粒子１
１当り４３　Ｍであり、０．０３）［尿素を基質として
実施例１と同様の方法で測定した活性収率は３０％であ
つた。

特許出願人−日東電気工業株式会社 代理人　弁理士牧野逸部

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ＋ｔ＋　　（ａｄカルボキシル基を有するラジカル重合
   性単量体０．２〜１０重量悌重量へ）この単量体と共重
   合し得る第一のラジカル重合性単量体１０〜９５重量襲
   、（ｃ）多官能性内部架橋用単量体１〜２０重量外、及
   び（ｄ）第二のラジカル共重合性単量体としてのアク啼
   ロニト呼ル又はメタクリロムトリル１〜６０重量憾を乳
   化共重合させて得られる水分散型高分子重合体粒子に酵
   素が共有結合によって固定化されていることを特徴とす
   る固定化酵素。 （２）カルボキシル基を有する単量体が一般式％式％ （但し、Ｒ１は水素、低級アルキル基又はカルボキシル
   基、Ｖは水素又は低級アルキル基を示し、Ｒ１か水素又
   は低級アルキル基のときはＰはカルボ低級アルコキシ基
   であってもよい。］で表わされることを特徴とする特許
   請求の範囲第１項記載の固定化酵素。 （３）水分散型高分子重合体粒子か０．０３〜２μの平
   均粒径を有することを特徴とする特許請求の範囲第１項
   記載の固定化酵素。 （４）第一の単量体がアクリル酸エステル、メタクリル
   駿エステル又はスチレンであることを特徴とする特許請
   求の範囲第１項記載の固定化酵素。 （５）多官能性内部架橋用単量体か多価アルコールのポ
   リアクリレート又はポリメタクリレートであることを特
   徴とする特許請求の範囲第１項記載の固定化酵素。