JPS6012033B2 - 固定化酵素 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は固定化酵素に関する。

酵素反応は医薬品、食品等の製造の過程で一部工業的に
も行なわれているが、従来は酵素を基質の水溶液に溶解
させて、水溶液中で反応を行なわせている。

しかし、このような方法によれば、反応条件を一定に維
持しつつ、新鮮な酵素を補給したり、また、反応後に酵
素を失活させることなく、生成物と酵素を分離すること
が非常に困難であり、酵素が不経済に消費される。その
うえ、反応が回分式であるから生産性に劣る。このよう
な問題を解決するため、既に種々の方法にて酵素を単体
に固定化し、この固定イ比酵素に基質を反応させること
が提案されている。

このような酵素の個定化方法の一つとして、水不溶性の
担体に酵素を共有結合、イオン結合又は物理吸着にて結
合させる担体結合法が知られている。しかし、従来、こ
の方法において用いられている坦体は、通常、セルロー
ス、デキストラン、アガロース等の多糖類の誘導体、ポ
リアクリルアミドゲル、多孔性ガラス等の径１肋乃至数
側の粒子であり、このような粒子に酵素が固定化された
固定化酵素は通常、カラムに充填され、固定されて、基
質溶液と接触されるので、基質が高分子量の場合、固定
化酵素表面に拡散し難く、反応に長時間を要すると共に
反応収率が低いという問題がある。本発明は上記した問
題を解決するためになされたものであって、反応系にお
いて遊離の酵素と同様に自由に移動でき、従って、固定
化酵素表面への基質の拡散が殆ど問題にならない高活性
の固定化酵素を提供することを目的とする。

本発明による固定化酵素は、‘ａ｝カルボキシル基を有
するラジカル重合性単量体０．２〜１の重量％、｛ｂに
の単量体と共重合し得る第一のラジカル重合性単量体１
０〜９５重量％、‘ｃー多官能性内部架橋用単量体１〜
２の重量％、及び【ｄ｝第二のラジカル共重合性単量体
としてのアクリロニトリル又まメタクリルニトリル１〜
６の重量％を乳化共重合させて得られる水分散型高分子
重合体粒子に酵素が共有結合によって固定化されている
ことを特徴とする。

本発明において用いるカルボキシル基を有するラジカル
重合性単量体は、好ましくは一般式ＲＩＣＨ＝ＣＲ２Ｃ
ＯＯ日（但し、ＲＩは水素、低級アルキル基、好ましく
はメチル基又はカルボキシル基、Ｒ２は水素又は低級ア
ルキル基、好ましくはメチル基を示し、ＲＩが水素又は
低級アルキル基のときはＲ２はカルボ低級アルコキシ基
であってもよい。

）で表わされ、好ましい具体例としてはアクリル酸、メ
タクリル酸、ィタコン酸、クロトン酸、マレィン酸、フ
マル酸、モノアルキルマレィン酸、モノアルキルフマル
酸、モノアルキルイタコン酸等を挙げることができるが
、特にアクリル酸、メタクリル酸及びィタコン酸の一種
又は二種以上の混合物が好ましく用いられる。

上記カルボキシル基を有する単量体と共重合される第一
のラジカル重合性単量体は、後述する第二のラジカル重
合性単量体であるアクリロニトリル及びメタクリルニト
リルを除いて、カルボキシル基を有する単量体と共重合
性を有する限りは特に制限されないが、好ましくはエチ
レン、プロピレン、塩化ビニル、酢酸ピニル、プロピオ
ン酸ビニル、アクリル酸ェステル、メタクリル酸ェステ
ル、スチレン、メチルスチレン、ビニルトルエン、ブタ
ジエン、イソプレン、アクリルアミド、メタクリルアミ
ド等の一種又は二種以上が用いられる。

特にアクリル酸ェステル、メタクリル酸工ステル又はス
チレンが好ましく用いられる。これらの共重合性単量体
は、得られる共重合体が酵素反応の行なわれる温度より
高い転移点を有するように選ばれる。また、多官能性内
部架橋用ラジカル重合性単量体としては多価アルコール
のポリ（メタ）アクリレートが好ましく、具体的にはエ
チレングリコ」ルジメタクリレート、トリエチレングリ
コールジメタクリレート、ジプロピレングリコールジメ
タクリレート、１，３ーブチレングリコールジメタクリ
レート、トリエチレングリコールジアクリレート、トリ
メチロールプロパントリメタクリレート、トリメチロー
ルプロパントリアクリレート、テトラメチ。

ールメタンテトラアクリレート等が用いられる。ジビニ
ルベンゼンも用いられる。更に、本発明においては、水
分散型高分子重合体粒子は、前記したように、第二の共
重合性単量体成分としてアクリロニトリル及び／又はメ
タクリロニトリルを含有することが必須である。本発明
において用いる水分散型高分子重合体粒子は上記各単量
体を水媒体中にて通常の方法で乳化共重合させることに
より得ることができるが、得られる重合体粒子中に乳化
剤が混在すると、酵素が失活する等の有害な影響があら
われることがあるので、乳化重合に際しては乳化剤を用
いないのが好ましい。本発明における単量体組成によれ
ば、特に乳化剤を要せずして安定に乳化共重合させるこ
とができるからである。但し、乳化剤が酵素に対して有
害な影響を与えなければ乳化剤を必要に応じて用いても
よい。本発明において乳化共重合させる単量体組成は、
カルポキシル基を有する単量体０．２〜１の重量％、好
ましくは０．５〜８重量％、第一の単量体１０〜９５重
量％、好ましくは２０〜９の重量％、内部架橋剤１〜２
の重量％、好ましくは２〜１の重量％、及びアクリロニ
トリル又はメタクリルニトリル１〜６０重量％、好まし
くは５〜４の重量％である。

カルポキシル基を有する単量体の量は、得られる共重合
体粒子への酵素の固定化量とも関連し、少なすぎるとき
は酵素を十分な量にて固定化することができず、一方、
多すぎるときは、得られる重合体粒子に酵素を固定化す
る際に酵素の失活が起こりやすくなるので好ましくない
。次に、一般に、カルボキシル基を有する単量体とこれ
に共重合性を有する単量体とを乳化共重合すると、前者
の単量体の親水性が高いために水媒体相中に遊離の水溶
性重合体が生じることが多い。

このような水溶性重合体が生じると、一部は水不溶性の
高分子重合体粒子の表面に吸着されて残り、これを担体
として酵素を固定化すると、この水溶性重合体にも酵素
が固定化される。このように水熔性重合体を含む担体に
酵素が固定化された固定化酵素は、酵素反応の際に水不
落性の水分散型高分子重合体粒子から港出し、固定イ捉
酵素自体の活性の経時低下が著しいうえに、基質や反応
生成物と混合するので、反応後にその分離を要する等の
種々の不都合が生じる。しかしながら、本発明に従って
、カルボキシル基を有する単量体と内部架橋用単量体と
アクリロニトリル及び／又はメタクリルニトリルとを乳
化共重合させることにより、重合の安定性が確保される
と共に、望ましくない水潟性重合体の生成が抑止される
。

このような結果が得られる理由は明確ではないが、重合
初期に生じるカルボキシル基を有する単量体を主成分と
する水溶性低分子量重合体にアクリロニトリル又はメタ
クリルニトリルと内部架橋用単量体が有効に共重合して
水不溶化すると共に、重合が安定化するのであろう。従
って、アクリロニトリル又はメタクリルニトリルの量が
上記範囲より少なすぎるとき、又は多すぎるときは、重
合の安定性が損なわれる。また、内部架橋用単量体が少
なすぎるときは水溶性重合体の副生が多くなり、一方、
多すぎるときは重合が安定性に欠けるようになる。本発
明において水分数型高分子重合体粒子の平均粒経は０．
０３〜２仏、好ましくは０．０７〜１〆である。

粒径が小さすぎると、固定化酵素を水中に分散させて酵
素反応を行なわせた後の回収が困難となり、一方、粒径
が大きすぎると、単位体積当りの粒子表面積が小さくな
り、酵素の固定化量が少なくなると共に、水中に分散さ
せるのが困難となるので好ましくない。水分数型高分子
粒子に酵素を共有結合するには、特に制限されることな
く、従来より知られている任意の方法によることができ
る。

例えば、一つの方法として、水熔性カルボジィミドを用
いて、酵素のアミノ基と水分散型高分子重合体粒子表面
のカルボキシル基とを直接アミド結合を形成させること
により結合させることができる。水落性カルボジィミド
としては、例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミ
ノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、１−シクロヘキシ
ル−３−（２−モルホリノエチル）力ルポジイミドーメ
トーｐ−トルェンスルホン酸等を挙げることができる。
このような水落性カルボジィミドを用いる酵素固定化は
従来知られている通常の条件の下で行なわれ、例えば水
分散型高分子重合体粒子の有するカルポキシル基の３〜
５ｑ音当量のカルボジィミドを用い、５℃程度の温度、
軸を４．５〜６．０に保持して酵素を一夜混合反応させ
ればよい。第二の方法として、水分散型高分子重合体粒
子表面のカルボキシル基にＮ−ヒドロキシスクシンィミ
ドの存在下に反応させた後、酵素のアミノ基を反応させ
、共有結合を形成させることができる。

更に、第三の方法として、水分散型高分子重合体粒子表
面のカルボキシル基にジアミンを作用させて、重合体粒
子表面にアミノ基を導入し、このアミノ基により酵素を
共有結合で固定化することもできる。例えば、前記した
カルボジィミドを用いて、酵素のカルポキシル基を重合
体粒子表面のアミノ基に反応させることができ、また、
グルタルアルデヒドのような架橋試薬を用いて、酵素の
アミ／基を重合体粒子に結合させることができる。ジァ
ルデヒドを架橋試薬として用いる場合には、重合体粒子
の有するアミノ基に対して過剰量を反応させ、重合体粒
子に一方のァルデヒド基により結合したジアルデヒドの
他方の遊離アルデヒド基に酵素のアミ／結合を反応させ
る。また、第四の方法としてジアゾカップリング法によ
ることもできる。

例えば、アミ／基を導入した重合体粒子にｐーニトロベ
ンズアルデヒドを反応、結合させ、次にニトロ基を通常
の方法、例えば水素化ホウ素ナトリウムと亜二チオン化
ナトリウムによってァミ／基に還元し、このアミノ基を
亜硫酸ナトリウムによってジアゾニウム基とし、これを
酵素のアミノ基とジアゾカップリングさせるのである。
以上のようにして酵素を重合体粒子に共有結合させた後
、用いた反応試薬や固定化されていない酵素を遠心分離
、膜分離等によって除去すれば、本発明の固定化酵素が
得られる。

本発明の固定化酵素は分散液として用いられ、基質と接
触される。

固定化酵素の使用量は、固定化酵素の粒径や酵素の固定
化量、必要とする反応速度、基質濃度等により適宜に決
定される。本発明において固定化される酵素は菌体内酵
素でよく、菌体外酵素でもよい。また、酵素は必ずしも
高度に精製されている必要はなく、抽出液や部分精製品
も用いられる。更に、本発明に従って単一の酵素を固定
化してもよいが、複数の酵素を固定化してもよい。酵素
の具体例としては、アミノ酸オキシダーゼ、カタラーゼ
、キサンチンオキシダーゼ、グルコース・オキシダーゼ
、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルタミ
ン酸デヒドロゲナーゼ、チトクロムＣオキシダーゼ、チ
ロシナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、ベルオキシダーゼ
、６−ホスルグルコン酸デヒドロゲナーゼ、リンゴ酸デ
ヒドロゲナーゼのような酸化還元酵素、アスパラギン酸
アセチルトランスフェラーゼ、アスパラギン酸アミノト
ランスフェラーゼ、グリシンアミノトランスフエラーゼ
、グルタミン酸−オキザロ酢酸アミノトラソスフェラー
ゼ、グルタミン酸−ピルビン酸アミノトランスフェラー
ゼ、クレアチンホスホキナーゼ、ヒスタミンメチルナラ
ンスフェラーゼ、ピルビン酸キナーゼ、フラクトキナー
ゼ、ヘキソキナーゼ、６−リジンアセチルトランスフエ
ラーゼ、、ロイシンアミノベフ。チターゼのような転移
酵素、アスパラギナーゼ、アセチルコリンエステラーゼ
、アミノアシラーゼ、アミラーゼ、アルギナーゼ、Ｌ−
アルギニンデイミナーゼ、インベルターゼ、ウレアーゼ
、ウリカーゼ、ウロキナーゼ、エステラーゼ、８ーガラ
クトシダーゼ、カリクレイン、キモトリプシン、トリプ
シン、トロンビン、ナリンギナーゼ、ヌクレオチダーゼ
、／ゞ／ｆイン、ヒヤウロニダーゼ、プラスミン、ベク
チナーゼ、ヘスベリジナーゼ、ペプシン、ベニシリナー
ゼ、ペニシリンアミダーゼ、ホスホリパ−ゼ、ホスフア
ターゼ、ラクターゼ、ＩＪパーゼ、リボヌクレアーゼ、
レンニンのような加水分解酵素、アスパラギン酸デカル
ボキシラーゼ、アスパルターゼ、クエン酸リアーゼ、グ
ルタミン酸デカルボキシラーゼ、ヒスチジンアンモニア
リアーゼ、フエニルアラニンアンモニアリアーゼ、フマ
ラーゼ、フマール酸ヒドラターゼ、リンゴ酸シンテター
ゼのようなリアーゼ、アラニンラセマーゼ、、グルコー
スイソメラーゼ、、グルコースホスフエートイソメラー
ゼ、グルタミン酸ラセマーゼ、乳酸ラセマーゼ、メチオ
ニンラセマーゼのような異性化酵素、アスパラギンシン
ターゼ、グルタチオンシンターゼ、ピルビン酸シンター
ゼのようなリガーゼ等を挙げることができる。本発明に
よる固定イＱ酵素は、以上のように、カルボキシル基を
有する水分散型高分子重合体粒子に酵素が共有結合にて
固定化されており、従来のセルロース誘導体単体粒子等
の場合と異なり、固定化酵素自体が遊離の酵素と同様に
反応系内を自由に移動できるため、基質の拡散が反応に
殆ど影響を与えず、従って、高分子量の基質の場合にも
遊離の酵素と同機の高い反応速度で酵素反応を行なわせ
ることができる。

しかも、酵素は担体に固定化されているため、酵素反応
後には遠心分離、塩析、凝集剤を用いる凝集沈殿、多孔
性膜による膿分離等によって容易に回収でき、長期間に
わたって繰返して使用することができる。更に、本発明
において用いる担体としての水分散性高分子重合体粒子
は、その製造面からみれば、乳化剤を用いることなく、
且つ、望ましくない水溶性重合体の生成なく、安定に乳
化共重合にて得ることができる。

また、アクリロニトリル又はメタクリルニトリルと内部
架橋用単量体を併用することにより、得られる水分散型
高分子重合体粒子は強度が大きいと共に、粒子相互の粘
着も起らない。実施例 １ アクリル酸３夕、メチルメタクリレート８０夕、トリェ
チレングリコールジメタクリレート２夕及びアクリロニ
トリル１５夕を蒸留水２３０夕に加え、過硫酸カリウム
０．３夕を水１０ｗこ溶解した重合開始剤水溶液を７０
ｏｏの温度で窒素気流下に加え、１２仇ｐｍで燈拝しつ
つ８時間重合させて、固形分３０％、平均粒径０．３０
仏の重合体粒子の水分散液を得た。

重合は非常に安定に行なわれて、凝集物は０．０２％で
あった。また、分散液を遠心分離し、上燈について調べ
たところ、仕込み量の５％のカルボキシル基しか定量さ
れず、水容性重合体の副生は僅かであった。次に、上記
の分散液１００Ｍに１−シクロヘキシル−３−（２ーモ
ルホリノエチル）力ルボジイミドーメト−ｐ−トルェン
スルホン酸２０夕を水２００机に溶解した水溶液を加え
、蝿拝しつつ、ＰＨを５．０に調整した。

ａーアミラ−ゼ−２．５夕を水５００の‘に溶解してｐ
Ｈを５．０に調整した酵素水溶液を上記分散液に加え、
蝿梓下にｐＨを０．５に調整しながら、５℃の温度で２
岬時間、酵素の固定化反応を行なわせた。この後、遠心
分離によって沈降した重合体粒子を緩衝液で洗糠し、未
固定のａ−アミラーゼ、禾反応のカルボジィミド及び反
応創生物を除去し、再び緩衝液中に分散させて、本発明
による固定化ａ−アミラーゼを得た。

この固定化酵素のａーアミラーゼ固定化量は、重合体粒
子１夕当り４０雌であり、また、１％デンプン水溶液を
基質として測定した活性収率は４０％であった。

尚、活性収率とは固定化された酵素の活性の理論量に対
する実際の活性の割合を意味する。

ここでは、１％デンプン水溶液を基質として固定イ挨酵
素を３５ｏｏで１０分間反応させ、ヨウ素デンプン反応
からデンプンの分解量を求めることにより、固定化酵素
の活性、デンプン分解速度（ｍ９／分）を得、これと等
しい活性を有する遊離の酵素量を酵素固定化量で除して
求めた。比較例 １ アクリル酸３夕、メチルメタクリレート８２夕及びアク
リロニトリル１５夕を実施例１と同様にして乳化共重合
させ、固形分２９％、平均粒径０．３０仏の重合体粒子
の水分散液を得た。

凝集物は１％であった。この分散液を遠心分離し、上燈
について調べたところ、仕込量の４０％のカルボキシル
基が定量され、多量の水溶性重合体の副生が認められた
。比較例 ２アクリル酸３夕、メチルメタクリレート９
５ｇ及びトリエチレングリコールジメタクリレート２夕
を実施例１と同様に乳化共重合させ、固形分２８％、平
均粒径０．３２ムの重合体粒子の水分散液を得た。

重合は不安定であって、凝集物は６％であった。また、
この分散液を遠心分離し、上燈を調べたところ、仕込量
の２０％カルボキシル基が定量された。実施例 ２ 実施例１で得られた重合体粒子水分散液１００の【に１
−シクロヘキシルー３−（２−モルホリノエチル）力ル
ボジイミドーメト−ｐートルエンスルホン酸２Ｍを水２
００の‘に溶解した水溶液を加え、渡杵しつつ、柵を５
．０に調整した。

メタキシリレンジアミン３．０夕を水３０の‘に溶解し
たｐＨ５．０の水溶液を上記分散液に加え、濃拝下に柵
を５．０に調製しつつ、室温で２蝿時間反応させた。こ
の後、遠０分離して沈降した重合体粒子を水で洗撤し、
未反応のカルボジィミド、メタキシリレンジアミン、反
応創生物等を除去し、アミノ基を有する水分散型高分子
重合体粒子を得た。この重合体粒子を水１００泌に再分
散させ、グルタルアルデヒドの５％水溶液６０叫を加え
、室温で２独時間反応させた後、遠心分離により精製し
、アルデヒド基を有する水分散型高分子重合体粒子を得
た。

次に、０．１Ｍリン酸水素二カリウム及び０．１Ｍリン
酸ニカリウムから調整した緩衝液（ｐＨ７．０）１００
泌に上記重合体粒子を分散させ、これにゥレアーゼ３夕
を緩衝液３０のＺに溶解した酵素水溶液を加え、５℃の
温度で２凪時間反応させて、ウレアーゼを重合体粒子に
固定化した。

反応後、遠心分離して沈降した重合体粒子を緩衝液で洗
総し、緩衝液に再分散させて本発明による固定化ウレア
ーゼを得た。この固定イは酵素のウレアーゼの固定化量
は重合体粒子１夕当り３０雌であり、活性収率は５０％
であった。

活性収率は、０．０３Ｍの尿素水溶液を基質とし、３５
ｑｏで１０分間固定化酵素を反応させ、生成したアンモ
ニア量（ムモル／分）を塩酸瓶定で求めて活性を測定し
これと等しい活性を有する遊離の酵素量を酵素固定化量
で除して求めた。実施例 ３ 実施例２で得られたアミノ基を有する水分散型高分子重
合体の水分散液１００叫にｐ−ニトロベソズアルデヒド
の１％エタノール溶液２００の‘を加え、室温で２時間
反応させた後、遠心分離、洗練し、ニトロ基を有する水
分散型高分子重合体粒子を得た。

この重合体粒子を水１００机とに再分散させ、これに０
．１Ｍ亜二チオン酸ナトリウムと０．９Ｍ炭酸水素ナト
リウムを含有する水溶液１００机上を加え、室温で２時
間反応させて、重合体粒子の有するニトロ基をアミノ基
に還元した。

遠心分離後、十分に洗液し、アミノ基を有する水分散型
高分子重合体粒子を得た。この重合体粒子を水１００肌
に分散させ、これに０．１Ｍの亜硝酸ナトリウムの０．
州塩酸水溶液５０の‘を加えて室温で１時間反応させ、
重合体粒子の有するアミノ基をジアゾニウム基に変えた
。

遠心分離後、十分に洗雛して、ジアゾニゥム基を有する
水分散型重合体粒子を得た。この重合体粒子を水１０肌
‘に再分散させ、これにトリプシン３夕を緩衝液３０の
‘に分散した酵素分散液を加え、５℃の温度で２独特間
反応させた後、遠心分離して沈降した重合体粒子を緩衝
液で洗縦、未固定のトリプシンを除去した。

これを再び緩衝液に分散させた、本発明による固定化ト
リプシンを得た。この固定化酵素におけるトリプシンの
固定化量は重合体粒子１夕当り２０の９であり、活性収
率は４０％であった。

尚、１％カゼイン水溶液を基質として酵素を３５ｑｏで
１０分間反応させた後、５％トリクロル酢酸により高分
子量タンパク質を沈殿させ、遊離の非タンパク性分鱗質
量を２８仇ｍの吸光度から求め、この吸光度を１分間に
１．０増加させる活性を１単位として、活性収率を求め
た。実施例 ４ メタクリル酸５夕、メチルメタクリレート２３夕、スチ
レン４０夕、ジビニルベンゼン２夕及びアクＩＪロニト
リル３０夕を蒸留水２３０外こ加え、実施例１と同様に
重合し、固形分３０％、平均粒径０．２５山の重合体粒
子の水分散液を得た。

重合は非常に安定に行なわれて、凝集物は０．０２％で
あった。上記分散液１００柵に１−シクロヘキシル−３
一（２−モルホリノヱチル）カルボジイミドーメト−Ｐ
−トルェンスルホン酸２０夕を水２００肌とに溶解した
水溶液を加え、縄拝しつつ、ｐＨを５．０に調整した。
ウレアーゼ３．０夕を水５００の‘に溶解してｐＨを５
．０に調整した酵素水溶液に上記分散液を加え、鷹枠下
にｐＨ５．０に調整しながら、２４時間酵素の固定化反
応を行なわせた。この後、遠心分離にて重合体粒子を洗
膝し、緩衝液に分散させて、本発明による固定化ウレア
−ゼを得た。

この固定イ携酵素のウレアーゼ固定化量は、重合体粒子
１夕当り４３の９であり、０．０９Ｍ尿素を基質として
実施例１と同様の方法で測定した活性収率は３０％であ
った。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ （ａ）カルボキシル基を有するラジカル重合性単量
   体０．２〜１０重量％、（ｂ）この単量体と共重合し得
   る第一のラジカル重合性単量体１０〜９５重量％、（ｃ
   ）多官能性内部架橋用単量体１〜２０重量％、及び（ｄ
   ）第二のラジカル共重合性単量体としてのアクリロニト
   リル又はメタクリロニトリル１〜６０重量％を乳化共重
   合させて得られる水分散型高分子重合体粒子に酸素が共
   有結合によって固定化されていることを特徴とする固定
   化酵素。 ２ カルボキシル基を有する単量体が一般式Ｒ＾１ＣＨ
   ＝ＣＲ＾２ＣＯＯＨ （但し、Ｒ＿１は水素、低級アル
   キル基又はカルボキシル基、Ｒ＾２は水素又は低級アル
   キル基を示し、Ｒ＾１が水素又は低級アルキル基のとき
   はＲ＾２はカルボ低級アルコキシ基であってもよい。 ）で表わされることを特徴とする特許請求の範囲第１項
   記載の固定化酵素。３ 水分散型高分子重合体粒子が０
   ．０３〜２μの平均粒径を有することを特徴とする特許
   請求の範囲第１項記載の固定化酵素。 ４ 第一の単量体がアクリル酸エステル、メタクリル酸
   エステル又はスチレンであることを特徴とする特許請求
   の範囲第１項記載の固定化酵素。 ５ 多官能性内部架橋用単量体が多価アルコールのポリ
   アクリレート又はポリメタクリレートであることを特徴
   とする特許請求の範囲第１項記載の固定化酵素。