Procédé de préparation d'acide ptéroylglutamique. La présente invention se rapporte à un procédé de préparation d'une ptéridine substituée, soit d'acide ptéroylglutamique qui correspond, sous une forme tautomère ai moins, à la formule:
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Selon la présente invention, on prépare l'acide ptéroy lglutamique en faisant réagir de la 2,4,5 - triamino - 6 - hydroxypyrimidine, du 2,3-dihydroxyacrylaldéhyde et de l'acide p-aminobenzoylgluta.mique.
L'acide ptéroylglutamique obtenu est une substance dont la couleur varie du jaune au rouge brun et qui se dissout difficilement dans l'eau et les solvants organiques. Il est destiné à être utilisé pour la. stimulation de la formation de l'hémoglobine et dans le trai tement de l'agranulocytose.
Les sels d'acides de l'acide ptéroylglutami- que peuvent se préparer par traitement de celui-ci au moyen d'acides minéraux forts, par exemple l'acide chlorhydrique, l'acide sulfurique, etc. On peut aussi obtenir des sels contenant des cations par traitement dudit acide au moyen d'un agent alcalin approprié, par exemple un hydroxyde d'un métal alcalin, de l'ammoniaque, une amine ou autres composés semblables.
D'autres sels mé talliques contenant comme cations le zinc, l'argent, le nickel, le cuivre, le magnésium, le baryum et autres peuvent être obtenus par des méthodes de double décomposition, par exemple en traitant une solution d'un sel de métal alcalin de l'acide ptéroylglutamique au moyen d'un sel soluble contenant le cation voulu.
Le premier réactif, la 2,4,5-triamino-6- hydroxypyrimidine, est un composé connu qu'on peut préparer par des méthodes décrites dans la littérature chimique. On sait égale ment que ce composé peut exister sous une ou plusieurs formes tautomères comme:
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Ce dernier composé est connu sous le nom de 2,4,5-triamiiio-pyrimidone-6. On sait dans ce domaine que toutes les formes tautomères peuvent être utilisées dans les mêmes réac tions chimiques d'une manière analogue et toutes les indications fournies sur l'emploi d'une forme tautomère sont valables pour les autres formes.
La formule (le structure du second com posé intermédiaire, le 2,3-dihydroxyacryl- aldéhyde (dénommée communément réduc- tone), est la suivante:
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Ce produit peut également exister sous forme tautomère, par exemple sous la forme céto nique, à laquelle on donne le nom de 2-oxo- 3-hydroxypropionaldéhyde. Naturellement, on peut utiliser les divers tautomères dans la ré action pour obtenir les produits voulus.
Le troisième réactif, l'acide p-amiiio- benzoy1glutamique, peut se préparer par action de chlorure de p-nitrobenzoyle sur l'acide glutamique et réduction du groupe nitro en groupe amino.
La réaction globale qui se produit an cours de l'exécution du procédé suivant la présente invention peut être formulée comme suit
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Dans certains cas, le produit de la réaction peut contenir la forme dihydro instable qui se transforme toutefois automatiquement en la forme stable par exposition à l'air, par exemple.
La réaction donnant naissance à l'acide ptéroy lglutamique peut être effectuée en mé langeant en même temps les trois réactifs essentiels ou en faisant réagir premièrement le second réactif avec l'un des deux autres réactifs, avant d'ajouter le troisième réactif au mélange réactionnel, sans isoler les inter médiaires.
On peut effectuer la réaction dans l'eau ou dans un solvant organique, de préférence un liquide organique hydroxylé comme l'alcool éthylique, l.'étliylènc--@ly col ou analo gues. On peut également utiliser d'autres solvants comme l'acétone, le benzène, la formamide, ete. La température de la réaction peut varier considérablement., de la tempé rature ordinaire à 160 C environ, les tempé ratures supérieures à 100 <B>C</B> étant préféra bles. Le temps requis varie naturellement avec la température et les autres conditions de la réaction.
Certains agents de condensation alcalins comme l'acétate de sodium, le phosphate diso- dique, le formiate de sodium, la pyridine, la diméthylaniline et analogues peuvent être employés pour augmenter le rendement en produit. De même, la. réaction se produit dans de larges limites de pH et i] ne semble pas qu'il y ait de limites d'alcalinité ou d'acidité. Il semble qu'on obtienne les meilleurs résultats, toutefois, à un pH compris entre 3 et 5.
Les exemples suivants montrent comment l'invention peut être réalisée. <B><I>Exemple 1:</I></B> On introduit dans 550 parties d'éthylène- glycol 5 parties de réductone, 9 parties de 2,4,5-triamino-6-hy droxypyrimidine et 17 par ties d'acide p-aminobenzoylglutamique et on chauffe le mélange pendant 15 minutes 145 C. On refroidit la solution, on l'étend de trois volumes d'eau et on la filtre. Le produit est lavé à l'eau, à. l'alcool méthylique, à l'éther, puis séché.
L'analyse du produit brut montre qu'il contient une quantité impor tante d'acide N-[4-{[(2-amino-4-hydroxy-6- pyrimido- (4,5-b) -pyrazyl) -méthyl] -amino } benzoyl]-glutamique. Le produit purifié se présente sous la forme de cristaux jaunes dont l'indice de réfraction a la valeur de 1,599 0,003 dans la direction parallèle à. la longueur des cristaux et de 1,774 0,003 dans la direction parallèle à la largeur des cristaux. Chauffé, le produit se décompose sans fondre.
Bien qu'il ne soit pas nécessaire pour nombre d'usages importants que le produit soit très purifié, voici cependant une méthode pour l'obtention d'un produit très pur sous forme cristallisée. Le produit brut de la réaction préparé comme ei-dessus est d'abord dissous dans une solution de soude caustique 0,2n à une concentration équivalente à 400 microgrammes (y) par cm'. On ajoute alors du chlorure de baryum 0,211, on agite le mélange pendant. 10 minutes et on le filtre. On ajoute clé l'alcool éthylique au filtrat pour obtenir une concentration de 20G et, après agitation, on filtre à nouveau la solution et. on rejette la matière insoluble, s'il y en a.
L'excès de baryum contenu dans le filtrat est alors précipité par addition d'une quan tité équivalente d'acide sulfurique en prenant soin de maintenir le mélange nettement alca- lin par addition d'hydroxyde de sodium, si nécessaire. Après élimination du sulfate de baryum. par filtration, la solution est étendue à 100 y par cm3 de composé actif, puis ajus tée à pH 7. On la filtre de nouveau, on con centre le filtrat à un petit volume de ma nière que la concentration en produit actif soit de 200 y par cm'. Cette solution est épuisée au moyen de quatre portions de 10 parties en volume de butanol. Les extraits butanoliques sont éliminés.
La phase aqueuse est alors traitée au moyen d'une quantité de charbon actif équivalant au poids total de composé actif présent. On filtre la solution et on élimine le charbon. On ajuste de pH du filtrat à 3, on chauffe pour dissoudre le com posé actif qui peut avoir précipité à cette acidité. On peut ajouter de l'eau, si néces saire. La solution saturée est alors refroidie à 4 C environ, et le précipité est recueilli. On peut le faire recristalliser dans l'eau chaude ajustée à pH 3 si on le désire.
<I>Exemple 2:</I> On chauffe à. 85 C, pendant 5 minutes, 5 parties de réductotie, 1? parties d'acide p-aminobenzoylglutamique et 550 parties d'éthylène-glycol. On ajoute alors 100 parties de 2,4,6-triamino-6-hydroxy py rimidine et on chauffe le mélange à 135 C pendant 30 mi nutes. La solution est alors refroidie, étendue de 3 volumes d'eau et filtrée. On lave le pro duit. à l'eau, à. l'alcool méthylique et à. l'éther et on sèche. L'analyse montre que le produit est identique à. celui de l'exemple 1.
<I>Exemple 3:</I> On chauffe à 100 C, pendant 15 minutes, 5 parties de réductone, 550 parties d'éthylène- glycol et 14 parties d'acide p-amino-benzoy 1- glut.amique. On ajoute alors 10 parties de 2,4,5 - triamino - 6 - hydroxy pyr imidine et. on chauffe le mélange à 135 C pendant 30 mi nutes. La solution est. alors refroidie, étendue de 3 volumes d'eau et filtrée. Le produit filtré est lavé à l'eau, à l'alcool méthylique et à l'éther et séché.
L'analyse montre que c'est le même produit que celui des exemples précé dents. <I>Exemple</I> .1: On dépolymérise 2,5 parties de réductone par dissolution dans 70 parties d'eau et chauffage à 60 C pendant 20 minutes, en fai sant passer un courant d'azote dans la solu tion. On dissout 3,5 parties de 2,4,5-triamino- 6-hydroxypyrimidine et 9,5 parties d'acétate de sodium dans 250 parties d'acide acétique ln et on filtre. Les deux solutions sont mélangées à. la température ordinaire, sous atmosphère d'azote.
Après plusieurs heures, le précipité est éliminé par filtration, lavé à l'eau, à l'al cool méthylique et à l'éther, et séché.
On mélange et on chauffe à 135 C pen dant 30 minutes 1 partie du produit ci-dessus, 1,4 partie d'acide p-aminobenzoylglutamique et 110 parties d'éthylène-glycol. La solution est alors refroidie, étendue au moyen de deux à quatre volumes d'eau et filtrée. Le produit, analysé après lavage et séchage, s'est révélé être le même que celui des exemples précé dents.
Exemple <I>5:</I> On dissout dans 500 parties d'eau 16 par ties de réductone et on laisse reposer la solu tion à 50 C pendant 10 minutes. On ajoute alors lentement cette solution à une solution de 2,4,5-triamino-6-hydroxypyrimidine et 60 parties d'acide p-aminobenzoylglutamique dans 2500 parties d'eau, en agitant à 60 C. Après repos d'une heure et refroidissement, on filtre, on lave à l'alcool et à l'éther et on sèche.
Ce produit brut contient également l'acide N-[4 {[ (2-amino-4-hydroxy-6-pyrimido- (4,5-b)-pyr- azyl)-méthyl]-amino}-benzoyl]-glutamique. Exemple <I>6:</I> A 25 cm3 d'eau à 50-60 C, on ajoute 0,2 g de réductone et on maintient la tempé- rature pendant environ 15 minutes. Après re froidissement à la température ordinaire, on ajoute 3 gouttes d'acide chlorhydrique concen tré, puis 0,5 g d'acide p-amino-benzoylglutami- que. Après agitation pendant 10 minutes, la solution est placée dans tri réfrigérant, une huile se sépare alors lentement.
Au bout de plusieurs semaines de repos, l'huile se solidifie et forme un solide rouge. Ce solide est filtré, lavé à l'alcool méthylique et à l'éther et séché. Il est très peu soluble dans l'eau chaude et soluble dans l'éthylène-glycol chaud, mais inso luble dans la plupart des solvants organiques. Le composé fond en se décomposant à 190 à 1.95 C. Ce produit est l'acide N-(2,3-dihydroxy- 2-pr opylidène) -aminobenzoylglut amique.
On chauffe à l35 C pendant 30 minutes en agitant un mélange de<B>100</B> mg d'acide N- (2,3-dihydroxy-2-propylidène)-p-aminoben- zoy1glutamique, 45 mg de 2,4,5-triamino-6- hydroxypyrimidine et 5 em3 d'éthylène-glyeol. On refroidit le mélange à la température ordi naire et on ajoute 2 à 4 vol. d'eau. On amène le pA entre 3 et 4 par addition de quelques gouttes d'acide chlorhydrique étendu. On filtre le produit, on le lave à l'eau, à l'alcool méthylique et à l'éther et on le sèche.
On obtient 50 mg d'acide N- [4-{ [ (2-amino-4- hydroxy-6-py rimido- [.1,5-b ] -py razyl) -méthyl ] - amino}-benzoyl]-glutamique brut.
Il est bien entendu que l'on peut intro duire des modifications diverses dans le pro cédé décrit. sans sortir du cadre de cette in vention.