JPH10500561A - ランダムフラグメント化および再組立によるｄｎａ変異誘発 - Google Patents

ランダムフラグメント化および再組立によるｄｎａ変異誘発

Info

Publication number
JPH10500561A
JPH10500561A JP7521977A JP52197795A JPH10500561A JP H10500561 A JPH10500561 A JP H10500561A JP 7521977 A JP7521977 A JP 7521977A JP 52197795 A JP52197795 A JP 52197795A JP H10500561 A JPH10500561 A JP H10500561A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
stranded
polynucleotide
double
fragment
sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP7521977A
Other languages
English (en)
Inventor
ウィレム ピー． シー． ステマー，
アンドレアス クラメリ，
Original Assignee
アフィマックス テクノロジーズ エヌ． ブイ．
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22733354&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JPH10500561(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by アフィマックス テクノロジーズ エヌ． ブイ． filed Critical アフィマックス テクノロジーズ エヌ． ブイ．
Publication of JPH10500561A publication Critical patent/JPH10500561A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures
    • C40B40/02—Libraries contained in or displayed by microorganisms, e.g. bacteria or animal cells; Libraries contained in or displayed by vectors, e.g. plasmids; Libraries containing only microorganisms or vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
    • C07K14/43595—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from coelenteratae, e.g. medusae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/545—IL-1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/102—Mutagenizing nucleic acids
    • C12N15/1027—Mutagenizing nucleic acids by DNA shuffling, e.g. RSR, STEP, RPR
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
    • C12N15/1037—Screening libraries presented on the surface of microorganisms, e.g. phage display, E. coli display
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2468—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1) acting on beta-galactose-glycoside bonds, e.g. carrageenases (3.2.1.83; 3.2.1.157); beta-agarase (3.2.1.81)
    • C12N9/2471—Beta-galactosidase (3.2.1.23), i.e. exo-(1-->4)-beta-D-galactanase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • C12N9/86—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in cyclic amides, e.g. penicillinase (3.5.2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6811—Selection methods for production or design of target specific oligonucleotides or binding molecules
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01023—Beta-galactosidase (3.2.1.23), i.e. exo-(1-->4)-beta-D-galactanase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
    • C12Y305/02—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in cyclic amides (3.5.2)
    • C12Y305/02006—Beta-lactamase (3.5.2.6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures
    • C40B40/04—Libraries containing only organic compounds
    • C40B40/06—Libraries containing nucleotides or polynucleotides, or derivatives thereof
    • C40B40/08—Libraries containing RNA or DNA which encodes proteins, e.g. gene libraries
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B50/00—Methods of creating libraries, e.g. combinatorial synthesis
    • C40B50/06—Biochemical methods, e.g. using enzymes or whole viable microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

(57)【要約】 ランダムフラグメント化後のDNA再組立のための方法、およびインビトロまたはインビボにおける組換えによる核酸配列の変異誘発のためのその適用を開示する。詳細には、変異タンパク質をコードする核酸フラグメントまたはポリヌクレオチドの生成のための方法を開示する。本発明はまた、タンパク質のインビトロまたはインビボにおける直接的な分子進化を可能にする変異誘発、再編成および選択の反復サイクルの方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】 ランダムフラグメント化および再組立によるDNA変異誘発 発明の背景 発明の分野 本発明は、所望の表現型を与えるポリヌクレオチドおよび／または選択可能な 有利な予め決定された特質を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドの 生成のための方法に関する。１つの局面において、本方法は変異タンパク質をコ ードする核酸フラグメントを生成および選択するために使用される。関連技術の説明 生体高分子(例えば、タンパク質、DNAなど)の活性配列の複雑さは、その情報 内容(information content)(「IC」；５-９)と呼ばれている。タンパク質の情報内 容はアミノ酸配列変異に対する活性タンパク質の抵抗性として定義され、同様の 機能を有する関連配列のファミリーを記載するために必要な最少数の不変アミノ 酸(ビット)から算定される(９、10)。ランダムな変異誘発に感受性であるタンパ ク質は、高い情報内容を有する。1974年に、この定義が作製された際、タンパク 質の多様性は、分類上の多様性としてしか存在していなかった。 分子ライブラリーのような分子生物学の発達は、かなり多数の変異しやすい塩 基の同定、およびランダムなライブラリーからの機能配列の選択さえ可能にして きた。大部分の残基が、典型的に全てが同時にではないにしても、変異され得、 配列の前後関係(context)の変化を補うことに依存している。従って、100アミノ 酸のタンパク質は、2,000個の異なる変異しかを含まないが、20100通りの可能な 変異の組み合わせを包含する。 情報密度は、配列の単位長当たりの情報内容である。酵素の活性部位は高い情 報密度を有する傾向がある。対照的に、酵素における可変リンカー(flexible li nker)は低い情報密度を有する(８)。 実験室形式で変異タンパク質を作製するために現在広く用いられている方法は 、誤りがち(error-prone)ポリメラーゼ連鎖反応(11、12、19)およびカセット変 異 誘発(８、20、21、22、40、41、42)であり、これらの方法では最適化しようとす る特定の領域が、合成上で変異誘発されるオリゴヌクレオチドで置換される。ど ちらの場合も、「変異体曇り(mutant cloud)」(４)は、元の配列における特定の部 位の周囲で生成される。 誤りがちなPCRは、長い配列にわたってランダムに低レベルの点変異を誘導す るために、低適合性の重合条件を使用する。誤りがちなPCRは、未知の配列のフ ラグメントの混合物を変異誘発するために使用され得る。しかし、コンピュータ ーによるシュミレーションは、点変異単独では、しばしばあまりにも緩やかで、 連続した配列進化に必要とされるブロック変化が可能でない場合もあることを示 唆した。公表されている誤りがちなPCRプロトコルは、0.5kb〜1.0kbより大きい のDNAフラグメントの増幅が不可能で、それらの実際的な適用は限られている。 さらに、誤りがちなPCRの反復サイクルは、中立変異の蓄積を導き、これは例え ば、タンパク質を免疫原性にし得る。 オリゴヌクレオチド直接変異誘発では、短い配列が合成上で変異誘発されるオ リゴヌクレオチドで置換される。このアプローチは遠位変異の組み合わせを生成 せず、従って組み合わせではない。莫大な配列長に関する制限されたライブラリ ーサイズは、タンパク質の最適化のために多数回の選択が避けられないことを意 味する。合成オリゴヌクレオチドを用いる変異誘発には、各回の選択の後に、個 々のクローンの配列決定をし、次いでファミリーに分類して、単一のファミリー を任意に選択し、そしてファミリーをコンセンサスモチーフに縮小する必要があ る。このコンセンサスモチーフは再合成され、そして単一の遺伝子中へ再挿入さ た後にさらなる選択を行う。このプロセスは統計的なボトルネック(statistical bottleneck)を構成し、多数回の変異誘発のためにはこのプロセスは労働力を必 要とし、そして実際的でない。 従って、誤りがちなPCRおよびオリゴヌクレオチド直接変異誘発は、単一サイ クルの配列微調整には有用であるが、多数サイクルに適用する場合、直ちに制限 されるようになる。 誤りがちなPCRは未知の配列のフラグメントの混合物を変異誘発するために使 用され得る(11、12)。しかし、公表されている誤りがちなPCRプロトコル(11、1 2)は、ポリメラーゼの低いプロセシビティー(processivity)を受ける。従って、 このプロトコルは平均的なサイズの遺伝子のランダムな変異誘発を生じ得ない。 このように能力がないことによって、誤りがちなPCRの実際的な適用が制限され る。 誤りがちなPCRのもう１つの重大な制限は、配列の情報内容に伴って下流変異 の速度が増すことである。ある情報内容、ライブラリーのサイズ、および変異誘 発速度、下流変異の上流変異に対するバランスは、統計的に、さらなる改良の選 択を阻害する(統計的最高限度)。 最後に、誤りがちなPCRの反復サイクルはまた、中立変異の蓄積を導き、例え ば、免疫原性に影響し得るが、結合アフィニティーには影響しない。 従って、誤りがちなPCRは、あまりにも緩やかで連続した配列進化に必要とさ れるブロック変化が可能でないことが見出された(１、２)。 カッセット変異誘発において、単一の鋳型の配列ブロックは、代表的に、(部 分的に)ランダム化された配列により置換される。従って、得られる最大情報内 容は、ランダムな配列の数(すなわち、ライブラリーのサイズ)により統計学的に 制限される。このことは統計的なボトルネックを構成し、現在のところ最適では ないが、より長期間のポテンシャルを有し得る他の配列ファミリーを排除する。 さらに、合成オリゴヌクレオチドでの変異誘発は、各回の選択の後に個々のク ローンの配列決定を必要とする(20)。従って、このアプローチは時間がかかり、 そして多数回の変異誘発には実際的でない。 従って、誤りがちなPCRおよびカセット変異が最も適しており、そして比較的 低い情報内容の範囲を微調整するために広く使用されてきた。１つの明白な例外 は、誤りがちなPCRによる多数回の増幅および選択を用いる、ランダムライブラ リーからのRNAリガーゼリボザイムの選択である(13)。 直鎖状の生物学的組換え配列(例えば、タンパク質、RNAおよびDNA)の設計のた めの手段は、天然に発達してきた手段ほど強力ではないことが、ますます明らか になっている。より良い変異体を見出すことは、より広いライブラリー内でより 多くの配列をサーチすることに依存しており、変異誘発性の増幅および選択のサ イクルの数を増加することが必要である。しかし、上記のように、広く用いられ ている現在の変異誘発方法には、反復サイクルのために使用される場合、明らか に制限がある。 大部分の生物の進化は自然淘汰および有性生殖により生じる。有性生殖は選択 された個体の子孫の遺伝子を混合および結合することを確実にする。減数分裂の 間、親由来の相同染色体を互いに並べ、そしてそれらの長さに沿って交差するこ とによって、遺伝子物質を交換する。このようなDNAの交換(swapping)または再 編成(shuffling)は、生物体がより迅速に進化することを可能にする(１、２)。 有性生殖において、挿入される配列は同種環境内で有用性が証明された配列なの で、一旦配列が新しい配列中へ挿入されても、実質的な情報内容を有する傾向が ある。 Martonら(27)は、直線的な反復配列を有するプラスミドにおける組換えをモニ ターするための、インビトロにおけるPCRの使用について記載している。Marton らは、DNAの切断またはニッキング(nicking)の結果として、PCR中に組換えが生 じることを開示している。これにより組換え分子が生じる。Meyerhansら(23)も また、インビトロにおけるPCR中にDNA組換えが存在することを開示している。 用語、適用された分子進化(「AME」)は、進化上の設計アルゴリズムの特定の有 用な目的に対する適用を意味する。AMEのための多くの異なるライブラリー形式 が、ポリヌクレオチド(３、11-14)、ペプチドおよびタンパク質(ファージ(15-17 )、lacI(18)およびポリソームについて報告されてきたが、これらの形式におい は、いずれも、組み合わせライブラリーを故意に作製するためのランダムな交差 による組換えを使用していない。 理論的には、100アミノ酸のタンパク質には2,000通りの異なる個々の変異体が 存在する。100個アミノ酸からなるタンパク質は、20100通りの可能な変異の組み 合わせを有するが、数が多すぎるので、従来の方法では徹底的に調査し得ない。 これらの可能な結合変異(combination mutation)の全てを生成およびスクリーニ ングすること可能にするようなシステムを開発することは有益である。 Winterおよび共同研究者らは(43,44)は、ファージシステムでの発現のために 、インビボ部位特異的組換えシステムを利用してＬ鎖抗体の遺伝子とＨ鎖抗体の 遺伝子とを結合した。しかし、彼らのシステムは組換えの特異的部位に依存して お り、それゆえ制限される。Hayashiら(48)は、重複伸長およびPCRによる単鎖抗体 (scFv)における抗体CDR領域の同時変異誘発を報告している。 Carenら(45)はランダムなインビボ組換えを使用する大規模集団の多重変異体 を生成する方法を記載している。しかし、彼らの方法は、プラスミドの２つの異 なるライブラリーの組み換えを必要としており、各ライブラリーは異なる選択マ ーカーを有している。従って、方法は存在する選択マーカーの数に等しい限られ た数の組換えに制限され、そして選択された配列(１つまたは複数)に連結するマ ーカー遺伝子の数を同時に直線的に増加する。 Calogeroら(46)およびGalizziら(47)は、相同であるがプラスミド上で端を切 り取った２つの昆虫トキシン遺伝子でのインビボ組換えによりハイブリッド遺伝 子を生成し得ることを報告している。Radmanら(49)は、欠損型ミスマッチ修復酵 素を有する宿主細胞において、実質的にミスマッチなDNA配列のインビボ組換え によりハイブリッド分子が形成されることを報告している。 変異タンパク質を生成する方法を開発することは有益であり、本方法は容易に サーチされる変異核酸配列の大規模ライブラリーをの開発を可能にした。本明細 書に記載の発明は、点変異誘発、核酸再編成および選択の反復サイクルを使用す ることに関し、タンパク質のような高度に複雑な直線配列のインビトロにおける 直接的な分子進化を、ランダム組換えによって可能にする。 それゆえに、変異DNA、RNAまたはタンパク質の大規模ライブラリーの生成を可 能にする方法および所望の目的のために特定の変異体を選択することを可能にす る方法を開発することは有益である。本明細書中に記載の発明は、DNA、RNAまた はタンパク質のような高度に複雑な直線配列のインビボにおける直接分子進化を 、組換えによって可能にする変異誘発、インビボ組換えおよび選択の反復サイク ルの使用に関する。 本発明のさらなる利点については、添付の図面を参考にして、本発明の以下の 記載から明らかになろう。 発明の要旨 本発明は、選択されるポリヌクレオチド配列または選択されるポリヌクレオチ ド配列の集団を、代表的には増幅されたポリヌクレオチドおよび／またはクロー ニングされたポリヌクレオチドの形態において生成する方法に関し、それによっ て選択されたポリヌクレオチド配列(１つまたは複数)は、選択され得る所望の表 現型の特徴(例えば、ポリペプチドをコードする、連結されたポリヌクレオチド の転写を促進する、タンパク質に結合するなどの特徴)を有する。所望の構造ま たは機能的特性(例えば、予め決定された生体高分子(例えば、レセプター)への 結合)を有するポリペプチドを同定する１つの方法は、ポリペプチドの大規模ラ イブラリーを、ポリペプチドのアミノ酸配列により与えられる所望の構造または 機能的特性を有する個々のライブラリーメンバーについてスクリーニングするこ とを包含する。 本発明は、アフィニティー相互作用スクリーニングまたは表現型スクリーニン グに適切なディスプレイされたポリペプチドまたはディスプレイされた抗体のラ イブラリーを生成する方法を提供する。本方法は、(1)ディスプレイされたポリ ペプチドまたはディスプレイされた抗体、および上記のディスプレイされたポリ ペプチドまたはディスプレイされた抗体をコードする関連性ポリヌクレオチドを 含む第１の複数の選択されたライブラリーメンバーを得、そして上記の関連性ポ リヌクレオチドまたはそのコピーを得る工程であって、ここで上記の関連性ポリ ヌクレオチドが実質的に同一の配列の領域を包含し、必要に応じて上記のポリヌ クレオチドまたはコピーに変異を導入する工程、および(２)代表的にはランダム に上記の関連性ポリヌクレオチドまたはコピーをプールし、そしてフラグメント 化してPCR増幅に適する条件下でそのフラグメントを形成し、PCR増幅および必要 に応じて変異誘発を実施し、それにより上記フラグメントを相同的に組換えて、 組換えポリヌクレオチドの再編成プールを形成し、それによって上記再編成プー ルの組換えポリヌクレオチドの実質的画分(例えば、10%を超える)が、第１の複 数の選択されたライブラリーメンバー中に存在せず、上記再編成プールは、アフ ィニティー相互作用スクリーニングに適切であるディスプレイされたポリペプチ ドまたはディスプレイされた抗体のライブラリーを構成する工程を包含する。必 要に応じて、本方法は再編成プールのライブラリーメンバーをスクリーニングす るさらなる工程を包含し、予め決定された高分子(例えば、タンパク質性レセプ ター、ペプチド、オリゴ糖、ビリオン、または他の予め決定された化合物または 構造)と結合または相互作用する能力を有する個々の再編成ライブラリーメンバ ー(例えば、触媒性抗体)を同定する。このようなライブラリーから同定されるデ ィスプレイされたポリペプチド、抗体、ペプチド類似体(peptidomimetic)抗体、 および可変領域配列は、治療、診断、研究、および関連する目的(例えば、触媒 、水性溶液の浸透性を増加するための溶質など)のために使用され得、および／ または再編成選択および／またはアフィニティー選択の１回以上のさらなるサイ クルを受け得る。方法は、選択の工程が、予め決定された分子に対する結合アフ ィニティー以外の表現型の特徴(例えば、触媒活性、安定性、酸化抵抗性、薬物 耐性、または宿主細胞上で与えられる検出可能な表現型)を対象とするように改 変され得る。 １つの実施態様において、第１の複数の選択されたライブラリーのメンバーは 、フラグメント化され、そしてインビトロにおいてPCRにより相同的に組換えら れる。 １つの実施態様において、第１の複数の選択されたライブラリーのメンバーは 、インビトロにおいてフラグメント化され、得られるフラグメントを宿主細胞ま たは生物体へ移し、そして相同組換えされ、インビボにおける再編成ライブラリ ーのメンバーを形成する。 １つの実施態様において、第１の複数の選択されたライブラリーのメンバーは 、エピソーム的に複製可能なベクター上でクローニングまたは増殖され、上記多 様なベクターは細胞へ移され、そして相同組換えされ、インビボにおける再編成 ライブラリーのメンバーを形成する。 １つの実施態様において、第１の複数の選択されたライブラリーのメンバーは フラグメント化されないが、直線的な反復としてエピソーム的に複製可能なベク ター上でクローニングまたは増殖され、各反復は、選択されたライブラリーのメ ンバー配列の異なる種を包含しており、上記ベクターは細胞内へ移され、そして ベクター内の組換えにより相同組換えされ、インビボにおける再編成ライブラリ ーのメンバーを形成する。 ある実施態様において、インビトロにおける再編成およびインビボにおける再 編成の組み合わせが、組み合わせの多様性を増強するために提供される。 本発明はアフィニティー相互作用スクリーニングに適するディスプレイされた 抗体のライブラリーを生成する方法を提供する。本方法は、(１)ディスプレイさ れた抗体、および上記のディスプレイされた抗体をコードする関連性ポリヌクレ オチドを含む第１の複数の選択されるライブラリーメンバーを得、そして上記の 関連性ポリヌクレオチドまたはそのコピーを得る工程であって、ここで上記の関 連性ポリヌクレオチドが実質的に同一な可変領域のフレームワーク(frame work) 配列の領域を包含する工程、および(２)上記の関連性ポリヌクレオチドまたはコ ピーをプールし、そしてフラグメント化してPCRの増幅に適する条件下でそのフ ラグメントを形成し、それにより上記フラグメントを相同組換して、CDRの新規 な組み合わせを包含する組換えポリヌクレオチドの再編成プールを形成し、それ によってCDRの組み合わせを包含する上記再編成プールの組換えポリヌクレオチ ドの実質的画分(例えば、10%を超える)が、第１の複数の選択されるライブラリ ーメンバー中に存在せず、上記再編成プールは、CDRの並べ替えを含み、そして アフィニティー相互作用スクリーニングに適切であるディスプレイされた抗体の ライブラリーを構成する工程を包含する。必要に応じて、再編成プールは予め決 定されたエピトープ(抗原)に結合する再編成ライブラリーメンバーを選択するた めに、アフィニティースクリーニングを受け、それゆえ複数の選択される再編成 ライブラリーのメンバーを選択する。必要に応じて、複数の選択される再編成ラ イブラリーのメンバーは、１〜約1000サイクルまたは所望の結合アフィニティー を有するライブラリーメンバーが得られるまで、所望により、繰り返し再編成お よびスクリーニングされ得る。 従って、本発明の１つの局面では、１つ以上の変異を鋳型２本鎖ポリヌクレオ チド中へ導入する方法が提供される(ここて鋳型２本鎖ポリヌクレオチドは所望 のサイズのランダムフラグメントに切断される)。本方法は、１つ以上の１本鎖 または２本鎖オリゴヌクレオチドを、得られる２本鎖フラグメントの集団に添加 する工程であって、ここで上記オリゴヌクレオチドは鋳型ポリヌクレオチドに同 一な範囲および非相同な範囲含む、工程；２本鎖のランダムフラグメントおよび オリゴヌクレオチドの得られる混合物を１本鎖フラグメントに変性する工程；上 記１本鎖フラグメント間の同一の領域で上記１本鎖フラグメントがアニールし、 そして変異誘発された２本鎖ポリヌクレオチドを形成する条件下で、得られる１ 本鎖フラグメントの集団をポリメラーゼとともにインキュベートする工程；およ び所望により上記の工程を反復する工程によってなされる。 別の局面において、本発明は、野生型タンパク質をコードする２本鎖鋳型ポリ ヌクレオチドを含有するサンプルを、上記鋳型ポリヌクレオチドを所望のサイズ のランダムな２本鎖フラグメントに切断することを提供する条件下で処理する工 程；１つ以上の１本鎖または２本鎖オリゴヌクレオチドを、得られるランダムフ ラグメントの集団に添加する工程であって、ここで上記オリゴヌクレオチドは鋳 型ポリヌクレオチドに同一な範囲または非相同範囲を包含する、工程；２本鎖の フラグメントおよびオリゴヌクレオチドの得られる混合物を１本鎖フラグメント に変性する、工程；同一な範囲で上記１本鎖フラグメントがアニールし、そして 変異誘発された２本鎖ポリヌクレオチドを形成する条件下で、得られる１本鎖フ ラグメントの集団をポリメラーゼとともにインキュベートする工程；所望により 上記の工程を反復する工程；次いで、変異誘発された２本鎖ポリヌクレオチド配 列から組換えタンパク質を発現する工程により、生物学的活性を有する組換えタ ンパク質を生成する方法に関する。 本発明の第３の局面は、異なる２本鎖鋳型ポリヌクレオチドをを含有するサン プルを処理する工程であって、ここで上記の異なる鋳型ポリヌクレオチドが上記 鋳型ポリヌクレオチドを所望のサイズのランダムな２本鎖フラグメントに切断こ とを提供する条件下で、同一な範囲および非相同な範囲を包含する、工程；処理 サンプル中に含有の得られるランダムな２本鎖フラグメントを１本鎖フラグメン トに変性する工程；同一な範囲で該１本鎖フラグメントがアニールし、そして鋳 型ポリヌクレオチド配列を含有するキメラな２本鎖ポリヌクレオチド配列を形成 する条件下で、得られる１本鎖フラグメントの集団をポリメラーゼとともにイン キュベートする工程に；および所望により上記の工程を反復する工程により、キ メラなポリヌクレオチドを得る方法に関する。 本発明の第４の局面は、インビトロにおいて、１本鎖鋳型ポリヌクレオチドと 、鋳型ポリヌクレオチドを切断および変性することにより得られるランダムな１ 本 鎖小フラグメントとを結合することにより、鋳型ポリヌクレオチドを複製し、そ して２本鎖鋳型ポリヌクレオチドの集団が形成されるような条件下、核酸ポリメ ラーゼの存在下で上記核酸フラグメントの混合物をインキュベートする方法に関 する。 本発明はまた、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドおよび／または転 写調節配列を含有するポリヌクレオチドを再編成するために、インビトロおよび ／またはインビボにおけるポリヌクレオチド再編成の使用を提供する。 本発明はまた、ウイルス遺伝子(例えば、キャプシドタンパク質、スパイク糖 タンパク質、ポリメラーゼ、プロテアーゼなど)またはウイルスゲノム(例えば、 パラミキソウイルス(例えば、paramyxoviridae)、オルトミキソウイルス(orthom yxoviridae)、ヘルペスウイルス、レトロウイルス、レオウイルス、ライノウイ ルスなど)の集団を再編成するために、ポリヌクレオチド再編成の使用を提供す る。ある実施態様において、本発明は免疫原ウイルスタンパク質の全てまたは一 部をコードする配列を再編成して、新規の組み合わせのエピトープおよび組換え により作製される新規のエピトープを生成する方法を提供し、このような再編成 されたウイルスタンパク質は、ウイルス進化の結果として天然の環境において生 じがちなエピトープまたはエピトープの組み合わせを包含し得る(例えば、イン フルエンザウイルス株の組換えなど)。 本発明はまた、遺伝子治療ベクター、およびヒト遺伝子治療のために使用され 得る複製能欠損の遺伝子治療構築物(DNAに基づくワクチン注射のためのワクチン 注射ベクター、および抗新生物遺伝子治療ならびに他の遺伝子治療形式を含むが 、これらに限定されない)を生成するためのポリヌクレオチド配列の再編成に適 した方法を提供する。 図面の簡単な説明 図１は、変異誘発性の再編成と誤りがちなPCRとを比較する概略図である；(a) 初発ライブラリー；(b)１回目のアフィニティー選択において選択された配列の プール；(d)選択された配列のインビトロにおける組換え(「再編成」)；(f)再編成 後の２回目のアフィニティー選択において選択された配列のプール；(c)誤りが ちなPCR；(e)誤りがちなPCR後の２回目のアフィニティー選択において選択され た配列のプール。 図２は、10bp〜50bpのランダムフラグメントからの1.0kb LacZα遺伝子フラグ メントの再組立(reassembly)を示す。(a)LacZα遺伝子を有するPCR増幅したゲル DNAフラグメントの写真。(b)DNアーゼI消化後のDNAフラグメントのゲルの写真。 (c)消化されたLacZα遺伝子DNAフラグメントから精製した10bp〜50bpのDNAフラ グメントのゲルの写真；(d)指示された数のサイクルのDNA再組立後の10bp〜50bp のDNAフラグメントのゲルの写真；(e)プライマーを用いたPCRによる増幅後の組 換え混合物のゲルの写真。 図３は、LacZα遺伝子の終止コドン変異体およびそれらのDNA配列の概略図で ある。四角枠の領域は非相同範囲であり、マーカーとして働く。終止コドンは小 さな四角枠内に位置するかまたは下線を付している。「＋」は、野生型遺伝子を示 し、そして「−」は遺伝子における変異範囲を示す。 図４は、合成オリゴヌクレオチドをLacZα遺伝子の再組立プロセスへの導入ま たはスパイク(spiking)の概略図である。 図５は、E.coliの使用コドン(codon usage)を用いて、マウスIL1-B遺伝子(M) とヒトIL1-B遺伝子(H)との間の相同な領域を示す。非相同領域には四角枠を付す 。 図６は、抗ウサギIgG抗体(A10B)のscFvを使用した抗体CDR再編成モデルシステ ムの概略図である。 図７は、抗ウサギIgG抗体(A10B)のscFvの再編成DNAにおいて、観察されたCDR の特定の組み合わせが生じる頻度を示す。 図８は、DNA再編成および各サイクルの選択後のscFv抗ウサギIgG抗体の改良さ れた結合活性を示す。 図９は、pBR322-Sfi-BL-LA-Sfiおよびダイレクトリピートを介するインビボに おけるプラスミド内の組換え、および機能的なβラクタマーゼ遺伝子を再構築す るプラスミド内の組換えによるアンピシリン耐性コロニーの発生率を概略する。 図10は、pBR322-Sfi-2Bla-Sfiおよびダイレクトリピートを介するインビボに おけるプラスミド内の組換え、および機能的なβラクタマーゼ遺伝子を再構築す るインビボにおけるプラスミド内の組換えによるアンピシリン耐性コロニーの発 生率を概略する。 図11は、組換えタンパク質を生成するために、ポリヌクレオチドフラグメント を細胞に導入した後、多数回の相同組換えの効率を試験する方法を示す。 図12は、以下の座位でのカセットを再編成することによるベクターのライブラ リーの生成を概略する：プロモーター、リーダーペプチド、ターミネーター、選 択薬物耐性遺伝子、および複製開始点。各遺伝子座での複数の平行な線はそのカ セットについてのカセットの多様性を表す。 図13は、再編成により真核生物のベクターライブラリーを構築するために、種 々の遺伝子座における適切なカセットのいくつかの例を概略的に示す。 好ましい実施態様の説明 本発明は、DNA配列の変異誘発のためのランダムフラグメント化およびその適 用後に、核酸分子を再組立する方法に関する。増強される生物学的活性を有する 変異タンパク質をコードする核酸フラグメントを生成する方法もまた記載される 。特に、本発明はまた、増強された生物学的活性を有する変異タンパク質の作製 を可能にする変異誘発、核酸の再編成および選択の反復サイクルの方法に関する 。 本発明はDNA、RNA、またはタンパク質変異体の非常に大規模なライブラリーを 生成する方法に関する。この方法は、所望の核酸フラグメント(１つまたは複数) が選択され得る関連のあるDNAフラグメントの生成において特定の利点を有する 。特に本発明はまた、増強された生物学的活性を有する変異タンパク質作製を可 能にする変異誘発、相同組換えおよび選択の反復サイクルの方法に関する。 しかし、本発明をさらに詳細に考察する前に、まず以下の用語について定義す る。 定義 本明細書で使用される以下の用語は、以下の意味を有する： 用語「DNA再組立」は、同一の配列の間で組換えが生じる場合に使用される。 対照的に、用語「DNA再編成」は、実質的に相同であるが同一ではない配列の間 の組換えを示すために本明細書で使用され、いくつかの実施態様において、DNA 再編成は非相同な組換え(例えば、cre/loxおよび／またはflp/frtシステムなど) を介する交差を含み得る。 用語「増幅」は、核酸フラグメントのコピー数が増加されることを意味する。 用語「同一な」または「同一」は、２つの核酸配列が同じ配列または相補的な配列 を有することを意味する。従って、「同一の範囲」は、核酸フラグメントまたはポ リヌクレオチドの領域または範囲が別のポリヌクレオチドまたは核酸フラグメン トに同一または相補的であることを意味する。 用語「対応する」は、ポリヌクレオチド配列が参照ポリヌクレオチド配列の全て または一部分に相同である(すなわち同一であり、厳密には進化的に関連しない) こと、またはポリペプチド配列が参照ポリペプチド配列に同一であることを意味 するために本明細書において使用される。対照的に、用語「相補する」は、相補的 な配列が参照ポリヌクレオチド配列の全てまたは一部分に相同であることを意味 するために本明細書で使用される。例えば、核酸配列「TATAC」は、参照配列「TATA C」に対応し、そして参照配列「GTATA」に相補的である。 以下の用語は、２つ以上のポリヌクレオチド間での配列の関係を記載するため に使用される：「参照配列」、「比較領域(comparison window)」、「配列同一性」、「 配列同一性のパーセンテージ」、および「実質的同一性」。「参照配列」は、配列比 較のための基本として使用される規定の配列である；参照配列は、より大きな配 列のサブセット(例えば、配列表に示される全長cDNAまたは遺伝子配列のセグメ ント(例えば、図１または図２(b)のポリヌクレオチド配列))であり得、または参 照配列は完全なcDNAまたは遺伝子配列を含有し得る。一般的に、参照配列は少な くとも20ヌクレオチドの長さであり、頻繁には少なくとも25ヌクレオチドの長さ であり、そしてしばしば少なくとも50ヌクレオチドの長さである。２つのポリヌ クレオチドが、それぞれ(１)２つのポリヌクレオチド間で類似の配列(すなわち 、完全なポリヌクレオチド配列の一部分)を含有し得、そして(２)２つのポリヌ クレオチド間で互いに一致しない配列をさらに含有し得るので、２つ(またはそ れ以上)のポリヌクレオチド間の配列比較は、代表的には、「比較領域」にわたる ２つのポリヌクレオチドの配列を比較することにより実施され、配列が類似する 局 所領域を同定および比較する。 本明細書で使用される「比較領域」は、少なくとも20の隣接するヌクレオチドの 位置の概念のセグメントをいい、ここでポリヌクレオチド配列が少なくとも20の 隣接するヌクレオチドの参照配列と比較され得、そしてここでは比較領域におけ るポリヌクレオチド配列の部分が、２つの配列の最適アラインメントのために、 参照配列(付加または欠失を含まない)に比べて20%以下の付加または欠失(すなわ ちギャップ)を含み得る。比較領域を並べるための、配列の最適なアラインメン トは、SmithおよびWaterman（1981）Adv.Appl.Math. 2:482の局所相同性アルゴ リズムにより、NeedlemanおよびWunsch（1970）J.Mol.Biol. 48:443の相同性ア ラインメントアルゴリズムにより、PearsonおよびLipman（1988）Proc.Natl.Aca d.Sci. （U.S.A.）85:2444の類似度方法に関するサーチにより、これらのアルゴ リズム(Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0，Genetics Compute r Group，575 Science Dr.,Madison，WIにおけるGAP、BESTFIT、FASTA、およびT FASTA)のコンピュータ実行により、または検査により行われ得、そして種々の方 法により生成される最も良いアラインメント(すなわち、比較領域にわたる最も 高い相同性パーセンテージを与える)が、選択される。 用語「配列同一性」は、２つのポリヌクレオチド配列が比較領域にわたって同一 である(すなわち、１ヌクレオチドずつに基づいて)ことを意味する。用語「配列 同一性のパーセンテージ」は、最適に並べられた２つの配列を比較領域にわたっ て比較し、同一の核酸塩基(例えば、A、T、C、G、U、またはI)が両方の配列にお いて生じる位置の数を測定し、一致した位置の数を得、一致した位置の数を比較 の領域における位置の全体数(すなわち、比較サイズ)で割り、そして結果に100 を掛けて、配列同一性のパーセンテージを得ることにより、算定される。本明細 書で使用される用語「実質的同一性」は、ポリヌクレオチド配列の特徴を示し、こ こではポリヌクレオチドは、少なくとも20の隣接するヌクレオチド位置の比較領 域にわたり、頻繁には少なくとも25〜50ヌクレオチドの領域にわたり参照配列と 比較して、少なくとも80%の配列同一性、好ましくは少なくとも85%の同一性、そ してしばしば90%〜95%パーセントの配列同一性、最も通常には少なくとも99%の 配列同一性を有する配列を包含し、ここでは配列同一性のパーセンテージは、ポ リヌクレオチド配列を参照配列と比べることにより算定され、このヌクレオチド 配列は、比較領域にわたり、全体で参照配列の20%以下の欠失または付加を含み 得る。 保存的アミノ酸置換は、類似側鎖を有する残基の互換性をいう。例えば、脂肪 族側鎖を有するアミノ酸のグループは、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン 、およびイソロイシンであり；脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸のグル ープはセリンおよびスレオニンであり；アミド含有側鎖を有するアミノ酸のグル ープはアスパラギンおよびグルタミンであり；芳香族側鎖を有するアミノ酸のグ ループは、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンであり；塩基性 側鎖を有するアミノ酸のグループはリジン、アルギニン、およびヒスチジンであ り；そしてイオウ含有側鎖を有するアミノ酸のグループはシステインおよびメチ オニンである。好ましい保存的アミノ酸の置換グループは：バリン-ロイシン-イ ソロイシン、フェニルアラニン-チロシン、リジン-アルギニン、アラニン-バリ ン、およびアスパラギン-グルタミンである。 用語「相同」または「同種(homeologous)」は、ある１本鎖核酸配列が相補的な１ 本鎖核酸配列にハイブリダイズし得ることを意味する。ハイブリダイゼーション の程度は配列間の同一性の量およびハイブリダイゼーション条件(例えば、後述 するような温度および塩濃度)を包含する多数の要素に依存し得る。好ましくは 同一な領域は約５bpより多くであり、より好ましくは同一な領域は10bpより多く である。 用語「非相同」は、ある１本鎖核酸配列が別の１本鎖核酸配列またはその相補鎖 にハイブリダイズし得ないことをいう。従って非相同な範囲は、核酸フラグメン トまたはポリヌクレオチドが、別の核酸またはポリヌクレオチドにハイブリダイ ズし得ない範囲または領域を配列中に有することを意味する。このような領域ま たは範囲は、例えば、変異の範囲である。 本明細書で使用される用語「同族」は、種間で進化的におよび機能的に関連付け られる遺伝子配列をいう。これに限定されないが例えば、ヒトゲノムにおいては 、ヒトCD4遺伝子は、マウスCD4遺伝子の同族遺伝子である。なぜならこれらの２ つの遺伝子の配列および構造が、それらが高度に相同であることを示し、そして 両 方の遺伝子がMHCクラスII-制限抗原認識を介してＴ細胞活性化をシグナルするこ とに機能するタンパク質をコードしているからである。 用語「野生型」は、核酸フラグメントがいかなる変異も含まないことを意味する 。「野生型」タンパク質は、タンパク質が天然において見られる活性のレベルで活 性であり、そして天然において見られるアミノ酸配列を含有することを意味する 。 用語「関連ポリヌクレオチド」は、ポリヌクレオチドの領域または範囲が同一で あり、かつポリヌクレオチドの領域または範囲が非相同であることを意味する。 用語「キメラなポリヌクレオチド」は、ポリヌクレオチドが野生型である領域お よび変異を受けた領域を含むことを意味する。ポリヌクレオチドが、あるポリヌ クレオチドに由来する野生型領域および別の関連ポリヌクレオチドに由来する野 生型領域を含むこともまた意味する。 用語「切断」は、ポリヌクレオチドを酵素で消化することまたはポリヌクレオチ ドを切断することを意味する。 本明細書で使用される用語「集団」は、ポリヌクレオチド、核酸フラグメント、 またはタンパク質のような成分の集合を意味する。「混合集団」は、核酸またはタ ンパク質の同じファミリーに属する(すなわち関連する)が、それらの配列が異な り(すなわち同一ではない)、それゆえそれらの生物学的活性においても異なる成 分の集合を意味する。 用語「特定核酸フラグメント」は、特定の終点を有し、そして特定核酸配列を有 する核酸フラグメントを意味する。２つの核酸フラグメント(ここでは１つの核 酸フラグメントが第２の核酸フラグメントの一部分と同一の配列を有するが、異 なる末端を有する)は、２つの異なる特定核酸フラグメントを包含する。 用語「変異」は、野生型核酸配列の配列における変化、またはペプチドの配列に おける変化を意味する。このような変異は、塩基転位または塩基転換のような点 変異であり得る。変異は欠失、挿入、または重複であり得る。 本明細書で使用されるポリペプチド表記は、標準的な慣習および慣用に従い、 左側方向がアミノ末端方向であり、右側方向がカルボキシ末端方向である。同様 に、他で特定しないかぎり、１本鎖ポリヌクレオチド配列の左側の末端は5'末端 であり；２本鎖ポリヌクレオチド配列の左側方向は5'方向という。新生RNA転写 産物の5'から3'付加の方向を、転写方向といい；RNAと同じ配列を有し、およびR NA転写産物の5'末端の5'側にであるDNA鎖上の配列領域を「上流配列」といい；RNA と同じ配列を有し、およびコードRNAの転写産物の3'末端の3'側にあるDNA鎖上の 配列領域を「下流配列」という。 本明細書で使用される用語「天然に存在する」は、ある物体に適用されるように 、ある物体が天然において見出され得る事実をいう。例えば、供給源から天然に 単離され得、研究室においてヒトにより故意に改変されていない生物(ウイルス を含む)に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然に存在す る配列である。一般的に、用語天然に存在するは、種に代表的であるような非病 的(非疾患)個体に存在する物体をいう。 本明細書で使用される用語「薬剤」は、化合物、化合物の混合物、場所的に局在 する化合物の配列(例えば、VLSIPSペプチド配列、ポリヌクレオチド配列、およ び／または結合小分子配列)、生体高分子、バクテリオファージのペプチドディ スプレイライブラリー、バクテリオファージ抗体(例えば、scFv)ディスプレイラ イブラリー、ポリソームペプチドディスプレイライブラリー、または細菌、植物 、真菌、または動物(特に哺乳動物)細胞または組織のような生体物質から作製さ れる抽出物を示す。薬剤は、本明細書の以下に記載されるスクリーニングアッセ イに含めることにより、抗新生物剤、抗炎症剤、またはアポトーシスモジュレー ターとしての潜在的活性について評価される。薬剤は、本明細書の以下に記載さ れるスクリーニングアッセイに含めることにより、特定のタンパク質相互作用の インヒビター(すなわち、２つの予め決定されたポリペプチド間の結合相互作用 を選択的に阻害するが、細胞の生存性を実質的に阻害しない薬剤)としての潜在 的活性について評価される。 本明細書て使用されるように、「実質的に純粋な」は、対象種が存在する優勢種 であること(すなわち、モル濃度に基づき、組成において他の任意の個々の高分 子種よりも豊富であること)を意味し、そして好ましくは実質的に精製された画 分は、対象種が、存在する全ての高分子種の少なくとも約50%(モルに基づき)を 含む組成である。一般的には、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在する全 高分子種の約80%〜90%より多くを含有する。最も好ましくは、対象種は本質的に 均質にまで精製され(汚染種が従来の検出方法により組成物中に検出され得ない) 、ここでは組成物は本質的に単一の高分子種からなる。溶媒種、小分子(＜500ダ ルトン)、および元素イオン種は高分子種とは見なさない。 本明細書で使用される用語「生理学的条件」は、温度、pH、イオン強度、粘性率 、および同様の生物学的パラメーターであって、これらは生存可能な生物に適合 する、および／または生存可能な酵母培養細胞または哺乳動物培養細胞において 細胞内に代表的に存在する。例えば、代表的な実験培養条件下で増殖される酵母 細胞における細胞内条件は、生理学的条件である。インビトロ転写反応混液に適 切なインビトロ反応条件は、一般的に生理学的条件である。一般に、インビトロ 生理学的条件は50〜200mM NaClまたはKCl、pH6.5〜8.5、20〜45℃、および0.001 〜10mM ２価イオン(例えば、Mg++、Ca++)；好ましくは約150mM NaClまたはKCl、 pH7.2〜7.6、５mM 二価カチオンを含有し、そしてしばしは0.01〜1.0%の非特異 的タンパク質(例えば、BSA)を含有する。非イオン性界面活性剤(Tween、NP-40、 Triton X-100)が、通常約0.001%〜２%、代表的には0.05%〜0.2%(v/v)でしばしば 存在し得る。特定の水性条件は従来の方法に従って当業者により選択され得る。 一般的な手引きのために、以下の緩衝化水性条件が適用可能であり得る：10〜25 0mM NaCl、５〜50mM Tris HCl、pH5-8、二価カチオン(１種類または複数)および ／または金属キレート剤および／または非イオン性界面活性剤および／または膜 画分および／または消泡剤および／または発光剤(scintillant)の最適な添加を 有する。 本明細書において、特異的ハイブリダイゼーションは、第１のポリヌクレオチ ドと第２のポリヌクレオチド(例えば、第１のポリヌクレオチドと区別されるが 実質的には同一の配列を有するポリヌクレオチド)との間のハイブリッドの形成 として定義され、ここでは、実質的に関連のないポリヌクレオチド配列が混合物 中でハイブリッドを形成しないストリンジェントなハイブリダイゼーション条件 下で、第１のポリヌクレオチドは優先して第２のポリヌクレオチド配列にハイブ リダイズする。 本明細書で使用される用語「単鎖抗体」は、ポリペプチド結合においてVHドメイ ンおよびVLドメインを含むポリペプチドをいい、一般的にスペーサーペプチド (例えば、[Gly- Gly- Gly- Gly-Ser]x)を介して連接され、アミノ末端および／ またはカルボキシ末端で付加的なアミノ酸配列を含み得る。例えば、単鎖抗体は コード化ポリヌクレオチドに結合するために、つなぎ(tether)セグメントを含み 得る。一例として、scFvは、単鎖抗体である。単鎖抗体は一般に、免疫グロブリ ンスーパーファミリーの遺伝子により実質的にコードされる、少なくとも10個の 隣接するアミノ酸の１つ以上のポリペプチドセグメントからなるタンパク質であ る(例えば、The Immunoglobulin Gene Superfamily, A.F.WilliamsおよびA.N.Ba rclay，Immunoglobulin Genes, T.Honjo，F.W．Alt,およびT.H.Rabbitts編（198 9）Academic Press：San Diego，CA，361-387頁(本明細書中に参考として援用さ れる)を参照のこと)。最も頻繁には単鎖抗体は、齧歯類、ヒト以外の霊長類、ト リ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、またはヒトのＨ鎖遺伝子配列またはＬ鎖遺伝子 配列によりコードされる。一般に機能的な単鎖抗体は、免疫グロブリンスーパー ファミリー遺伝子産物の十分な部分を含有しており、特定標的分子(代表的には レセプターまたは抗原(エピトープ))に対する結合特性を保有する。 本明細書で使用されるように、用語「相補性決定領域」および「CDR」は、Kabatお よびChothiaにより例証される技術認識用語である。一般に、CDRの定義は、高頻 度可変領域または高頻度可変ループ(ChothiaおよびLesk（1987）J.Mol.Biol. 19 6 ：901；Chothiaら（1989）Nature 342：877；E.A.Kabatら，Sequences of Prot eins Immunological Interest（National Institutes of Health，Bethesda，MD ）(1987)；およびTramontanoら（1990）J.Mol.Biol. 215：175)としてもまた知 られる。可変領域のドメインは、代表的に、天然に存在する免疫グロブリン鎖の アミノ末端の約105〜115アミノ酸(例えば、アミノ酸１〜110)を含むが、いくら か短いまたは長い可変ドメインはもまた、単鎖抗体の形成に適している。 免疫グロブリンのＬ鎖可変領域またはＨ鎖可変領域は、CDRとも呼ばれる３つ の高頻度可変領域により中断される「フレームワーク」領域からなる。フレームワ ーク領域およびCDRの範囲は正確に定義されている(「Sequences of Proteins of Immunological interset」E.Kabatら，第４版，U.S．Department of Health and Human Services，Bethesda，MD(1987)を参照のこと)。異なるＬ鎖またはＨ鎖の フレームワーク領域の配列は種内で比較的保存されている。本明細書で使用さ れる「ヒトフレームワーク領域」は、天然に存在するヒト免疫グロブリンのフレー ムワーク領域に実質的に同一(約85%以上、通常は90%〜95%以上)であるフレーム ワーク領域である。抗体のフレームワーク領域(すなわち、構成要素のＬ鎖およ びＨ鎖の結合フレームワーク領域)は、CDRの配置および配列に作用する。CDRが 主に、抗原のエピトープへの結合を担う。 本明細書で使用される用語「可変セグメント」は、ランダムな配列、偽似ランダ ムな配列、または規定の核配列を含む新生ペプチドの一部分をいう。可変セグメ ントは、可変領域位置および不変領域位置の両方を含み得、可変領域位置での残 基の変化の程度は制限され得る；両方の選択とも実施者の判断で選択される。代 表的に、可変セグメントは約５〜20アミノ酸残基の長さ(例えば、８〜10アミノ 酸)であるが、可変セグメントはより長くあり得、そして抗体位置またはレセプ ター位置(例えば、抗体フラグメント、核酸結合タンパク質、レセプタータンパ ク質など)を含み得る。 本明細書で使用される「ランダムペプチド配列」は、２つ以上のアミノ酸モノマ ーからなり、確率過程またはランダム過程により構築されるアミノ酸配列をいう 。ランダムなペプチドはフレームワークモチーフまたは骨組みモチーフを含み得 、不変配列を含み得る。 本明細書で使用される「ランダムペプチドライブラリー」は、一セットのランダ ムペプチドをコードするポリヌクレオチド配列のセットをいい、そしてこれらの ポリヌクレオチド配列によりコードされるランダムペプチドのセット、ならびに これらのランダムペプチドを含む融合タンパク質をいう。 本明細書で使用される用語「疑似ランダム」は、限定された可変性を有する配列 のセットをいい、これにより、例えば、ある位置の残基の可変性の程度が別の位 置の残基の可変性の程度と異なる。しかし任意の疑似ランダム位置は、ある程度 の残基の変化を可能にするが、制限される。 本明細書で使用される用語「規定の配列フレームワーク」は、一般的に実験デー タまたは構造データを基礎として、非ランダムに選択される規定の配列のセット をいい；例えば、規定の配列フレームワークは、βシート構造を形成すると予想 されるアミノ酸配列のセットを含み得、または他の変化の間にロイシンジッパー の７個の反復モチーフ、亜鉛フィンガードメインを含み得る。「規定の配列核」は 、可変性の制限範囲を含む配列のセットである。(1)20個の従来のアミノ酸の完 全にランダムな10マーの配列は、(20)10個の配列のいずれでもあり得、そして(2 )20個の従来のアミノ酸の疑似ランダムな10マーの配列は(20)10個の配列のいず れでもあり得るが、特定の位置および／または全体で特定の残基に偏りが表れる のに対し、一方(3)規定の配列核は、それぞれの残基位置が可能である20個の従 来のアミノ酸(および／または可能な比従来型のアミノ酸／イミノ酸)のいずれで もあることが可能とされた場合、可能な配列の最大数よりも少なくなる配列のサ ブセットである。一般に、規定の配列核は、個々の選択されたライブラリーメン バー配列のセグメントまたは全長のいずれかに、可変残基位置および不変残基位 置を含んだり、そして／またはアミノ酸残基の規定のサブセットから選択される 残基を含み得る可変残基位置を包んだりなどする。規定の配列核は、アミノ酸配 列またはポリヌクレオチド配列のいずれかをいい得る。これらに限定されないが 例えば、配列(NNK)10および(NNH)10は、配列核であると定義される(ここでNはA 、T、G、またはCを表し；Kは、GまたはTを表し；およびMはAまたはCを表す)。 本明細書で使用される「エピトープ」は、抗体の可変領域結合ポケットと相互作 用して結合相互作用を形成し得る抗原または他の高分子の一部分をいう。代表的 に、このような結合相互作用はCDRの１つ以上のアミノ酸残基の分子間接触とし て示される。 本明細書で使用される「レセプター」は、所定のリガンドにアフィニティーを有 する分子をいう。レセプターは天然に存在する分子または合成分子であり得る。 レセプターは不変状態においてまたは他の種とともに集合体として使用され得る 。レセプターは、共有結合的または非共有結合的に、直接または特異的な結合物 質を介してのいずれかで、結合メンバーに付着され得る。レセプターの例は、抗 体(特定の抗原決定基(例えば、ウイルス、細胞、または他の物質)と反応するモ ノクロール抗体および抗血清を包含する)、細胞膜レセプター、炭水化物および 糖タンパク質の複合体、酵素、およびホルモンレセプターを包含するがこれらに 限定されない。 本明細書で使用される「リガンド」は、ランダムペプチド配列または可変セグメ ント配列のような、特定のレセプターで認識される分子をいう。当業者の認識す るところによれば、分子(または高分子複合体)は、レセプターおよびリガンドの 両方であり得る。一般的に、小分子量を有する結合対をリガンドといい、そして 大きな分子量を有する結合対をレセプターという。 本明細書て使用される「リンカー」または「スペーサー」は、２つの分子(例えば 、DNA結合タンパク質およびランダムペプチド)を結合させる分子または分子のグ ループをいい、そして好ましい配置にその２つの分子を置くように供せられる。 これにより、例えば、ランダムペプチドは、DNA結合タンパク質から最少の立体 障害でレセプターに結合し得る。 本明細書で使用される用語「作動可能に連結される」は、機能的関係におけるポ リヌクレオチド要素の連結をいう。核酸が、別の核酸配列と機能的関係に置かれ る場合、核酸は「作動可能に連結される」。例えば、プロモーターまたはエンハン サーが、コード配列の転写に影響する場合、これはコード配列に作動可能に連結 される。作動可能に連結されるとは、代表的に、連結されるDNA配列が隣接され ることを意味し、２つのタンパク質コード領域を接続することが必要である場合 、隣接されかつリーディングフレーム内にある。方法論 核酸再編成は、インビトロまたはインビボにおいて核酸フラグメントまたはポ リヌクレオチドのプールを相同組換えする方法である。関連核酸配列またはポリ ヌクレオチドの混合物をランダムにフラグメント化し、そして再組立して、組換 え核酸分子またはポリヌクレオチドのライブラリーまたは混合集団を生じる。 カセット変異誘発とは対照に、再編成および誤りがちなPCRのみが、(プライマ ー以外の配列情報を用いずに)盲目的に配列のプールを変異させる。 反復選択について誤りがちなPCRのみよりも優れる本発明の変異性再編成の利 点は、抗体工学からの例を用いて最も良く説明され得る。図１に、本明細書で記 載されるDNA再編成の概略図が示される。開始ライブラリーは多様な起源の関連 配列(すなわち、天然mRNA由来の抗体)からなり得、または単一抗体遺伝子の任意 の型の変異誘発(再編成を包含する)により得られ得る。選択される相補性決定領 域(「CDR」)の集合は、一回目のアフィニティー選択後に得られる(図１)。図にお いて、太いCDRは、抗体分子に抗原への増加したアフィニティーを与える。再編 成は、全てのCDR1と全てのCDR２および全てのCDR３などとの自由な組み合わせの 結合を可能にする(図１)。 この方法は、逆鎖反応である点でPCRとは異なる。PCRでは、ポリメラーゼの開 始部位の数および分子の数は指数関数的に増加する。しかし、ポリメラーゼ開始 部位の配列および分子の配列は本質的に同じである。反対に、ランダムフラグメ ントの核酸再組立または再編成では、開始部位の数およびランダムフラグメント の数(サイズではない)は、時間がたつと減少する。全プラスミドに由来するフラ グメントについて、理論上の終点は、単一の大きな鎖状分子である。 相同な領域で交差が生じるので、組換えは主に同じ配列ファミリーのメンバー 間で生じる。このことは、ひどく不適合性である(例えば、同じ抗原の異なるエ ピトープに対する)CDRの組み合わせを防止する。配列の多数のファミリーが同じ 反応において再編成され得ることが意図される。さらに、再編成は相対的順位を 保存するので、例えば、CDR1は、CDR2の位置では見出されない。 優れた再編成体は多数の最も良い(例えば、最も高いアフィニティーの)CDRを 含み、そしてこれらの優れた再編成体はそれらの優れたアフィニティーに基づい て選択され得る(図１)。 100個の異なる選択される抗体配列のプールに由来するCDRは、1006通りまで順 序変えされ得る。この多数の順序変えはDNA配列の単一ライブラリーでは表し得 ない。従って、DNA再編成および選択の多数のサイクルは、配列の長さおよび所 望の配列の多様性に依存して要求され得ることが意図される。 反対に、誤りがちなPCRは全ての選択されるCDRを同じ関連配列中に保ち(図１) 、よりずっと小さな変異曇りを生成する。 本発明の方法において使用され得る鋳型ポリヌクレオチドはDNAまたはRNAであ り得る。それは、組換えまたは再組立される遺伝子またはDNAフラグメントの大 きさに依存して種々の長さであり得る。好ましくは、鋳型ポリヌクレオチドは50 bp〜50kbである。目的のタンパク質をコードする核酸を含有する完全なベクター が、本発明の方法において使用され得ることが意図され、そして実際に首尾良く 使用されている。 鋳型ポリヌクレオチドは、PCR反応(米国特許第4,683,202号および第4,683,195 号)または他の増幅方法またはクローニング方法を使用する増幅により得られ得 る。しかし、フラグメント化する前にPCR産物から遊離プライマーを除去すると 、より効率的な結果が提供される。プライマーの十分な除去を損なうと、低頻度 の交差クローンを導き得る。 鋳型ポリヌクレオチドはしばしば、２本鎖であるべきである。２本鎖核酸分子 は、得られる１本鎖核酸フラグメントの領域が互いに相補的で、従って、ハイブ リダイズして２本鎖分子を形成し得ることを確実にすることが要求される。 鋳型ポリヌクレオチドに同一な領域および鋳型ポリヌクレオチドに非相同な領 域を有する１本鎖または２本鎖核酸フラグメントが、この工程で、鋳型ポリヌク レオチドに添加され得ることが意図される。２つの異なるが関連したポリヌクレ オチド鋳型がこの工程で混合され得ることもまた意図される。 ２本鎖ポリヌクレオチド鋳型および任意の添加される２本鎖フラグメントまた は１本鎖フラグメントは、約５bp〜5kb以上のフラグメントにランダムに消化さ れる。好ましくは、ランダムフラグメントの大きさは10bp〜1000bpであり、より 好ましくはDNAフラグメントの大きさは約20bp〜500bpである。 あるいは、多数のニックを有する２本鎖核酸は、本発明の方法において使用さ れ得る。ニックは２本鎖核酸の１本鎖における切れ目である。このようなニック 間の距離は好ましくは５bp〜５kbであり、より好ましくは10bp〜1000bpの間であ る。 核酸フラグメントは多数の異なる方法により消化され得る。核酸フラグメント はヌクレアーゼ(例えは、DNアーゼIまたはRNアーゼ)を用いて消化され得る。核 酸は、超音波処理方法によりまたは小穴を有するチューブの通過によりランダム に剪断され得る。 核酸が１つ以上の制限酵素を用いて部分的に消化され得、これにより特定の交 差点が統計的に保持され得ることもまた意図される。 任意の１つの特定核酸フラグメントの濃度は、全核酸の１重量%より大きいこ とはなく、より好ましくは、任意の１つの特定核酸フラグメントの濃度は、全核 酸の0.1重量%より大きいことはない。 混合物における異なる特定核酸フラグメントの数は少なくとも約100個であり 、好ましくは少なくとも500個であり、そしてより好ましくは少なくとも約1000 個である。 この工程で、１本鎖核酸フラグメントまたは２本鎖核酸フラグメントは、合成 または天然のいずれかで、核酸フラグメントの混合物の不均一性を増加するため に、ランダムな２本鎖核酸フラグメントに添加され得る。 ２本鎖のランダムに切断された核酸フラグメントの集団が、この工程で混合さ れ得、または組み合わされ得ることもまた意図される。 鋳型ポリヌクレオチドへの変異の挿入が所望される場合、鋳型ポリヌクレオチ ドに同一な領域および鋳型ポリヌクレオチドに非相同な領域を有する１本鎖核酸 フラグメントまたは２本鎖核酸ラグメントは、全核酸に比べて20重量倍過剰に、 より好ましくは１本鎖核酸フラグメントが全核酸に比べて10重量倍過剰に添加さ れ得る。 異なるが関連した鋳型ポリヌクレオチドの混合物が所望される場合、鋳型のそ れぞれに由来する核酸フラグメントの集団が約1:100より少ない比率で組み合わ され得、より好ましくは、比率は約1:40より小さい。例えば、野生型ポリヌクレ オチドと変異ポリヌクレオチドの集団との戻し交雑が、中立変異(例えば、選択 される表現型の特性において実質のない変化を生じる変異)を除去するために所 望され得る。このような例では、ランダム消化変異ポリヌクレオチドフラグメン トに添加され得るランダム消化野生型ポリヌクレオチドフラグメントの比率は約 １:１から約100:1であり、そしてより好ましくは１:１から40:1である。 ランダム核酸フラグメントの混合集団は、変性されて１本鎖核酸フラグメント を形成し、次いで再びアニールされる。他の１本鎖核酸フラグメントに相同な領 域を有するこれらの１本鎖核酸フラグメントのみが、再びアニールされる。 ランダム核酸フラグメントは熱を加えることにより変性される。当業者は完全 に２本鎖核酸を変性するために必要な条件を決定し得る。好ましくは、温度は80 ℃〜100℃であり、より好ましくは温度は90℃〜96℃である。核酸フラグメント を変性するために使用され得る他の方法は、圧力(36)およびpHを包含する。 核酸フラグメントは冷却することにより再びアニールされ得る。好ましくは、 温度は20℃〜75℃であり、より好ましくは温度は40℃〜65℃である。高頻度の交 差が、平均して単に４つの連続した相同な塩基に基づいて必要される場合、組換 えは低いアニール温度を使用することにより増強され得るが、プロセスはより困 難になる。生じる再生の程度は、１本鎖核酸フラグメントの集団間の相同性の程 度に依存する。 再生はポリエチレングリコール(「PEG」)または塩の添加により加速され得る。 塩濃度は好ましくは0mM〜200mMであり、より好ましくは塩濃度は10mM〜100mMで ある。塩はKClまたはNo.Clであり得る。PEGの濃度は好ましくは０%〜20%であり 得、より好ましくは５%〜10%であり得る。 次に、アニールされた核酸フラグメントは、核酸ポリメラーゼおよびdNTP(す なわち、dATP、dCTP、dGTP、およびdTTP)の存在下でインキュベートされる。核 酸ポリメラーゼは、Klenowフラグメント、Taqポリメラーゼ、または当該分野に おいて知られる任意の他のDNAポリメラーゼであり得る。 再組立に使用されるアプローチは、それでもなお交差が生じるような最少の程 度の相同性に依存する。同一である範囲が広い場合、Taqポリメラーゼが45℃〜6 5℃の間のアニール温度を用いて使用され得る。同一である範囲が小さな場合、K lenowポリメラーゼが、20℃〜30℃の間のアニール温度を用いて使用され得る。 当業者は達成される交差の数を増加するためにアニールの温度を変化させ得る。 ポリメラーゼはアニーリングの前、アニーリングと同時に、またはアニーリン グの後にランダム核酸フラグメントに添加され得る。 ポリメラーゼの存在下での変性、再生、およびインキュベーションのサイクル は、本明細書では、核酸の再編成または再組立という。このサイクルは所望の回 数反復される。好ましくは、サイクルは２回〜50回反復され、より好ましくは10 回〜40回反復される。 得られる核酸は、約50bp〜約100kbのより大きな２本鎖ポリヌクレオチドであ り、好ましくはより大きなポリヌクレオチドは500bp〜50kbである。 このより大きなポリヌクレオチドフラグメントは、鋳型ポリヌクレオチドと同 じ大きさを有する核酸フラグメントの多くのコピーを直列して含有し得る。次い で、この鎖状フラグメントは鋳型ポリヌクレオチドの単一コピーに消化される。 結果は鋳型ポリヌクレオチドとほぼ同じ大きさの核酸フラグメントの集団である 。同一な範囲および非相同な範囲を有する１本鎖核酸フラグメントまたは２本鎖 核酸フラグメントが、再編成の前に鋳型ポリヌクレオチドに添加される場合、集 団は混合集団である。 次いで、これらのフラグメントは適切なベクターにクローン化され、そして細 菌を形質転換するためにライゲーション混合液が使用される。 単一の核酸フラグメントは、鎖状フラグメントを消化するのではなく、種々の 方法(PCR(米国特許第4,683,195号および4,683,202号)を包含する)によりクロー ン化される前に単一の核酸フラグメントを増幅することにより、より大きな鎖状 核酸フラグメントから得られ得ることが意図される。 クローン化に使用されるベクターは、ベクターが所望の大きさのDNAフラグメ ントを受容するのであれば決定的なものではない。DNAフラグメントの発現が所 望される場合、クローン化媒体は、宿主細胞におけるDNAフラグメントの発現を 可能にするように、DNAフラグメントの挿入部位の隣に転写シグナルおよび翻訳 シグナルをさらに含有する。好ましいベクターは、プラスミドのpUC系列およびp BR系列を包含する。 得られる細菌集団は、ランダムな変異を有する多くの組換えDNAフラグメント を含む。この混合集団は、所望の組換え核酸フラグメントを同定するために試験 され得る。選択の方法は所望のDNAフラグメントに依存する。 例えば、リガンドへの結合効率が増加されたタンパク質をコードするDNAフラ グメントが所望される場合、集団またはライブラリーにおいてそれぞれのDNAフ ラグメントにより発現されるタンパク質は、当該分野において公知の方法(すな わち、パンニング、アフィニティークロマトグラフィー)により、リガンドに結 合するそれらの能力について試験され得る。増加した薬物耐性を有するタンパク 質をコードするDNAフラグメントが所望される場合、集団またはライブラリーに おいてそれぞれのDNAフラグメントにより発現されるタンパク質は、宿主生物に 薬物耐性を与えるそれらの能力について試験され得る。所望されるタンパク質の 知識を与えられた当業者であれば、タンパク質に所望の特性を与えるDNAフラグ メントを同定するために、集団を容易に試験し得る。 当業者が、タンパク質のフラグメントがファージ表面上で融合タンパク質とし て発現されるようなファージディスプレイシステム(Pharmacia，Milwaukee WI) を使用し得ることが意図される。組換えDNA分子は、融合タンパク質(その一部分 は組換えDNA分子によりコードされる)の転写を生じるような部位で、ファージDN Aへクローン化される。組換え核酸分子を含有するファージは、細胞内で複製お よび転写を行う。融合タンパク質のリーダー配列は、融合タンパク質の輸送をフ ァージ粒子の先端部へと導く。従って、組換えDNA分子により部分的にコードさ れる融合タンパク質は、上記の方法による検出および選択のために、ファージ粒 子上にディスプレイされる。 核酸再編成の多くのサイクルが、第１の集団のサブ集団からの核酸フラグメン トを用いて実施され得ることがさらに意図され、サブ集団は所望の組換えタンパ ク質をコードするDNAを含む。このようにして、さらに高い結合アフィニティー または酵素活性を有するタンパク質が達成され得る。 核酸再編成の多くのサイクルが、サブ集団から任意のサイレント変異を取り除 くために、野生型核酸フラグメントおよび一回目のまたはそれに続く核酸再編成 に由来する核酸のサブ集団の混合物を用いて実施され得る。 核酸の任意の供給源が、精製された形態で出発核酸として利用される。従って 、プロセスはDNAまたはRNA(メッセンジャーRNAを含む)を使用し得、DNAまたはRN Aは、１本鎖または２本鎖であり得る。さらに、それぞれの片鎖を含むDNA-RNAの ハイブリッドが使用され得る。核酸配列は、変異される核酸配列の大きさに依存 して種々の長さであり得る。好ましくは、特定核酸配列は50〜50000塩基対であ る。目的のタンパク質をコードする核酸を含有する完全なベクターが本発明の方 法において使用され得ることが意図される。 核酸は任意の供給源から得られ得、例えば、pBR322のようなプラスミドから、 クローン化されたDNAまたはRNAから、または任意の供給源(細菌、酵母、ウイル スおよび植物または動物のような高等生物を含む)に由来する天然のDNAまたはRN Aから得られ得る。DNAまたはRNAは、血液または組織物質から抽出され得る。鋳 型ポリヌクレオチドはポリメラーゼ連鎖反応(PCR)(米国特許第4,683,202号およ び4,683,195号)を使用する増幅により得られ得る。あるいは、ポリヌクレオチド は細胞に存在するベクターに存在し得、そして十分な核酸が、細胞を培養し、そ して細胞から当該分野で公知の方法により核酸を抽出することにより得られ得る 。 任意の特定核酸配列が、本プロセスにより変異の集団を生成するために使用さ れ得る。特定核酸配列の変異配列の小さな集団が存在することまたは本プロセス の前に作製されることのみが必要とされる。 変異を有する特定核酸配列の初めの小さな集団が、多くの異なる方法により作 製され得る。変異は誤りがちなPCRにより作製され得る。誤りがちなPCRは、長い 配列にわたり、ランダムに低レベルで点変異を誘導するために、低忠実度の重合 条件を使用する。あるいは、オリゴヌクレオチドに特異的に変異を誘発すること により、変異は鋳型ポリヌクレオチドに導入され得る。オリゴヌクレオチドに特 異的に変異を誘発するにおいて、ポリヌクレオチドの短い配列が、制限酵素消化 を使用してポリヌクレオチドから除去され、そして種々の塩基が元の配列から変 化された合成オリゴヌクレオチドで置き換えられる。ポリヌクレオチド配列はま た、化学変異誘発により変化させられ得る。化学変異誘発物質は、例えば、重亜 硫酸ナトリウム、亜硝酸、ヒドロキシルアミン、ヒドラジン、またはギ酸を包含 する。ヌクレオチド前駆体のアナログである他の薬剤は、ニトロソグアニジン、 5-ブロモウラシル、2-アミノプリン、またはアクリジンを包含する。一般的に、 これらの薬剤はヌクレオチド前駆体の代わりにPCR反応に添加され、それゆえ配 列を変異させる。プロフラビン、アクリフラビン、キナクリンなどのような挿入 剤もまた使用され得る。ポリヌクレオチド配列のランダム変異誘発は、Ｘ線また は紫外線光を用いる照射によっても達成され得る。一般に、そのように変異が誘 発されたプラスミドDNAフラグメントまたはDNAフラグメントは、E.coliへ導入さ れ、そして変異のプラスミドのプールまたはライブラリーとして増殖される。 あるいは、特定核酸の小さな混合集団は、天然において見出され得うる。なぜ ならそれらが同じ遺伝子の異なる対立遺伝子、または異なる関連種に由来する同 じ遺伝子(すなわち、同族遺伝子)からなり得るからである。あるいは、特定核酸 配列の小さな混合集団は、１つの種(例えば、免疫グロブリン遺伝子)内に見出さ れる関連DNA配列であり得る。 一旦、特定核酸配列の混合集団が生成されたら、ポリヌクレオチドは、当業者 に周知の技術を使用して直接使用され得るか、または適切なクローニングベクタ ーに挿入され得る。 ベクターの選択はポリヌクレオチド配列の大きさ、および本発明の方法におい て使用される宿主細胞に依存する。本発明の鋳型はプラスミド、ファージ、コス ミド、ファージミド、ウイルス(例えば、レトロウイルス、パラインフルエンザ ウイルス、ヘルペスウイルス、レオウイルス、パラミキソウイルスなど)、また はその選択部分(例えば、コートタンパク質、スパイク糖タンパク質、キャプシ ドタンパク質)であり得る。例えば、変異特定核酸配列がより大きい場合、コス ミドおよびファージミドが好ましい。なぜならこれらのベクターは大きな核酸フ ラグメントを安定に増殖し得るからである。 特定核酸配列の混合集団がベクターにクローン化される場合、それぞれのベク ターを宿主細胞に挿入し、そして宿主細胞にベクターを増殖させることにより、 特定核酸配列の混合集団はクローン的に(clonally)増幅され得る。このことはク ローン増幅(clonal amplification)と呼ばれる。なぜなら核酸配列の絶対数は増 加されるが、変異体の数は増加しないからである。有用性 本発明のDNA再編成方法は、未知の配列のプール上で盲目的に実施され得る。 再組立の混合オリゴヌクレオチド(再組立される配列に相同である末端を有する) を添加することにより、任意の配列混合物が任意の特定位置で別の配列混合物中 に取り込まれ得る。従って、合成オリゴヌクレオチド、PCRフラグメント、また は全遺伝子の混合物が、規定の位置で別の配列ライブラリーへ混合され得る。１ つの配列(混合物)の挿入は、鋳型の別の部分における配列の挿入から独立する。 従って、組換えの程度、要求される相同性の程度、およびライブラリーの多様性 の程度は、再組立されるDNAの長さに従って独立してまたは同時に変化され得る 。 ２つの遺伝子を混合するこのアプローチは、マウスハイブリドーマ由来の抗体 をヒト化するために有用であり得る。２つの遺伝子を混合するアプローチまたは 変異配列を遺伝子へ挿入するアプローチは、任意の治療学的に使用されるタンパ ク質(例えば、インターロイキンI、抗体、tPA、成長ホルモンなど)のために有用 であり得る。このアプローチは、任意の核酸(例えば、プロモーター、またはイ ントロン、または遺伝子の3'非翻訳領域または5'非翻訳領域)において、発現を 増加するためにまたはタンパク質の発現特異性を変えるためにもまた有用であり 得る。このアプローチはまた、リボザイムまたはアプタマー(aptamer)を変異す るためにもまた使用され得る。 再編成は、多様な領域を分離する相同な領域の存在を要求する。スカホールド 様タンパク質構造は、特に再編成に適し得る。保存されるスカホールドは、自己 会合により全体の折り畳みを決定するが、特異的結合を媒介する相対的に制限さ れないループをディスプレイする。このようなスカホールドの例は、免疫グロブ リンβバレル、および４ヘリックス束である(24)。この再編成は、結合について 変異配列の種々の組み合わせを有するスカホールド様タンパク質を作製するため に、使用され得る。 インビトロにおける再編成 同等のいくつかの標準的な遺伝子交配もまた、インビトロにおける再編成によ り実施され得る。例えば、「分子戻し交雑」は、目的の変異について選択しながら 、変異体の核酸と野生型核酸との混合を反復することにより実施され得る。従来 の育種におけるように、このアプローチは異なる供給源に由来する表現型を選択 されたバックグランドに組み合わせるために使用され得る。これは、例えば、選 択されない特徴(すなわち、免疫原性)に影響する中立変異を除去するために有用 である。従って、このアプローチは、タンパク質におけるどの変異が増強される 生物学的活性に関連するか関連しないかを決定するために有用であり得、誤りが ちな変異誘発方法またはカセット変異誘発方法により達成され得ない利点を決定 するために有用であり得る。 大きな機能的遺伝子は、小さなランダムフラグメントの混合物から正確に組立 され得る。この反応は、化石の高度にフラグメント化されたDNAから遺伝子を再 組立するために有用であり得る(25)。さらに、化石に由来するランダムな核酸フ ラグメントは、関連種に由来する類似遺伝子からの核酸フラグメントとともに組 み合わせられ得る。 本発明の方法は、種々の研究および診断的適用に必要とされるように、単一の 細胞から全ゲノムを、インビトロにおいて増幅するために使用され得る。PCRに よるDNA増幅は、実際、約40kbの長さに制限される。PCRによりE.coli(5,000kb) のような全ゲノムを増幅することは、125個の40kbのフラグメントを生じる約250 のプライマーを必要とする。このアプローチは、十分な配列データが利用できな いために実用的ではない。反対に、DNアーゼIを用いるゲノムのランダムな消化 、それに続く小フラグメントのゲル精製は、多数の可能なプライマーを提供する 。PCR反応においてこのランダム小フラグメントの混合物をプライマーとして単 独でまたは鋳型としての全ゲノムと共に使用すると、理論上、ゲノムの多くのコ ピーを含む単一の鎖状体を終点とする逆鎖反応が生じる。 ランダムフラグメントのみが使用される場合、コピー数において100倍の増幅 および50kbより大きい平均フラグメントサイズが得られ得る(実施例２を参照の こと)。より大きな鎖状体が、多くの小フラグメントの重複により生成されると 考えられる。合成プライマーを使用して得られる特定PCR産物の質は、増幅され ないDNAから得られる産物と区別されない。このアプローチはゲノムのマッピン グに有用であると期待される。 再編成されるポリヌクレオチドは、実施者の判断で、ランダムにまたは非ラン ダムにフラグメント化され得る。 インビボにおける再編成 インビボにおける再編成の１つの実施態様において、特定核酸配列の混合集団 は、各宿主細胞において、少なくとも２つの異なる核酸配列が存在する条件下で 、細菌細胞または真核細胞へ導入される。フラグメントは種々の異なる方法によ り、宿主細胞へ導入され得る。宿主細胞は、当業者に公知の方法(例えば、塩化 カルシウムを用いる処理)を使用してフラグメントで形質転換され得る。フラグ メントがファージゲノムに挿入される場合、宿主細胞は特定核酸配列を有する組 換えファージゲノムを用いてトランスフェクトされ得る。あるいは、核酸配列は 、エレクトロポレーション、トランスフェクション、リポフェクション、バイオ リス ティック(biolistic)、接合などを用いて宿主細胞へ導入され得る。 一般的に、この実施態様において、特定核酸配列は、宿主細胞において配列を 安定に複製し得るベクター中に存在する。さらに、ベクターを有する宿主細胞が 選択され得るように、ベクターがマーカー遺伝子をコードすることが意図される 。このことは、変異特定核酸配列が、宿主細胞へ導入された後に回収され得るこ とを確実にする。しかし、特定核酸配列の完全な混合集団がベクター配列上に存 在する必要がないことが意図される。むしろ、宿主細胞にフラグメントを導入し た後に、各宿主細胞が、少なくとも１つのそこに存在する特定核酸配列を有する １つのベクターを含有することを確実にするために、十分な数だけの配列がベク ターにクローン化される必要がある。特定核酸配列の集団のサブセットをベクタ ーへクローン化させるよりも、このサブセットは宿主細胞に、すでに安定に組み 込まれ得ることもまた、意図される。 同一の領域を有する２つのフラグメントが、宿主細胞へ挿入される場合、２つ のフラグメント間に相同組換えが生じることが見出された。２つの変異特定核酸 配列間のこのような組換えで、いくつかの状況において二重変異体または三重変 異体を生じる。 いくつかの変異特定核酸配列が、直鎖上の核酸分子上に存在する場合、組換え の頻度が増加されることもまた見出された。従って、好ましい実施態様では、い くつかの特定核酸配列が直鎖状核酸フラグメント上に存在する。 形質転換の後に、宿主細胞形質転換体は、所望の特質を有する変異特定核酸配 列を含有するこれらの宿主細胞形質転換体を同定するために選択下におかれる。 例えば、特定の薬物に対して増加される耐性が所望される場合、形質転換された 宿主細胞は、特定の増加した薬物濃度を受け得、そして増加する薬物耐性を与え 得る変異タンパク質を産生する形質転換体が、選択され得る。特定タンパク質が レセプターに結合する能力の増強が所望される場合、タンパク質の発現は形質転 換体から誘導され得、そして得られるタンパク質は当業者に公知の方法によるリ ガンド結合アッセイにおいてアッセイされ、リガンドに対して増強される結合を 示す変異集団のサブセットを同定する。あるいは、タンパク質は、適切なプロセ シングを確実にするように、別のシステムにおいて発現され得る。 一旦、所望される特徴を有する第１の組換え特定核酸配列(娘配列)のサブセッ トが同定されると、次いで、それらは２回目の組換えを受ける。 組換えの２回目のサイクルにおいて、組換え特定核酸配列は、元の変異特定核 酸配列(親配列)とともに混合され得、そして上記のようにサイクルが反復され得 る。この方法では、増強される特性を有するかまたは増強される特性を有するタ ンパク質をコードする第２の組換え特定核酸配列のセットが同定され得る。この サイクルは所望される多数回反復され得る。 第２のまたはそれに続く組換えサイクルにおいて、戻し交雑が実施され得るこ ともまた意図される。分子の戻し交雑は、所望の特定核酸配列を多数の野生型配 列と混合することにより実施され得、それにより少なくとも１つの野生型核酸配 列および変異核酸配列が、形質転換後に、同じ宿主細胞中に存在する。野生型特 定核酸配列を用いる組換えは、免疫原性のような選択されない特徴に影響し得る が、選択される特徴には影響し得ないそれらの中立変異を除去する。 本発明の別の実施態様において、一回目の間、宿主細胞へ導入する前に、特定 核酸配列のサブセットがフラグメント化され得ることが意図される。フラグメン トの大きさは、他の配列と相同組換えできるように、他の配列に同一ないくつか の領域を含むのに十分な大きさでなくてはならない。フラグメントの大きさは0. 03kb〜100kbの範囲であり、より好ましくは0.2kb〜10kbの範囲である。それに続 くラウンドにおいて、以前のラウンドから選択される配列以外の全ての特定核酸 配列は、宿主細胞へ導入する前に切断されてフラグメント化され得る。 配列のフラグメント化は、当該分野において公知の種々の方法により達成され 得る。配列は、核酸配列中、ランダムにフラグメント化され得るか、または特定 部位でフラグメント化され得る。ランダムフラグメントは核酸の切断により、ま たは核酸を過酷な物理的処理(例えば、剪断または放射線照射)または過酷な化学 剤(例えば、遊離ラジカル；金属イオン；脱プリン；および切断するための酸処 理による)に核酸を曝露することにより得られ得る。DNAの場合、DNアーゼまたは 同様のヌクレアーゼを使用することによってもまた、ランダムフラグメントが得 られ得る。配列は、制限酵素の使用により、特定部位で切断され得る。フラグメ ント化配列は、１本鎖または２本鎖であり得る。配列が、本来１本鎖である場合 、 宿主細胞に挿入する前に、それらは熱、化学物質、または酵素で変性され得る。 核酸の鎖を分離するために適切な反応条件は、当該分野において周知である。 このプロセスの工程は、限界なく反復され得、達成され得る可能な変異体の数 によってのみ、制限される。一定の数のサイクル後、全ての可能な変異体が達成 され、そしてさらなるサイクルは余分になる。 ある実施態様において、同じ変異鋳型核酸が繰り返し組換えされて、そして得 られる組換え体が所望の特徴について選択される。 それゆえ、変異鋳型核酸の初めのプールまたは集団は、E.coliのような細菌に おいて複製可能なベクターへクローン化される。E.coliにおいて自律複製し得る かぎり、特定のベクターは必須ではない。好ましい実施態様において、ベクター は、ベクターに連結される変異特定核酸によりコードされる任意のタンパク質の 発現および生成を可能にするように設計される。ベクターが選択可能なマーカー をコードする遺伝子を含有することもまた、好ましい。 変異核酸配列のプールを含有するベクターの集団は、E.coli宿主細胞へ導入さ れる。ベクターの核酸配列は形質転換、トランスフェクションまたはファージの 場合は感染により導入され得る。細菌に形質転換するために使用されるベクター の濃度は、多くのベクターが各細胞へ導入され得る程度である。一旦、細胞中に 存在すると、相同組換えの効率は、相同組換えが種々のベクター間で生じる程度 である。このことにより、元の親変異配列と異なる変異の組み合わせを有する変 異体(娘)を生成する。 次いで、宿主細胞はクローン的に複製され、ベクター上に存在するマーカー遺 伝子について選択される。プラスミドを有するこれらの細胞のみが、選択下で増 殖する。 次いで、ベクターを含む宿主細胞は、好ましい変異の存在について試験される 。このような試験は、例えば、選択される遺伝子が改良される薬物耐性遺伝子で ある場合、細胞を選択圧下におくことからなり得る。ベクターが変異核酸配列に よりコードされるタンパク質の発現を可能にする場合、このような選択はコード されるタンパク質の発現を可能にし、タンパク質を単離し、そして、例えば、増 加された効率で目的のリガンドに結合するかどうかを決定するためにタンパク質 を 試験することを包含し得る。 一旦、所望の特徴を与える特定の娘変異核酸配列が同定されると、核酸は、す でにベクターに連結されているかまたはベクターから分離されているかのいずれ かで単離される。次いで、この核酸は核酸の第一集団または親集団と混合され、 そしてサイクルが反復される。 本方法により増強された所望の特性を有する核酸配列が選択され得ることが示 される。 別の実施態様において、変異体の第一世代は細胞内に保持され、親変異配列が 再び細胞に添加される。従って、実施態様Iの第一サイクルは上記のように実施 される。しかし、娘核酸配列が同定された後、これらの配列を含む宿主細胞が保 持される。 親の変異特定核酸集団は、フラグメントとしてまたは同じベクターへクローン 化されるかのいずれかで、既に娘核酸を含む宿主細胞へ導入される。組換えを細 胞において生じさせ、次世代の組換え体、または子孫が上記の方法により選択さ れる。 このサイクルは、所望の特徴を有する核酸またはペプチドが得られるまで、多 数回反復され得る。続くサイクルにおいて、好ましい変異体に添加される変異配 列の集団が、親変異体または任意の次の世代から生じ得る。 別の実施態様において、本発明は、任意の中立変異を除去するために、得られ る組換え特定核酸の「分子」戻し交雑を実施する方法を提供する。中立変異は、核 酸またはペプチドに所望の特性を与えない変異である。しかし、このような変異 は核酸またはペプチドに所望でない特徴を与え得る。従って、このような中立変 異を除去することが望ましい。本発明の方法は、そのように行う手段を提供する 。 この実施態様において、所望の特徴を有する変異体核酸が実施態様の方法によ り得られた後、核酸、核酸を有するベクター、またはベクターおよび核酸を含有 する宿主細胞が単離される。 次いで、核酸またはベクターはかなり過剰な野生型核酸とともに宿主細胞へ導 入される。変異体の核酸および野生型配列の核酸を、組換えに供する。得られる 組換え体は、変異体核酸と同じ選択下に置かれる。所望の特徴を有するこれらの 組換え体のみが選択される。所望の特徴を与えない任意のサイレント変異は野生 型DNAとの組換えを介して失われる。このサイクルは、全てのサイレント変異が 除去されるまで、多数回反復され得る。 従って、本発明の方法は、分子戻し交雑において、不必要な変異またはサイレ ント変異を除去するために使用され得る。有用性 本発明のインビボにおける組換え方法は、未知の変異体のプールまたは特定核 酸フラグメントまたは配列の対立遺伝子上で盲目的に実施され得る。しかし、特 定核酸フラグメントの実際のDNAまたはRNA配列を知る必要はない。 遺伝子の混合集団内で組換えを使用するアプローチは、任意の有用なタンパク 質(例えば、インターロイキンI、抗体、tPA、成長ホルモンなど)を生成するため に有用であり得る。本アプローチは、変化された特異性または活性を有するタン パク質を生成するために使用され得る。本アプローチは変異体核酸配列(例えば 、プロモーター領域、イントロン、エキソン、エンハンサー配列、遺伝子の3'非 翻訳領域または5'非翻訳領域)を生成するために有用であり得る。従って、本ア プローチは増加された発現率を有する遺伝子を生成するために使用され得る。本 アプローチは、反復性DNA配列の研究においてもまた有用であり得る。最後に本 アプローチは、リボザイムまたはアプタマーを変異させるのに有用であり得る。 タンパク質における多様性の領域を分離するスカホールド様領域は、本発明の 方法に特に適切であり得る。保存されたスカホールドは、自己結合により全体の 折り畳みを決定するが、特異的結合を媒介する比較的制限されていないループを ディスプレイする。このようなスカホールドの例は、免疫グロブリンβバレル、 および４へリックス束である。本発明の方法は、結合について変異配列の種々の 組み合わせを有するスカホールド様タンパク質を作製するために使用され得る。 いくつかの標準的な遺伝交配の等価物がまた、本発明の方法により実施され得 る。例えば、「分子」戻し交雑は、目的の変異を選択しながら、変異体の核酸を野 生型の核酸と繰り返し混合することにより実施され得る。従来の育種におけるよ うに、本アプローチは異なる供給源に由来する表現型を選択されるバックグラン ドへ組み合わせるために使用され得る。本アプローチでは、例えば、選択されな い特徴(例えば、免疫原性)に影響する中立変異を除去するために有用である。従 って、本アプローチは、タンパク質のどの変異が増強された生物学的活性に関連 するか、そしてどの変異が関連しないかを決定するために有用であり得る。 ペプチドディスプレイ法 本方法は、開示された方法のいずれかによるインビトロおよび／またはインビ ボにおける組換えにより、および任意の組み合わせで、ペプチドディスプレイ法 により選択されるポリヌクレオチド配列を再編成するために使用され得、ここで は会合されたポリヌクレオチドは、表現型(例えば、予め決定されたレセプター( リガンド)に対するアフィニティーについて)についてスクリーニングされるディ スプレイされたペプチドをコードする。 生物薬剤の開発および分子生物学の増々重要な局面は、生体高分子と相互作用 するペプチドまたはペプチド疑似体のペプチド構造(アミノ酸一次配列を包含す る)の同定である。所望の構造または所望の機能的特性(例えば、予め決定された 生体高分子(例えば、レセプター)に対する結合)を有するペプチドを同定する１ つの方法は、ペプチドのアミノ酸配列により与えられる所望の構造または所望の 機能的特性を有する個々のライブラリーメンバーについて、大規模なライブラリ ーまたはペプチドをスクリーニングすることを包含する。 ペプチドライブラリーを生成する直接化学合成方法に加えて、いくつかのDNA 組換え方法もまた報告されている。１つの型は、バクテリオファージ粒子または 細胞表面上のペプチド配列、抗体、または他のタンパク質のディスプレイを包含 する。一般に、これらの方法において、それぞれのバクテリオファージ粒子また は細胞は、天然のバクテリオファージまたは細胞のタンパク質配列に加えて、デ ィスプレイされたペプチドの単一種をディスプレイする個々のライブラリーメン バーとして供せられる。各バクテリオファージまたは細胞は、特定のディスプレ イされたペプチドの配列をコードする核酸配列情報を含有し；従って、ディスプ レイされたペプチド配列は、単離されたライブラリーメンバーのヌクレオチド配 列決定により確かめられ得る。 周知のペプチドディスプレイ方法は、繊維状バクテリオファージの表面上のペ プチド配列(代表的には、バクテリオファージコートタンパク質との融合物とし て)の提示を包含する。バクテリオファージライブラリーは固定化した予め決定 された高分子または小分子(例えば、レセプター)とともにインキュベートされ得 、それにより固定化高分子に結合するペプチド配列を提示するバクテリオファー ジ粒子が、予め決定された高分子に結合するペプチド配列を提示しないバクテリ オファージ粒子と差別的に区分され得る。次いで、固定化高分子に結合するバク テリオファージ粒子(すなわち、ライブラリーメンバー)は回収され、そして次の アフィニティー増強およびファージ複製ラウンドのため、複製されて、選択され るバクテリオファージサブ集団を増幅する。数ラウンドのアフィニティー増強お よびファージ複製の後、このように選択されたバクテリオファージライブラリー メンバーは単離され、そしてディスプレイされたペプチド配列をコードするヌク レオチド配列が決定され、これにより予め決定された高分子(例えば、レセプタ ー)に結合するペプチドの配列(１つまたは複数)を同定する。このような方法はP CT特許公開第91/17271号、同91/18980号、および同91/19818号ならびに93/08278 号においてさらに記載されている。 後者のPCT公開は、ペプチドリガンドのディスプレイのための組換えDNA方法が 、第１のポリペプチド部分(代表的には可変配列を含み、予め決定された高分子 への潜在的な結合に利用可能である)、および第２のポリペプチド部分(個々の融 合タンパク質をコードするDNAベクターのようなDNAに結合する)で構成される融 合タンパク質をそれぞれ有する融合タンパク質のライブラリーの生成を包含する ことを記載している。形質転換された宿主細胞が融合タンパク質の発現を可能に する条件下で培養される場合、融合タンパク質はそれをコードするDNAベクター に結合する。宿主細胞の溶解の際に、融合タンパク質／ベクターDNA複合体は、 バクテリオファージ粒子がファージに基づくディスプレイシステムにおいてスク リーニングされるのとほぼ同様にして、予め決定された高分子に対してスクリー ニングされ得、選択された融合タンパク質／ベクターDNA複合体におけるDNAベク ターの複製および配列決定が、選択されるライブラリーペプチド配列(１つまた は複数)の同定のための基礎として供せられる。 ペプチドおよび同様のポリマーのライブラリーを生成する他のシステムは、組 換え方法およびインビトロにおける化学合成方法の両方の局面を有する。これら のハイブリッド方法において、無細胞酵素機構がライブラリーメンバー(すなわ ち、ペプチドまたはポリヌクレオチド)のインビトロにおける合成を達成するた めに使用される。１つの型の方法において、予め決定されたタンパク質または予 め決定された色素分子を結合する能力を有するRNA分子が、選択およびPCR増幅を 交互に行うことにより選択された(TuerkおよびGold（1990）Science 249:505；E llingtonおよびSzostak（1990）Nature 346:818)。同様の技術が、予め決定され たヒト転写因子を結合するDNA配列を同定するために使用された(ThiesenおよびB ach（1990）Nucleic Acids Res. 18:3203；BeaudryおよびJoyce（1992）Science 257;635；PCT特許公開第92/05258号および第92/14843号)。同様の様式において 、インビトロにおける翻訳の技術が目的のタンパク質を合成するために使用され 、そしてペプチドの大規模なライブラリーを生成する方法として提案されてきた 。一般に安定化されたポリソーム複合体を含有するインビトロにおける翻訳に依 存するこれらの方法は、PCT特許出願第88/08453号、第90/05785号、第90/07003 号、第91/02076号、91/05058号、および92/02536号にさらに記載されている。出 願人らは、ライブラリーメンバーが、DNA結合活性を有する第１のポリペプチド 部分、およびライブラリーメンバーの独特のペプチド配列を有する第２のポリペ プチド部分を有する融合タンパク質を含む方法を記載し；このような方法は、無 細胞インビトロ選択形式における使用に、特に適切である。 ディスプレイされたペプチド配列は、代表的には３〜5000アミノ酸以上、頻繁 には５〜100アミノ酸、そしてしばしば約８〜15アミノ酸の種々の長さであり得 る。ライブラリーは、ディスプレイされたペプチド配列の種々の長さを有するラ イブラリーメンバーを含有し得るか、またはディスプレイされたペプチド配列の 固定した長さを有するライブラリーメンバーを含有し得る。ディスプレイされた ペプチド配列(１つまたは複数)の１部分または全ては、ランダムな配列、疑似ラ ンダムな配列、規定の核セットの配列、固定した配列などであり得る。本ディス プレイ方法は、ポリソーム上の新生scFvまたはファージ上に表示されたscFvのよ うな単鎖抗体のインビトロおよびインビボにおけるディスプレイの方法を包含し 、 広い多様性の可変領域配列および結合特異性を有するscFvライブラリーを、大規 模なスケールでスクリーニングし得る。 本発明はまた、ランダムな配列、疑似ランダムな配列、および規定の配列のフ レームワークペプチドライブラリーを提供し、および目的のレセプター分子また はエピトープ、またはペプチドを改変する遺伝子産物、またはRNAに所望の様式 で結合する有用な化合物(例えば、ペプチド、単鎖抗体を含む)を同定するために 、それらのライブラリーを生成し、スクリーニングする方法を提供する。ランダ ムな配列、疑似ランダムな配列、および規定の配列のフレームワークペプチドは 、ディスプレイされたペプチド、またはディスプレイされたペプチドが合成され たポリヌクレオチドの鋳型に付着するディスプレイされた単鎖抗体を含むペプチ ドライブラリーメンバーのライブラリーから生成される。付着の様式は、選択さ れた本発明の特定の実施態様に従って変化し得、そしてファージ粒子におけるキ ャプシドの包みこみ、または細胞における取り込みを包含し得る。 アフィニティー増強方法は、ペプチドおよび単鎖抗体のかなり大規模なライブ ラリーがスクリーニングされ、そして所望のペプチド(１つまたは複数)または単 鎖抗体をコードするポリヌクレオチド配列が選択されることを可能にする。次い で、ポリヌクレオチドは単離および再編成され得、選択されるペプチド(１つま たは複数)の(またはその予め決定された部分)または単鎖抗体(または、ちょうど そのVH、VL、またはCDR部分)のアミノ酸配列を組み合わせて組換えする。これら の方法を使用して、ペプチドまたは単鎖抗体を分子について所望の結合アフィニ ティーを有するとして同定し得、そして所望の高アフィニティーペプチドまたは scFvに迅速に集めるために再編成のプロセスを活用し得る。次いで、ペプチドま たは抗体は、任意の適切な使用(例えば、治療剤または診断剤として)のために、 従来の手段により大量に合成され得る。 本発明の著しい利点は、予想されるリガンド構造に関する以前の情報が目的の ペプチドリガンドまたは抗体を単離するために全く要求されないことである。同 定されたペプチドは、生物学的活性を有し得、このことは選択されるレセプター 分子に対する特異的な結合アフィニティーを少なくとも含むことが意味され、そ して、いくつかの例において、他の化合物の結合をブロックし、代謝経路を刺激 または阻害し、シグナルまたはメッセンジャーとして作用し、細胞活性を刺激ま たは阻害するなどの能力をさらに包含する。 本発明はまた、予め決定されたレセプター(例えば、哺乳動物タンパク質性レ セプター(例えば、ペプチド性ホルモンレセプター、細胞表面レセプター、他の タンパク質(１つまたは複数)に結合してヘテロダイマーのような細胞内タンパク 質複合体を形成する細胞内タンパク質など)、またはエピトープ(例えば、固定化 タンパク質、糖タンパク質、オリゴ糖など)に結合するライブラリーメンバーに ついて、新生ペプチド(単鎖抗体を包含する)をディスプレイするポリソームのラ イブラリーをアフィニティースクリーニングすることにより選択されるポリヌク レオチド配列のプールを再編成する方法もまた提供する。 これらの方法のいずれかにより、第１の選択ラウンド(代表的には、レセプタ ー(例えば、リガンド)に対する結合についてのアフィニティー選択による)にお いて選択されるポリヌクレオチド配列は、プールされ、そしてプール(単数また は複数)はインビトロおよび／またはインビボにおける組換えにより再編成され 、組換えられた選択ポリヌクレオチド配列の集団を含む再編成プールを生成する 。組換えられた選択ポリヌクレオチド配列は、少なくとも１回の続く選択ラウン ドにかけられる。続く選択ラウンド(１回または複数回)において選択されたポリ ヌクレオチド配列は、直接用いられ得、配列決定され得、そして／または、１回 以上のさらなるラウンドの再編成およびそれに続く選択にかけられ得る。選択さ れた配列は、中立配列(すなわち、結合において非実質的な機能的効果を有する) をコードするポリヌクレオチド配列と戻し交雑され(例えば、選択される配列に 実質的に同一な野生型または天然に存在する配列と戻し交雑することによる)、 免疫原性の低い天然様の機能的ペプチドを生成し得る。一般に、戻し交配の間、 続く選択は、予め決定されたレセプター(リガンド)への結合の特性を保有するよ うに適用される。 選択配列の再編成の前または同時に、配列が変異誘発され得る。１つの実施態 様において、選択されるライブラリーメンバーは、原核生物ベクター(例えば、 プラスミド、ファージミド、またはバクテリオファージ)中にクローン化され、 ここでは、別個のライブラリーメンバーを提示する個々のコロニー(またはプラ ーク)の集合が生成される。次いで、選択される個々のライブラリーメンバーは 操作され(例えば、部位特異的変異誘発、カセット変異誘発、化学変異誘発、PCR 変異誘発など)、選択されるライブラリーメンバーの配列に基づいて配列の多様 性のカーネル(kernal)を提示するライブラリーメンバーの集合を生成し得る。選 択される個々のライブラリーメンバーまたはプールの配列は操作され、ランダム 変異、疑似ランダムな変異、規定のカーネル変異(すなわち、可変残基位置およ び不変残基位置を含み、そして／またはアミノ酸残基の規定のサブセットから選 択される残基を含み得る可変残基位置を含む)、コドンに基づく変異などを、選 択される個々のライブラリーメンバー配列にセグメント的にまたは全長にわたっ てのいずれかで、組み込み得る。変異誘発された選択ライブラリーメンバーは、 次いで、本明細書で記載されるインビトロおよび／またはインビボにおける組換 え再編成により、再編成される。 本発明はまた、本発明の複数の個々のライブラリーメンバーを含むペプチドラ イブラリーを提供し、ここでは(１)上記複数のうち各個々のライブラリーメンバ ーが、選択される配列のプールの再編成により生成される配列を含有し、そして (２)各個々のライブラリーメンバーは、可変ペプチドセグメント配列または単鎖 抗体セグメント配列(これは、上記複数における他の個々のライブラリーメンバ ーの可変ペプチドセグメント配列または単鎖抗体配列から区別される)を含有す る(しかし、いくつかのライブラリーメンバーは、不均一な増幅、推計学的確率 などのために、ライブラリー当たり１コピー以上で存在し得る)。 本発明はまた、その方法によって作られるもの(product-by-prosess)を提供す る。ここでは、予め決定された結合特異性を有する(または予め決定された結合 特異性を有するペプチドをコードする)選択されたポリヌクレオチド配列が、以 下の工程により形成される：(1)ディスプレイペプチドまたはディスプレイ単鎖 抗体のライブラリーを予め決定されたレセプター(例えば、リガンド)またはエピ トープ(例えば、抗原高分子)に対してスクリーニングし、そして予め決定された レセプターまたはエピトープに結合するライブラリーメンバーを同定および／ま たは濃縮し、選択されたライブラリーメンバーのプールを生成する工程、(２)予 め決定されたエピトープを結合して、そしてそれによりライブラリーから単離お よび／または濃縮されて再編成ライブラリーを生成する選択されたライブラリー メンバー(または増幅またはクローン化されたそのコピー)を、組換えにより再編 成する工程、および(３)再編成ライブラリーを予め決定されたレセプター(例え ば、リガンド)またはエピトープ(例えば、抗原高分子)に対してスクリーニング し、そして予め決定されたレセプターまたはエピトープに結合する再編成ライブ ラリーメンバーを同定および／または濃縮し、選択された再編成ライブラリーメ ンバーのプールを生成する工程。 抗体ディスプレイおよびスクリーニング法 本発明の方法は、開示された方法のいずれかによるインビトロおよび/または インビボ組換えおよび任意の組み合わせにより、抗体ディスプレイ法により選択 されたポリヌクレオチド配列を再編成するために用いられ得る。ここで会合され たポリヌクレオチドは、表現型（例えば、予め決定された抗原（リガンド）への 結合についてのアフィニティー）についてスクリーニングされたディスプレイさ れた抗体をコードする。 種々の分子遺伝学的アプローチが、免疫グロブリン鎖中に存在し得る非常に多 数の異なる可変領域により表される広大な免疫学的レパートリーを捕獲するため に考案されている。天然に存在する生殖系列免疫グロブリンＨ鎖座位は、多様性 （D）セグメント遺伝子の直列の配列の上流に位置する可変性（V）セグメント遺 伝子の分離した直列の配列からなる。このDセグメント自身は、結合（J）領域遺 伝子の直列の配列の上流に位置し、J領域は、定常（CH）領域遺伝子の上流に位 置する。Bリンパ球の発達の間、V-D-J再配列が生じ、ここでＨ鎖可変領域遺伝子 （VH）は、融合したD-Jセグメントを形成するための再配列、それに続くV-D-J結 合産物遺伝子を形成するためのVセグメントとの再配列により形成され、生産的 に再配列される場合、このV-D-J結合産物遺伝子は、機能的なＨ鎖の可変領域（VH ）をコードする。同様に、Ｌ鎖座位は、いくつかのJセグメントの１つといくつ かのVセグメントの１つを再配列し、Ｌ鎖の可変領域（VL）をコードする遺伝子 を形成する。 免疫グロブリン中にあり得る可変領域の広範なレパートリーは、Ｂ細胞発達に おける再配列の間のVセグメントとJセグメント（とDセグメント(Ｈ鎖座位である 場合)）との結合の多数の組み合わせの可能性に部分的に由来する。Ｈ鎖可変領 域における付加的な配列多様性は、V-D-J結合の間のDセグメントの不均一な再配 列、およびN領域付加から生じる。さらに、特定のＢ細胞クローンの抗原選択は 、Ｈ鎖とＬ鎖の可変領域のいずれか１つまたは両方に非生殖系列変異を有する変 異体をより高いアフィニティーに関して選択する；この現象は、「アフィニティ ー成熟」または「アフィニティー鋭敏化（sharpening）」と呼ばれる。代表的に は、これらの「アフィニティー鋭敏化」変異は、可変領域の特定の範囲に、最も 一般的には相補性決定領域（CDR）中にクラスター形成する。 抗原刺激化Ｂ細胞の発達（すなわち、免疫化）を通して高アフィニティー免疫 グロブリンを産生および同定することにおける多くの制限を克服するために、特 異的な抗原に対する高アフィニティー抗体についてスクリーニングされ得る組み 合わせの抗体ライブラリーを作製するように操作され得る種々の原核生物の発現 システムが開発されている。Escherichia coliおよびバクテリオファージシステ ムにおける抗体の発現における最近の利点（以下の「別のペプチドディスプレイ 法」を参照のこと）は、実際に任意の特異性が、特徴づけられたハイブリドーマ から抗体遺伝子をクローニングするか、または抗体遺伝子ライブラリー（例えば 、Ig cDNAから）を用いる新規選択のいずれかにより得られ得るという可能性を 増加している。 抗体の組み合わせのライブラリーは、バクテリオファージプラークまたは溶原 菌のコロニーとしてスクリーニングされ得るバクテリオファージλ発現システム において生成されている（Huseら、(1989)Science 246: 1275; CatonおよびKopr owski（1990）Proc.Natl.Acad.Sci ．(U.S.A.) 87: 6450; Mullinaxら、(1990)Pr oc.Natl.Acad.Sci．(U.S.A.)87: 8095; Perssonら、(1991)Proc.Natl.Acad.Sci ．(U.S.A.) 88:2432）。バクテリオファージ抗体ディスプレイライブラリーおよ びλファージ発現ライブラリーの種々の実施様態が、記載されている（Kangら、 (1991)Proc.Natl.Acad.Sci ．(U.S.A.) 88: 4363；Clacksonら、(1991)Nature 35 2 : 624；McCaffertyら、(1990)Nature 348: 552；Burtonら、(1991)Proc.Natl.A cad.Sci ．(U.S.A.) 88: 10134；Hoogenboomら、(1991)Nucleic Acids Res. 19: 4133；Changら、(1991)J.Immunol. 147: 3610；Breitlingら、(1991) Gene 104: 147；Marksら、(1991)J.Mol.Biol. 222: 581；Barbasら、(1992)Proc .Natl.Acad.Sci ．(U.S.A.) 89: 4457；HawkinsおよびWinter（1992）J.Immunol. 22: 867; Marksら、(1992)Biotechnology 10: 779；Marksら、(1992)J.Biol.Ch em. 267: 16007; Lowmanら、(1991)Biochemistry 30: 10832；Lernerら、(1992)Science 258: 1313は、参考として本明細書中に援用される）。代表的には、バ クテリオファージ抗体ディスプレイライブラリーは、固定化（例えば、アフィニ ティークロマトグラフィーにより反応性ファージについて富化するためのクロマ トグラフィー樹脂への共有結合による）および/または標識（例えば、プラーク またはコロニーリフトをスクリーニングするために）されているレセプター（例 えば、ポリペプチド、炭水化物、糖タンパク質、核酸）でスクリーニングされる 。 １つの特に有利なアプローチは、いわゆる単鎖フラグメント可変（scFv）ライ ブラリーの使用である（Marksら、(1992)Biotechnology 10: 779； Winter Gお よびMilstein C（1991）Nature 349:293；Clacksonら、(1991)前出；Marksら、( 1991)J.Mol.Biol. 222: 581；Chaudharyら、(1990)Proc.Natl.Acad.Sci ．(USA) 87 : 1066；Chiswellら、(1992)TIBTECH 10: 80；McCaffertyら、(1990)前出；お よびHustonら、(1988)Proc.Natl.Acad.Sci ．(USA) 85: 5879）。バクテリオファ ージコートタンパク質においてディスプレイされるscFvライブラリーの種々の実 施様態が記載されている。 1988年のはじめ、Fvフラグメントの単鎖アナログおよびそれらの融合タンパク 質が、抗体工学法により確実に生成されている。第１の工程は、一般に、所望の 結合特性を有するVHおよびVLドメインをコードする遺伝子を得ることを包含する ；これらのV遺伝子は、特定のハイブリドーマ細胞株から単離され得るか、組み 合わせのV遺伝子ライブラリーから選択され得るか、またはV遺伝子合成により作 製され得る。単鎖Fvは、成分V遺伝子と適切に設計されたリンカーペプチド（例 えば、(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)3または等価のリンカーペプチド(１つまたは複数) ）をコードするオリゴヌクレオチドとを結合することにより形成される。リンカ ーは、VH-リンカー-VLまたはVL-リンカー-VHのいずれかの順序で第１のV領 域のC-末端、および第２のV領域のN-末端に橋を架ける。原則として、scFv結合 部位は、その親の抗体結合部位のアフィニティーおよび特異性の両方を正確に複 製し得る。 従って、scFvフラグメントは、柔軟なリンカーペプチドにより単一のポリペプ チド鎖に連結されたVHおよびVLドメインからなる。scFv遺伝子が組立てられた後 、それらは、ファージミド中にクローン化され、そしてバクテリオファージpIII （遺伝子３）コートタンパク質との融合タンパク質としてM13ファージ（または 類似の繊維状バクテリオファージ）の先端部で発現される。目的の抗体を発現す るファージの富化は、予め決定されたエピトープ（例えば、標的抗原、レセプタ ー）への結合についてscFv集団をディスプレイする組換えファージをパンニング することにより達成される。 ライブラリーメンバーの連結ポリヌクレオチドは、スクリーニング手順または 選択手順後のライブラリーメンバーの複製に関する基礎を提供し、そしてヌクレ オチド配列決定による、ディスプレイされたペプチド配列またはVHおよびVLアミ ノ酸配列の正体の決定のための基礎をも提供する。ディスプレイされたペプチド （１つまたは複数）または単鎖抗体（例えば、scFv）および／またはそのVHおよ びVLドメインあるいはそれらのCDRは、適切な発現システムにクローン化され得 、そして発現され得る。しばしば、単離されたVHおよびVLドメインをコードする ポリヌクレオチドは、定常領域（CHおよびCL）をコードするポリヌクレオチドに 連結され、完全な抗体（例えば、キメラ、または完全なヒトの抗体）、抗体フラ グメントなどをコードするポリヌクレオチドを形成する。しばしば、単離された CDRをコードするポリヌクレオチドは、適切な可変領域フレームワーク（および 随意に定常領域）をコードするポリヌクレオチドに融合され、完全な抗体（例え ば、ヒト化または完全なヒト抗体）、抗体フラグメントなどをコードするポリヌ クレオチドを形成する。抗体は、免疫アフィニティークロマトグラフィーにより 、調製量の抗原を単離するために用いられ得る。このような抗体の種々の他の使 用は、疾患（例えば、腫瘍形成）を診断／または段階づけすること、および治療 応用のために、疾患（例えば：腫瘍形成、自己免疫疾患、AIDS、心血管性疾患、 感染症など）を処置することである。 種々の方法が、scFvライブラリーの組み合わせの多様性の増加が、結合種のレ パートリー（イディオタイプスペクトル）を広げることについて報告されている 。PCRの使用は、可変領域を、特定のハイブリドーマ供給源からか、または非免 疫化細胞から遺伝子ライブラリーとして、迅速にクローン化することを可能にし 、これは組み合わされ得るVHおよびVLカセットの分類における組み合わせの多様 性を供給する。さらに、VHおよびVLカセットは、例えば、ランダムな変異誘発、 疑似ランダムな変異誘発、または定方向変異誘発（directed mutagenesis）によ り、それ自身多様化させられ得る。代表的には、VHおよびVLカセットは、相補性 決定領域（CDR）（しばしば第３のCDR、CDR3）内またはその近くにおいて多様化 される。酵素的インバースPCR変異誘発は、誤りがちなPCRおよび化学的変異誘発 がそうであるように（Dengら、(1994)J.Biol.Chem. 269:9533）、scFv部位特異 的変異体の比較的大きなライブラリーを構築することに関して単純かつ信頼し得 る方法であることが示されている（Stemmerら、(1993)Biotechniques 14: 256） 。Riechmannら、(1993)Biochemistry 32: 8848は、縮重オリゴヌクレオチドPCR および引き続いて結果として生じるscFv変異体のファージディスプレイによる部 位特異的ランダム化を用いる抗体scFvフラグメントの半合理的な設計を示した。 Barbasら、(1992)前出は、ヒト破傷風トキソイド結合Fabの合成CDR領域における 配列をランダム化することにより、偏った可変領域配列を用いることに起因する 制限されたレパートリーサイズの問題を回避することを試みた。 CDRランダム化は、Ｈ鎖CDR3のみについて約1×1020CDR、そしておおよそ類似 した数のH鎖CDR1およびCDR2の変異体、ならびにＬ鎖CDR1-3変異体を作製する潜 在力を有する。個々にまたは一緒に考慮すると、Ｈ鎖および／またはＬ鎖のCDR ランダム化の組み合わせは、全ての可能な組み合わせを提示するクローンライブ ラリーを作製するために、膨大な数のバクテリオファージクローン（それらのほ とんどは、非結合性である）の生成を必要とする。このような多数の初期形質転 換体の生成は、現在の形質転換技術およびバクテリオファージディスプレイシス テムでは、容易ではない。例えば、Barbasら、(1992)前出は、5×107の形質転換 体のみを生成し、これは、完全にランダム化されたCDRのライブラリーのごく小 さな割合の潜在的多様性のみを提示する。 これらの実質的な制限にも関わらず、scFvのバクテリオファージディスプレイ はすでに、種々の有用な抗体および抗体融合タンパク質を産生している。二特異 性の単鎖抗体は、効率的な腫瘍細胞溶解を仲介することが示されている（Gruber ら、(1994)J.Immunol. 152: 5368）。抗Rev scFvの細胞内発現は、インビトロで のHIV-1ウイルス複製を阻害することが示されており（Duanら、(1994)Proc.Natl .Acad.Sci ．(USA) 91: 5075）、そして抗p21ras scFvの細胞内発現は、Xenopus 卵母細胞の減数分裂の成熟を阻害することが示されている（Bioccaら、(1993)Bi ochem ．Biophys.Res.Commun. 197:422）。HIV感染を診断するために用いら得る 組換えscFvもまた、報告されており、scFvの診断上の利用性が示されている（Li lleyら、(1994)J.Immunol.Meth. 171;211）。scFvが第２のポリペプチド（例え ば、毒素または線維素溶解性活性化タンパク質）に連結している融合タンパク質 もまた報告されている（Holvostら、(1992)Eur.J.Biochem. 210: 945; Nicholls ら、(1993)J.Biol.Chem. 268: 5302）。 広範な抗体多様性を有し、そして潜在的な配列組み合わせの非常に小さい割合 のみをカバーし得る多くの従来のCDR変異誘発およびランダム化法の制限の多く を克服するscFvライブラリーを生成し得るならば、scFv抗体の数および質を治療 上および診断上の使用に適切に大幅に改善してもよい。これに取り組むために、 本発明のインビトロおよびインビボ再編成法が、選択されたディスプレイされた 抗体から得られた核酸から（代表的にPCR増幅またはクローン化により）得られ たCDRを組み換えるために用いられる。このようなディスプレイされた抗体は、 細胞、バクテリオファージ粒子、ポリソーム、または任意の適切な抗体ディスプ レイシステムにおいて、ディスプレイされ得る。ここで抗体が、それをコードす る核酸（１つまたは複数）と会合されている。ある改変例においては、CDRは最 初に、抗体産生細胞（例えば、第WO92/03918号、第WO93/12227号、および第WO94 /25585号に記載のように、免疫化した野生型マウス、ヒト、またはヒト抗体を作 製し得るトランスジェニックマウス由来の形質細胞／脾細胞）（これはそれに由 来するハイブリドーマを包含する）由来のmRNA（またはcDNA）から得られる。 これらの方法のいずれかにより第１の選択ラウンドにおいて選択された（代表 的には、ディスプレイされた抗体が抗原（例えば、リガンド）に結合することに 関するアフィニティー選択による）ポリヌクレオチド配列は、プールされ、そし てこのプール（１つまたは複数）は、インビトロおよび／またはインビボ組換え 、特にCDRの再編成により再編成され（代表的には、Ｈ鎖CDRが他のＨ鎖CDRで再 編成され、そしてＬ鎖CDRが他のＬ鎖CDRで再編成される）、組み換えられた選択 ポリヌクレオチド配列の集団を含有する再編成されたプールを作製する。組み換 えられた選択ポリヌクレオチド配列は、ディスプレイされた抗体のような選択様 式において発現され、そして少なくとも１回の引き続く選択ラウンドにかけられ る。引き続く選択ラウンド（１回または複数回）において選択されたポリヌクレ オチド配列は、直接使用され得、配列決定され得、そして／または所望の結合ア フィニティーを有する抗体が得られるまで１回またはそれ以上の更なる再編成お よび引き続く選択のラウンドにかけられ得る。選択された配列はまた、中立の抗 体フレームワーク配列をコードするポリヌクレオチド配列（すなわち、抗原結合 において非実質的な機能的効果を有する）と戻し交雑され（例えば、ヒト可変領 域フレームワークとの戻し交雑による）、ヒト様配列抗体を作製し得る。一般に 、戻し交雑の間、引き続く選択は、予め決定された抗原への結合の特性を保有す るように適用される。 あるいは、または公知の改変例との組み合わせにおいて、標的エピトープの結 合価は、選択されたscFvライブラリーメンバーの平均結合アフィニティーを調節 するように、改変され得る。標的エピトープは、例えば、競合エピトープを含有 すること、希釈、または当業者に公知の他の方法により、種々の密度で表面また は基質に結合され得る。予め決定されたエピトープの高密度（結合価）は、比較 的低いアフィニティーを有するscFvライブラリーメンバーについて富化するため に用いられ得る。一方、低密度（結合価）は、より高いアフィニティーについて scFvライブラリーメンバーを優先的に富化し得る。 多種多様な可変セグメントを生成するために、ペプチド配列のランダム、疑似 ランダム、または規定の配列のカーネルセットをコードする合成オリゴヌクレオ チドの集合は、予め決定された部位（例えば、CDR）への連結により挿入され得 る。同様に、単鎖抗体カセット（１つまたは複数）の１つまたはそれ以上のCDR の配列多様性は、部位特異的変異誘発、CDR置換などを用いてCDR（１つまたは複 数）を変異させることにより拡大され得る。生じるDNA分子は、再編成の前のク ローン化および増幅のために宿主において増殖され得るか、または直接使用され 得（すなわち、宿主細胞における増殖の際に生じ得る多様性の損失を回避し得る ）、そして選択されたライブラリーメンバーは、引き続いて再編成される。 目的の可変セグメントペプチド配列または目的の単鎖抗体をコードするディス プレイされたペプチド／ポリヌクレオチド複合体（ライブラリーメンバー）は、 アフィニティー富化技術により、ライブラリーから選択される。これは、目的の ペプチド配列に特異的な固定化された高分子またはエピトープ（例えは、レセプ ター、他の高分子、または他のエピトープ種）により達成される。アフィニティ ー選択手順を繰り返すことにより、所望の配列をコードするライブラリーメンバ ーの富化物が提供され、次いでこの富化物は、プールおよび再編成、配列決定、 および／または更なる増殖およびアフィニティー富化のために単離され得る。 所望の特異性を有しないライブラリーメンバーは、洗浄により除去される。要 求される洗浄の度合およびストリンジェンシーは、目的のそれぞれのペプチド配 列または単鎖抗体、および固定化された予め決定された高分子またはエピトープ に関して決定される。調節の所定の度合は、結合のインキュベーションおよび引 き続く洗浄の条件を調整することにより、回収された新生のペプチド／DNA複合 体の結合特性に影響を及ぼし得る。温度、pH、イオン強度、二価陽イオン濃度、 および洗浄の容量および持続時間は、固定化高分子に対するアフィニティーの特 別な範囲内で、新生のペプチド／DNA複合体について選択される。通常、高アフ ィニティーの指標となる緩徐な解離速度に基づく選択は、しばしば最も実践的な 経路である。これは、飽和量の遊離した予め決定された高分子の存在下における 継続的なインキュベーション、または洗浄の容量、回数、および長さを増加させ ることのいずれかにより実施され得る。それぞれの場合において、解離した新生 ペプチド／DNAまたはペプチド／RNA複合体の再結合は防止され、そして時間の増 加とともに、徐々にアフィニティーが高くなる新生のペプチド／DNAまたはペプ チド／RNA複合体が回収される。 結合および洗浄の手順のさらなる改変は、特別な特徴を有するペプチドを見い 出すために適用され得る。いくつかのペプチドのアフィニティーは、イオン強度 または陽イオン濃度に依存する。これは、ペプチドからこのタンパク質を除去す るのに穏やかな条件が要求される場合の種々のタンパク質のアフィニティー精製 において用いられるペプチドについて有用な特徴である。 １つの改変例は、scFvライブラリーが、異なる結合特異性を有するscFvの多重 性について同時にスクリーニングされ得るような、多重結合標的（多重エピトー プ種、多重レセプター種）の使用を包含する。scFvライブラリーのサイズが、し はしば潜在的なscFv配列の多様性を制限すると仮定すると、一般に、可能な限り の大きなサイズのscFvライブラリーが本発明者らにとって望ましい。多数の非常 に大きなポリソームscFv-ディスプレイライブラリーを生成することの時間性お よび経済性の考慮は、障害になり得る。この実質的な問題を回避するために、多 重性を有する予め決められたエピトープ種（レセプター種）が、単一のライブラ リーにおいて同時にスクリーニングされ得るか、または多数のエピトープ種に対 する逐次スクリーニングが用いられ得る。１つの改変例において、それぞれ別個 のビーズ（またはビーズのサブセット）にコードされる多重標的エピトープ種は 、適切な結合条件下でポリソームディスプレイscFvライブラリーと混合およびイ ンキュベートされ得る。次いで多重エピトープ種を含有するビーズの集合は、ア フィニティー選択により、scFvライブラリーメンバーを単離するために用いられ 得る。一般に、引き続くアフィニティースクリーニングラウンドは、ビーズの同 一の混合物、それのサブセット、または１つのみまたは２つの個々のエピトープ 種を含有するビーズを包含し得る。このアプローチは、効率的なスクリーニング を提供し、そして研究自動化法、バッチプロセシング法、および高処理能力スク リーニング法と適合する。 種々の技術は、予め決定された高分子またはエピトープに対する十分な結合活 性を有するように、ペプチドライブラリーまたは単鎖抗体ライブラリーを多様化 するために、あるいは再編成の前または同時に、周囲の可変セグメントペプチド またはVH、VL、あるいはパンニングの初期のラウンドにおいて見い出されるCDR を多様化するために本発明において用いられ得る。１つのアプローチにおいて、 ポジティブに選択されたペプチド／ポリヌクレオチド複合体（アフィニティー富 化の初期のラウンドにおいて同定される複合体）は、活性ペプチドの正体を決定 す るために配列決定される。次いてオリゴヌクレオチドは、これらの活性ペプチド 配列に基づいて合成され、これはそれぞれの工程で取り込まれる全ての塩基を低 レベルで使用し、一次オリゴヌクレオチド配列の僅かな改変例を生じる。次いで この（僅かに）縮重したオリゴヌクレオチドの混合物は、適切な位置で可変セグ メント配列中にクローン化される。この方法は、開始ペプチド配列の規則正しい 調節された改変例を生じ、次いでこれらは再編成され得る。しかしこの方法は、 個々のポジティブ新生ペプチド／ポリヌクレオチド複合体が、変異誘発の前に配 列決定されることを要求し、従って少数の回収された複合体の多様性を拡大し、 そしてより高い結合アフィニティーおよび／またはより高い結合特異性を有する 変異体を選択するために有用である。変種の、ポジティブに選択された（特に可 変領域配列の）ペプチド／ポリヌクレオチド複合体の変異性PCR増幅において、 その増幅産物は、インビトロおよび／またはインビボで再編成され、そして１回 以上のさらなるスクリーニングのラウンドが、配列決定の前に実施される。同一 の一般的なアプローチは、多様性を拡大し、そして結合アフィニティー／特異性 を増強するために、代表的には、再編成の前または同時にCDRまたは隣接のフレ ームワーク領域を多様化することにより、単鎖抗体とともに用いられ得る。所望 であれば、再編成反応は、選択されたライブラリーメンバーとインビトロ組換え し得る変異原性オリゴヌクレオチドでスパイクされ得る。従って、合成オリゴヌ クレオチドおよびPCRフラグメント（誤りがちな方法または高度に忠実な方法に より合成された）の混合物がインビトロ再編成混合物に添加され、そして結果と して生じる再編成されたライブラリーメンバー（再編成体）中に取り込まれ得る 。 本発明の再編成は、CDR変異体単鎖抗体の広大なライブラリーの生成を可能に する。このような抗体を生成する１つの方法は、再編成の前または再編成と同時 に、単鎖抗体および／またはCDRのランダム化中に合成CDRを挿入することである 。合成CDRカセットの配列は、ヒトCDRの公知の配列データを参照することにより 選択され、そして以下のガイドラインに従って実施者の判断により選択される： 合成CDRは、公知のCDR配列に対して少なくとも40％の位置的な配列同一性を有し 、そして好ましくは、公知のCDR配列に対して少なくとも50〜70パーセントの位 置的な配列同一性を有する。例えば、合成CDR配列の集合は、Kabatら、(1991)前 出 に列挙された天然に存在するヒトCDR配列に基づいてオリゴヌクレオチド配列 の集合を合成することにより生成され得る；合成CDR配列のプール（１つまたは 複数）は、少なくとも一つの公知の天然に存在するヒトCDR配列に対して少なく とも40％の配列同一性を有するCDRペプチド配列をコードするように計算される 。あるいは、天然に存在するCDR配列の集合が比較され得、ある残基位置に頻繁 に（すなわち、公知のCDR配列の少なくとも５％において）用いられるアミノ酸 が、相当する位置（１つまたは複数）で合成CDR中に取り込まれるように、コン センサス配列を生成し得る。代表的には、いくつか（例えば、３〜約50）の公知 のCDR配列が比較され、そして公知のCDRの間の観測された天然配列の改変例が一 覧表にされ、そして観測された天然配列の改変例の全てまたはほとんどの順列を 包含するCDRペプチド配列をコードするオリゴヌクレオチドの集合が合成される 。限定されないが、例えば、ヒトVH CDR配列の集合が、Tyr、Val、Phe、またはA spのいずれかであるカルボキシ末端アミノ酸を有する場合、合成CDRオリゴヌク レオチド配列のプール（１つまたは複数）は、カルボキシ末端のCDR残基がこれ らのアミノ酸のいずれかであるように設計される。いくつかの実施様態では、CD R配列の集合においてある残基位置に天然に存在する残基以外の残基が取り込ま れる：保存的なアミノ酸置換は、頻繁に取り込まれ、そして公知の天然に存在す るCDR配列と比較して５残基位置までが、非保存的なアミノ酸置換が取り込まれ るように変動し得る。このようなCDR配列は、（第１ラウンドのスクリーニング の前の）最初のライブラリーメンバーにおいて用いられ、そして／または選択さ れたライブラリーメンバー配列のインビトロの再編成反応をスパイクするために 用いられ得る。規定の配列および／または縮重配列のこのようなプールの構築は 、当業者により容易に達成される。 合成CDR配列の集合は、天然に存在するCDR配列であるとして知られていない、 少なくとも１つのメンバーを含む。Ｈ鎖CDRにおけるN領域付加に相当するランダ ムまたは疑似ランダムな配列の一部を含有するかまたは含有しないかは、実施者 の判断内にある；N領域配列は、V-DおよびD-J結合部に存在する１ヌクレオチド 〜約４ヌクレオチドの範囲である。合成Ｈ鎖CDR配列の集合は、少なくとも約100 のユニークなCDR配列を含み、代表的には少なくとも約1,000のユニークCDR配列 を含み、好ましくは、少なくとも約10,000のユニークなCDR配列を含み、しばし ば50,000より多いユニークなCDR配列を含む；しかし、特に、保存的なアミノ酸 置換が、保存的なアミノ酸置換基が天然に存在するヒトCDRにおけるその位置に 存在しないか、またはまれに存在する（すなわち、0.1％未満）位置において許 容される場合、ときには1×107〜1×108のユニークなCDR配列が存在することも あるが、通常、せいぜい約1×106のユニークなCDR配列が集合中に含まれる。一 般に、ライブラリーに含まれるユニークなCDR配列の数は、ライブラリー中の最 初の形質転換体の予測される数を10倍（a factor of 10）を超えて超過するべき でない。このような単鎖抗体は、一般に、少なくとも約1×107M-1のアフィニテ ィーで、好ましくは少なくとも約5×107M-1のアフィニティーで、より好ましく は少なくとも1×108M-1〜1×109M-1またはそれ以上のアフィニティーで、ときに は1×1010M-1またはそれ以上のアフィニティーで、予め決定された抗原（例えば 、免疫原）に結合する。頻繁には、予め決定された抗原は、例えばヒト細胞表面 抗原（例えば、CD4、CD8、IL-2レセプター、EGFレセプター、PDGFレセプター） のようなヒトタンパク質、他のヒト生体高分子（例えば、トロンボモジュリン、 プロテインＣ、糖質抗原、シアリルLewis抗原、L-セレクチン）、または非ヒト 疾患関連高分子（例えば、細菌LPS、ビリオンカプシドタンパク質、またはエン ベロープ糖タンパク質）などである。 所望の特異性を有する高アフィニティー単鎖抗体は、種々のシステムにおいて 改変および発現される。例えば、scFvは、植物中で産生されており（Firekら、( 1993)Plant Mol ．Biol. 23: 861）、そして原核生物系において容易に生成され 得る（Owens RJおよびYoung RJ（1994）J.Immunol.Meth. 168: 149; Johnson S およびBird RE（1991）Methods Enzymol. 203: 88）。さらに、単鎖抗体は、抗 体全体またはその種々のフラグメントを構築する基礎として用いられ得る（Kett leboroughら、(1994)Eur.J.Immunol. 24: 952）。可変領域をコードする配列は 、単離され得（例えば、PCR増幅またはサブクローン化により）、そして免疫原 性が好適に最小化されるヒトの治療的使用により適切なヒト配列抗体をコードす るように、所望のヒト定常領域をコードする配列にスプライシングされ得る。結 果として生じる完全なヒトコード配列（１つまたは複数）を有するポリヌクレオ チ ド（１つまたは複数）は、宿主細胞において発現され（例えば、哺乳動物細胞に おいて発現ベクターから）、そして製薬製造のために精製され得る。 DNA発現構築物は、代表的には、コード配列に作動可能に連結された発現調節D NA配列を含有し、この配列は、天然に会合したプロモーター領域、または異種の プロモーター領域を含む。好ましくは、発現調節配列は、真核生物宿主細胞を形 質転換またはトランスフェクトし得るベクターの真核生物プロモーターシステム である。一旦ベクターが適切な宿主中に取り込まれると、宿主は、ヌクレオチド 配列の高レベルの発現、ならびに変異「改変」抗体の収集および精製に適切な条件 下で維持される。 上述のように、DNA配列は、配列が発現調節配列に作動可能に連結された（す なわち、構造遺伝子の転写および翻訳を確実にするように位置された）後に、宿 主中で発現される。これらの発現ベクターは、代表的には、エピソームまたは宿 主の染色体DNAの必須部分として、この宿主生物において複製可能である。一般 に、発現ベクターは、所望のDNA配列で形質転換されたこれらの細胞の検出を可 能にするために、選択マーカー（例えば、テトラサイクリンまたはネオマイシン ）を含有する（例えば、米国特許第4,704,362号を参照のこと。これは、参考と して本明細書中に援用される）。 真核の微生物（例えば、酵母）に加えて、哺乳動物の組織細胞培養物もまた、 本発明のポリペプチドを生成するために用いられ得る（Winnacker、「From Genes to Clones,」 VCH Publishers，N.Y.，N.Y．(1987)を参照のこと。これは参考 として本明細書中に援用される）。真核細胞は、実際に好ましい。なぜなら、無 傷の免疫グロブリンを分泌し得る多数の適切な宿主細胞株が当該分野で開発され ており、そしてこれは、CHO細胞株、種々のCOS細胞株、HeLa細胞、ミエローマ細 胞株などを含むが、形質転換されたＢ細胞またはハイブリドーマが好ましい。こ れらの細胞のための発現ベクターは、発現調節配列(例えば、複製起点、プロモ ーター、エンハンサー)(Queenら、(1986)Immunol.Rev．89: 49)、および必要と されるプロセシング情報部位（例えば、リボソーム結合部位、RNAスプライシン グ部位、ポリアデニル化部位、および転写終結配列）を含有する。好ましい発現 調節配列は、免疫グロブリン遺伝子、サイトメガロウイルス、SV40、アデノウ イルス、ウシパピローマウイルスなどに由来するプロモーターである。 真核生物のDNA転写は、ベクター中にエンハンサー配列を挿入することにより 増加され得る。エンハンサーは、プロモーターによる転写を増加する10bpと300b pとの間のシス作用性配列である。エンハンサーは、転写単位に対して5'または3 'のいずれかにある場合、転写を効率的に増加し得る。それらはまた、イントロ ン内、またはコード配列自身の内部に位置される場合にも効果的である。代表的 には、ウイルスのエンハンサーが使用され、これは、SV40エンハンサー、サイト メガロウイルスエンハンサー、ポリオーマエンハンサーおよびアデノウイルスエ ンハンサーが含まれる。マウス免疫グロブリンＨ鎖エンハンサーのような、哺乳 動物系由来のエンハンサー配列もまた、一般に使用される。 哺乳動物の発現ベクターシステムはまた、代表的に選択マーカー遺伝子を含有 する。適切なマーカーの例は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子（DHFR）、チミ ジンキナーゼ遺伝子（TK）、または薬物耐性を与える原核生物遺伝子を包含する 。最初の２つのマーカー遺伝子は、生育培地へのチミジンの添加をともなわずに 生育する能力を欠如する変異体細胞株の使用を好む。次いで、形質転換された細 胞は、非補充培地における生育能により同定され得る。マーカーとして有用な原 核生物の薬物耐性遺伝子の例は、G418、ミコフェノール酸、およびヒグロマイシ ンへの耐性を与える遺伝子を包含する。 目的のDNAセグメントを含有するベクターは、細胞の宿主タイプに依存して周 知の方法により宿主細胞中に導入され得る。例えば、塩化カルシウムトランスフ ェクションが、原核細胞に一般に利用されるが、リン酸カルシウム処理、リポフ ェクション、またはエレクトロポレーションは、他の細胞の宿主に用いられ得る 。哺乳動物を形質転換するために用いられる他の方法は、ポリブレン、プロトプ ラスト融合、リポソーム、エレクトロポレーション、およびマイクロインジェク ションの使用を含む（一般に、Sambrookら、前出を参照のこと）。 一旦発現されると、抗体、個々の変異免疫グロブリン鎖、変異抗体フラグメン ト、および本発明の他の免疫グロブリンポリペプチドは、当該分野の標準的な手 順に従って精製され得る。この手順は、硫酸アンモニウム沈澱、フラクションカ ラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを包含する（一般に、Scopes，R.， Protein Purification，Springer-Verlag，N.Y．(1982)を参照のこと）。一旦部 分的にまたは所望の均一性まで精製されると、次いでポリペプチドは、治療的に 、またはアッセイ手順、免疫蛍光染色などの開発および実施において用いられ得 る（一般に、Immunological Methods、Iおよび11巻、LefkovitsおよびPernis編 、Academic Press，New York，N.Y．(1979および1981)を参照のこと）。 本発明の方法により生成される抗体は、診断および治療に用いられ得る。限定 のためではなく、説明のために、それらは、ガン、自己免疫疾患、またはウイル ス感染症を処置するために用いられ得る。ガンの処置について、抗体は、代表的 に癌細胞において優先的に発現される抗原（例えば、erbB-2、CEA、CD33、およ び当業者に周知の多数の他の抗原および結合メンバー）に結合する。 酵母ツーハイブリッドスクリーニングアッセイ 再編成はまたは、予め決定されたポリペプチド配列に結合するライブラリーメ ンバーを同定するためのツーハイブリッドスクリーニングシステムをスクリーニ ングすることにより得られた選択されたライブラリーメンバーのプールを組換え 的に多様化するために用いられ得る。選択されたライブラリーメンバーは、プー ルされ、そしてインビトロおよび／またはインビボ組換えにより再編成される。 次いで再編成されたプールは、前記の予め決定されたポリペプチド配列（例えば 、SH2ドメイン）に結合するライブラリーメンバー、または別の予め決定された ポリペプチド配列（例えば、他のタンパク質の種由来のSH2ドメイン）を選択す るために、酵母ツーハイブリッドシステムにおいてスクリーニングされ得る。 予め決定されたポリペプチド配列に結合するポリペプチド配列を同定するため の１つのアプローチは、予め決定されたポリペプチド配列が融合タンパク質中に 存在するいわゆる「ツーハイブリッド」システムを用いている（Chienら、（199 1）Proc.Natl.Acad.Sci ．(USA) 88:9578）。このアプローチは、転写のアクティ ベーター（Fields SおよびSong O（1989）Nature 340:245）、酵母Ga14転写タン パク質の再構成を通して、インビボでのタンパク質−タンパク質の相互作用を同 定する。代表的には、この方法は、酵母Ga14タンパク質の特性に基づく。このタ ンパク質は、DNA結合および転写の活性化に機能する分離可能なドメインからな る。２つのハイブリッドタンパク質（一方は、公知のタンパク質のポリペプチド 配列に融合された酵母Ga14 DNA結合ドメインからなり、他方は、第２のタンパク 質のポリペプチド配列に融合されたGa14活性化ドメインからなる）をコードする ポリヌクレオチドが構築され、酵母宿主細胞に導入される。２つの融合タンパク 質間の分子間の結合は、Ga14 DNA結合ドメインとGa14活性化ドメインとを再構成 し、これはGa14結合部位に作動可能に連結されたレポーター遺伝子（例えば、la cZ、HIS3）の転写の活性化を導く。代表的に、ツーハイブリッド法は、公知のタ ンパク質に相互作用する新規のポリペプチト配列を同定するために用いられる（ Silver SCおよびHunt SW（1993）Mol.Biol.Rep. 17: 155; Durfeeら、(1993)Gen es Devel. 7; 555; Yangら、(1992)Science 257: 680; Lubanら、(1993)Ce11 73 :1067; Hardyら、(1992)Genes Devel. 6; 801; Bartelら、(1993)Biotechniques 14: 920; およびVojtekら、(1993)Cell 74: 205）。しかし、ツーハイブリッド 法の変法が、第２の公知のタンパク質への結合に影響する公知のタンパク質の変 異を同定するために用いられている（Li BおよびFields S（1993）FASEB J. 7: 957; Laloら、(1993)Proc.Natl.Acad.Sci ．(USA) 90: 5524; Jacksonら、(1993)Mol.Cell.Biol. 13; 2899;およびMaduraら、(1993)J.Biol.Chem. 268: 12046） 。ツーハイブリッドシステムはまた、２つの公知のタンパク質の相互作用する構 造ドメインを同定するため（Bardwellら、(1993)Med.Microbiol. 8: 1177; Chak rabortyら、(1992)J.Biol.Chem. 267: 17498; Staudingerら、(1993)J.Biol.Che m. 268: 4608; およびMilne GTおよびWeaver DT（1993）Genes Devel. 7; 1755 ）、または単一のタンパク質のオリゴマー形成に機能するドメインを同定するた めにも用いられている（Iwabuchiら、(1993)Oncogene 8; 1693; Bogerdら、(199 3)J.Virol. 67: 5030）。ツーハイブリッドシステムの変法は、タンパク質分解 酵素のインビボでの活性を研究するために用いられている（Dasmahapatraら、(1 992)Proc.Natl.Acad.Sci. (USA) 89: 4159）。あるいは、E．coli/BCCP 相互作 用的スクリーニングシステム（Germinoら、(1993)Proc.Natl.Acad.Sci ．(U.S.A. ) 90: 933; Guarente L（1993）Proc.Natl.Acad.Sci.（U.S.A.）90: 1639）は、 相互作用するタンパク質配列（すなわち、ヘテロ二量体化するか、またはより高 次のヘテロ多量体を形成するタンパク質配列）を同定するため に用いられ得る。ツーハイブリッドシステムにより選択された配列は、プールお よび再編成され、そして予め決定された結合配列を含有するハイブリッドに結合 するポリペプチド配列を同定するためのスクリーニングの１つ以上の引き続くラ ウンドのために、ツーハイブリッドシステムに導入され得る。このようにして同 定された配列は、コンセンサス配列およびコンセンサス配列カーネルを同定する ために比較され得る。 上述の開示から理解され得るように、本発明は、広範な応用を有する。従って 、以下の実施例は、説明のために提供され、制限のためではない。 以下の実施例において、以下の略語は以下の意味を有する。以下に定義されな い場合、その略語は当該分野で理解される意味を有する。 ml ＝ ミリリットル μl ＝ マイクロリットル μM ＝ マイクロモル濃度 nM ＝ ナノモル濃度 PBS ＝ リン酸緩衝生理食塩水 ng ＝ ナノグラム μg ＝ マイクログラム IPTG ＝ イソプロピルチオ-β-D-ガラクトシド bp ＝ 塩基対 kb ＝ キロ塩基対 dNTP ＝ デオキシヌクレオシド３リン酸 PCR ＝ ポリメラーゼ連鎖反応 X-gal ＝ 5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル-β-D-ガラクトシド DNAseI ＝ デオキシリボヌクレアーゼ PBS ＝ リン酸緩衝生理食塩水 CDR ＝ 相補性決定領域 MIC ＝ 最小阻止濃度 scFv ＝ 抗体の単鎖Fvフラグメント 一般に、組換えDNA工学の標準的な技術は、種々の出版物（例えば、Sambrook ら、1989，Molecular Cloning: A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Lab oratory; Ausubelら、1987，Current Protocols in Molecular Biology、１巻お よび２巻ならびに増補、ならびにBergerおよびKimmel、Methods in Enzymology ，Volume 152，Guide to Molecular Cloning Techniques (1987)，Academic Pres s，Inc.，San Diego，CA、それぞれ参考として全体が本明細書中に援用される） に記載されている。制限酵素およびポリヌクレオチド修飾酵素を、製造業者の推 奨に従って用いた。オリゴヌクレオチドをApplied Biosystems Inc．Model 394 DNA合成機で、ABIの化学製品を用いて合成した。所望であれば、予め決定された DNA配列を増幅するためのPCRアンプリマー（amplimer）は、従事者の判断で選択 され得る。 実施例 実施例１．LacZα遺伝子の再組立 １）基質の調製 再組立反応のための基質は、pUC18由来の野生型LacZα遺伝子のdsDNAポリメラ ーゼ連鎖反応（「PCR」）産物であった(図２)(28; Gene Bank第XO2514号)。プラ イマー配列は、5'AAAGCGTCGATTTTTGTGAT3'（配列番号１）および5'ATGGGGTTCCGC GCACATTT3'（配列番号２）であった。遊離したプライマーを、製造業者の指示に 従い、Wizard PCR prep（Promega，Madison WI）によりPCR産物から除去した。 遊離したプライマーの除去は、重要であることが見い出された。 ２）DNAseI消化 約５μgのDNA基質を、10〜20分間室温にて、100μlの[50mM Tris-HCl pH 7.4 ，1mM MgCl2]中で、0.15単位のDNAseI（Sigma，St．Louis MO）で消化した。消 化されたDNAを、２％低融点アガロースゲルで泳動した。10〜70塩基対（bp）の フラグメントを、DE81イオン交換紙（Whatman，Hillsborough OR）上への電気泳 動により２％低融点アガロースゲルから精製した。DNAフラグメントを、1M NaCl を用いてこの紙から溶出してエタノール沈澱した。 ３）DNA再組立 精製されたフラグメントを、PCR Mix（0.2mM 各dNTP、2.2mM MgCl2、50mM KCl 、10mM Tris-HCl pH 9.0、0.1％ Triton X-100、0.3μl Taq DNAポリメラーゼ、 50μlの総容量）中に10〜30ng/μlの濃度で再懸濁させた。この時点では、プラ イマーを添加しなかった。94℃60秒間、[94℃30秒間、50〜55℃30秒間、72℃30 秒間]の30〜45サイクル、および72℃５分間の再組立プログラムを、MJ Research （Watertown MA）PTC-150サーマルサイクラーにおいて用いた。より大きな配列 への小さなフラグメントのPCR再組立に続いて、再組立の25、30、35、40、およ び45サイクル後の反応のサンプルを採取した（図２）。 100〜200bpのフラグメントの再組立は、正確なサイズの単一のPCR産物を産生 し得るが、10〜50塩基のフラグメントは、代表的に正確なサイズのいくらかの産 物および不均一な分子量の産物を産生する。制限酵素消化後、正確なサイズの単 一のバンドが得られるので、このサイズ不均一性のほとんどは、産物の末端での １本鎖配列に起因すると思われる。 ４）プライマーを用いたPCR それぞれ0.8μMの上記のプライマー（配列番号１および２）を有するPCR Mix への再組立産物の希釈、および約15サイクルのPCR（それぞれのサイクルは、[94 ℃30秒間、50℃30秒間、および72℃30秒間]からなる）の後、正確なサイズの単 一の産物が得られた（図２）。 ５）クローニングおよび分析 上記の工程４由来のPCR産物を、末端の制限酵素BamHIおよびEco0109で消化し 、そして上記の工程２に記載のようにゲル精製した。再組立されたフラグメント を、BamHIおよびEco0109で消化したpUC18に連結した。E．coliを、製造業者（St ratagene，San Diego CA）により推奨されるような標準的な条件下で、この連結 混合物を用いて形質転換し、そして100μg/mlアンピシリン、0.004％ X-galおよ び２mM IPTGを有するアガープレートに播いた。++組換え体と判定されるHinDIII -NheIフラグメントを有する得られたコロニーを、それが青く見えることにより 同定した。 この実施例は、LacZα遺伝子を保有する1.0kbの配列が、10〜70bpのフラグメ ントに消化され得ること、およびこれらのゲル精製された10〜70bpのフラグメン トが、正確なサイズの単一の産物に再組立され得ることを説明する。ここで、得 られたコロニーの84％（N＝377）がLacZ+である（再編成なしの場合の94％に対 して；図２）。 得られたLacZ-コロニー由来のLacZ遺伝子をコードするDNAを、製造業者の指示 に従い、配列決定キット（United States Biochemical Co.，Cleveland OH）で 配列決定し、そしてこの遺伝子が、再組立プロセスに起因する点変異を有するこ とを見い出した（表１）。11/12の型の置換が見い出され、そしてフレームシフ トは見い出されなかった。 10〜70bpの切片からのDNA再組立の間の点変異誘発率は、DNA配列決定から0.7 ％（N＝4,473）であると決定された。これは誤りがちなPCRと類似している。い かなる理論にも制限されることなく、より大きなフラグメントが再組立に用いら れる場合、または校正ポリメラーゼが添加される場合、点変異誘発率は、より低 くあり得ると考えられている。 14のこれらの点変異されたLacZ-コロニーのプラスミドDNAを、組合わせ、そし て再び上述の方法により再組立／再編成した場合、得られたコロニーの34％（N ＝291）がLacZ+であり、そしてこれらのコロニーは、おそらく異なるコロニー由 来のDNAの組換えにより生じたのであろう。 誤りがちなPCRによる単一の点変異の予測される回復率は、変異誘発率が0.7％ （10）であると仮定すると、＜１％であると予想される。 このようにして、大きなDNA配列は、驚くほど効率的および単純な反応により 、小さなフラグメントのランダムな混合物から再組立され得る。この技術の１つ の応用は、相同性に基づいた関連した配列の組換えまたは再編成である。実施例２．LacZ遺伝子およびプラスミドDNA全体の再編成 １）LacZ遺伝子再編成 ２つのLacZ遺伝子構築物を用いて、75塩基離れた２つのマーカー間のクロスオ ーバーを計測した。終止コドンを、LacZα遺伝子の２つの離れた範囲に挿入し、 ネガティブマーカーとして用いた。それぞれのマーカーは、４つの終止コドンを 有する25bpの非相同配列であり、終止コドンのうち２つは、LacZ遺伝子のリーデ ィングフレーム内にある。25bpの非相同配列を、大きな四角により図３に示す。 終止コドンは、四角で囲むか、または下線を付すかした。+-および-+型のLacZα 遺伝子（図３）を含有する２つの1.0kbのLacZテンプレートの1:1混合物を、DNAs eIで消化し、そして100〜200bpのフラグメントを実施例１に記載のように精製し た。再編成プログラムを、0.5μlのポリメラーゼを添加し、そして全容量が100 μlであった以外は、実施例１における再組立について記載された条件と同様の 条件下で実施した。 クローニング後、得られた青色のコロニーの数は、24％;(N＝386)であった。 これは青色のコロニーの理論的な最大数（すなわち25％）に近接しており、２つ のマーカー間の組換えが完全であったことを示した。10の青色のコロニーの全て は、予測されるHindIII-NheI制限フラグメントを含有した。 ２）プラスミドDNA全体の再編成 2.7kbプラスミド全体（pUC18-+およびpUC18+-）もまた、試験した。+-および- +型のLacZα遺伝子（図３）を含有する２つの2.9kbのプラスミドの1:1混合物を 、DNAseIで消化し、そして100〜200bpのフラグメントを実施例１に記載のように 精製した。プログラムが[94℃30秒間、55℃30秒間、72℃30秒間]の60サイクルで あった以外は、上記の工程（1）における再組立について記載された条件と同様 の条件下で再編成プログラムを実施した。ゲル分析は，再編成プログラム後、産 物のほとんどが20kbよりも大きいことを示した。このようにして、2.7kbのプラ スミド全体（pUC18-+およびpUC18+-）を、プライマーの添加なしにランダムな10 0〜200bpのフラグメントから効率的に再組立した。 プラスミド上に唯一の部位を有する制限酵素（EcoO109）での消化後、産物の ほとんどは、予測されるサイズの単一のバンドからなっていた。このバンドをゲ ル精製し、再連結し、そしてこのDNAをE.coliの形質転換に用いた。実施例１に 記載のように、形質転換体を0.004％ X-galプレート上に播いた。得られたプラ スミドの11％（N＝328）は、青色すなわち++組換え体であった。 ３）スパイクしたDNA再編成 再編成混合物中に混合されるオリゴヌクレオチドは、テンプレートDNAに対す るオリゴヌクレオチドのフランキング配列の相同性に基づき最終産物中に取り込 まれ得る（図４）。上述のLacZ-終止コドン変異体（pUC18-+）をDNAseI消化テン プレートとして用いた。両末端に野生型LacZ遺伝子に対する18塩基の相同性を含 有する66マーのオリゴヌクレオチドを、４倍モル濃度過剰量で反応物中に添加し 、本来の遺伝子中に存在する終止コドン変異を補正した。再編成反応を、上記の 工程２における条件と同様の条件下で実施した。得られた産物を消化し、連結し 、そして上述のようにE.coliに挿入した。 ssDNAは、dsDNAよりも効率的であるようであり、おそらくこれは競合的なハイ ブリダイゼーションに起因すると思われる。取り込みの度合は、モル濃度過剰量 、アニーリング温度、または相同性の長さを調整することにより、広範な範囲に 亘って変化し得る。実施例３．プライマーの完全な非存在下におけるDNA再組立 プラスミドpUC18を制限酵素EcoRI、Eco0109、XmnI、およびAlwNIで消化し、約 370、460、770、および1080bpのフラグメントを産生した。これらのフラグメン トを電気泳動し、そして２％低融点アガロースゲルから別々に精製した（370塩 基対のバンドと460塩基対のバンドは、分離され得なかった）。これにより、３ つの別個のチューブに、大きなフラグメント、中程度のフラグメント、および２ つの小さなフラグメントの混合物を得た。 それぞれのフラグメントを実施例１に記載のようにDNAseIで消化し、そして50 〜130bpのフラグメントを、それぞれの本来のフラグメントについて２％低融点 アガロースゲルから精製した。 PCR混合物（上述の実施例１に記載のような）を精製した消化フラグメントに 添加して、フラグメントの最終濃度を10ng/μlとした。プライマーを添加しなか った。再組立反応を、３つの消化したDNAフラグメント混合物それぞれについて 別々に[94℃30秒間、60℃30秒間]を75サイクル実施し、そして産物をアガロース ゲル電気泳動により分析した。 この結果は、1080bp、770bp、ならびに370bpおよび460bpのバンドが、精製さ れたフラグメントから効率的に再形成されたことを明確に示した。これは、再編 成がいかなるプライマーの使用をも全く必要としないことを示す。実施例４．IL-1β遺伝子再編成 この実施例は、15塩基よりも少ない相同性に基づいてクロスオーバーが得られ 得ることを説明する。例として、ヒトおよびマウスのIL-1β遺伝子を再編成した 。 マウスのIL-1β遺伝子（BBG49）およびE．coliのコドン使用頻度を有するヒト IL-1β遺伝子（BBG2; R&D Systems Inc.，Minneapolis MN）を再編成反応のテン プレートとして用いた。ヒトIL-1β配列とマウスIL-1β配列との間の完全に相同 な範囲は、平均してわずか4.1塩基の長さである（図５、非相同の領域を四角で 囲った）。 それぞれの遺伝子のdsDNA PCR産物の調製、プライマーの除去、10〜50bpフラ グメントのDNAseI消化および精製は、実施例１において上述されたものと同様で あった。PCR反応に用いられるプライマーの配列は、5'TTAGGCACCCCAGGCTTT3'（ 配列番号３）および5'ATGTGCTGCAAGGCGATT3'（配列番号４）であった。 再編成反応の最初の15のサイクルは、DNAポリメラーゼIのKlenowフラグメント を用いて、それぞれのサイクル毎に１単位の新たな酵素を添加しながら、実施し た。DNAをポリメラーゼを含まない実施例１のPCR混合物に添加した。手動のプロ グラムは、94℃１分間、および次いで[95℃１分間、ドライアイス／エタノール 上に10秒間（凍結するまで）、25℃にて約20秒間インキュベート、1UのKlenowフ ラグメントの添加、および25℃にて２分間インキュベート]の15サイクルであっ た。変性工程後のそれぞれのサイクルにおいて、チューブをドライアイス／エタ ノール中で迅速に冷却し、そしてアニール温度まで再加熱した。次いで、熱不安 定性ポリメラーゼを添加した。この酵素は、全てのサイクルごとの添加を必要と する。このアプローチを用いることにより、わずか数塩基の連続した相同性に基 づいて、高レベルのクロスオーバーが得られた（図５、クロスオーバーの位置 これらの15回の手動のサイクルの後、Taqポリメラーゼを添加し、そしてさら なる22サイクルの再編成反応[94℃30秒間、35℃30秒間]をプライマーなしで実施 した。 次いで反応物を20倍に希釈した。以下のプライマーを、0.8μMの最終濃度で添 加した：5'AACGCCGCATGCAAGCTTGGATCCTTATT3'（配列番号５）および5'AAAGCCCTC TAGATGATTACGAATTCATAT3'（配列番号６）。そしてPCR反応を実施例１における上 述のように実施した。第２のプライマーペアは、制限部位の変化が必要であると 考えられるためだけで第１のペアと異なった。 XbaIおよびSphIでのPCR産物の消化の後、このフラグメントをXbaI-SphI消化pU C18に連結した。いくつかのコロニー由来の挿入物の配列を、製造業者の指示に 従い、ジデオキシDNA配列決定キット（United States Biochemical Co.，Clevel and OH）により決定した。 全部て17のクロスオーバーが、９つのコロニーのDNA配列決定により見い出さ れた。いくつかのクロスオーバーは、わずか1〜2塩基の連続した相同性に基づい ていた。 短い相同性に基づく効率的なクロスオーバーを強いるために、非常に低い効率 的なアニーリング温度が要求されることが見い出された。任意の熱安定性ポリメ ラーゼを用いて、PCR機械の冷却時間（1〜2℃/秒の94℃から25℃への）は、効果 的なアニーリング温度を設定されたアニール温度よりも高くする。従って、Taq ポリメラーゼに基づくプロトコルのいずれもが、IL-1β遺伝子の一方の10倍過剰 量を用いてもクロスオーバーを産生しなかった。対照的に、熱不安定性ポリメラ ーゼ（例えば、DNAポリメラーゼIのKlenowフラグメント）は、低いアニーリング 温度を正確に得るために用いられ得る。実施例５．TEM-1βラクタマーゼ遺伝子のDNA再編成 直接分子進化のための変異誘発DNA再編成の利用性を、βラクタマーゼモデル システムにおいて試験した。TEM-1βラクタマーゼは、非常に効率的な酵素であ り、主に拡散によりその反応速度は限定される。この実施例は、その反応特異性 を変化すること、および通常加水分解しない薬物セフォタキシムに対して耐性を 得ることが可能であるかを決定する。 プラスミドを含まない細菌性細胞におけるセフォタキシムの最小阻止濃度（MI C）を、E．coli XL1-blue細胞（Stratagene，San Diego CA）の一夜細菌培養物 の10-2希釈の10μl（約1000cfu）を、異なるレベルのセフォタキシム（Sigma，S t．Louis MO）を有するプレートに播き、続いて37℃で24時間インキュベートす ることにより決定した。 セフォタキシム上での生育は、細胞の密度に対して敏感であり、それ故類似の 数の細胞がそれぞれのプレートに播かれる必要がある（添加物非含有LBプレート に播くことにより得られる）。1000個の細胞のプレートが一貫して行われた。 １）最初のプラスミド構築 細菌のTEM-1βラクタマーゼ遺伝子を保有するpUC18誘導体を用いた（28）。TE M-1βラクタマーゼ遺伝子は、細菌に約0.02μg/mlのセフォタキシムに対する耐 性を与える。２つのプライマー： を用いるベクター配列のPCRおよび２つの他のプライマー： を用いるβラクタマーゼ配列のPCRにより、プロモーターの5'および遺伝子の末 端の3'にSfi1制限部位を付加した。 ２つの反応産物をSfiIで消化し、混合し、連結し、そして細菌を形質転換する ために用いた。 得られたプラスミドは、pUC182Sfiであった。このプラスミドは、TEM-1遺伝子 およびP-3プロモーターを保有するSfi1フラグメントを含有する。 このプラスミドを保有するE．coli XL1-blue（Stratagene，San Diego CA）に 関するセフォタキシムの最小阻止濃度は、37℃で24時間後で0.02μg/mlであった 。 再編成なしに、セフォタキシムに対するβラクタマーゼ遺伝子の耐性を改変す る能力は、２倍に増加した薬物レベルへの細胞（約107cfu）の希釈したプールの 段階的な再プレートにより決定した。1.28μg/mlまでへの耐性が再編成なしに得 られ得た。これは、耐性の64倍の増加を表す。 ２）DNAseI消化 第１の再編成反応のための基質は、プライマーCおよびD（両方ともSfiI部位を 含有する）を用いるpUC182SfiのPCRにより得られた0.9kbのdsDNAであった。 各サイクルごとにPCR産物から遊離プライマーをWizard PCR prep（Promega，M adison WI）により除去した。 約５μgのDNA基質を、10分間室温で、100μlの50mM Tris-HCl pH7.4、１mM Mg Cl2中て0.15単位のDNAseI（Sigma，St．Louis MO）で消化した。100〜300bpのフ ラグメントを、DE81イオン交換紙（Whatman，Hillsborough OR）への電気泳動、 １M NaClでの溶出、およびエタノール沈澱により、実施例１に記載の方法によっ て２％低融点アガロースゲルから精製した。 ３）遺伝子再編成 精製したフラグメントを、10〜30ng/μlの濃度でPCR混合物（0.2mM 各dNTP、2 .2mM MgCl2、50mM KCl、10mM Tris-HCl pH 9.0、0.1％ Triton X-100）に再懸濁 した。この時点でプライマーを添加しなかった。94℃60秒間、次いで[94℃30秒 間、50〜55℃30秒間、72℃30秒間]の40サイクル、そして次いで72℃５分間の再 組立プログラムを、MJ Research（Watertown MA）PTC-150サーマルサイクラーに おいて使用した。 ４）プライマーを用いる再組立産物の増幅 0.8μMのそれぞれのプライマー（CおよびD）を有するPCR混合物への再組立産 物の希釈、および20のPCRサイクル[94℃30秒間、50℃30秒間、72℃30秒間]の後 、900bpのサイズの単一の産物を得た。 ５）クローニングおよび分析 末端の制限酵素SfiIでの900bp産物の消化、およびアガロースゲル精製の後、9 00bp産物を、T4 DNAリガーゼ（BRL，Gaithersburg MD）を用いて唯一のSfiI部位 でベクターpUC182Sfiに連結した。混合物を、E．coli XL1-blue細胞にエレクト ロポレートし、そして0.32〜0.64μg/mlのセフォタキシム（Sigma，St．Louis M O）を有するLBプレートに播いた。細胞を、37℃て24時間まで増殖させ、得られ たコロニーをプールとしてプレートから掻き取り、そして次のラウンドの再編成 のためのPCRテンプレートとして用いた。 ６）引き続く再組立ラウンド ３ラウンドの再編成のそれぞれの後に得られた形質転換体を、漸増するレベル のセフォタキシムに播いた。最も高いレベルのセフォタキシムを有するプレート 由来のコロニー（＞100、多様性を維持するために）をプールし、次のラウンド のPCR反応のためのテンプレートとして用いた。 上記の工程（５）において0.32〜0.64μg/mlで得られたセフォタキシム耐性コ ロニーの混合物を次のラウンドの再編成のためのテンプレートして用いた。LBブ ロス中の10μlの細胞を、上述のように、99℃10分間、次いで[94℃30秒間、52℃ 30秒間、72℃30秒間]の35サイクル、および次いで72℃５分の再組立プログラム においてテンプレートとして用いた。 再組立産物を消化し、そして上記の工程（５）に記載のようにpUC182Sfiに連 結した。混合物をE．coli XL1-blue細胞にエレクトロポレートし、そして5〜10 μg/mlのセフォタキシムを有するLBプレートに播いた。 5〜10μg/mlで得られたコロニーを、細胞を80〜160μg/mlのセフォタキシムを 含有するLBプレートに播いた以外は第１および第２のラウンドと同様である第３ のラウンドに用いた。第３のラウンドの後、コロニーを、80〜160μg/mlで得、 そして漸増する濃度のセフォタキシムに再プレートした後、コロニーは、37℃で 24時間後、320μg/mlまでで得られた（MIC＝320μg/ml）。 セフォタキシムにおける増殖は、細胞密度に依存し、全てのMICが規格化され ることを要求する（本発明者らの場合、プレートあたり約1,000細胞まで）。よ り高い細胞密度で、1280μg/mlまででの増殖が得られた。1,280μg/mlで増殖さ れた５つの最も大きいコロニーを、単一コロニーのために２回プレートし、そし てSfi1挿入物を、コロニーPCR産物の制限マッピングにより分析した。 セフォタキシムに対する耐性が16,000倍に増加した（MIC＝0.02μg/mlからMIC ＝320μg/ml）１つの変異体が得られた。 選択後、選択されたクローンのプラスミドを野生型E．coli XL1-blue細胞（St ratagene，San Diego CA）に戻し、測定された薬剤耐性の全てが、染色体の変異 に起因しないことを確認した。 再編成および選択の３つのサイクルは、TEM-1βラクタマーゼに関する伸展し た幅広いスペクトラムの抗生物質であるセフォタキシムの最小阻止濃度における 1.6×104倍の増加を生じた。対照的に、再編成なしの繰り返しのプレーティング は、耐性のわずか16倍の増加のみを生じた（誤りがちなPCRまたはカセット変異 誘発）。 ７）配列分析 1,280μg/mlで生育した５つの最も大きいコロニーの全ては、野生型TEM-1酵素 と同一な制限地図を有した。これらのコロニーの内の１つから得られたプラスミ ドのSfiI挿入物を、製造業者の指示に従い、ジデオキシDNA配列決定法（United States Biochemical Co.，Cleveland OH）により配列決定した。全ての塩基番号 は、改訂されたpBR322配列（29）に対応し、そしてアミノ酸番号は、ABL標準番 号付けスキーム（30）に対応する。アミノ酸は３文字表記で示され、そしてヌク レオチドは１文字表記で示される。用語G4205Aは、ヌクレトチド4205が、グアニ ジンからアデニンに変化したことを意味する。 ９つの１塩基置換が見い出された。G4205Aは、βラクタマーゼP3プロモーター （31）の-35と-10部位との間に位置される。ChenおよびClowes（31）により観察 されたプロモーター上方変異体（up-mutant）は、本発明で用いられたSfi1フラ グメントの外側に位置され、従って検出され得なかった。４つの変異は、サイレ ント変異であり（A3689G、G3713A、G3934A、およびT3959A）、そして４つがアミ ノ酸変化を生じた（Gly238Serを生じるC3448T、Met182Thrを生じるA3615G、Glu1 04Lysを生じるC3850T、およびAla18Valを生じるG4107A）。 ８）分子戻し交雑 次いで非必須変異を除去するために、過剰量の野生型DNAを用いた分子戻し交 雑を用いた。 分子戻し交雑は、DNAseI消化および再編成反応を40倍の過剰量の野生型TEM-1 遺伝子フラグメントの存在下で実施した以外は、上述したような通常の再編成と 同一な方法によりDNA再編成の第３のラウンドから選択されたプラスミドに対し て実施した。戻し交雑をより効率的にするために、非常に小さなDNAフラグメン ト（30〜100bp）を再編成反応に用いた。戻し交雑変異体を、80〜160μg/mlのセ フォタキシム（Sigma，St．Louis MO）を有するLBプレートで再び選択した。 この戻し交雑再編成を、40倍の過剰量の野生型TEM-1 DNAの存在下での第１の 戻し交雑ラウンドからのコロニー由来のDNAを用いて繰り返した。戻し交雑の効 率を増加させるために、小さなDNAフラグメント（30〜100bp）を用いた。第２の ラウンドの戻し交雑変異体を、80〜160μg/mlのセフォタキシムを有するLBプレ ートで再び選択した。 得られた形質転換体を160μg/mlのセフォタキシムに播き、そしてコロニーの プールを、1,280μg/mlまでの漸増するレベルのセフォタキシムに再プレートし た。1,280μg/mlで得られた最も大きなコロニーを、単一コロニーのために再プ レートした。 この戻し交雑変異体は、野生型よりも32,000倍高い耐性を示した（MIC＝640μ g/ml）。変異体株は、以前に報告された臨床的TEM-1由来株または加工されたTEM -1由来株よりもセフォタキシムに対して64倍高い耐性である。従って、DNA再編 成は、少なくともいくつかのサイクルの定方向性分子進化のための迅速で強力な 手段であるようである。 戻し交雑された変異体のSfiI挿入物のDNA配列を、製造業者の指示に従いジデ オキシDNA配列決定キット（United States Biochemical Co.，Cleveland OH）を 用いて決定した（表３）。変異体は、９つの１塩基対変異を有した。予測される ように、以前に同定した４つのサイレント変異の全てが消失し、野生型遺伝子の 配列に戻っていた。プロモーター変異（G4205A）および４つのアミノ酸変異の内 の３つ（Glu104Lys、Met182Thr、およびGly238Ser）は、戻し交雑されたクロー ンに残っていた。このことは、それらが高レベルのセフォタキシム耐性のために 必須であることを示唆する。しかし、２つの新規のサイレント変異（T3842Cおよ びA3767G）ならびにアミノ酸変化を生じる３つの新規の変異（Arg241Hisを生じ るC3441T、Gly92Serを生じるC3886T、およびAla42Glyを生じるG4035C）が見い出 された。これらの２つのサイレント変異は、タンパク質の１次配列に影響しない が、タンパク質の発現レベル（例えばmRNAの構造により）、およびおそらくタン パク質の折り畳みにさえに影響し得る（コドン使用頻度を変化すること、および それゆえタンパク質の折り畳みに関係する休止部位を変化することによる）。 戻し交雑変異体および非戻し交雑変異体は両方とも１つのプロモーター変異（ これは、単独または組み合わせにより発現レベルにおいて2〜3倍の増加を生じる ）および３つの共通したアミノ酸変化（Glu104Lys、Met182Thr、およびGly238Se r）を有する。Glu104LysおよびGly238Serは、いくつかのセフォタキシム耐性TEM -1誘導体または他のTEM-1誘導体（表４）において存在する変異である。 ９）発現レベル比較 野生型プラスミド、非戻し交雑変異体、および戻し交雑変異体におけるβラク タマーゼ遺伝子の発現レベルを、Witholt，B．(32)の方法に従い浸透圧ショック により調製された周辺質の抽出物のSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動（4〜2 0％；Novex，San Diego CA）により比較した。 精製されたTEM-1βラクタマーゼ（Sigma，St．Louis MO）を、分子量基準とし て用い、そしてプラスミドを含まないE．coli XL1-blue細胞をネガティブコント ロールとして用いた。 変異体および戻し交雑された変異体は、野生型遺伝子と比較して2〜3倍高いレ ベルのβラクタマーゼタンパク質を産生するようであった。プロモーター変異は 、βラクタマーゼの2〜3倍の増加を生じるようであった。実施例６．TEM-1βラクタマーゼ遺伝子の変異体組み合わせ体の構築 変異の異なる組み合わせの耐性を決定するため、そして発表された変異体と新 規の変異体とを比較するために、いくつかの変異体を、同一のプラスミドバック グラウンド中に構築した。２つの変異（Glu104LysおよびGly238Ser）は、セフォ タキシム変異体として知られている。構築した全ての変異体の組み合わせは、プ ロモーター変異を有しており、これは選択された変異体の比較を可能にした。結 果を図４に示す。 変異の特定の組み合わせは、１変異当たり２つのオリゴヌクレオチドを用いて 、PCRにより野生型pUC182Sfi中に導入された。 以下の変異を得るためのオリゴヌクレオチドは以下のようであった： これらの個々のPCRフラグメントを、合成オリゴヌクレオチドからゲル精製し た。10ngのそれぞれのフラグメントを組み合わせ、そして再組立反応を、94℃１ 分間、および次いで25サイクル；[94℃30秒間、50℃30秒間、および72℃45秒間] で実施した。PCRを、SfiI含有外側プライマー（実施例５のプライマーCおよびプ ライマーD）の存在下で25サイクルにわたって再組立産物に対して実施した。DNA をSfiIで消化し、そして野生型pUC182Sfiベクターに挿入した。以下の変異体組 み合わせが得られた（表４）。 保存された変異が、MICにおける15の倍加(doubling)の内の９つの原因である と結論づけられた。 Glu104Lys単独は、0.08μg/mlへのMICの倍加のみを生じることが示され、そし てGly238Ser（いくつかの状況において１つのさらなるアミノ酸変化を有する） は、0.16μg/mlのMICのみを生じた（26）。２重変異体Glu104Lys/Gly238Serは、 10μg/mlのMICを有する。この変異体は、TEM-15に相当する。 これらの同一のGlu104Lys変異およびGly238Ser変異は、Gln39Lys（TEM-3）ま たはThr263Met（TEM-4）と組み合わせて、高レベルの耐性（TEM-3について2〜32 μg/mlおよびTEM-4について8〜32μg/ml(34、35)）を生じる。 戻し交雑後に保存された３つのアミノ酸変化(Glu104Lys/Met182Thr/Gly238Ser )を含有する変異体もまた、10μg/mlのMICを有した。これは、新規の選択された 変異体のそれぞれが、３つの公知の変異に加えてさらに有する変異が、セフォタ キシムに対する遺伝子の耐性のさらなる32〜64倍の増加の原因であることを意味 した。 天然に存在する、臨床的TEM-1由来酵素（TEM-1〜19）のそれぞれは、5〜7つの みの同一の変異の異なる組み合わせを含有する（総説）。これらの変異は、遺伝 子において十分に分離した位置に存在するので、高度なセフォタキシム耐性を有 する変異体は、単一の範囲のカセット変異誘発によっては得られ得ない。これは 、標準的なカセット変異誘発アプローチにより得られる最大MICが、わずか0.64 μg/mlである理由を説明し得る（26）。例えば、Glu104Lys変異およびGly238Ser 変異は両方とも0.16μg/ml未満のMICを有することが本研究において個々に見い 出された。DNA再編成の使用は、組み合わせを可能にし、それ故10μg/mlのMICを 有するGlu104Lys/Gly238Serの組み合わせが見い出された。 この実施例の重要な制限は、開始点としての単一の遺伝子の使用である。多数 の関連した天然に存在する遺伝子が再編成される場合、より良好な組み合わせが 見い出され得ることが意図される。このような混合物に存在する多様性は、変異 誘発再編成により産生されるランダムな変異よりも有意義である。例えば、単一 の種由来の関連した遺伝子のレパートリー（例えば、免疫系の既存の多様性）、 または多くの異なる種から得られる関連した遺伝子を使用し得ることが意図され る。実施例７．６つの変異体CDR全てのライブラリーのDNA再編成による抗体A10Bの改 善。 A10B scFv抗体、マウス抗ウサギIgGは、Pharmacia（Milwaukee WI）から寄贈 された。pCANTAB5ファージディスプレイベクターを使用する市販のPharmaciaフ ァージディスプレイシステムを使用した。 本来のA10B抗体は、低いアビディティのみを再現性よく有した。というのは、 （ファージELISA(Pharmaciaアッセイキット)またはファージタイターにより測定 したところ）固定化抗原（ウサギIgG）に弱く結合するクローンのみが得られた からである。競合アッセイにおいてA10B抗体結合の50%阻害を生じたウサギIgGの 濃度は、13ピコモル濃度であった。観察された低いアビディティはまた、A10Bク ローンの不安定さに起因し得る。 A10B scFv DNAを製造業者の指示に従い配列決定した（United States Biochem ical Co.，Cleveland OH）。Kabat（33）との比較に基づくと、この配列は、既 存の抗体と同様であった。 １）ファージDNAの調製 A10B野生型抗体遺伝子を有するファージDNA（10μl）を、99℃にて10分間イン キュベートし、次いで72℃にて２分間インキュベートした。PCR混合物（50mM KC l、10mM Tris-HCl pH 9.0、0.1％ Triton X-100、200μM 各dNTP、1.9mM MgCl） 、0.6μmのそれぞれのプライマー、および0.5μl Taq DNAポリメラーゼ（Promeg a，Madison WI）をファージDNAに添加した。PCRプログラムを[94℃30秒間、45℃ 30秒間、72℃45秒間]の35サイクルにわたって実施した。用いたプライマーは： であった。 次いで850bpのPCR産物を電気泳動し、そして２％低融点アガロースゲルから精 製した。 ２）フラグメント化 300ngのゲル精製した850bpのバンドを、20分間室温にて、50mM Tris-HCl pH 7 .5、10mM MgCl中で0.18単位のDNAse I（Sigma，St．Louis MO）で消化した。消 化したDNAを、２％低融点アガロースゲルにおいて分離し、そして50〜200bp間の バンドをゲルから精製した。 ３）試験ライブラリーの構築 本実験の目的は、CDRの挿入が効果的であるか否かを試験することである。 内部に制限酵素部位を有する以下のCDR配列を合成した。「CDR H」は、抗体の Ｈ鎖におけるCDRを意味し、「CDR L」は、抗体のＬ鎖におけるCDRを意味する。 制限部位を有するCDRオリゴ： 上記工程(2)からの50〜200bpの精製A10B抗体DNAフラグメントにCDRオリゴを過 剰な10倍のモル量で添加した。PCR混合物(50mM KCl、10mM Tris-HCl pH9.0、0.1 % Triton X-100、1.9mM MgCl、200μmの各dNTP、0.3μl Taq DNAポリメラーゼ (Promega、Madison WI)、総容積50μl)を添加し、そして94℃で１分間、72℃で １分間、次いで35サイクル：94℃で30秒間、55℃で30秒間、72℃で30秒間の再編 成プログラムを行った。 １μlの再編成混合液を100μlのPCR混合物(50mM KCl、10mM Tris-HCl pH9.0、 0.1% Triton X-100、200μmの各dNTP、1.9mM MgCl、それぞれ0.6μMの２つの外 側プライマー(配列番号26および27、下記参照のこと)、0.5μl Taq DNAポリメラ ーゼ)に添加し、そしてPCRプログラムを30サイクル[94℃で30秒間、45℃で30秒 間、72℃で45秒間]行った。得られる850塩基対サイズのDNAフラグメントの混合 液をフェノール/クロロホルム抽出し、そしてエタノール沈殿させた。 外側プライマーは： 850bpのPCR生成物を制限酵素SfiIおよびNotIで消化し、低融点アガロースゲル から精製し、そしてPharmacia、Milwaukee WIから得たpCANTAB5発現ベクターに 連結した。Invitrogen(San Diego CA)により記載される方法に従って、連結した ベクターをTG1細胞(Pharmacia、Milwaukee WI)にエレクトロポレートし、そして 単一のコロニーについてプレートした。 得られるコロニー由来のDNAを100μlのPCR混合物(50mM KCl、10mM Tris-HCl p H9.0、0.1% Triton X-100、200μmの各dNTP、1.9mM MgCl、0.6μMの外側プライ マー１(配列番号27、下記参照のこと)および６つの内側プライマー(配列番号40 〜45；下記参照のこと)、および0.5μlのTaq DNAポリメラーゼ)に添加し、そし て35サイクル[94℃で30秒間、45℃で30秒間、72℃で45秒間]でPCRプログラムを 行った。PCR生成物のサイズを、アガロースゲル電気泳動により測定し、そして 制限部位を有するどのCDRが挿入されたのかを決定するために用いた。 CDR内側プライマー： ６つの合成CDRは、野生型A10B抗体DNAの予想された位置に挿入された(図７)。 これらの研究は、特定のクローン中の６つのCDRはそれぞれ制限部位を有するCDR になるわずかな可能性を有するが、ほとんどのクローンは少なくとも１つの制限 部位を有するCDRを保有し、そして制限部位を有するCDRの可能な任意の組み合わ せが生成されたことを示した。 ４）変異相補性決定領域(「CDR」)の構築 本発明者らの配列データに基づき、６つのCDRに対応する６オリゴヌクレオチ ドを作製した。CDR(Kabat定義)を70(個の存在塩基):10:10:10の比率で合成的に 変異を誘発し、そして約20塩基のフランキング配列により5'末端および3'末端側 に側面を接しさせた。このフランキング配列は、変異を誘発しない抗体遺伝子フ ラグメントの混合物に過剰なモル量で混合する場合、CDRの取り込みに対して相 同性を提供する。得られる変異配列を以下に示す。 CDRライブラリーのオリゴ 太字体かつ下線を付した配列は、70:10:10:10のヌクレオチド(ここで70％は野生 型ヌクレオチド)の混合物を用いて合成した変異配列であった。 過剰な10倍のモル量のCDR変異オリゴを、上記工程(2)からの長さ50〜200bpの 精製A10B抗体DNAフラグメントに添加した。PCR混合物(50mM KCl、10mM Tris-HCl pH9.0、0.1% Triton X-100、1.9mM MgCl、200μmの各dNTP、0.3μlのTaq DNAポ リメラーゼ(Promega、Madison WI)、総容積50μl)を添加し、そして94℃で１分 間、72℃で１分間、次いで35サイクル：[94℃で30秒、55℃で30秒、72℃で30秒] の再編成プログラムを行った。 １μlの再編成した混合物を100μlのPCR混合物(50mM KCl、10mM Tris-HCl pH9 .0、0.1% Triton X-100、200μmの各dNTP、1.9mM MgCl、それぞれ0.6μMの２つ の外側プライマー(配列番号26および27、下記参照のこと)、0.5μlのTaq DNAポ リメラーゼ)に添加し、そして30サイクル[94℃で30秒間、45℃で30秒間、72℃で 45 秒間]でPCRプログラムを行った。得られる850塩基対サイズのDNAフラグメントの 混合物をフェノール/クロロホルム抽出し、そしてエタノール沈殿させた。 外側プライマーは： ５）scFV抗体DNAのpCANTAB5へのクローニング 850bpのPCR生成物を制限酵素SfiIおよびNotIで消化し、低融点アガロースゲル から精製し、そしてPharmacia、Milwaukee WIから得たpCANTAB5発現ベクターに 連結した。Invitrogen(San Diego CA)により記載される方法に従って連結したベ クターをTG1細胞(Pharmacia Milwaukee WI)にエレクトロポレートし、そして製 造業者により推薦されるガイドラインに従ってヘルパーファージを用いてファー ジライブラリーを増殖させた。 この様式で生成したライブラリーを、６サイクルの選択を使用して、改善され た抗体の存在についてスクリーニングした。 ６）高親和性クローンの選択 96ウェルのマイクロタイタープレートの15ウェルを、ウサギIgG(Jackson Immu noresearch、Bar Harbor ME)で10μg/ウェル、37℃で１時間コートし、次いでPB S中の２%のノンファットドライミルクで37℃で１時間ブロックした。 100μlのファージライブラリー(１×1010cfu)を100μlの２%のミルクで室温で 30分間ブロックし、次いて15ウェルのそれぞれに添加し、37℃で１時間インキュ ベートした。 次いで、0.5%のTween-20を含有するPBSを用い、37℃で１回の洗浄あたり10分 間でウェルを３回洗浄した。結合したファージを100μlの溶出緩衝液(Glycine-H Cl、pH2.2)で溶出し、続いて2MのTris pH7.4で迅速に中和し、そしてファージ生 産のためにトランスフェクションした。この選択サイクルを６回反復した。 ６サイクルの後、個々のファージクローンを拾い、そしてファージELISAによ り相対的な親和性を比較し、そしてウサギIgGに対する特異性をPharmacia(Milwa ukee WI)製のキットを用いて製造業者により推薦される方法に従ってアッセイし た。 ウエスタンアッセイにより試験した場合、最良のクローンは、野生型A10Bと比 較して約100倍の改善された発現レベルを有した。最良のクローンを用いる競合 アッセイにおいて50%の阻害を生じたウサギIgGの濃度は１ピコモル濃度であった 。最良のクローンはウサギ抗原に対する特異性に再現性が認められた。ファージ によりディスプレイされる抗体のコピー数は増加するようてある。実施例８. 部分的遺伝子のダイレクトリピートによるインビボでの組換え プラスミドを２つの部分で構築した。この２つの部分は、これらの２つのダイ レクトリピートの共通範囲間の組換えが完全長の活性組換え遺伝子をもたらすこ とを示す同一遺伝子(β-ラクタマーゼ)の不活性コピーである。 細菌TEM-1βラクタマーゼ遺伝子を保有するpUC18誘導体を使用した(Yanish-Pe rronら、1985、Gene 33:103-119)。TEM-1βラクタマーゼ遺伝子(「Bla」)は、約 0.02μg/mlのセフォタキシムに対する耐性を細菌に与える。２つのプライマーを 用いるベクター配列のPCRにより、Sfi1制限部を、5'側のプロモーターとβラク タマーゼ遺伝子の3'末端とに加えた。 ２つのプライマーの配列： および他の２つのプライマーを用いるβラクタマーゼ遺伝子配列のPCRによる場 合： ２つの反応生成物をSfi1で消化し、混合し、連結し、そしてこれを用いて以下 に記載される手順によりコンピテントなE.coli菌を形質転換した。得られたプラ スミドをpUC182Sfi-Bla-Sfiとした。このプラスミドはBLA遺伝子およびP-3プロ モーターを保有するSfi1フラグメントを含む。 pUC182Sfi-Bla-Sfiを保有するE.coli XL1-blue(Stratagen、San Diego CA)に 対するセフォタキシムの最小阻害濃度は、37℃、24時間後で0.02μg/mlであった 。 pBR322のテトラサイクリン遺伝子を相同性範囲を用いてpUC18Sfi-Bla-Sfiにク ローニングし、pBR322TetSfi-Bla-Sfiを得た。次いでSspIおよびFspIを用いるpB R322TetSfi-Bla-Sfiの制限消化および平滑末端連結によりTEM-1遺伝子を欠失さ せ、pUC322TetSfi-Sfiを得た。 TEM-1遺伝子の重複領域を標準的なPCR技術および以下のプライマーを用いて増 幅した： ２つの得られるDNAフラグメントをSfi1およびBstX1で消化し、pBR322TetSfi-S fiのSfi部位に連結した。得られるプラスミドをpBR322Sfi-BL-LA-Sfiとした。プ ラスミドの地図ならびに機能的β-ラクタマーゼのプラスミド内組換えおよび再 形成のスキームを図９に示す。 このプラスミドをTG-1細胞またはJC8679 E.coli細胞のいずれかにエレクトロ ポレートした。E.coli JC8679はRecBC sbcA(Olinerら、1993、NAR 21:5192)であ る。この細胞をテトラサイクリンを含有する固体寒天プレート上にプレートした 。次いで、増殖したこれらのコロニーを100μg/mlのアンピリシンを含有する個 体寒天プレート上にプレートし、そして生存するコロニーの数をカウントした。 アンピリシン耐性を示したこれらの形質転換体中のβ-ラクタマーゼ遺伝子挿入 物を、 て標準的なPCR技術により増幅し、そして挿入物の長さを測定した。１kbの挿入 物の存在は、図９および表５に示されるように遺伝子がうまく組換えられたこと を示す。 約17%〜25%のテトラサイクリン耐性コロニーはアンピシリン耐性でもあり、そ してすべてのアンピシリン耐性コロニーは、コロニーPCRにより決定されるよう に、正確に組換えられた。それゆえ、同じプラスミドに位置する部分的遺伝子は うまく組換えられて機能的遺伝子を作製する。実施例９. 完全長遺伝子のダイレクトリピートによるインビボ組換え β-ラクタマーゼ遺伝子の異なる対立遺伝子の２つの完全長コピーを有するプ ラスミドを構築した。２つの遺伝子の相同組換えによりこの遺伝子の１つの組換 え完全長コピーを得た。 pBR322TetSfi-SfiおよびpBR322TetSfi-Bla-Sfiの構築については上で述べた。 β-ラクタマーゼ遺伝子の２つの対立遺伝子を以下のように構築した。２つのP CR反応をpUC18Sfi-Bla-Sfiをテンプレートとして用いて行った。１つの反応は以 下のプライマーを用いて行った。 第２のPCR反応を以下のプライマーを用いて行った： これにより２つのBla遺伝子(一方のBla遺伝子は5'末端Sfi1部位および3'末端B stX1部位を有し、他方のBla遺伝子は5'末端BstX1部位および3'末端Sfi1部位を有 する)を得た。 これらの２つの遺伝子をBstX1およびSfi1で消化し、そしてSfi1消化プラスミ ドpBR322TetSfi-Sfiに連結した後、Bla遺伝子のタンデムリピートを有するプラ スミド(pBR322-Sfi-2BLA-Sfi)を得た。（図10を参照のこと） このプラスミドをE.coli細胞内にエレクトロポレートした。この細胞を15μg/ mlのテトラサイクリンを含有する固体寒天プレート上にプレートした。次いで増 殖したこれらのコロニーを100μg/mlのアンピシリンを含有する固体寒天プレー ト上にプレートし、そして生存するコロニーの数をカウントした。アンピシンリ ン耐性を示すこれらの形質転換体中のBla挿入物を、実施例８に記載される方法 およびプライマーを使用する標準的なPCR技術により増幅した。１kbの挿入物の 存在は、表６に示されるように重複遺伝子(duplicate gene)が組換えられたこと を示す。 コロニーPCRにより、タンデムリピートが効率的に組換えられて、単一の組換 え遺伝子を形成することを確認した。実施例10. 多数サイクルのプラスミド内のダイレクトリピート組換え さらに迅速に耐性細胞を生産するために多数サイクルの組換えを用い得るか否 かを決定するために、実施例９に記載される多数サイクルの方法を行った。 マイナスの組換えコントロールは、β-ラクタマーゼ遺伝子の１つのコピーか らなり、一方プラスの組換え実験は、ダイレクトリピートとしてのβ-ラクタマ ーゼの２つのコピーを挿入する工程からなった。テトラサイクリンマーカーを用 いて、各ラウンドにおいてセフォタキシム耐性について選択されたコロニーの数 を等しくして連結効率に対して補正をした。 第１ラウンドにおいて、pBR322TetSfi-Bla-SfiをEcrIで消化し、誤りがちなPC Rのための正常なPCR混合物とCadwell PCR混合物(CadwellおよびJoyce(1992)PCR Methods and Applications 2:28-33)との１：１の混合物(１ml)を用いてPCRにか けた。PCRプログラムは、最初に70℃で２分間、次いで94℃で30秒間、52℃で30 秒間、および72℃で３分間＋６秒/１サイクルの30サイクルであり、続いて72℃ で10分間であった。 １つのBla遺伝子コントロールプラスミドを作製するためのPCR反応で使用され るプライマーは、プライマー2650(配列番号50)およびプライマー2719(配列番号5 5)5’TTAAGGGATTTTGGTCATGAGATT 3'であった。これはフラグメント＃59としてひ とまとめに消化され、増幅されたDNAフラグメントの混合された集団を生じた。 これらのフラグメントは多くの異なる変異を有した。 ２つのBla遺伝子プラスミドを作製するために２つの異なるPCR反応で使用され るプライマーは、第１の遺伝子についてはプライマー2650(配列番号50)およびプ ライマー2649(配列番号51)であり、そして第２の遺伝子についてはプライマー26 48(配列番号54)およびプライマー2719(配列番号55)であった。これは、２つの増 幅したDNAフラグメント：フラグメント＃89(プライマー2648および2719で増幅し た)およびフラグメント＃90(プライマー2650および2649で増幅した)それぞれの 混合された集団を生じた。それぞれの場合、多くの異なる変異体がそれぞれのフ ラグメントの混合された集団に導入された。 誤りがちなPCRの後、増幅されたDNAフラグメント＃59の集団をSfi1で消化し、 次いでpBR322TetSfi-Sfi内にクローニングしてプラスミドpBR322Sfi-Bla-Sfi1の 混合された集団を作製した。 誤りがちなPCRの後、増幅されたDNAフラグメント＃90および＃89の集団をSfiI およびBstXIで50℃で消化し、そしてpBR322TetSfi-Sfiに連結してプラスミドpBR 322TetSfi-2Bla-Sfi1の混合された集団を作製した(図10)。 プラスミドpBR322Sfi-Bla-Sfi1およびpBR322Sfi-2Bla-Sfi1をE.coli JC8679内 にエレクトロポレートし、そして異なる濃度のセフォタキシムを有する寒天プレ ートに置いて耐性株について選択し、そしてテトラサイクリンプレートに置いて 力価を測定した。 等しい数のコロニーを(テトラサイクリン上で増殖するコロニーの数に基づい て)拾い、LB-tet中で増殖させ、そしてコロニーからDNAを抽出した。これは組換 えの１ラウンドである。このDNAをEcrIで消化し、そして上記のように第２ラウ ンドの誤りがちなPCRに用いた。 ５ラウンド後、１つのフラグメントプラスミドに対するセフォタキシムのMIC( 最小阻害濃度)は0.32であったが、２つのフラグメントプラスミドについてのMIC は1.28であった。結果は、５サイクル後の組換えにより得られる耐性は、インビ ボ組換えの存在下では４倍高かったことを示す。実施例11. フラグメントのエレクトロポレーションによるインビボ組換え pUC18Sfi-Bla-Sfiを含む適切なE.coli細胞を記載のように調製した。プラスミ ドpUC18Sfi-Bla-Sfiは、前出に記載のような標準的なTEM-1 β-ラクタマーゼ遺 伝子を含有する。 pUC18Sfi-cef-Sfi(クローンST2)(Stemmer WPC（1994）Nature 370:389-91、本 明細書中で参考として援用される)由来のTEM-1由来セフォタキシム耐性遺伝子を 得た。このプラスミドは、このプラスミドを有するE.coliにセフォタキシムにつ いての640μg/mlのMICを与える。１つの実験において、完全なプラスミドpUC18S fi-cef-Sfi DNAを、プラスミドpUC18Sfi-Bla-Sfiを有するE.coli細胞内にエレク トロポレートした。 別の実験において、pUC18Sfi-cef-Sfi由来のセフォタキシム遺伝子を有するDN Aフラグメントを、プライマー2650(配列番号50)および2719(配列番号55)を用い るPCRにより増幅した。得られる１kbのPCR生成物をDNアーゼにより100bp未満のD NAフラグメントに消化し、そしてこれらのフラグメントをすでにpUC18Sfi-Bla-S fiを有するコンピテントなE.coli細胞内にエレクトロポレートした。 次いで、両方の実験からの形質転換された細胞を、セフォタキシムの種々の濃 度を有する寒天プレート上に形質転換された細胞をプレートすることによりその セフォタキシムに対する耐性についてアッセイした。結果を表７に示す。 結果から、エレクトロポレーション後、ST-2 Cef遺伝子全体が細菌ゲノムまた はプラスミドのいずれかに挿入されたように思われる。たいていの挿入物は相同 的であるため、この遺伝子がプラスミドに挿入され、野生型遺伝子を置換したこ とが予想される。ST-2由来のCef遺伝子のフラグメントはまた、効率的にプラス ミド中の野生型遺伝子内に挿入された。野生型遺伝子(全体またはフラグメント で)の導入を伴い、そして非DNAの導入を伴う場合は、セフォタキシム耐性の急激 な増加は観察されなかった。それゆえ、ST-2フラグメントが野生型フラグメント よりも極めて高いセフォタキシム耐性を生じることが示された。耐性を増加させ る遺伝子プールから調製されたフラグメントの反復された挿入物が、耐性の増加 をもたらすことが意図される。 従って、ST-2遺伝子フラグメントによりセフォタキシム耐性の増加を生じるこ れらのコロニーを単離し、そしてプラスミドDNAを抽出した。このDNAを上記の方 法によるPCRを用いて増幅した。増幅したDNAをDNアーゼで消化してフラグメント (＜100bp)にし、そして２〜４μgのフラグメントを上記のようにすでにpUC322Sf i-Bla-Sfiを含有するコンピテントなE.coli細胞内にエレクトロポレートした。 形質転換された細胞を種々の濃度のセフォタキシムを含有する寒天上にプレート した。 コントロールとしてpUC18Sfi-Kan-Sfiを有するコンピテントなE.coliも使用し た。pUC18Sfi-cef-SfiのPCR生成物の消化物からのDNAフラグメントをこれらの細 胞内にエレクトロポレートした。カナマイシン遺伝子とβ-ラクタマーゼ遺伝子 との間には相同性は存在せず、従って組換えは起こらない。 この実験を２ラウンド反復した。結果を表８に示す。 実施例12 組換え形式の決定 本実験は、どの組換え形式が1サイクルあたり最大の組換え体を生成するかを 決定するために設計された。 第１のアプローチにおいて、ベクターpUC185Sfi-Bla-SfiをPCRプライマーで増 幅して、大フラグメントおよび小フラグメントを生成した。大フラグメントはプ ラスミドおよびBla遺伝子部分を有する末端を有し、そして小フラグメントはBla 遺伝子の中間部分をコードした。完全なBla遺伝子を有する第３のフラグメント を実施例８の方法によりPCRを使用して作製した。より大きなプラスミドフラグ メントおよび完全なBla遺伝子を有するフラグメントを上記の方法により同時にE coli JC8679細胞内にエレクトロポレートし、そして形質転換体を異なる濃度の セフォタキシム上にプレートした。 第２のアプローチにおいて、ベクターpUC18Sfi-Bla-Sfiを増幅して、上記第１ のアプローチにおけるように単離された大プラスミドフラグメントを生成した。 ２つのフラグメントはそれぞれ完全なBla遺伝子の一部を有し、その結果２つの フラグメントが共になって完全なBla遺伝子にまたがる２つのフラグメントもま たPCRにより得た。大プラスミドフラグメントおよび２つのBla遺伝子フラグメン トをすべてコンピテントなE.coli JC8679細胞内にエレクトロポレートし、そし て形質転換体を種々の濃度のセフォタキシム上にプレートした。 第３のアプローチにおいて、ベクターとプラスミドとの両方をE.coli JC8679 細胞内にエレクトロポレートし、そして形質転換体を種々の濃度のセフォタキシ ム上にプレートした。 第４のアプローチにおいて、完全なBla遺伝子を、すでにベクターpUCSfi-Sfi を含むE.Coli JC8679細胞内にエレクトロポレートし、そして形質転換体を種々 の濃度のセフォタキシム上にプレートした。コントロールとしてE.coli JC8679 細胞を完全なBla遺伝子またはベクター単独のいずれかでエレクトロポレートし た。 結果を図11に表す。ベクターへの２つのフラグメントの挿入の効率は、完全な Bla遺伝子を有する１つのフラグメントが使用される場合より100倍低い。第３の アプローチは、挿入の効率は遊離DNA末端の存在に依存することを示した。なぜ なら、このアプローチでは組換え体が得られなかったからである。しかし、第３ のアプローチの結果もまた、ベクターのエレクトロポレーションの低効率による ものであった。発現ベクターがすでにコンピテントな細胞内にある場合、ベクタ ーのエレクトロポレーションの効率はもはや要因ではなく、効率的な相同組換え は非切断のベクターを用いてさえ達成され得る。実施例12. ベクターの性能を最適化するカセット再編成のためのキット 最適化された表現型(例えば、クローン化遺伝子のようなベクターがコードさ れる配列の最大の発現)を与え得るベクターを提供するために、再編成され得る 種々のカセットを含むキットが提供され、そして最適化された再編成体が選択さ れ得る。図12は、それぞれの遺伝子座が複数のカセットを有する１つの実施態様 を概略的に示す。例えば、細菌の発現システムにおいて、図13はそれぞれの遺伝 子座で使用される例示のカセットを示す。与えられた遺伝子座のそれぞれのカセ ット(例えば、本実施例のすべてのプロモーター)は、隣接する遺伝子座のカセッ トのフランキング配列に重複し得、そしてまた、好ましくは相同組換えまたは非 相同性組換えに関与し得る(例えば、lox/creまたはflp/frt系)実質的に同一な配 列と隣接し、遺伝子座内であるが実質的に遺伝子座間ではないカセットの再編成 を提供するようにする。 カセットはPCRフラグメントとしてキットに供給されるが、それぞれのタイプ のカセットまたは個々のカセットの種は個別のチューブにパッケージされる。ベ クターライブラリーは、それぞれの遺伝子座のカセットの重複フランキング配列 と隣接する遺伝子座のカセットとのハイブリダイゼーションによって、プラスミ ド全体またはその実質的な部分を組立てるチューブの内容物を組み合わせること により作製される。組立てられたベクターは目的の未定の遺伝子へ連結されてベ クターライブラリーを形成する。ここで、それぞれのライブラリーのメンバーは 目的の未決定の遺伝子およびカセットの結合により決定されるカセットの組み合 わせを含む。ベクターは適切な宿主細胞内に移され、そしてこの細胞は発現に適 切な条件下で培養され、そして所望の表現型が選択される。 本発明は、好適な実施例と考えられるものに関して記載されているが、本発明 が開示された実施例に制限されないことが理解されるべきである。反対に、本発 明は添付された請求の範囲の趣旨および範囲内に包含される種々の改変および同 等の組立てを包含することが意図されている。 すべての刊行物、特許、および特許出願は、それぞれ個々の刊行物、特許、ま たは特許出願が特別にかつ個々にその全体が参考として援用されると示される場 合と同じ程度に、本明細書中においてそれらの全体が参考として援用される。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)， ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ， ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，Ｍ Ｗ，ＭＸ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ， ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １．１つ以上の変異を鋳型２本鎖ポリヌクレオチドへ導入するための方法であっ て、ここで該鋳型２本鎖ポリヌクレオチドは、所望の大きさの２本鎖のランダム フラグメントに切断され、以下の工程： a)得られる２本鎖フラグメントの集団に１つ以上の１本鎖オリゴヌクレオチド または２本鎖オリゴヌクレオチドを添加する工程であって、ここで該オリゴヌク レオチドが、鋳型ポリヌクレオチドに対して同一な範囲および非相同な範囲を含 む、工程； b)得られる２本鎖のランダムフラグメントおよびオリゴヌクレオチドの混合物 を１本鎖フラグメントに変性する工程； c)得られる１本鎖フラグメントの集団を、該１本鎖フラグメント間の同一の領 域で該１本鎖フラグメントがアニールし、そして変異誘発された２本鎖ポリヌク レオチドを形成する条件下で、ポリメラーゼとともにインキュベートする工程； および d)(b)および(c)の工程を反復する工程； を包含する、方法。 ２．２本鎖フラグメントの混合物中の特定の２本鎖フラグメントの濃度が、全DN Aの１重量%よりも低い、請求項１に記載の方法。 ３．異なる特定の２本鎖フラグメントの数が、少なくとも約100である、請求項 １に記載の方法。 ４．２本鎖フラグメントの大きさが約５bp〜５kbである、請求項１に記載の方法 。 ５．変異誘発される２本鎖ポリヌクレオチドの大きさが50bp〜100kbを包含する 、請求項１に記載の方法。 ６．生物学的活性を有する組換えタンパク質を生成する方法であって、以下の工 程： a)野生型タンパク質をコードする２本鎖鋳型ポリヌクレオチドを含有するサン プルを、所望の大きさを有するランダムな２本鎖フラグメントへの該鋳型ポリヌ クレオチドの切断を提供するような条件下で処理する工程； b)得られるランダムフラグメントの集団に１つ以上の１本鎖オリゴヌクレオチ ドまたは２本鎖オリゴヌクレオチドを添加する工程であって、ここで該オリゴヌ クレオチドは鋳型ポリヌクレオチドに同一な範囲および非相同な範囲を含有する 、工程； c)得られる２本鎖のランダムフラグメントおよびオリゴヌクレオチドの混合物 を１本鎖フラグメントに変性する工程； d)得られる１本鎖フラグメントの集団を、該同一な範囲で該１本鎖フラグメン トがアニールし、そして変異誘発された２本鎖ポリヌクレオチドを形成する条件 下で、ポリメラーゼとともにインキュベートする工程； e)(c)および(d)の工程を反復する工程；および f)該変異誘発された２本鎖ポリヌクレオチドに由来する組換えタンパク質を発 現する工程； を包含する、方法。 ７．工程(a)における２本鎖フラグメントの混合物中の特定の２本鎖フラグメン トの濃度が、全DNAの１重量%よりも低い、請求項６に記載の方法。 ８．工程(a)における異なる特定の２本鎖フラグメントの数が、少なくとも約100 個である、請求項６に記載の方法。 ９．２本鎖フラグメントの大きさが約５bp〜５kbである、請求項６に記載の方法 。 １０．変異誘発される２本鎖ポリヌクレオチドの大きさが50bp〜100Kbである、 請求項６に記載の方法。 １１．組換えタンパク質の集団に由来する所望の組換えタンパク質を選択する工 程をさらに包含する、請求項６に記載の方法。 １２．キメラなポリペプチドを得る方法であって、以下の工程： a)異なる２本鎖鋳型ポリヌクレオチドを含有するサンプルを処理する工程、こ こで該異なる鋳型ポリヌクレオチドが、所望な大きさを有する２本鎖のランダム フラグメントへの該鋳型ポリヌクレオチドの切断を提供するような条件下で、同 一な範囲および非相同な範囲を含む、工程； b)工程(a)で生成される処理サンプルに含有の得られる２本鎖のランダムな鋳 型フラグメントを１本鎖フラグメントに変性する工程； c)該同一な範囲での標的１本鎖フラグメントのアニーリング、および鋳型ポリ ヌクレオチド配列を含有するキメラな２本鎖ポリヌクレオチド配列の形成を提供 する条件下で、得られる１本鎖フラグメントの集団をポリメラーゼとともにイン キュベートする工程；および d)所望により(b)および(c)の工程を反復する工程； を包含する、方法。 １３．工程(a)における２本鎖フラグメントの混合物中の特定の２本鎖フラグメ ントの濃度が、全DNAの１重量%よりも低い、請求項１２に記載の方法。 １４．工程(a)における異なる特定の２本鎖フラグメントの数が、少なくとも100 個である、請求項１２に記載の方法。 １５．２本鎖フラグメントの大きさが約５bp〜５kbである、請求項１２に記載の 方法。 １６．変異誘発される２本鎖ポリヌクレオチドの大きさが50bp〜100kbを包含す る、請求項１２に記載の方法。 １７．鋳型ポリヌクレオチドを複製する方法であって、インビトロにおける１本 鎖鋳型ポリヌクレオチドと鋳型ポリヌクレオチドの切断および変性から得られる 小さなランダムな１本鎖フラグメントとを結合する工程、および２本鎖鋳型ポリ ヌクレオチドの集団が形成される条件下、核酸ポリメラーゼの存在下で核酸フラ グメントの該混合物をインキュベートする工程、 を包含する、方法。 １８．アフィニティー相互作用スクリーニングまたは表現型のスクリーニングに 適切なディスプレイされたペプチドまたはディスプレイされた抗体のライブラリ ーを生成する方法であって、以下の工程： (１)ディスプレイされたペプチドまたはディスプレイされた抗体、および該デ ィスプレイされたペプチドまたはディスプレイされた抗体をコードする関連性ポ リヌクレオチドを包含する第１の複数の選択されるライブラリーメンバーを得、 そして該関連性ポリヌクレオチドまたはそのコピーを得る工程であって、ここで 該関連性ポリヌクレオチドが実質的に同一な配列の領域を含有する、工程、およ び (２)該関連性ポリヌクレオチドまたはコピーをプールし、そしてフラグメント 化して、PCR増幅に適切な条件下でそのフラグメントを形成し、PCR増幅を実施し 、そしてそれにより該フラグメントを相同組換えして組換えポリヌクレオチドの 再編成プールを形成する工程であって、それによって該再編成プールの組換えポ リヌクレオチドの実質画分が、該第１の複数の選択されるライブラリーメンバー に存在しない、工程、 を包含する方法。 １９．前記ポリヌクレオチドまたはコピーに変異を導入する工程をさらに包含す る、請求項１８に記載の方法。 ２０．前記変異がPCR増幅を実施することにより導入される、請求項１９に記載 の方法。 ２１．前記PCR増幅が誤りがちなPCRである、請求項２０に記載の方法 ２２．予め決定された高分子に結合する能力を有する個々の再編成ライブラリー メンバーを同定するために、再編成プールの前記ライブラリーメンバーをスクリ ーニングする、さらなる工程を包含する、請求項１８に記載の方法。 ２３．前記第１の複数の選択されるライブラリーメンバーが、予め決定された分 子に対する結合アフィニティー以外の表現型の特徴について選択されることによ り得られる、請求項１８に記載の方法。 ２４．前記第１の複数の選択されるライブラリーメンバーがプールされ、そして フラグメント化され、そしてインビトロにおけるPCRにより相同組換えされる、 請求項１８に記載の方法。 ２５．前記第１の複数の選択されるライブラリーメンバーが、インビトロにおい てプールされ、そしてフラグメント化されて、得られるフラグメントが宿主細胞 または生物体へ移され、そして相同組換えされて、インビボにおける再編成ライ ブラリーメンバーを形成する、請求項１８に記載の方法。 ２６．前記第１の複数の選択されるライブラリーメンバーがエピソーム的に複製 可能なベクターにクローニングされるかまたは増幅され、多数の該ベクターが細 胞内へ移され、そして相同組換えされて、インビボにおける再編成ライブラリー メンバーを形成する、請求項１８に記載の方法。 ２７．アフィニティー相互作用スクリーニングまたは表現型のスクリーニングに 適切なディスプレイされたペプチドまたはディスプレイされた抗体のライブラリ ーを生成する方法であって、以下の工程： (１)ディスプレイされたペプチドまたはディスプレイされた抗体、および該デ ィスプレイされたペプチドまたはディスプレイされた抗体をコードする関連性ポ リヌクレオチドを包含する第１の複数の選択されるライブラリーメンバーを得、 そして該関連性ポリヌクレオチドまたはそのコピーを得る工程であって、ここで 該関連性ポリヌクレオチドが実質的に同一な配列の領域を含有する、工程、およ び (２)該関連性ポリヌクレオチドまたはコピーを、エピソーム的に複製可能なベ クターにクローン化するかまたは増幅し、そして多数の該ベクターを細胞内へ移 し、そして相同組換えして、インビボにおける再編成ライブラリーメンバーを形 成する工程、 を包含する方法。 ２８．前記ポリヌクレオチドまたはそのコピーに変異を導入する工程をさらに包 含する、請求項２７に記載の方法。 ２９．前記エピソーム的に複製可能なベクターが、複数の関連性ポリヌクレオチ ドまたはそのコピーのダイレクトリピートを含有する、請求項２７に記載の方法 。 ３０．アフィニティー相互作用スクリーニングに適切なディスプレイされた抗体 のライブラリーを生成する方法であって、以下の工程： (１)ディスプレイされた抗体、および該ディスプレイされた抗体をコードする 関連性ポリヌクレオチドを包含する第１の複数の選択されるライブラリーメンバ ーを得、そして該関連性ポリヌクレオチドまたはそのコピーを得る工程であって 、ここで該関連性ポリヌクレオチドが、実質的に同一な可変領域のフレームワー ク配列の領域を含有する、工程、および (２)該関連性ポリヌクレオチドまたはコピーをプールし、そしてフラグメント 化して、PCR増幅に適切な条件下でそのフラグメントを形成し、PCR増幅を実施し 、そしてそれにより該フラグメントを相同組換えしてCDRの新規の組み合わせを 包含する組換えポリヌクレオチドの再編成プールを形成する工程であって、そ れによっCDRの組み合わせを含む該再編成プールの組換えポリヌクレオチドの実 質画分が、該第１の複数の選択ライブラリーメンバーに存在しない、工程、 を包含する方法。 ３１．前記再編成プールがアフィニティースクリーニングを受けて、予め決定さ れたエピトープに結合する再編成ライブラリーメンバーを選択し、そしてそれに よって複数の選択される再編成ライブラリーメンバーを選択するさらる工程を包 含する、請求項３０に記載の方法。 ３２．１〜約1000サイクルで、複数の選択される再編成ライブラリーメンバーを 再編成し、そしてスクリーニングする、さらなる工程を包含する、請求項３１に 記載の方法。
JP7521977A 1994-02-17 1995-02-17 ランダムフラグメント化および再組立によるｄｎａ変異誘発 Pending JPH10500561A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/198,431 US5605793A (en) 1994-02-17 1994-02-17 Methods for in vitro recombination
US08/198,431 1994-02-17
PCT/US1995/002126 WO1995022625A1 (en) 1994-02-17 1995-02-17 Dna mutagenesis by random fragmentation and reassembly

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2000201673A Division JP3393848B2 (ja) 1994-02-17 2000-07-03 ランダムフラグメント化および再組立によるｄｎａ変異誘発
JP2002206303A Division JP3485560B2 (ja) 1994-02-17 2002-07-15 ランダムフラグメント化および再組立によるｄｎａ変異誘発

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPH10500561A true JPH10500561A (ja) 1998-01-20

Family

ID=22733354

Family Applications (6)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP7521977A Pending JPH10500561A (ja) 1994-02-17 1995-02-17 ランダムフラグメント化および再組立によるｄｎａ変異誘発
JP2000201673A Expired - Fee Related JP3393848B2 (ja) 1994-02-17 2000-07-03 ランダムフラグメント化および再組立によるｄｎａ変異誘発
JP2002206303A Expired - Fee Related JP3485560B2 (ja) 1994-02-17 2002-07-15 ランダムフラグメント化および再組立によるｄｎａ変異誘発
JP2002365621A Withdrawn JP2003174881A (ja) 1994-02-17 2002-12-17 ランダムフラグメント化および再組立によるｄｎａ変異誘発
JP2004174720A Expired - Fee Related JP4067516B2 (ja) 1994-02-17 2004-06-11 ランダムフラグメント化および再組立によるｄｎａ変異誘発
JP2007180396A Withdrawn JP2007244399A (ja) 1994-02-17 2007-07-09 ランダムフラグメント化および再組立によるｄｎａ変異誘発

Family Applications After (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2000201673A Expired - Fee Related JP3393848B2 (ja) 1994-02-17 2000-07-03 ランダムフラグメント化および再組立によるｄｎａ変異誘発
JP2002206303A Expired - Fee Related JP3485560B2 (ja) 1994-02-17 2002-07-15 ランダムフラグメント化および再組立によるｄｎａ変異誘発
JP2002365621A Withdrawn JP2003174881A (ja) 1994-02-17 2002-12-17 ランダムフラグメント化および再組立によるｄｎａ変異誘発
JP2004174720A Expired - Fee Related JP4067516B2 (ja) 1994-02-17 2004-06-11 ランダムフラグメント化および再組立によるｄｎａ変異誘発
JP2007180396A Withdrawn JP2007244399A (ja) 1994-02-17 2007-07-09 ランダムフラグメント化および再組立によるｄｎａ変異誘発

Country Status (12)

Country Link
US (14) US5605793A (ja)
EP (4) EP0934999B1 (ja)
JP (6) JPH10500561A (ja)
CN (1) CN1145641A (ja)
AT (2) ATE216722T1 (ja)
AU (3) AU703264C (ja)
CA (1) CA2182393C (ja)
DE (5) DE69526497T2 (ja)
DK (2) DK0752008T3 (ja)
ES (2) ES2165652T3 (ja)
RU (1) RU2157851C2 (ja)
WO (1) WO1995022625A1 (ja)

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003519665A (ja) * 2000-01-14 2003-06-24 ニュー・ホライズンズ・ダイアグノスティックス・コーポレイション 細菌感染の治療処置における、細菌ファージに関連した溶菌酵素の非経口使用
JP2003521933A (ja) * 2000-02-10 2003-07-22 ゼンコー タンパク質ライブラリーに関するタンパク質設計オートメーション
JP2003524416A (ja) * 2000-01-11 2003-08-19 バイエル・バイオサイエンス・エヌ・ヴェー 生物学的サンプル中のエリートイベントｇａｔ−ｚｍ１を同定する方法およびキット
JP2003533228A (ja) * 2000-05-16 2003-11-11 カリフォルニア インスティテュート オブ テクノロジー オキシダーゼ酵素の指向的進化
JP2006500934A (ja) * 2002-10-04 2006-01-12 マックワリー ユニバーシティ ランダムドリフト突然変異誘発
JP2006502706A (ja) * 2002-07-25 2006-01-26 エムジェイ バイオワークス インコーポレーティッド ハイブリッドタンパク質方法および組成物
JP2006504438A (ja) * 2002-11-01 2006-02-09 エヴォジェニクス・ピーティーワイ・リミテッド リバビリンおよび／またはｒｎａレプリカーゼを使用した変異誘発方法
US7122310B2 (en) 2000-10-11 2006-10-17 Sanko Junyaku Co., Ltd. Methods of constructing self-assembly of probes and method of detecting the same
JP2011523555A (ja) * 2008-06-04 2011-08-18 モディクエスト べー．フェー． 抗炎症剤
JP4789271B2 (ja) * 2005-12-02 2011-10-12 シンセティック ゲノミクス、インク． エラーが最小化された核酸分子の合成

Families Citing this family (2412)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5547839A (en) 1989-06-07 1996-08-20 Affymax Technologies N.V. Sequencing of surface immobilized polymers utilizing microflourescence detection
WO1992010588A1 (en) * 1990-12-06 1992-06-25 Affymax Technologies N.V. Sequencing by hybridization of a target nucleic acid to a matrix of defined oligonucleotides
US6150141A (en) * 1993-09-10 2000-11-21 Trustees Of Boston University Intron-mediated recombinant techniques and reagents
US6406855B1 (en) * 1994-02-17 2002-06-18 Maxygen, Inc. Methods and compositions for polypeptide engineering
US6165793A (en) * 1996-03-25 2000-12-26 Maxygen, Inc. Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination
US5837458A (en) * 1994-02-17 1998-11-17 Maxygen, Inc. Methods and compositions for cellular and metabolic engineering
US20060257890A1 (en) * 1996-05-20 2006-11-16 Maxygen, Inc. Methods and compositions for cellular and metabolic engineering
US6309883B1 (en) * 1994-02-17 2001-10-30 Maxygen, Inc. Methods and compositions for cellular and metabolic engineering
US6395547B1 (en) 1994-02-17 2002-05-28 Maxygen, Inc. Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination
US5605793A (en) 1994-02-17 1997-02-25 Affymax Technologies N.V. Methods for in vitro recombination
US6995017B1 (en) 1994-02-17 2006-02-07 Maxygen, Inc. Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination
US6117679A (en) 1994-02-17 2000-09-12 Maxygen, Inc. Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination
US6335160B1 (en) * 1995-02-17 2002-01-01 Maxygen, Inc. Methods and compositions for polypeptide engineering
US6808904B2 (en) * 1994-06-16 2004-10-26 Syngenta Participations Ag Herbicide-tolerant protox genes produced by DNA shuffling
GB9824544D0 (en) 1998-11-09 1999-01-06 Medical Res Council Screening system
CA2196419C (en) 1994-08-20 2007-08-21 Yen Choo Improvements in or relating to binding proteins for recognition of dna
US7262055B2 (en) 1998-08-25 2007-08-28 Gendaq Limited Regulated gene expression in plants
US7285416B2 (en) * 2000-01-24 2007-10-23 Gendaq Limited Regulated gene expression in plants
US6063562A (en) * 1994-09-16 2000-05-16 Sepracor, Inc. In vitro method for predicting the evolutionary response of HIV protease to a drug targeted thereagainst
US7597886B2 (en) * 1994-11-07 2009-10-06 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor-gamma
US7820798B2 (en) * 1994-11-07 2010-10-26 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor-gamma
CA2206451C (en) * 1994-12-09 2002-11-26 Wakunaga Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for suppressing nonspecific hybridization in primer extension method
US20010053523A1 (en) * 1995-06-02 2001-12-20 M&E Biotech A/S. Method for identification of biologically active peptides and nucleic acids
US6936289B2 (en) 1995-06-07 2005-08-30 Danisco A/S Method of improving the properties of a flour dough, a flour dough improving composition and improved food products
US6143557A (en) * 1995-06-07 2000-11-07 Life Technologies, Inc. Recombination cloning using engineered recombination sites
US6720140B1 (en) 1995-06-07 2004-04-13 Invitrogen Corporation Recombinational cloning using engineered recombination sites
US6964861B1 (en) * 1998-11-13 2005-11-15 Invitrogen Corporation Enhanced in vitro recombinational cloning of using ribosomal proteins
US6495357B1 (en) * 1995-07-14 2002-12-17 Novozyme A/S Lipolytic enzymes
US6455254B1 (en) 1995-07-18 2002-09-24 Diversa Corporation Sequence based screening
US6004788A (en) 1995-07-18 1999-12-21 Diversa Corporation Enzyme kits and libraries
US5958672A (en) 1995-07-18 1999-09-28 Diversa Corporation Protein activity screening of clones having DNA from uncultivated microorganisms
US6057103A (en) * 1995-07-18 2000-05-02 Diversa Corporation Screening for novel bioactivities
DK0843725T3 (da) * 1995-08-11 2002-08-12 Novozymes As Fremgangmåde til fremstilling af polypeptidvarianter
ATE219517T1 (de) 1995-08-18 2002-07-15 Morphosys Ag Protein-/(poly)peptidbibliotheken
US6352842B1 (en) 1995-12-07 2002-03-05 Diversa Corporation Exonucease-mediated gene assembly in directed evolution
US6358709B1 (en) 1995-12-07 2002-03-19 Diversa Corporation End selection in directed evolution
US20030219752A1 (en) * 1995-12-07 2003-11-27 Diversa Corporation Novel antigen binding molecules for therapeutic, diagnostic, prophylactic, enzymatic, industrial, and agricultural applications, and methods for generating and screening thereof
US5939250A (en) * 1995-12-07 1999-08-17 Diversa Corporation Production of enzymes having desired activities by mutagenesis
US20020031771A1 (en) * 1995-12-07 2002-03-14 Short Jay M. Sequence based screening
US5965408A (en) 1996-07-09 1999-10-12 Diversa Corporation Method of DNA reassembly by interrupting synthesis
WO2000053744A2 (en) * 1999-03-09 2000-09-14 Diversa Corporation End selection in directed evolution
US6238884B1 (en) 1995-12-07 2001-05-29 Diversa Corporation End selection in directed evolution
US5830696A (en) 1996-12-05 1998-11-03 Diversa Corporation Directed evolution of thermophilic enzymes
US6489145B1 (en) 1996-07-09 2002-12-03 Diversa Corporation Method of DNA shuffling
US20020164580A1 (en) * 1995-12-07 2002-11-07 Diversa Corporation Combinatorial screening of mixed populations of organisms
US6713279B1 (en) 1995-12-07 2004-03-30 Diversa Corporation Non-stochastic generation of genetic vaccines and enzymes
US7018793B1 (en) * 1995-12-07 2006-03-28 Diversa Corporation Combinatorial screening of mixed populations of organisms
US6790605B1 (en) * 1995-12-07 2004-09-14 Diversa Corporation Methods for obtaining a desired bioactivity or biomolecule using DNA libraries from an environmental source
US6361974B1 (en) * 1995-12-07 2002-03-26 Diversa Corporation Exonuclease-mediated nucleic acid reassembly in directed evolution
US6939689B2 (en) 1995-12-07 2005-09-06 Diversa Corporation Exonuclease-mediated nucleic acid reassembly in directed evolution
US20020028443A1 (en) * 1999-09-27 2002-03-07 Jay M. Short Method of dna shuffling with polynucleotides produced by blocking or interrupting a synthesis or amplification process
US6537776B1 (en) 1999-06-14 2003-03-25 Diversa Corporation Synthetic ligation reassembly in directed evolution
US6344328B1 (en) 1995-12-07 2002-02-05 Diversa Corporation Method for screening for enzyme activity
US6740506B2 (en) 1995-12-07 2004-05-25 Diversa Corporation End selection in directed evolution
GB9621295D0 (en) * 1995-12-07 1996-11-27 Cambridge Antibody Tech Specific binding members,materials and methods
US6764835B2 (en) 1995-12-07 2004-07-20 Diversa Corporation Saturation mutageneis in directed evolution
US7888466B2 (en) 1996-01-11 2011-02-15 Human Genome Sciences, Inc. Human G-protein chemokine receptor HSATU68
US5976846A (en) * 1996-01-13 1999-11-02 Passmore; Steven E. Method for multifragment in vivo cloning and mutation mapping
AU1874997A (en) * 1996-02-15 1997-09-02 Pangenetics B.V. Molecules for the induction of immunological tolerance
US6096548A (en) * 1996-03-25 2000-08-01 Maxygen, Inc. Method for directing evolution of a virus
US6506602B1 (en) 1996-03-25 2003-01-14 Maxygen, Inc. Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination
US6372480B1 (en) 1996-04-19 2002-04-16 Mycogen Corporation Pesticidal proteins
US6242211B1 (en) 1996-04-24 2001-06-05 Terragen Discovery, Inc. Methods for generating and screening novel metabolic pathways
US20020120118A1 (en) * 1996-05-22 2002-08-29 Short Jay M. Enzymes having endoglucanase activity and methods of use thereof
US7465571B1 (en) 1996-05-22 2008-12-16 Verenium Corporation Endoglucanases
US6617434B1 (en) * 1996-05-31 2003-09-09 North Shore Long Island Jewish Research Institute Identificiaton of differentially methylated and mutated nucleic acids
US5871917A (en) 1996-05-31 1999-02-16 North Shore University Hospital Research Corp. Identification of differentially methylated and mutated nucleic acids
DK0938584T3 (da) 1996-07-10 2008-09-22 Lonza Ag Fremgangsmåde til fremstilling af (S)-eller (R)-3,3,3-trifluor-2-hydroxy-2-methylpropionsyre
JPH1066577A (ja) * 1996-08-07 1998-03-10 Novo Nordisk As 核酸プールおよびその製造方法
JPH1066576A (ja) * 1996-08-07 1998-03-10 Novo Nordisk As 突出末端を有する２本鎖ｄｎａ及びこれを用いたｄｎａのシャフリング方法
GB9618960D0 (en) 1996-09-11 1996-10-23 Medical Science Sys Inc Proteases
CA2268265A1 (en) * 1996-09-27 1998-04-02 Maxygen, Inc. Methods for optimization of gene therapy by recursive sequence shuffling and selection
US5811381A (en) * 1996-10-10 1998-09-22 Mark A. Emalfarb Cellulase compositions and methods of use
US7883872B2 (en) * 1996-10-10 2011-02-08 Dyadic International (Usa), Inc. Construction of highly efficient cellulase compositions for enzymatic hydrolysis of cellulose
WO2000020555A2 (en) * 1998-10-06 2000-04-13 Aarl Inc Transformation system in the field of filamentous fungal hosts: in chrysosporium
US6838238B1 (en) * 1996-10-17 2005-01-04 Invitrogen Corporation Morphatides: novel shape and structure libraries
US6242669B1 (en) 1996-10-30 2001-06-05 Mycogen Corporation Pesticidal toxins and nucleotide sequences which encode these toxins
IL119586A (en) * 1996-11-07 2001-09-13 Univ Ramot Discontinuous library of a single biological unit and a method for its preparation
US20070009930A1 (en) * 1996-12-18 2007-01-11 Maxygen, Inc. Methods and compositions for polypeptide engineering
US6326204B1 (en) 1997-01-17 2001-12-04 Maxygen, Inc. Evolution of whole cells and organisms by recursive sequence recombination
US7148054B2 (en) * 1997-01-17 2006-12-12 Maxygen, Inc. Evolution of whole cells and organisms by recursive sequence recombination
AU1022402A (en) * 1997-01-17 2002-03-14 Maxygen, Inc. Evolution of whole cells and organisms by recursive sequence recombination
AU6029998A (en) 1997-01-17 1998-08-07 Regents Of The University Of Minnesota Dna molecules and protein displaying improved triazine compound degrading ability
AU743305C (en) * 1997-01-17 2006-03-30 Maxygen, Inc. Evolution of whole cells and organisms by recursive sequence recombination
US6261804B1 (en) 1997-01-21 2001-07-17 The General Hospital Corporation Selection of proteins using RNA-protein fusions
DK0971946T3 (da) 1997-01-21 2006-10-30 Gen Hospital Corp Selektion af proteiner ved anvendelse af RNA-protein-fusioner
US8207093B2 (en) * 1997-01-21 2012-06-26 The General Hospital Corporation Selection of proteins using RNA-protein fusions
GB9701425D0 (en) * 1997-01-24 1997-03-12 Bioinvent Int Ab A method for in vitro molecular evolution of protein function
ES2199431T3 (es) * 1997-01-31 2004-02-16 Cosmix Molecular Biologicals Gmbh Generacion de diversidad en genotecas combinatorias.
EP1009802B1 (en) 1997-02-12 2004-08-11 Eugene Y. Chan Methods for analyzimg polymers
US5851808A (en) 1997-02-28 1998-12-22 Baylor College Of Medicine Rapid subcloning using site-specific recombination
WO1998038326A1 (en) 1997-02-28 1998-09-03 Nature Technology Corporation Self-assembling genes, vectors and uses thereof
US6159688A (en) 1997-03-18 2000-12-12 Novo Nordisk A/S Methods of producing polynucleotide variants
US6159687A (en) 1997-03-18 2000-12-12 Novo Nordisk A/S Methods for generating recombined polynucleotides
DK0996718T3 (da) * 1997-03-18 2009-04-06 Novozymes As Fremgangsmåde til konstruktion af et bibliotek ved anvendelse af DNA-shuffling
NZ337910A (en) * 1997-03-18 2001-10-26 Novo Nordisk As Shuffling of heterologous DNA sequences using conserved regions
US6291165B1 (en) * 1997-03-18 2001-09-18 Novo Nordisk A/S Shuffling of heterologous DNA sequences
US5948653A (en) 1997-03-21 1999-09-07 Pati; Sushma Sequence alterations using homologous recombination
US6153410A (en) * 1997-03-25 2000-11-28 California Institute Of Technology Recombination of polynucleotide sequences using random or defined primers
EP0985033A4 (en) * 1997-04-04 2005-07-13 Biosite Inc POLYVALENT AND POLYCLONAL LIBRARIES
EP1433852B1 (en) 1997-04-09 2006-06-28 Danisco A/S Use of lipase for improving doughs and baked products
US6188965B1 (en) 1997-04-11 2001-02-13 California Institute Of Technology Apparatus and method for automated protein design
IL124275A (en) * 1997-05-02 2002-03-10 Bio Merieux Vitek Inc A method to produce sequences of nucleic acids
US6558901B1 (en) * 1997-05-02 2003-05-06 Biomerieux Vitek Nucleic acid assays
GB9712512D0 (en) 1997-06-16 1997-08-20 Bioinvent Int Ab A method for in vitro molecular evolution of protein function
US7087420B1 (en) 1997-07-17 2006-08-08 Cambia Microbial β-glucuronidase genes, gene products and uses thereof
US6391547B1 (en) * 1997-09-09 2002-05-21 Center For The Application Of Molecular Biology To International Agriculture Microbial β-glucuronidase genes, gene products and uses thereof
DE19731990A1 (de) * 1997-07-25 1999-01-28 Studiengesellschaft Kohle Mbh Verfahren zur Herstellung und Identifizierung von neuen Hydrolasen mit verbesserten Eigenschaften
WO1999011818A1 (fr) * 1997-08-28 1999-03-11 Isao Karube Procede de detection d'acides nucleiques ou de polypeptides hautement fonctionnels
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
WO1999014336A2 (en) * 1997-09-19 1999-03-25 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
AU9434398A (en) 1997-10-13 1999-05-03 Novo Nordisk A/S Alpha-amylase mutants
GB9722131D0 (en) 1997-10-20 1997-12-17 Medical Res Council Method
US7351578B2 (en) * 1999-12-10 2008-04-01 Invitrogen Corp. Use of multiple recombination sites with unique specificity in recombinational cloning
JP4303418B2 (ja) * 1997-10-24 2009-07-29 ライフ テクノロジーズ コーポレーション 組換え部位を有する核酸を使用する組換えクローニング
CN101125873A (zh) * 1997-10-24 2008-02-20 茵维特罗根公司 利用具重组位点的核酸进行重组克隆
AU1124499A (en) 1997-10-28 1999-05-17 Maxygen, Inc. Human papillomavirus vectors
US6428784B1 (en) * 1997-10-31 2002-08-06 New Horizons Diagnostics Corp Vaginal suppository for treating group B Streptococcus infection
US6399098B1 (en) 1997-10-31 2002-06-04 New Horizons Diagnostics Corp Composition for treating dental caries caused by streptococcus mutans
US6399097B1 (en) 1997-10-31 2002-06-04 New Horizons Diagnostics Corporation Composition for treatment of a bacterial infection of the digestive tract
US6277399B1 (en) 1997-10-31 2001-08-21 New Horizon Diagnostics Corporation Composition incorporating bacterial phage associated lysing enzymes for treating dermatological infections
US6423299B1 (en) 1997-10-31 2002-07-23 Vincent Fischetti Composition for treatment of a bacterial infection of an upper respiratory tract
US7232576B2 (en) 1997-10-31 2007-06-19 New Horizons Diagnostics Corp Throat lozenge for the treatment of Streptococcus Group A
US20030082110A1 (en) * 1997-10-31 2003-05-01 Vincent Fischetti Use of bacterial phage associated lysing proteins for treating bacterial dental caries
EP1030861A4 (en) 1997-10-31 2001-09-05 Maxygen Inc MODIFICATION OF VIRUSTROPISMIUS AND THE ECONOMIC SPECTRUM BY VIRAL GENOM MIXING
US20030129147A1 (en) * 1997-10-31 2003-07-10 Vincent Fischetti Use of bacterial phage associated lysing proteins for treating bacterial dental caries
US6752988B1 (en) * 2000-04-28 2004-06-22 New Horizons Diagnostic Corp Method of treating upper resiratory illnesses
US6432444B1 (en) 1997-10-31 2002-08-13 New Horizons Diagnostics Corp Use of bacterial phage associated lysing enzymes for treating dermatological infections
US6056954A (en) 1997-10-31 2000-05-02 New Horizons Diagnostics Corp Use of bacterial phage associated lysing enzymers for the prophylactic and therapeutic treatment of various illnesses
US20020136712A1 (en) * 1997-10-31 2002-09-26 Fischetti Vincent Bacterial phage associated lysing enzymes for the prophylactic and therapeutic treatment of colonization and infections caused by streptococcus pneumoniae
US20030129146A1 (en) * 1997-10-31 2003-07-10 Vincent Fischetti The use of bacterial phage associated lysing proteins for treating bacterial dental caries
US6406692B1 (en) 1997-10-31 2002-06-18 New Horizons Diagnostics Corp Composition for treatment of an ocular bacterial infection
US7321023B2 (en) * 1997-11-07 2008-01-22 Incyte Corporation SP16 protein
DE69841340D1 (de) 1997-12-05 2010-01-07 Europ Lab Molekularbiolog Neue Methode zur Klonierung DNS unter Anwendung des E. coli RecE/RecT Rekombinationssystems
AU746786B2 (en) * 1997-12-08 2002-05-02 California Institute Of Technology Method for creating polynucleotide and polypeptide sequences
AR017831A1 (es) * 1997-12-10 2001-10-24 Pioneer Hi Bred Int Metodo para alterar la composicion de aminoacidos de una proteina nativa de interes, proteina elaborada, y polinucleotido
US20030166169A1 (en) * 1998-01-16 2003-09-04 Padgett Hal S. Method for constructing viral nucleic acids in a cell-free manner
US6303848B1 (en) 1998-01-16 2001-10-16 Large Scale Biology Corporation Method for conferring herbicide, pest, or disease resistance in plant hosts
US6426185B1 (en) 1998-01-16 2002-07-30 Large Scale Biology Corporation Method of compiling a functional gene profile in a plant by transfecting a nucleic acid sequence of a donor plant into a different host plant in an anti-sense orientation
US6468745B1 (en) 1998-01-16 2002-10-22 Large Scale Biology Corporation Method for expressing a library of nucleic acid sequence variants and selecting desired traits
US20020164585A1 (en) * 1998-01-16 2002-11-07 Sean Chapman Method for enhancing RNA or protein production using non-native 5' untranslated sequences in recombinant viral nucleic acids
US20030027173A1 (en) * 1998-01-16 2003-02-06 Della-Cioppa Guy Method of determining the function of nucleotide sequences and the proteins they encode by transfecting the same into a host
US6541011B2 (en) 1998-02-11 2003-04-01 Maxygen, Inc. Antigen library immunization
US7390619B1 (en) * 1998-02-11 2008-06-24 Maxygen, Inc. Optimization of immunomodulatory properties of genetic vaccines
JP2002512775A (ja) * 1998-03-17 2002-05-08 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト Ｍｌｏタンパク質をコードし、植物に真菌耐性を付与する遺伝子
AU2003203147B2 (en) 1998-03-23 2008-05-29 Novozymes A/S Phytase variants
IL139093A0 (en) 1998-05-01 2001-11-25 Maxygen Inc Optimization of pest resistance genes using dna shuffling
US6287765B1 (en) * 1998-05-20 2001-09-11 Molecular Machines, Inc. Methods for detecting and identifying single molecules
US20030207345A1 (en) * 1998-05-21 2003-11-06 California Institute Of Technology Oxygenase enzymes and screening method
US6902918B1 (en) 1998-05-21 2005-06-07 California Institute Of Technology Oxygenase enzymes and screening method
EP2284272B1 (en) 1998-06-10 2014-08-13 Novozymes A/S Mannanases
US7153655B2 (en) * 1998-06-16 2006-12-26 Alligator Bioscience Ab Method for in vitro molecular evolution of protein function involving the use of exonuclease enzyme and two populations of parent polynucleotide sequence
US6337186B1 (en) 1998-06-17 2002-01-08 Maxygen, Inc. Method for producing polynucleotides with desired properties
US6365408B1 (en) 1998-06-19 2002-04-02 Maxygen, Inc. Methods of evolving a polynucleotides by mutagenesis and recombination
US6846655B1 (en) 1998-06-29 2005-01-25 Phylos, Inc. Methods for generating highly diverse libraries
DK1098988T4 (da) 1998-07-21 2007-09-03 Danisco Födevare
US20030153042A1 (en) * 1998-07-28 2003-08-14 California Institute Of Technology Expression of functional eukaryotic proteins
US6991922B2 (en) * 1998-08-12 2006-01-31 Proteus S.A. Process for in vitro creation of recombinant polynucleotide sequences by oriented ligation
US20040191772A1 (en) * 1998-08-12 2004-09-30 Dupret Daniel Marc Method of shuffling polynucleotides using templates
EP1104459A1 (en) 1998-08-12 2001-06-06 Maxygen, Inc. Dna shuffling of monooxygenase genes for production of industrial chemicals
US20060242731A1 (en) * 1998-08-12 2006-10-26 Venkiteswaran Subramanian DNA shuffling to produce herbicide selective crops
US20030092023A1 (en) * 1998-08-12 2003-05-15 Daniel Dupret Method of shuffling polynucleotides using templates
WO2002086121A1 (en) * 2001-04-25 2002-10-31 Proteus Template-mediated, ligation-oriented method of nonrandomly shuffling polynucleotides
US20030104417A1 (en) * 1998-08-12 2003-06-05 Proteus S.A. Template-mediated, ligation-oriented method of nonrandomly shuffling polynucleotides
US6951719B1 (en) * 1999-08-11 2005-10-04 Proteus S.A. Process for obtaining recombined nucleotide sequences in vitro, libraries of sequences and sequences thus obtained
BR9911681A (pt) * 1998-08-12 2001-10-02 Maxygen Inc Embaralhamento de dna para produzir culturas seletivas para herbicidas
ES2329205T3 (es) 1998-08-17 2009-11-23 Bristol-Myers Squibb Company Identificacion de interacciones de compuestos-proteinas usando bibliotecas de moleculas de fusion de proteinas-acidos nucleicos.
WO2000014271A1 (en) * 1998-09-03 2000-03-16 Loma Linda University METHOD FOR STUDYING PROTEIN INTERACTIONS $i(IN VIVO)
US20070178475A1 (en) * 1998-09-17 2007-08-02 Nehls Michael C Novel human polynucleotides and polypeptides encoded thereby
US20050086718A1 (en) 1999-03-23 2005-04-21 Mendel Biotechnology, Inc. Plant transcriptional regulators of abiotic stress
US7897843B2 (en) 1999-03-23 2011-03-01 Mendel Biotechnology, Inc. Transcriptional regulation of plant biomass and abiotic stress tolerance
US6500639B2 (en) 1998-10-07 2002-12-31 Maxygen, Inc. DNA shuffling to produce nucleic acids for mycotoxin detoxification
US6403312B1 (en) 1998-10-16 2002-06-11 Xencor Protein design automatic for protein libraries
EP1157093A1 (en) * 1998-10-16 2001-11-28 Xencor, Inc. Protein design automation for protein libraries
US20020048772A1 (en) 2000-02-10 2002-04-25 Dahiyat Bassil I. Protein design automation for protein libraries
US7315786B2 (en) 1998-10-16 2008-01-01 Xencor Protein design automation for protein libraries
AU1318400A (en) 1998-10-19 2000-05-08 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Dna-templated combinatorial library chemistry
AU6188599A (en) 1998-10-26 2000-05-15 Novozymes A/S Constructing and screening a dna library of interest in filamentous fungal cells
GB9823468D0 (en) 1998-10-28 1998-12-23 Secr Defence Novel enzyme
JP3267576B2 (ja) * 1998-11-09 2002-03-18 三光純薬株式会社 プローブ高分子の形成方法
EP1129184A1 (en) 1998-11-10 2001-09-05 Maxygen, Inc. Modified adp-glucose pyrophosphorylase for improvement and optimation of plant phenotypes
US6438561B1 (en) * 1998-11-19 2002-08-20 Navigation Technologies Corp. Method and system for using real-time traffic broadcasts with navigation systems
KR100851418B1 (ko) 1998-11-20 2008-08-08 코산 바이오사이언시즈, 인코포레이티드 에포틸론 및 에포틸론 유도체의 생산을 위한 재조합 방법 및 물질
US6410301B1 (en) 1998-11-20 2002-06-25 Kosan Biosciences, Inc. Myxococcus host cells for the production of epothilones
JP4813660B2 (ja) * 1998-11-27 2011-11-09 ダーウィン ディスカバリー リミテッド 骨鉱化作用を増加するための組成物および方法
US20040009535A1 (en) 1998-11-27 2004-01-15 Celltech R&D, Inc. Compositions and methods for increasing bone mineralization
ATE504651T1 (de) 1998-12-18 2011-04-15 Novozymes As Subtilase enzyme der i-s1- und i-s2-untergruppen mit einem zusätzlichen aminosäurerest in einer aktiven schleifenregion
US6570003B1 (en) * 2001-01-09 2003-05-27 Lexion Genetics Incorporated Human 7TM proteins and polynucleotides encoding the same
US20020031802A1 (en) * 2000-05-12 2002-03-14 Yi Hu Novel seven transmembrane proteins and polynucleotides encoding the same
US20020061556A1 (en) * 2000-04-27 2002-05-23 Walke D. Wade Novel membrane proteins and polynucleotides encoding the same
JP2002537762A (ja) * 1999-01-05 2002-11-12 トラスティーズ オブ ボストン ユニバーシティ 改良型核酸クローニング
US20040005673A1 (en) * 2001-06-29 2004-01-08 Kevin Jarrell System for manipulating nucleic acids
US6358712B1 (en) 1999-01-05 2002-03-19 Trustee Of Boston University Ordered gene assembly
US6534261B1 (en) * 1999-01-12 2003-03-18 Sangamo Biosciences, Inc. Regulation of endogenous gene expression in cells using zinc finger proteins
US7070934B2 (en) 1999-01-12 2006-07-04 Sangamo Biosciences, Inc. Ligand-controlled regulation of endogenous gene expression
US7013219B2 (en) * 1999-01-12 2006-03-14 Sangamo Biosciences, Inc. Regulation of endogenous gene expression in cells using zinc finger proteins
WO2000042560A2 (en) 1999-01-19 2000-07-20 Maxygen, Inc. Methods for making character strings, polynucleotides and polypeptides
US6436675B1 (en) 1999-09-28 2002-08-20 Maxygen, Inc. Use of codon-varied oligonucleotide synthesis for synthetic shuffling
US20030054390A1 (en) * 1999-01-19 2003-03-20 Maxygen, Inc. Oligonucleotide mediated nucleic acid recombination
US6376246B1 (en) 1999-02-05 2002-04-23 Maxygen, Inc. Oligonucleotide mediated nucleic acid recombination
WO2000042559A1 (en) * 1999-01-18 2000-07-20 Maxygen, Inc. Methods of populating data structures for use in evolutionary simulations
US6368861B1 (en) * 1999-01-19 2002-04-09 Maxygen, Inc. Oligonucleotide mediated nucleic acid recombination
US6917882B2 (en) * 1999-01-19 2005-07-12 Maxygen, Inc. Methods for making character strings, polynucleotides and polypeptides having desired characteristics
US20070065838A1 (en) * 1999-01-19 2007-03-22 Maxygen, Inc. Oligonucleotide mediated nucleic acid recombination
US7873477B1 (en) * 2001-08-21 2011-01-18 Codexis Mayflower Holdings, Llc Method and system using systematically varied data libraries
US7702464B1 (en) 2001-08-21 2010-04-20 Maxygen, Inc. Method and apparatus for codon determining
US7024312B1 (en) * 1999-01-19 2006-04-04 Maxygen, Inc. Methods for making character strings, polynucleotides and polypeptides having desired characteristics
US6961664B2 (en) 1999-01-19 2005-11-01 Maxygen Methods of populating data structures for use in evolutionary simulations
US8457903B1 (en) 1999-01-19 2013-06-04 Codexis Mayflower Holdings, Llc Method and/or apparatus for determining codons
US20090130718A1 (en) * 1999-02-04 2009-05-21 Diversa Corporation Gene site saturation mutagenesis
JP2003524394A (ja) 1999-02-11 2003-08-19 マキシジェン， インコーポレイテッド ハイスループット質量分析法
EP2357192A1 (en) 1999-02-26 2011-08-17 Human Genome Sciences, Inc. Human endokine alpha and methods of use
EP2119788A1 (en) * 1999-03-02 2009-11-18 Life Technologies Corporation Compositions and methods for use in recombinational cloning of nucleic acids
JP3399518B2 (ja) * 1999-03-03 2003-04-21 インターナショナル・ビジネス・マシーンズ・コーポレーション 半導体構造およびその製造方法
US6531316B1 (en) 1999-03-05 2003-03-11 Maxyag, Inc. Encryption of traits using split gene sequences and engineered genetic elements
CA2362737A1 (en) * 1999-03-05 2000-09-08 Maxygen, Inc. Recombination of insertion modified nucleic acids
EP1159285B1 (en) * 1999-03-08 2005-05-25 Metrigen, Inc. Methods and compositions for economically synthesizing and assembling long dna sequences
US8148110B2 (en) * 1999-03-15 2012-04-03 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Detection of molecular interactions by β-lactamase reporter fragment complementation
KR100312070B1 (ko) * 1999-03-15 2001-11-03 박호군 고속 선별법을 포함하는 개선된 형질을 갖는 효소 변이체의 제조방법
US7105315B2 (en) * 1999-06-16 2006-09-12 Incyte Genomics, Inc. Transmembrane protein differentially expressed in cancer
US20030104526A1 (en) * 1999-03-24 2003-06-05 Qiang Liu Position dependent recognition of GNN nucleotide triplets by zinc fingers
US7030215B2 (en) * 1999-03-24 2006-04-18 Sangamo Biosciences, Inc. Position dependent recognition of GNN nucleotide triplets by zinc fingers
ES2618608T3 (es) 1999-03-30 2017-06-21 Novozymes A/S Variantes de alfa-amilasa
ES2532606T3 (es) 1999-03-31 2015-03-30 Novozymes A/S Polipéptidos con actividad de alfa-amilasa alcalina y ácidos nucleicos que los codifican
WO2000060058A2 (en) 1999-03-31 2000-10-12 Novozymes A/S Polypeptides having alkaline alpha-amylase activity and nucleic acids encoding same
US6703240B1 (en) 1999-04-13 2004-03-09 Maxygar, Inc. Modified starch metabolism enzymes and encoding genes for improvement and optimization of plant phenotypes
US20020110809A1 (en) * 1999-04-30 2002-08-15 Nehls Michael C. Novel human polynucleotides and polypeptides encoded thereby
US20020095031A1 (en) * 1999-05-04 2002-07-18 Nehls Michael C. Novel human polynucleotides and polypeptides encoded thereby
WO2000071691A1 (en) 1999-05-20 2000-11-30 Novozymes A/S Subtilase enzymes of the i-s1 and i-s2 sub-groups having at least one additional amino acid residue between positions 125 and 126
AU4392700A (en) 1999-05-20 2000-12-12 Novozymes A/S Subtilase enzymes of the i-s1 and i-s2 sub-groups having at least one additionalamino acid residue between positions 129 and 130
EP1183341B2 (en) 1999-05-20 2012-05-02 Novozymes A/S Subtilase enzymes of the i-s1 and i-s2 sub-groups having at least one additional amino acid residue between positions 127 and 128
AU4392800A (en) 1999-05-20 2000-12-12 Novozymes A/S Subtilase enzymes of the i-s1 and i-s2 sub-groups having at least one additionalamino acid residue between positions 126 and 127
WO2000071690A1 (en) 1999-05-20 2000-11-30 Novozymes A/S Subtilase enzymes of the i-s1 and i-s2 sub-groups having at least one additional amino acid residue between positions 128 and 129
EP1183337B1 (en) 1999-05-20 2008-09-17 Novozymes A/S Subtilase enzymes of the i-s1 and i-s2 sub-groups having at least one additional amino acid residue between positions 132 and 133
US7332308B1 (en) 1999-05-21 2008-02-19 The Penn State Research Foundation Incrementally truncated nucleic acids and methods of making same
CA2374347A1 (en) * 1999-05-31 2000-12-07 Novozymes A/S Screening method for peptides
EP1067181A1 (en) * 1999-06-10 2001-01-10 Rijksuniversiteit te Groningen Enzyme selection
WO2000078968A2 (en) * 1999-06-18 2000-12-28 Elitra Pharmaceuticals, Inc. Nucleotide sequences of moraxella catarrhalis genome
WO2001004287A1 (en) * 1999-07-07 2001-01-18 Maxygen Aps A method for preparing modified polypeptides
AU5805700A (en) 1999-07-09 2001-01-30 Novozymes A/S Glucoamylase variant
US6421613B1 (en) * 1999-07-09 2002-07-16 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Data processing of the maize prolifera genetic sequence
US6387620B1 (en) * 1999-07-28 2002-05-14 Gilead Sciences, Inc. Transcription-free selex
US6653151B2 (en) 1999-07-30 2003-11-25 Large Scale Proteomics Corporation Dry deposition of materials for microarrays using matrix displacement
US6713309B1 (en) 1999-07-30 2004-03-30 Large Scale Proteomics Corporation Microarrays and their manufacture
US7179638B2 (en) 1999-07-30 2007-02-20 Large Scale Biology Corporation Microarrays and their manufacture by slicing
GB9918154D0 (en) * 1999-08-02 1999-10-06 Zeneca Ltd Expression system
BRPI0013119B8 (pt) * 1999-08-12 2021-05-25 Pah Usa 15 Llc molécula polinucleotídica isolada, vetor recombinante purificado, célula hospedeira procariótica e célula de streptomyces avermitilis mutada, método para obtenção de uma nova cepa de s. avermitilis e processo para produção de avermectinas
US6251604B1 (en) * 1999-08-13 2001-06-26 Genopsys, Inc. Random mutagenesis and amplification of nucleic acid
US6720142B1 (en) * 1999-08-19 2004-04-13 University Of Rochester Method of determining evolutionary potential of mutant resistance genes and use thereof to screen for drug efficacy
US6448388B1 (en) 2000-08-16 2002-09-10 Lexicon Genetics Incorporated Human proteases and polynucleotides encoding the same
US20020049312A1 (en) * 2000-05-23 2002-04-25 Turner C. Alexander Noel human thrombospondin-like proteins and polynucleotides encoding the same
US6716614B1 (en) * 1999-09-02 2004-04-06 Lexicon Genetics Incorporated Human calcium dependent proteases, polynucleotides encoding the same, and uses thereof
US20080003673A1 (en) * 1999-09-02 2008-01-03 Alejandro Abuin Novel human proteases and polynucleotides encoding the same
US20050153323A1 (en) * 2000-07-28 2005-07-14 Yi Hu Novel human proteases and polynucleotides encoding the same
US20030050464A1 (en) * 2000-07-28 2003-03-13 Yi Hu Novel human proteases and polynucleotides encoding the same
US6472588B1 (en) * 1999-09-10 2002-10-29 Texas Tech University Transgenic cotton plants with altered fiber characteristics transformed with a sucrose phosphate synthase nucleic acid
US7063837B2 (en) * 1999-09-14 2006-06-20 New Horizons Diagnostics Corp Syrup composition containing phage associated lytic enzymes
US6867291B1 (en) * 2000-09-15 2005-03-15 Lexicon Genetics Incorporated Human hemicentin proteins and polynucleotides encoding the same
US20020107382A1 (en) * 2000-09-27 2002-08-08 Friddle Carl Johan Novel human protease inhibitor proteins and polynucleotides encoding the same
US6790660B1 (en) 2001-09-18 2004-09-14 Lexicon Genetics Incorporated Human kielin-like proteins and polynucleotides encoding the same
US6746861B2 (en) 2000-01-18 2004-06-08 Lexicon Genetics Incorporated Human kinase protein and polynucleotides encoding the same
US20080050809A1 (en) * 1999-09-28 2008-02-28 Alejandro Abuin Novel human kinases and polynucleotides encoding the same
US6716616B1 (en) 1999-09-28 2004-04-06 Lexicon Genetics Incorporated Human kinase proteins and polynucleotides encoding the same
US6864079B2 (en) 2001-04-06 2005-03-08 Lexicon Genetics Incorporated Human kinase and polynucleotides encoding the same
US6511840B1 (en) 2000-06-15 2003-01-28 Lexicon Genetics Incorporated Human kinase proteins and polynucleotides encoding the same
US6541252B1 (en) 2000-05-19 2003-04-01 Lexicon Genetics Incorporated Human kinases and polynucleotides encoding the same
US6797510B1 (en) 2001-05-24 2004-09-28 Lexicon Genetics Incorporated Human kinases and polynucleotides encoding the same
US6586230B1 (en) 2000-10-27 2003-07-01 Lexicon Genetics Incorporated Human kinase and polynucleotides encoding the same
US6841377B1 (en) 2001-06-13 2005-01-11 Lexicon Genetics Incorporated Human kinase and polynucleotides encoding the same
US20040002474A1 (en) * 1999-10-07 2004-01-01 Maxygen Inc. IFN-alpha homologues
AU782326B2 (en) 1999-10-12 2005-07-21 Lexicon Pharmaceuticals, Inc. Human LDL receptor family proteins and polynucleotides encoding the same
US7430477B2 (en) * 1999-10-12 2008-09-30 Maxygen, Inc. Methods of populating data structures for use in evolutionary simulations
AU1198701A (en) * 1999-10-13 2001-04-23 Lexicon Genetics Incorporated Novel human membrane proteins
WO2001027306A2 (en) 1999-10-13 2001-04-19 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Biosynthesis of polyketide synthase substrates
US6750054B2 (en) * 2000-05-18 2004-06-15 Lexicon Genetics Incorporated Human semaphorin homologs and polynucleotides encoding the same
US20080213878A1 (en) * 1999-10-19 2008-09-04 Gregory Donoho Novel human membrane proteins and polynucleotides encoding the same
US6346249B1 (en) * 1999-10-22 2002-02-12 Ludwig Institute For Cancer Research Methods for reducing the effects of cancers that express A33 antigen using A33 antigen specific immunoglobulin products
GB9925161D0 (en) 1999-10-26 1999-12-22 Secr Defence Novel enzyme
US6635438B2 (en) * 1999-11-02 2003-10-21 Catch, Inc. Enzymatic cycling assays for homocysteine and cystathionine
EP1230269A2 (en) 1999-11-03 2002-08-14 Maxygen, Inc. Antibody diversity generation
DE19953854C2 (de) 1999-11-09 2002-01-17 Max Planck Gesellschaft Verfahren zur Herstellung von Biopolymeren mit veränderten Eigenschaften
AR026433A1 (es) 1999-11-10 2003-02-12 Novozymes As Variantes de alfa-amilasa tipo fungamyl
US6686515B1 (en) 1999-11-23 2004-02-03 Maxygen, Inc. Homologous recombination in plants
EP1235906B8 (de) * 1999-11-26 2008-01-23 BASF Plant Science GmbH Verfahren zur mutagenese von nukleotidsequenzen aus pflanzen, algen, oder pilzen
US7115712B1 (en) 1999-12-02 2006-10-03 Maxygen, Inc. Cytokine polypeptides
WO2001042287A2 (en) * 1999-12-07 2001-06-14 Lexicon Genetics Incorporated Putative human g-protein coupled receptors
EP1240187A2 (en) 1999-12-07 2002-09-18 Lexicon Genetics Incorporated Novel human kinase proteins and polynucleotides encoding the same
JP2004500060A (ja) * 1999-12-09 2004-01-08 レキシコン・ジェネティクス・インコーポレーテッド ヒトａｄａｍ−ｔｓプロテアーゼおよびそれをコードするポリヌクレオチド
CN1757724B (zh) 1999-12-10 2014-06-11 茵维特罗根公司 具有独特特异性的多个重组位点在重组克隆中的用途
WO2001046476A1 (en) * 1999-12-23 2001-06-28 Maxygen, Inc. Alteration of hydrolase genes and screening of the resulting libraries for the ability to catalyze specific reactions
CA2396029A1 (en) * 1999-12-27 2001-07-05 Crucell Holland B.V. Use of a native epitope for selecting evolved binding members from a library of mutants of a protein capable of binding to said epitope
US6927046B1 (en) 1999-12-30 2005-08-09 Archer-Daniels-Midland Company Increased lysine production by gene amplification using coryneform bacteria
US20010039014A1 (en) * 2000-01-11 2001-11-08 Maxygen, Inc. Integrated systems and methods for diversity generation and screening
AU783689B2 (en) 2000-01-24 2005-11-24 Adnexus Therapeutics, Inc. Sensitive, multiplexed diagnostic assays for protein analysis
US7022479B2 (en) * 2000-01-24 2006-04-04 Compound Therapeutics, Inc. Sensitive, multiplexed diagnostic assays for protein analysis
AU782817B2 (en) * 2000-02-04 2005-09-01 Lexicon Pharmaceuticals, Inc. Novel human G protein coupled receptor proteins and polynucleotides encoding the same
EP1621617A1 (en) * 2000-02-10 2006-02-01 Xencor, Inc. Protein design automation for protein libraries
AU2001241939A1 (en) * 2000-02-28 2001-09-12 Maxygen, Inc. Single-stranded nucleic acid template-mediated recombination and nucleic acid fragment isolation
US20020155571A1 (en) * 2000-02-29 2002-10-24 Raillard Sun Ai Triazine degrading enzymes
US6436677B1 (en) * 2000-03-02 2002-08-20 Promega Corporation Method of reverse transcription
AU4352101A (en) 2000-03-10 2001-09-24 Lexicon Genetics Inc Novel human g-coupled protein receptor kinases and polynucleotides encoding the same
AU2001287273A1 (en) * 2000-03-24 2001-10-08 Maxygen, Inc. Methods for modulating cellular and organismal phenotypes
EP1272634A1 (en) 2000-04-03 2003-01-08 Lexicon Genetics Incorporated Human ion channel protein and polynucleotides encoding the same
EP1274720A4 (en) 2000-04-12 2004-08-18 Human Genome Sciences Inc FUSION PROTEINS CONTAINING ALBUMIN
WO2001079509A1 (en) * 2000-04-12 2001-10-25 Lexicon Genetics Incorporated Human metalloprotease and polynucleotides encoding the same
US7129326B2 (en) * 2000-04-14 2006-10-31 Genencor International, Inc. Methods for selective targeting
ES2338097T3 (es) * 2000-04-14 2010-05-04 Genencor International, Inc. Procedimiento de identificacion selectiva.
WO2001082945A2 (en) * 2000-04-28 2001-11-08 New Horizons Diagnostic Corporation The use of bacterial phage associated lysing enzymes for treating various illnesses
US6534292B1 (en) 2000-05-08 2003-03-18 Genencor International, Inc. Methods for forming recombined nucleic acids
EP1280909A2 (en) * 2000-05-12 2003-02-05 Lexicon Genetics Incorporated Human lipocalin homologs and polynucleotides encoding the same
US7244560B2 (en) * 2000-05-21 2007-07-17 Invitrogen Corporation Methods and compositions for synthesis of nucleic acid molecules using multiple recognition sites
US20030032059A1 (en) * 2000-05-23 2003-02-13 Zhen-Gang Wang Gene recombination and hybrid protein development
US6790667B1 (en) * 2000-05-30 2004-09-14 Lexicon Genetics Incorporated Human mitochondrial proteins and polynucleotides encoding the same
US20030031675A1 (en) 2000-06-06 2003-02-13 Mikesell Glen E. B7-related nucleic acids and polypeptides useful for immunomodulation
US6703495B2 (en) * 2000-06-07 2004-03-09 Lexicon Genetics Incorporated Polynucleotides encoding human transporter protein
US6465632B1 (en) * 2000-06-09 2002-10-15 Lexicon Genetics Incorporated Human phosphatases and polynucleotides encoding the same
WO2001094417A2 (en) * 2000-06-09 2001-12-13 Lexicon Genetics Incorporated Novel human seven transmembrane proteins and polynucleotides encoding the same
FR2810339B1 (fr) * 2000-06-14 2004-12-10 Hoechst Marion Roussel Inc Banques combinatoires ameliorees par recombinaison dans la levure et procede d'analyse
WO2001096528A2 (en) 2000-06-15 2001-12-20 Human Genome Sciences, Inc. Human tumor necrosis factor delta and epsilon
AU2001268427B2 (en) 2000-06-16 2007-03-29 Glaxosmithkline Intellectual Property Limited Antibodies that immunospecifically bind to blys
US7468475B2 (en) 2000-06-16 2008-12-23 Schmuelling Thomas Method for modifying plant morphology, biochemistry and physiology
AU2001272978A1 (en) 2000-06-23 2002-01-08 Maxygen, Inc. Novel co-stimulatory molecules
US6410271B1 (en) 2000-06-23 2002-06-25 Genetastix Corporation Generation of highly diverse library of expression vectors via homologous recombination in yeast
US6406863B1 (en) * 2000-06-23 2002-06-18 Genetastix Corporation High throughput generation and screening of fully human antibody repertoire in yeast
AU2001268716A1 (en) * 2000-06-23 2002-01-08 Maxygen, Inc. Novel chimeric promoters
US6410246B1 (en) 2000-06-23 2002-06-25 Genetastix Corporation Highly diverse library of yeast expression vectors
EP2119773A1 (en) 2000-06-26 2009-11-18 Novozymes A/S Lipolytic enzymes from strains of fusarium and acremonium
US7846733B2 (en) 2000-06-26 2010-12-07 Nugen Technologies, Inc. Methods and compositions for transcription-based nucleic acid amplification
AU2001271516B2 (en) * 2000-06-27 2006-08-03 Lexicon Pharmaceuticals, Inc. Novel human gaba receptors and polynucleotides encoding the same
AU2001271912A1 (en) * 2000-07-07 2002-01-21 Maxygen, Inc. Molecular breeding of transposable elements
US6994963B1 (en) 2000-07-10 2006-02-07 Ambion, Inc. Methods for recombinatorial nucleic acid synthesis
US6858422B2 (en) * 2000-07-13 2005-02-22 Codexis, Inc. Lipase genes
AU2001273559A1 (en) * 2000-07-18 2002-01-30 Enchira Biotechnology Corporation Methods of ligation mediated chimeragenesis utilizing populations of scaffold and donor nucleic acids
US6878861B2 (en) * 2000-07-21 2005-04-12 Washington State University Research Foundation Acyl coenzyme A thioesterases
CA2416691A1 (en) * 2000-07-21 2002-01-31 Incyte Genomics, Inc. Proteases
US7435562B2 (en) 2000-07-21 2008-10-14 Modular Genetics, Inc. Modular vector systems
US6887685B1 (en) * 2000-07-25 2005-05-03 Lexicon Genetics Incorporated Human thymosin protein and polynucleotides encoding the same
US7087415B2 (en) * 2000-07-31 2006-08-08 Athena Biotechnologies, Inc. Methods and compositions for directed gene assembly
US20020127623A1 (en) * 2000-07-31 2002-09-12 Maxygen, Inc. Biosensors, reagents and diagnostic applications of directed evolution
CA2702204C (en) 2000-08-01 2011-09-06 Novozymes A/S Alpha-amylase mutants with altered properties
JP3859947B2 (ja) * 2000-08-04 2006-12-20 独立行政法人理化学研究所 突然変異導入方法
AU8337701A (en) 2000-08-14 2002-02-25 Us Health Enhanced homologous recombination mediated by lambda recombination proteins
WO2002016547A2 (en) 2000-08-21 2002-02-28 Novozymes A/S Subtilase enzymes
US7198924B2 (en) * 2000-12-11 2007-04-03 Invitrogen Corporation Methods and compositions for synthesis of nucleic acid molecules using multiple recognition sites
CA2420036A1 (en) * 2000-08-22 2002-02-28 Lexicon Genetics Incorporated Human 7tm proteins and polynucleotides encoding the same
EP1406483A4 (en) 2000-08-22 2005-05-25 Mendel Biotechnology Inc GENE FOR CHANGING THE PROPERTIES OF PLANTS
AU2001288339B2 (en) * 2000-08-22 2005-09-29 Lexicon Pharmaceuticals, Inc. Novel human proteases and polynucleotides encoding the same
US7879540B1 (en) * 2000-08-24 2011-02-01 Promega Corporation Synthetic nucleic acid molecule compositions and methods of preparation
CA2421059A1 (en) * 2000-08-24 2002-02-28 Maxygen, Inc. Constructs and their use in metabolic pathway engineering
US20030157643A1 (en) * 2000-08-24 2003-08-21 Almond Brian D Synthetic nucleic acids from aquatic species
FR2813314B1 (fr) * 2000-08-25 2004-05-07 Biomethodes Procede de mutagenese dirigee massive
CA2420325A1 (en) 2000-08-25 2002-02-28 Basf Plant Science Gmbh Plant polynucleotides encoding novel prenyl proteases
AU2001285326A1 (en) * 2000-08-31 2002-03-13 Lexicon Genetics Incorporated Human kinase proteins and polynucleotides encoding the same
WO2002020753A2 (en) * 2000-09-01 2002-03-14 Lexicon Genetics Incorporated Human gaba transporter protein and polynucleotides encoding the same
US6395504B1 (en) 2000-09-01 2002-05-28 New Horizons Diagnostics Corp. Use of phage associated lytic enzymes for the rapid detection of bacterial contaminants
AU2001290744A1 (en) * 2000-09-11 2002-03-26 University Of Rochester Method of identifying putative antibiotic resistance genes
JP2004509628A (ja) * 2000-09-21 2004-04-02 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド 組換えポリヌクレオチドの製造方法
US20020142324A1 (en) * 2000-09-22 2002-10-03 Xun Wang Fungal target genes and methods to identify those genes
AU2001291162A1 (en) * 2000-09-25 2002-04-08 Regents Of The University Of Michigan Production of viral vectors
US20040091920A1 (en) * 2000-09-27 2004-05-13 Mitsubishi Chemical Corporation Method of constructing a mutant DNA library and use thereof
US6787352B2 (en) 2000-09-27 2004-09-07 Lexicon Genetics Incorporated Polynucleotides encoding human ion-exchanger proteins
AU2001292254A1 (en) * 2000-09-27 2002-04-08 Mitsubishi Chemical Corporation Method of constructing mutant dna library and utilization thereof
US6777232B1 (en) * 2000-10-02 2004-08-17 Lexicon Genetics Incorporated Human membrane proteins and polynucleotides encoding the same
AU2002230390A1 (en) * 2000-10-05 2002-04-29 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Ixodes scapularis tissue factor pathway inhibitor
US20020155460A1 (en) * 2000-10-10 2002-10-24 Genencor International Inc. Information rich libraries
AU2002213183A1 (en) 2000-10-12 2002-04-22 Lexicon Genetics Incorporated Human kinases and polynucleotides encoding the same
EP1975229A3 (en) 2000-10-13 2009-03-18 Novozymes A/S Alpha-amylase variant with altered properties
WO2002031133A1 (en) 2000-10-13 2002-04-18 Novozymes A/S Subtilase variants
US7001763B1 (en) 2000-10-17 2006-02-21 Lexicon Genetics Incorporated Human semaphorin proteins and polynucleotides encoding the same
US7045283B2 (en) 2000-10-18 2006-05-16 The Regents Of The University Of California Methods of high-throughput screening for internalizing antibodies
EP1624062A3 (en) * 2000-10-27 2006-02-22 Lexicon Genetics Incorporated Human 7tm proteins and polynucleotides encoding them
CA2427701A1 (en) * 2000-10-30 2002-05-10 Lexicon Genetics Incorporated Human 7tm proteins and polynucleotides encoding the same
US7060442B2 (en) * 2000-10-30 2006-06-13 Regents Of The University Of Michigan Modulators on Nod2 signaling
US7202070B2 (en) * 2000-10-31 2007-04-10 Biocatalytics, Inc. Method for reductive amination of a ketone using a mutated enzyme
EP1404841B1 (en) 2000-10-31 2011-08-17 Eisai Inc. Cyp1b1 nucleic acids and methods of use
ATE336571T1 (de) * 2000-11-01 2006-09-15 Lexicon Genetics Inc Polynukleotide die für humane meltrin beta (adam19) metalloendopeptidasen kodieren
EP1333854A4 (en) * 2000-11-02 2005-10-05 New Horizons Diagnostics Corp USE OF BACTERIAL PHAGS IN CONNECTION WITH LYSEENZYMS FOR PREVENTING FOOD DRUGS
WO2002038757A1 (en) * 2000-11-10 2002-05-16 Amicogen, Inc. Method for generating recombinant dna library using unidirectional single-stranded dna fragments
EP1349932A2 (en) * 2000-11-15 2003-10-08 Lexicon Genetics Incorporated Novel human secreted proteins and polynucleotides encoding the same
CA2429544C (en) * 2000-11-17 2010-10-19 University Of Rochester In vitro methods of producing and identifying immunoglobulin molecules in eukaryotic cells
EP1830190A3 (en) * 2000-11-17 2008-07-09 University Of Rochester In vitro methods of producing and identifying immunoglobulin molecules in eukaryotic cells
AU2002228633A1 (en) 2000-11-20 2002-06-03 Lexicon Genetics Incorporated Human kinases and polynucleotides encoding the same
AU1994402A (en) 2000-11-28 2002-06-11 Mediummune Inc Methods of administering/dosing anti-rsv antibodies for prophylaxis and treatment
US7211414B2 (en) 2000-12-01 2007-05-01 Visigen Biotechnologies, Inc. Enzymatic nucleic acid synthesis: compositions and methods for altering monomer incorporation fidelity
JP2004517622A (ja) * 2000-12-11 2004-06-17 レキシコン・ジェネティクス・インコーポレーテッド 新規ヒトキナーゼ及び該キナーゼをコードするポリヌクレオチド
WO2002048333A2 (en) * 2000-12-12 2002-06-20 Lexicon Genetics Incorporated Novel human kinases and uses thereof
US6958213B2 (en) * 2000-12-12 2005-10-25 Alligator Bioscience Ab Method for in vitro molecular evolution of protein function
WO2002048402A2 (en) 2000-12-13 2002-06-20 Nugen Technologies, Inc. Methods and compositions for generation of multiple copies of nucleic acid sequences and methods of detection thereof
DE10062086A1 (de) * 2000-12-13 2002-07-04 Wella Ag Mittel und Verfahren zum Färben von Keratinfasern
US6583269B1 (en) 2000-12-18 2003-06-24 Lexicon Genetics Incorporated Human protease inhibitor and polynucleotides encoding the same
US6852844B1 (en) * 2000-12-20 2005-02-08 Lexicon Genetics Incorporated Human protocadherin proteins and polynucleotides encoding the same
AU2002227377A1 (en) * 2000-12-20 2002-07-01 Lexicon Pharmaceuticals, Inc. Human ion channel protein and polynucleotides encoding the same
US20020150895A1 (en) * 2000-12-22 2002-10-17 Raymond Wheeler Method and apparatus for filtering and extending RNA alignment coverage
US20020086292A1 (en) * 2000-12-22 2002-07-04 Shigeaki Harayama Synthesis of hybrid polynucleotide molecules using single-stranded polynucleotide molecules
US7070973B2 (en) * 2000-12-26 2006-07-04 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Butyrylcholinesterase variants and methods of use
WO2002059325A2 (en) 2000-12-27 2002-08-01 Lexicon Genetics Incorporated Human kinases and polynucleotides encoding the same
US20020119522A1 (en) * 2000-12-28 2002-08-29 Friddle Carl Johan Novel human ion channel-related proteins and polynucleotides encoding the same
WO2002053753A2 (en) * 2001-01-05 2002-07-11 Lexicon Genetics Incorporated Novel human lipase and polynucleotides encoding the same
CA2435394C (en) * 2001-01-22 2018-01-09 Sangamo Biosciences, Inc. Modified zinc finger binding proteins
US20030104402A1 (en) * 2001-01-23 2003-06-05 University Of Rochester Methods of producing or identifying intrabodies in eukaryotic cells
WO2002059287A2 (en) * 2001-01-23 2002-08-01 Lexicon Genetics Incorporated Novel human kinases and polynucleotides encoding the same
EP1356059A1 (en) * 2001-01-24 2003-10-29 Lexicon Genetics Incorporated Human lipase and polynucleotides encoding the same
US20020127674A1 (en) * 2001-02-02 2002-09-12 Xuanchuan Yu Novel human transporter protein and polynucleotides encoding the same
WO2002062822A2 (en) * 2001-02-02 2002-08-15 University Of Rochester Methods of identifying regulator molecules
EP1683865A3 (en) 2001-02-02 2006-10-25 Eli Lilly & Company Mammalian proteins and in particular CD200
WO2002064612A2 (en) 2001-02-09 2002-08-22 Human Genome Sciences, Inc. Human g-protein chemokine receptor (ccr5) hdgnr10
CA2473197A1 (en) * 2001-02-20 2002-08-29 Lexicon Genetics Incorporated Novel human protease and polynucleotides encoding the same
US6849449B2 (en) * 2001-03-01 2005-02-01 Regents Of The University Of Michigan Orphanin FQ receptor nucleic acids
KR20030082535A (ko) 2001-03-09 2003-10-22 뉴젠 테크놀로지스 인코포레이티드 Ｒｎａ 서열의 증폭을 위한 방법 및 조성물
AU2002245593A1 (en) * 2001-03-12 2002-09-24 Lexicon Genetics Incorporated Novel human dectin proteins and polynucleotides encoding the same
CA2440563A1 (en) * 2001-03-12 2002-09-19 Lexicon Genetics Incorporated Novel human egf-family proteins and polynucleotides encoding the same
WO2002072774A2 (en) * 2001-03-12 2002-09-19 Lexicon Genetics Incorporated Novel human transporter proteins and polynucleotides encoding the same
US6994995B1 (en) * 2001-03-16 2006-02-07 Lexicon Genetics Incorporated Human synaptotagmin and polynucleotides encoding the same
US7070928B2 (en) 2001-03-19 2006-07-04 President And Fellows Of Harvard College Evolving new molecular function
US7807408B2 (en) * 2001-03-19 2010-10-05 President & Fellows Of Harvard College Directed evolution of proteins
US7678554B2 (en) 2001-03-19 2010-03-16 President And Fellows Of Harvard College Nucleic acid shuffling
WO2002074932A2 (en) 2001-03-20 2002-09-26 Lexicon Genetics Incorporated Novel human kinase and polynucleotides encoding the same
US20030049619A1 (en) * 2001-03-21 2003-03-13 Simon Delagrave Methods for the synthesis of polynucleotides and combinatorial libraries of polynucleotides
AR035799A1 (es) 2001-03-30 2004-07-14 Syngenta Participations Ag Toxinas insecticidas aisladas de bacillus thuringiensis y sus usos.
EP1383879A4 (en) 2001-04-06 2005-05-11 Lexicon Genetics Inc HUMAN KINASES AND POLYNUCLEOTIDES ENCODING SAME
FR2823219B1 (fr) * 2001-04-10 2003-07-04 Pasteur Institut Mutants de la desoxycytidine kinase possedant une activite enzymatique elargie
US6644173B2 (en) * 2001-04-11 2003-11-11 Keuring, Incorporated Beverage filter cartridge holder
DE60236646D1 (de) 2001-04-13 2010-07-22 Human Genome Sciences Inc Anti-VEGF-2 Antikörper
AU2002307340A1 (en) * 2001-04-16 2002-10-28 California Institute Of Technology Peroxide-driven cytochrome p450 oxygenase variants
US6607895B2 (en) 2001-04-16 2003-08-19 Lexicon Genetics Incorporated Human adenylsuccinate synthetase and polynucleotides encoding the same
CA2444195A1 (en) * 2001-04-19 2002-10-31 Invitrogen Corporation Compositions and methods for recombinational cloning of nucleic acid molecules
FR2824073B1 (fr) * 2001-04-25 2003-12-19 Proteus Procede de creation in vitro de sequences polynucleotidiques recombinees par ligation orientee
WO2002088313A2 (en) * 2001-04-30 2002-11-07 Lexicon Genetics Incorporated Novel human nuclear transporters and polynucleotides encoding the same
WO2002090496A2 (en) * 2001-05-03 2002-11-14 Rensselaer Polytechnic Institute Novel methods of directed evolution
EP1950305A1 (en) 2001-05-09 2008-07-30 Monsanto Technology, LLC Tyr a genes and uses thereof
CA2446967A1 (en) * 2001-05-09 2002-11-14 Lexicon Genetics Incorporated Novel human kinases and polynucleotides encoding the same
US7498158B2 (en) 2001-05-15 2009-03-03 Novozymes A/S Alpha-amylase variant with altered properties
AU2002342955A1 (en) * 2001-05-17 2002-11-25 Proteus Method of preparing polynucleotide fragments for use in shuffling, and shuffling of same
NZ528260A (en) 2001-05-18 2005-09-30 Danisco Method of improving dough and bread quality with the addition of an enzyme that hydrolyses a glycolipid and a phospholipid and incapable of hydrolysing a triglyceride or monoglyceride
WO2002094992A2 (en) * 2001-05-18 2002-11-28 Rigel Pharmaceuticals, Incorporated Directed evolution of protein in mammalian cells
JP2004532636A (ja) * 2001-05-21 2004-10-28 インヴィトロジェン コーポレーション 核酸分子の単離に用いるための組成物および方法
CN100594935C (zh) 2001-05-25 2010-03-24 人体基因组科学有限公司 免疫特异性结合trail受体的抗体
WO2002097095A1 (en) * 2001-05-25 2002-12-05 Lexicon Genetics Incorporated Novel human transporter proteins and polynucleotides encoding the same
JP2005500829A (ja) 2001-05-29 2005-01-13 レキシコン・ジェネティクス・インコーポレーテッド 新規ヒト水酸化酵素及び該酵素をコードするポリヌクレオチド
US20030044980A1 (en) * 2001-06-05 2003-03-06 Gorilla Genomics, Inc. Methods for low background cloning of DNA using long oligonucleotides
JP4242761B2 (ja) 2001-06-06 2009-03-25 ノボザイムス アクティーゼルスカブ エンド−β−１，４−グルカナーゼ
US20030027301A1 (en) * 2001-06-14 2003-02-06 Yi Hu Novel human transporter proteins and polynucleotides encoding the same
EP1401850A1 (en) 2001-06-20 2004-03-31 Nuevolution A/S Nucleoside derivatives for library preparation
EP1925672A1 (en) 2001-06-22 2008-05-28 Syngeta Participations AG Abiotic stress responsive polynucleotides and polypeptides
EP2333070A3 (en) 2001-06-22 2011-09-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Defensin polynucleotides and methods of use
DK2277997T3 (da) 2001-06-26 2013-12-02 Novozymes As Polypeptider med cellobiohydrolase I-aktivitet og polynukleotider, der koder for samme
CA2453864A1 (en) * 2001-06-27 2003-01-09 F. Hoffmann-La Roche Ag A walk-through technique for in vitro recombination of polynucleotide sequences
GB0115841D0 (en) 2001-06-28 2001-08-22 Medical Res Council Ligand
WO2003004609A2 (en) * 2001-07-03 2003-01-16 Lexicon Genetics Incorporated Novel human kielin-like proteins and polynucleotides encoding the same
DK200101090A (da) 2001-07-12 2001-08-16 Novozymes As Subtilase variants
US20040213765A1 (en) * 2001-07-13 2004-10-28 Vincent Fischetti Use of bacterial phage associated lytic enzymes to prevent food poisoning
WO2003008624A2 (en) * 2001-07-15 2003-01-30 Keck Graduate Institute Nucleic acid amplification using nicking agents
EP1277835A1 (en) * 2001-07-19 2003-01-22 Libragen Methods of creating genetic diversity
WO2003008563A2 (en) * 2001-07-20 2003-01-30 California Institute Of Technology Improved cytochrome p450 oxygenases
US7402383B2 (en) 2001-07-23 2008-07-22 Dsm Ip Assets B.V. Process for preparing variant polynucleotides
US6867189B2 (en) * 2001-07-26 2005-03-15 Genset S.A. Use of adipsin/complement factor D in the treatment of metabolic related disorders
US8067556B2 (en) 2001-07-26 2011-11-29 Agilent Technologies, Inc. Multi-site mutagenesis
US6833441B2 (en) * 2001-08-01 2004-12-21 Abmaxis, Inc. Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers
US6943001B2 (en) * 2001-08-03 2005-09-13 Diversa Corporation Epoxide hydrolases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
CA2456229A1 (en) * 2001-08-03 2003-02-13 Diversa Corporation Epoxide hydrolases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
US6987079B2 (en) * 2001-08-14 2006-01-17 W.R. Grace & Co.-Conn. Supported catalyst systems
CA2457298A1 (en) * 2001-08-14 2003-02-27 Lexicon Genetics Incorporated Novel human collagen proteins and polynucleotides encoding the same
EP1427821B1 (en) * 2001-08-20 2007-06-20 Regenesis Bioremediation Products Biosensor for small molecule analytes
US7647184B2 (en) * 2001-08-27 2010-01-12 Hanall Pharmaceuticals, Co. Ltd High throughput directed evolution by rational mutagenesis
BR0212070A (pt) 2001-08-29 2004-09-28 Genentech Inc ácidos nucléicos e polipeptìdeos bv8 com atividade mitogênica
WO2003020936A1 (en) * 2001-08-31 2003-03-13 The Dow Chemical Company Nucleic acid compositions conferring altered metabolic characteristics
KR100428998B1 (ko) * 2001-09-10 2004-04-28 한국과학기술원 모체 단백질과는 크기와 서열이 다른 단백질의 변이집단을생산하는 방법
EP1438428A4 (en) * 2001-09-14 2005-11-16 Univ Queensland EVIDENCE OF METHYLATION OF DNA
EP1436385A4 (en) * 2001-09-14 2005-12-14 Invitrogen Corp DNA POLYMERASES AND MUTANTS CORRESPONDING
US7108975B2 (en) * 2001-09-21 2006-09-19 Regents Of The University Of Michigan Atlastin
US7582425B2 (en) * 2001-09-21 2009-09-01 The Regents Of The University Of Michigan Atlastin
WO2003027330A1 (en) * 2001-09-25 2003-04-03 Xencor Rna dependent rna polymerase mediated protein evolution
DE10147074A1 (de) * 2001-09-25 2003-05-08 Beru Ag Verfahren zum Betreiben einer aus mehreren Heizelementen bestehenden mehrstufigen elektrischen Heizung
WO2003029456A1 (en) 2001-10-01 2003-04-10 Dyax Corp. Multi-chain eukaryotic display vectors and uses thereof
US8008252B2 (en) 2001-10-10 2011-08-30 Novo Nordisk A/S Factor VII: remodeling and glycoconjugation of Factor VII
EP2042196B1 (en) 2001-10-10 2016-07-13 ratiopharm GmbH Remodelling and glycoconjugation of Granulocyte Colony Stimulating Factor (G-CSF)
US7173003B2 (en) * 2001-10-10 2007-02-06 Neose Technologies, Inc. Granulocyte colony stimulating factor: remodeling and glycoconjugation of G-CSF
US7157277B2 (en) 2001-11-28 2007-01-02 Neose Technologies, Inc. Factor VIII remodeling and glycoconjugation of Factor VIII
US7214660B2 (en) 2001-10-10 2007-05-08 Neose Technologies, Inc. Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin
US20040005709A1 (en) * 2001-10-24 2004-01-08 Hoogenboom Henricus Renerus Jacobus Mattheus Hybridization control of sequence variation
EP1440083B1 (en) 2001-10-25 2013-01-02 Medical Research Council Molecules
EP1840211A1 (en) 2001-10-31 2007-10-03 Danisco A/S Pyranosone dehydratase from phanerochaete chrysosporium
US7175983B2 (en) * 2001-11-02 2007-02-13 Abmaxis, Inc. Adapter-directed display systems
WO2003050914A1 (en) * 2001-12-05 2003-06-19 E-Tenna Corporation Capacitively-loaded bent-wire monopole on an artificial magnetic conductor
US6989261B2 (en) * 2001-12-20 2006-01-24 Eli Lilly And Company Butyrylcholinesterase variant polypeptides with increased catalytic efficiency and methods of use
DE10162728A1 (de) 2001-12-20 2003-07-10 Henkel Kgaa Neue Alkalische Protease aus Bacillus gibsonii (DSM 14393) und Wasch-und Reinigungsmittel enthaltend diese neue Alkalische Protease
DE10162727A1 (de) 2001-12-20 2003-07-10 Henkel Kgaa Neue Alkalische Protease aus Bacillus gibsonii (DSM 14391) und Wasch-und Reinigungsmittel enthaltend diese neue Alkalische Protease
US7049121B2 (en) * 2001-12-20 2006-05-23 Applied Molecular Evolution Butyrylcholinesterase variant polypeptides with increased catalytic efficiency and methods of use
DE10163884A1 (de) 2001-12-22 2003-07-10 Henkel Kgaa Neue Alkalische Protease aus Bacillus sp. (DSM 14392) und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend diese neue Alkalische Protease
MY139056A (en) * 2001-12-28 2009-08-28 Ab Enzymes Gmbh Microbially-expressed thermotolerant phytase for animal feed
KR100475305B1 (ko) * 2002-01-08 2005-03-10 주식회사 마이크로아이디 단일가닥 특이적인 ｄｎａ 절단효소 엑소뉴클리아제ⅶ을 이용하여 키메라 ｄｎａ 라이브러리를 만드는 방법
US20040009498A1 (en) * 2002-01-14 2004-01-15 Diversa Corporation Chimeric antigen binding molecules and methods for making and using them
JP2005523688A (ja) * 2002-01-18 2005-08-11 ブリストル−マイヤーズ　スクイブ　カンパニー タンパク質チロシンキナーゼおよび／またはタンパク質チロシンキナーゼ経路と相互作用する化合物の活性を予測するためのポリヌクレオチドおよびポリペプチドの同定
US7262054B2 (en) * 2002-01-22 2007-08-28 Sangamo Biosciences, Inc. Zinc finger proteins for DNA binding and gene regulation in plants
DE20200926U1 (de) * 2002-01-23 2002-04-18 Hegenscheidt-MFD GmbH & Co. KG, 41812 Erkelenz Festwalzgerät einer Festwalzmaschine für Kurbelwellen
US20040096826A1 (en) * 2002-01-30 2004-05-20 Evans Glen A. Methods for creating recombination products between nucleotide sequences
US7255986B2 (en) * 2002-01-31 2007-08-14 The Board Of Trustees Operating Michigan State University Compositions for the diagnosis and treatment of epizootic catarrhal enteritis in ferrets
PT1476539E (pt) 2002-02-12 2009-04-09 Pfizer Prod Inc Gene streptomyces avermitilis que dirige a proporção de avermectinas b2:b1
AU2002306484A1 (en) 2002-02-13 2003-09-04 Dow Global Technologies Inc. Over-expression of extremozyme genes in pseudomonads and closely related bacteria
US20030224404A1 (en) * 2002-02-25 2003-12-04 Manuel Vega High throughput directed evolution of nucleic acids by rational mutagenesis
WO2003072054A2 (en) * 2002-02-25 2003-09-04 Cabot Corporation Custom ligand design for biomolecular filtration and purification for bioseperation
IL162811A0 (en) * 2002-02-26 2005-11-20 Du Pont Method for the recombination of genetic elements
WO2003072742A2 (en) * 2002-02-27 2003-09-04 California Institute Of Technology Novel glucose 6-oxidases
NZ535044A (en) * 2002-03-01 2008-12-24 Ravgen Inc Non-invasive method to determine the genetic sequence of foetal DNA from a sample from a pregnant female thereby detecting any alternation in gene sequence as compared with the wild type sequence
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
WO2003075129A2 (en) 2002-03-01 2003-09-12 Maxygen, Inc. Methods, systems, and software for identifying functional bio-molecules
US6977162B2 (en) 2002-03-01 2005-12-20 Ravgen, Inc. Rapid analysis of variations in a genome
US7244592B2 (en) * 2002-03-07 2007-07-17 Dyax Corp. Ligand screening and discovery
US7620500B2 (en) 2002-03-09 2009-11-17 Maxygen, Inc. Optimization of crossover points for directed evolution
AU2003222269A1 (en) * 2002-03-11 2003-09-29 Nugen Technologies, Inc. Methods for generating double stranded dna comprising a 3' single stranded portion and uses of these complexes for recombination
DE60324778D1 (de) * 2002-03-15 2009-01-02 Nuevolution As Eine verbesserte methode zur synthese von matritzenabhängigen molekülen
US20050247001A1 (en) * 2002-03-15 2005-11-10 Nuevolution A/S Building block forming a c-c or a c-hetero atom bond uponreaction
AU2003218630A1 (en) * 2002-03-15 2003-09-29 Nuevolution A/S A building block capable of functional entity transfer to nucleophil
US10731151B2 (en) 2002-03-15 2020-08-04 Nuevolution A/S Method for synthesising templated molecules
US20050221318A1 (en) * 2002-03-15 2005-10-06 Gouliaev Alex H Building block forming a c-c bond upon reaction
US7598430B2 (en) * 2002-03-20 2009-10-06 J.R. Simplot Company Refined plant transformation
US20050034188A1 (en) * 2002-03-20 2005-02-10 J. R. Simplot Company Refined plant transformation
DE60332711D1 (de) 2002-03-22 2010-07-08 Bayer Bioscience Nv Neue insektizide proteine von bazillus thuringiensis
US20030186301A1 (en) * 2002-03-25 2003-10-02 The Regents Of The University Of California Constructing user-defined, long DNA sequences
US20030228598A1 (en) * 2002-03-25 2003-12-11 The Regents Of The University Of California DNA/RNA as a write/read medium
US20030180781A1 (en) * 2002-03-25 2003-09-25 The Regents Of The University Of California Constructing very long DNA sequences from synthetic DNA molecules
US7452666B2 (en) * 2002-03-25 2008-11-18 Lawrence Livermore National Security, Llc Synthesis of DNA
WO2003085093A2 (en) * 2002-04-01 2003-10-16 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that specifically bind to gmad
WO2003087763A2 (en) 2002-04-03 2003-10-23 Celltech R & D, Inc. Association of polymorphisms in the sost gene region with bone mineral density
JP2005535572A (ja) 2002-04-12 2005-11-24 メディミューン，インコーポレーテッド 組換え抗インターロイキン−９抗体
PT1497418E (pt) 2002-04-19 2013-01-25 Dsm Ip Assets Bv Fosfolípases, ácidos nucleicos que as codificam e métodos para as preparar e utilizar
US7226771B2 (en) 2002-04-19 2007-06-05 Diversa Corporation Phospholipases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
US6776751B2 (en) * 2002-04-22 2004-08-17 Kendor Laboratory Products, Lp Rotor cover attachment apparatus
US7727720B2 (en) 2002-05-08 2010-06-01 Ravgen, Inc. Methods for detection of genetic disorders
US20070178478A1 (en) * 2002-05-08 2007-08-02 Dhallan Ravinder S Methods for detection of genetic disorders
US7442506B2 (en) 2002-05-08 2008-10-28 Ravgen, Inc. Methods for detection of genetic disorders
AU2003241449B2 (en) 2002-05-14 2009-03-05 Dsm Ip Assets B.V. Carotene synthase gene and uses therefor
CA2485506C (en) * 2002-05-17 2012-02-28 Alligator Bioscience Ab A method for in vitro molecular evolution of protein function
DE10222858A1 (de) 2002-05-23 2003-12-04 Basf Ag Verfahren zur fermentativen Herstellung schwefelhaltiger Feinchemikalien
US7425618B2 (en) 2002-06-14 2008-09-16 Medimmune, Inc. Stabilized anti-respiratory syncytial virus (RSV) antibody formulations
US7132100B2 (en) 2002-06-14 2006-11-07 Medimmune, Inc. Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations
ATE386810T1 (de) * 2002-06-14 2008-03-15 Dyax Corp Rekombination von nukleinsäurebibliotheksmitgliedern
CA2490004A1 (en) * 2002-06-20 2003-12-31 Board Of Trustees Operating Michigan State University Plastid division and related genes and proteins, and methods of use
MXPA04012496A (es) * 2002-06-21 2005-09-12 Novo Nordisk Healthcare Ag Glicoformos del factor vii pegilados.
EP1600459A3 (en) * 2002-06-28 2005-12-07 Domantis Limited Ligand
US9321832B2 (en) 2002-06-28 2016-04-26 Domantis Limited Ligand
WO2004002223A2 (en) 2002-06-28 2004-01-08 Dow Agrosciences Llc Pesticidally active proteins and polynucleotides obtainable from paenibacillus species
US20060002935A1 (en) 2002-06-28 2006-01-05 Domantis Limited Tumor Necrosis Factor Receptor 1 antagonists and methods of use therefor
US20040219516A1 (en) * 2002-07-18 2004-11-04 Invitrogen Corporation Viral vectors containing recombination sites
CA2851035C (en) 2002-07-18 2018-05-29 Stanislaw Flasinski Methods for using artificial polynucleotides and compositions thereof to reduce transgene silencing
US7560260B2 (en) 2002-07-25 2009-07-14 Bio-Rad Laboratories, Inc. Compositions with polymerase activity
WO2004013070A2 (en) 2002-08-01 2004-02-12 Nuevolution A/S Multi-step synthesis of templated molecules
EP2275536A1 (en) 2002-08-06 2011-01-19 Verdia, Inc. AP1 amine oxidase variants
US20040067532A1 (en) * 2002-08-12 2004-04-08 Genetastix Corporation High throughput generation and affinity maturation of humanized antibody
WO2004016750A2 (en) 2002-08-14 2004-02-26 Macrogenics, Inc. FcϜRIIB-SPECIFIC ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
WO2004016767A2 (en) * 2002-08-19 2004-02-26 The President And Fellows Of Harvard College Evolving new molecular function
US7361635B2 (en) 2002-08-29 2008-04-22 Sangamo Biosciences, Inc. Simultaneous modulation of multiple genes
CA2498319A1 (en) * 2002-09-09 2004-03-18 Nautilus Biotech Rational evolution of cytokines for higher stability, the cytokines and encoding nucleic acid molecules
US20060020396A1 (en) * 2002-09-09 2006-01-26 Rene Gantier Rational directed protein evolution using two-dimensional rational mutagenesis scanning
US20050202438A1 (en) * 2002-09-09 2005-09-15 Rene Gantier Rational directed protein evolution using two-dimensional rational mutagenesis scanning
US7563600B2 (en) 2002-09-12 2009-07-21 Combimatrix Corporation Microarray synthesis and assembly of gene-length polynucleotides
PT1546336E (pt) 2002-09-18 2012-04-09 Mendel Biotechnology Inc Polinucleótidos e polipéptidos em plantas
WO2004029207A2 (en) 2002-09-27 2004-04-08 Xencor Inc. Optimized fc variants and methods for their generation
GB0222846D0 (en) 2002-10-03 2002-11-06 Choo Yen Cell culture
US6863731B2 (en) * 2002-10-18 2005-03-08 Controls Corporation Of America System for deposition of inert barrier coating to increase corrosion resistance
JP3447009B1 (ja) * 2002-10-29 2003-09-16 實 平垣 構築物用構成体およびその製造方法
DK3299463T3 (da) 2002-10-30 2020-12-07 Nuevolution As Enzymatisk kodning
TWI319007B (en) 2002-11-06 2010-01-01 Novozymes As Subtilase variants
US7365186B2 (en) * 2002-11-22 2008-04-29 Arborgen, Llc Vascular-preferred promoter sequences and uses thereof
EP2581383A1 (en) 2002-11-25 2013-04-17 Genencor International, Inc. Skin or hair binding peptides
WO2004050041A2 (en) * 2002-12-04 2004-06-17 Applied Molecular Evolution, Inc. Butyrylcholinesterase variants that alter the activity of chemotherapeutic agents
ATE450609T1 (de) 2002-12-19 2009-12-15 Nuevolution As Durch quasizufallsstrukturen und funktionen geführte synthesemethode
US7348168B2 (en) 2002-12-20 2008-03-25 Novozymes A/S Polypeptides having cellobiohydrolase II activity and polynucleotides encoding same
EP1578963B1 (en) 2002-12-20 2015-02-25 Novozymes A/S Galactanase variants
US20050130892A1 (en) * 2003-03-07 2005-06-16 Xencor, Inc. BAFF variants and methods thereof
US20050221443A1 (en) * 2003-01-06 2005-10-06 Xencor, Inc. Tumor necrosis factor super family agonists
US20060014248A1 (en) * 2003-01-06 2006-01-19 Xencor, Inc. TNF super family members with altered immunogenicity
US7553930B2 (en) * 2003-01-06 2009-06-30 Xencor, Inc. BAFF variants and methods thereof
EP2368578A1 (en) 2003-01-09 2011-09-28 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US20050196766A1 (en) 2003-12-24 2005-09-08 Soe Jorn B. Proteins
EP3323887A3 (en) 2003-01-17 2018-09-12 DuPont Nutrition Biosciences ApS Method for the in situ production of an emulsifier in a foodstuff
MXPA05007654A (es) 2003-01-17 2005-09-30 Danisco Metodo.
US7955814B2 (en) 2003-01-17 2011-06-07 Danisco A/S Method
US8709435B2 (en) 2003-01-21 2014-04-29 Biomay Ag Hypallergenic mosaic antigens and methods of making same
MXPA05007615A (es) * 2003-01-21 2005-09-30 Bristol Myers Squibb Co Polinucleotido que codifica una novedosa acil coenzima a, monoacilglicerol aciltransferasa-3 (mgat3), y usos del mismo.
WO2004074462A2 (en) 2003-02-20 2004-09-02 Athenix Corporation Delta-endotoxin genes and methods for their use
US20070026397A1 (en) * 2003-02-21 2007-02-01 Nuevolution A/S Method for producing second-generation library
EP1597394A2 (en) * 2003-02-21 2005-11-23 Nuevolution A/S A method for obtaining structural information about an encoded molecule
EP3508578A1 (en) 2003-03-06 2019-07-10 BASF Enzymes, LLC Amylases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
EP2853593B1 (en) 2003-03-07 2017-10-04 DSM IP Assets B.V. Hydrolases, nucleic acids encoding them and mehods for making and using them
AU2004219592C1 (en) 2003-03-12 2011-02-24 Genentech, Inc. Use of Bv8 and/or EG-VEGF to promote hematopoiesis
JP2006523211A (ja) * 2003-03-14 2006-10-12 ネオス テクノロジーズ インコーポレイテッド 分岐水溶性ポリマーとその複合物
US7915201B2 (en) * 2003-03-20 2011-03-29 Nuevolution A/S Ligational encoding of small molecules
WO2004087882A2 (en) * 2003-03-26 2004-10-14 Washington University Neuregulin protein regulation of synaptic proteins
JP4939929B2 (ja) * 2003-03-26 2012-05-30 ポール，サッドヒル タンパク質分解抗体および共有結合抗体
US9006388B2 (en) 2003-03-26 2015-04-14 Sudhir Paul Covalent attachment of ligands to nucleophilic proteins guided by non-covalent
US8017323B2 (en) * 2003-03-26 2011-09-13 President And Fellows Of Harvard College Free reactant use in nucleic acid-templated synthesis
EP1613643A4 (en) * 2003-03-27 2009-10-28 Sudhir Paul LUPUS ANTIBODIES FOR THE PASSIVE IMMUNE THERAPY OF HIV / AIDS
DK2341136T3 (en) 2003-04-04 2016-09-12 Basf Enzymes Llc Pectate lyases, nucleic acids encoding them, and methods of making and using them
NZ542586A (en) * 2003-04-09 2009-11-27 Biogenerix Ag Method of forming a covalent conjugate between a G-CSF peptide and PEG
WO2006127896A2 (en) * 2005-05-25 2006-11-30 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated factor ix
US8791070B2 (en) 2003-04-09 2014-07-29 Novo Nordisk A/S Glycopegylated factor IX
KR20110094361A (ko) 2003-04-11 2011-08-23 메디뮨 엘엘씨 재조합 ｉｌ­９ 항체 및 그의 용도
JP2006523465A (ja) 2003-04-14 2006-10-19 ニューゲン テクノロジーズ， インコーポレイテッド ランダムにプライミングされる複合プライマーを用いる大規模増幅
US20040214194A1 (en) * 2003-04-17 2004-10-28 Mj Bioworks, Inc. Methods of making hybrid proteins
EP2228379A1 (en) 2003-04-25 2010-09-15 North Carolina State University Lactobacillus acidophilus nucleic acid sequences encoding cell surface protein homologues and uses therefore
US7834147B2 (en) * 2003-04-28 2010-11-16 Childrens Hospital Medical Center Saposin C-DOPS: a novel anti-tumor agent
CA2521284C (en) 2003-04-29 2014-07-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Novel glyphosate-n-acetyltransferase (gat) genes
DK2228440T3 (da) 2003-05-02 2013-01-02 Novozymes Inc Varianter af beta-glucosidaser
US20050009772A1 (en) * 2003-05-06 2005-01-13 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for the treatment of glaucoma and other retinal diseases
CN102766545B (zh) 2003-05-07 2014-08-06 诺维信公司 变体枯草杆菌蛋白酶（枯草杆菌酶）
US7521242B2 (en) 2003-05-09 2009-04-21 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Host cells deficient for mismatch repair and their use in methods for inducing homologous recombination using single-stranded nucleic acids
AU2004240553A1 (en) * 2003-05-09 2004-12-02 Neose Technologies, Inc. Compositions and methods for the preparation of human growth hormone glycosylation mutants
US20070073048A1 (en) 2003-05-15 2007-03-29 Ying Lian Hiv polynucleotides and polypeptides derived from botswana mj4
US7173010B2 (en) * 2003-05-19 2007-02-06 Regents Of The University Of Michigan Orphanin FQ receptor
US7655833B2 (en) * 2003-05-29 2010-02-02 Brookhaven Science Associates, Llc ADS genes for reducing saturated fatty acid levels in seed oils
EP1639081A4 (en) * 2003-06-06 2007-11-07 Arborgen Llc COMPOSITIONS AND METHOD FOR REGULATING POLYSACCHARIDES OF A PLANT CELL
EP1639089A4 (en) * 2003-06-06 2007-12-12 Arborgen Llc TRANSCRIPTION FACTOR
US7381409B2 (en) 2003-06-16 2008-06-03 Celltech R&D, Inc. Antibodies specific for sclerostin and methods of screening and use therefor
US7524664B2 (en) 2003-06-17 2009-04-28 California Institute Of Technology Regio- and enantioselective alkane hydroxylation with modified cytochrome P450
US8603949B2 (en) * 2003-06-17 2013-12-10 California Institute Of Technology Libraries of optimized cytochrome P450 enzymes and the optimized P450 enzymes
EP1633865B1 (en) 2003-06-18 2011-09-28 Bayer Pharma Aktiengesellschaft New biological entities and the use thereof
DE602004027376D1 (de) 2003-06-19 2010-07-08 Novozymes As Proteasen
US7407787B2 (en) 2003-06-23 2008-08-05 North Carolina State University Lactobacillus acidophilus nucleic acids encoding fructo-oligosaccharide utilization compounds and uses thereof
US20050095615A1 (en) * 2003-06-26 2005-05-05 Welch Peter J. Methods and compositions for detecting promoter activity and expressing fusion proteins
BRPI0412279A (pt) 2003-07-02 2006-09-19 Diversa Corp glucanases, ácidos nucléicos codificando as mesmas e métodos para preparar e aplicar os mesmos
US9005625B2 (en) 2003-07-25 2015-04-14 Novo Nordisk A/S Antibody toxin conjugates
EP1660646B1 (en) * 2003-08-11 2014-12-31 California Institute Of Technology Thermostable peroxide-driven cytochrome p450 oxygenase variants and methods of use
CA2535526C (en) 2003-08-11 2015-09-29 Diversa Corporation Laccases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
US20050048617A1 (en) 2003-08-18 2005-03-03 Medimmune, Inc. Humanization of antibodies
US20060228350A1 (en) * 2003-08-18 2006-10-12 Medimmune, Inc. Framework-shuffling of antibodies
US7326782B2 (en) * 2003-08-21 2008-02-05 Wisconsin Alumni Research Foundation Metabolic engineering of viomycin biosynthesis
EP2377931B1 (en) 2003-08-25 2013-05-08 Novozymes Inc. Variants of glycoside hydrolases
CA2536635C (en) * 2003-08-25 2015-05-12 Funzyme Biotechnologies Sa Novel fungal proteins and nucleic acids encoding same
DK1664343T3 (da) 2003-09-09 2014-08-11 Integrigen Inc Fremgangsmåder og sammensætninger til generering af kimcelle humane antistofgener
WO2005026387A1 (en) 2003-09-18 2005-03-24 Nuevolution A/S A method for obtaining structural information concerning an encoded molecule and method for selecting compounds
ATE437650T1 (de) * 2003-10-07 2009-08-15 United Therapeutics Corp Tyrosinasemutante und verfahren zur verwendung davon
CA2542353A1 (en) 2003-10-10 2005-04-21 Xencor, Inc. Protein based tnf-alpha variants for the treatment of tnf-alpha related disorders
EP2284259A3 (en) 2003-10-10 2011-06-15 Novozymes A/S Protease variants
US20050084868A1 (en) * 2003-10-16 2005-04-21 Wolfgang Aehle Generation of stabilized proteins by combinatorial consensus mutagenesis
WO2005040372A1 (en) 2003-10-23 2005-05-06 Novozymes A/S Protease with improved stability in detergents
EP1682656B1 (en) 2003-10-28 2013-09-18 Novozymes Inc. Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same
EP1682566B1 (en) 2003-11-12 2013-06-05 E.I. Du Pont De Nemours And Company Delta-15 desaturases suitable for altering levels of polyunsaturated fatty acids in oleaginous plants and yeast
US7985569B2 (en) 2003-11-19 2011-07-26 Danisco Us Inc. Cellulomonas 69B4 serine protease variants
BRPI0416797A (pt) 2003-11-19 2007-04-17 Genencor Int serina proteases, ácidos nucléicos codificando enzimas de serina e vetores e células hospedeiras incorporando as mesmas
CA2546698A1 (en) * 2003-11-20 2005-06-02 Agency For Science, Technology And Research Method
US7405198B2 (en) * 2003-11-24 2008-07-29 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated erythropoietin
US8633157B2 (en) * 2003-11-24 2014-01-21 Novo Nordisk A/S Glycopegylated erythropoietin
US20080305992A1 (en) 2003-11-24 2008-12-11 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated erythropoietin
US8304189B2 (en) * 2003-12-01 2012-11-06 Life Technologies Corporation Nucleic acid molecules containing recombination sites and methods of using the same
WO2005055946A2 (en) * 2003-12-03 2005-06-23 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor
US20060040856A1 (en) * 2003-12-03 2006-02-23 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated factor IX
US7956032B2 (en) 2003-12-03 2011-06-07 Novo Nordisk A/S Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor
EP1548113B1 (en) * 2003-12-04 2007-01-24 Roche Diagnostics GmbH A method for obtaining circular mutated and/or chimaeric polynucleotides
US20070169227A1 (en) 2003-12-16 2007-07-19 Pioneer Hi-Bred International Inc. Dominant Gene Suppression Transgenes and Methods of Using Same
GB0716126D0 (en) 2007-08-17 2007-09-26 Danisco Process
KR101169265B1 (ko) 2003-12-24 2012-08-02 대니스코 에이/에스 단백질
US7718408B2 (en) 2003-12-24 2010-05-18 Danisco A/S Method
US7338933B2 (en) * 2004-01-08 2008-03-04 Neose Technologies, Inc. O-linked glycosylation of peptides
US7432057B2 (en) * 2004-01-30 2008-10-07 Michigan State University Genetic test for PSE-susceptible turkeys
ES2468366T3 (es) 2004-01-30 2014-06-16 Novozymes Inc. Polip�ptidos con actividad de mejora celulol�tica y polinucle�tidos que los codifican
EP1715736A4 (en) 2004-02-12 2008-09-03 Novozymes Inc POLYPEPTIDES HAVING XYLANASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES ENCODING SAME
HUE028143T2 (en) 2004-02-25 2016-12-28 Pioneer Hi Bred Int New crystalline bacillus thuringiensis polypeptides, polynucleotides, and compositions thereof
JP4891220B2 (ja) 2004-02-25 2012-03-07 ノボザイムス アクティーゼルスカブ 菌類細胞壁分解酵素
WO2005089110A2 (en) * 2004-02-27 2005-09-29 President And Fellows Of Harvard College Polynucleotide synthesis
US7459289B2 (en) 2004-03-08 2008-12-02 North Carolina State University Lactobacillus acidophilus nucleic acid sequences encoding carbohydrate utilization-related proteins and uses therefor
GB0405637D0 (en) 2004-03-12 2004-04-21 Danisco Protein
US7569223B2 (en) * 2004-03-22 2009-08-04 The Rockefeller University Phage-associated lytic enzymes for treatment of Streptococcus pneumoniae and related conditions
WO2005090566A2 (en) * 2004-03-22 2005-09-29 Nuevolution A/S Ligational encoding using building block oligonucleotides
ES2314646T3 (es) 2004-03-22 2009-03-16 Solvay Pharmaceuticals Gmbh Composiciones farmaceuticas por via de productos que contienen lipasa , en particular de pancreatina, que contienen tensioactivos.
EP1786463A4 (en) * 2004-03-26 2009-05-20 Human Genome Sciences Inc ANTIBODY AGAINST NOGO RECEPTOR
US8038996B2 (en) * 2004-03-27 2011-10-18 University Of Arizona Composition and method for cancer treatment
EP1732378B1 (en) 2004-04-02 2013-01-16 CropDesign N.V. Plants overexpressing a NAP1-like protein with increased seed yield a method for making the same
JP2008505853A (ja) 2004-04-13 2008-02-28 クインテセンス バイオサイエンシーズ インコーポレーティッド 細胞傷害性薬剤としての非天然のリボヌクレアーゼ複合体
SI1740039T1 (sl) 2004-04-30 2012-10-30 Dow Agrosciences Llc Novi geni z rezistenco na herbicide
US8633006B2 (en) 2004-06-29 2014-01-21 Novozymes, Inc. Polypeptides having alpha-glucosidase activity and polynucleotides encoding same
US7622125B2 (en) * 2004-05-05 2009-11-24 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Polycistronic HIV vector constructs
KR101083595B1 (ko) * 2004-05-14 2011-11-16 가톨릭대학교 산학협력단 단백질 형질도입 도메인 유전자를 함유하는 재조합베큘로바이러스 발현벡터
US7674621B2 (en) 2004-05-21 2010-03-09 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Plasmids and phages for homologous recombination and methods of use
US9045748B2 (en) 2004-05-27 2015-06-02 Novozymes, Inc. Methods for transforming and expression screening of filamentous fungal cells with a DNA library
US7825293B2 (en) 2004-05-28 2010-11-02 Cropdesign N.V. Plants having improved growth characteristics and a method for making the same
CN101001957B (zh) 2004-06-09 2012-07-04 先锋高级育种国际公司 质体转运肽
ES2461857T3 (es) 2004-06-16 2014-05-21 Dsm Ip Assets B.V. Composiciones y métodos para la decoloración enzimática de clorofila
US20060008844A1 (en) 2004-06-17 2006-01-12 Avidia Research Institute c-Met kinase binding proteins
CA2591858C (en) 2004-06-21 2015-05-05 Novozymes A/S Proteases derived from norcardiopsis
US7985892B1 (en) 2004-06-29 2011-07-26 Dow Agrosciences Llc Truncated Cry35 proteins
AU2005327983B2 (en) 2004-06-30 2008-08-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of protecting plants from pathogenic fungi
MXPA06015054A (es) 2004-07-02 2007-08-07 Pioneer Hi Bred Int Polipeptidos antifungales.
EP3620523A3 (en) 2004-07-05 2020-08-19 Novozymes A/S Alpha-amylase variants with altered properties
EP2439211A1 (en) 2004-07-12 2012-04-11 CropDesign N.V. Plants having improved growth characteristics and method for making the same
WO2006010143A2 (en) 2004-07-13 2006-01-26 Neose Technologies, Inc. Branched peg remodeling and glycosylation of glucagon-like peptide-1 [glp-1]
EA014985B1 (ru) 2004-07-16 2011-04-29 Даниско А/С Способ ферментативного рафинирования пищевых масел гидратацией и применение липидацилтрансферазы для осуществления способа
JP2008507282A (ja) 2004-07-20 2008-03-13 アイソジェニス・インコーポレイテッド 自己免疫および自己抗原に関連する疾患の特異的阻害
US20090292110A1 (en) * 2004-07-23 2009-11-26 Defrees Shawn Enzymatic modification of glycopeptides
WO2006012902A2 (en) 2004-08-02 2006-02-09 Novozymes A/S Creation of diversity in polypeptides
WO2006017694A1 (en) * 2004-08-05 2006-02-16 Biosite Incorporated Compositions and methods for phage display of polypeptides
US7597884B2 (en) 2004-08-09 2009-10-06 Alios Biopharma, Inc. Hyperglycosylated polypeptide variants and methods of use
US7148051B2 (en) * 2004-08-16 2006-12-12 E. I. Du Pont De Nemours And Company Production of 3-hydroxycarboxylic acid using nitrilase
FI20050753A7 (fi) 2004-09-03 2006-03-04 Licentia Oy Uudet peptidit
EP1799249A2 (en) * 2004-09-10 2007-06-27 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated interferon alpha
US7563443B2 (en) * 2004-09-17 2009-07-21 Domantis Limited Monovalent anti-CD40L antibody polypeptides and compositions thereof
US7728118B2 (en) 2004-09-17 2010-06-01 Promega Corporation Synthetic nucleic acid molecule compositions and methods of preparation
AU2005286770A1 (en) 2004-09-21 2006-03-30 Medimmune, Llc Antibodies against and methods for producing vaccines for respiratory syncytial virus
US7453025B2 (en) 2004-09-22 2008-11-18 Arborgen, Llc Reproductive ablation constructs
US7799906B1 (en) 2004-09-22 2010-09-21 Arborgen, Llc Compositions and methods for modulating lignin of a plant
GB0421598D0 (en) 2004-09-29 2004-10-27 Cambridge Advanced Tech Modification of plant development and morphology
EP2298872A3 (en) 2004-09-30 2011-08-10 Novozymes A/S Polypeptides having lipase activity and polynucleotides encoding same
US7666616B2 (en) 2004-09-30 2010-02-23 Trustees Of Dartmouth College Nucleic acid sequences encoding luciferase for expression in filamentous fungi
AR050895A1 (es) 2004-10-04 2006-11-29 Novozymes As Polipeptidos que tienen actividad de fitasa y polinucleotidos que los codifican
GB0422052D0 (en) 2004-10-04 2004-11-03 Dansico As Enzymes
MX285771B (es) 2004-10-04 2011-04-07 Novozymes As Polipeptidos que tienen avtividad de fitasa y polinucleotidos queridos mama y papa: codifican los mismos.
EP2166098B1 (en) 2004-10-05 2013-11-06 SunGene GmbH Constitutive expression cassettes for regulation of plant expression
HUE034217T2 (en) 2004-10-08 2018-01-29 Dow Agrosciences Llc Certain plants with no saturated fatty acid in the core or a reduced level of saturated fatty acids and seed oil
EP1841452B8 (en) 2004-10-08 2014-06-11 Domantis Limited Single domain antibodies against tnfr1 and methods of use therefor
GB0423139D0 (en) 2004-10-18 2004-11-17 Danisco Enzymes
US20060099626A1 (en) * 2004-10-27 2006-05-11 Harbury Pehr B DNA-templated combinatorial library device and method for use
WO2006047639A2 (en) 2004-10-27 2006-05-04 Medimmune, Inc. Modulation of antibody specificity by tailoring the affinity to cognate antigens
WO2006047669A2 (en) * 2004-10-27 2006-05-04 Monsanto Technology Llc Non-random method of gene shuffling
EP3061461A1 (en) 2004-10-29 2016-08-31 ratiopharm GmbH Remodeling and glycopegylation of fibroblast growth factor (fgf)
US20080108502A1 (en) 2004-10-29 2008-05-08 Cropdesign N.V. Plants Having Improved Growth Characteristics And Method For Making The Same
EP1655364A3 (en) 2004-11-05 2006-08-02 BASF Plant Science GmbH Expression cassettes for seed-preferential expression in plants
US7485423B2 (en) 2004-11-11 2009-02-03 Modular Genetics, Inc. Ladder assembly and system for generating diversity
WO2006053565A2 (en) 2004-11-19 2006-05-26 Novozymes A/S Polypeptides having antimicrobial activity and polynucleotides encoding same
EP1662000B1 (en) 2004-11-25 2011-03-30 SunGene GmbH Expression cassettes for guard cell-preferential expression in plants
EP1666599A3 (en) 2004-12-04 2006-07-12 SunGene GmbH Expression cassettes for mesophyll- and/or epidermis-preferential expression in plants
EP2163634A1 (en) 2004-12-08 2010-03-17 SunGene GmbH Expression cassettes for vascular tissue-preferential expression in plants
EP1669456A3 (en) 2004-12-11 2006-07-12 SunGene GmbH Expression cassettes for meristem-preferential expression in plants
US7198927B2 (en) 2004-12-22 2007-04-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Enzymatic production of glycolic acid
ES2543131T3 (es) 2004-12-22 2015-08-14 Novozymes North America, Inc. Enzimas para tratamiento de almidón
CA2592894C (en) 2004-12-28 2013-08-27 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Improved grain quality through altered expression of gamma-zein protein
JP2008526864A (ja) * 2005-01-06 2008-07-24 ネオス テクノロジーズ インコーポレイテッド 糖断片を用いる糖結合
US9029331B2 (en) * 2005-01-10 2015-05-12 Novo Nordisk A/S Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor
EP1846442B1 (en) 2005-01-13 2010-04-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize cyclo1 gene and promoter
EP1848801A1 (en) * 2005-01-13 2007-10-31 Codon Devices, Inc. Composition and methods for protein design
NZ556605A (en) 2005-01-27 2010-03-26 Cropdesign Nv Plants having increased yield and a method for making the same
HUE025945T2 (en) 2005-02-15 2016-07-28 Univ Duke Anti-CD19 antibodies and their applications in oncology
MX2007010552A (es) 2005-03-02 2009-02-19 Inst Nac De Tecnologia Agropec Plantas de arroz resistentes a herbicidas, polinucleotidos que codifican proteinas de subunidad grande de acido acetohidroxi sintasa resistentes a herbicidas, y sus metodos de uso.
EP2886658A1 (en) 2005-03-10 2015-06-24 BASF Enzymes LLC Lyase enzymes, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
NZ594810A (en) 2005-03-15 2012-12-21 Verenium Corp Cellulases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
CN100577805C (zh) * 2005-03-16 2010-01-06 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种基因改组的方法及所获得的重组基因和编码蛋白
AR052947A1 (es) 2005-03-18 2007-04-11 Novozymes As Polipeptidos que tienen actividad antimicrobiana y polinucleotidos que codifican para los mismos
EP1869192B1 (en) 2005-03-18 2016-01-20 MedImmune, LLC Framework-shuffling of antibodies
CA2601400A1 (en) 2005-03-19 2006-09-28 Medical Research Council Improvements in or relating to treatment and prevention of viral infections
US8715988B2 (en) * 2005-03-28 2014-05-06 California Institute Of Technology Alkane oxidation by modified hydroxylases
US11214817B2 (en) 2005-03-28 2022-01-04 California Institute Of Technology Alkane oxidation by modified hydroxylases
NZ577786A (en) 2005-04-01 2010-10-29 Athenix Corp AXMI-027, a delta-endotoxin genes and methods for its use
EP1871795A4 (en) * 2005-04-08 2010-03-31 Biogenerix Ag COMPOSITIONS AND METHOD FOR PRODUCING GLYCOSYLATION MUTANTS OF A PROTEASE-RESISTANT HUMAN GROWTH HORMONE
US20060269998A1 (en) 2005-04-15 2006-11-30 North Carolina State University Methods and compositions to modulate adhesion and stress tolerance in bacteria
ES2707152T3 (es) 2005-04-15 2019-04-02 Macrogenics Inc Diacuerpos covalentes y usos de los mismos
US8034994B2 (en) 2005-04-19 2011-10-11 Basf Plant Science Gmbh Starchy-endosperm and/or germinating embryo-specific expression in mono-cotyledonous plants
EP1877551B2 (en) 2005-04-27 2014-02-26 Novozymes, Inc. Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same
US7592429B2 (en) * 2005-05-03 2009-09-22 Ucb Sa Sclerostin-binding antibody
US8003108B2 (en) 2005-05-03 2011-08-23 Amgen Inc. Sclerostin epitopes
AU2006244445B2 (en) 2005-05-05 2013-04-18 Duke University Anti-CD19 antibody therapy for autoimmune disease
CN1861789B (zh) * 2005-05-13 2010-04-28 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种综合的基因改组方法及所获得的重组基因和编码蛋白
AR053269A1 (es) 2005-05-16 2007-04-25 Monsanto Technology Llc Plantas y semillas de maiz con mejoramiento de asparagina y proteina
WO2006127423A2 (en) * 2005-05-18 2006-11-30 Codon Devices, Inc. Methods of producing polynucleotide libraries using scarless ligation
US20060263974A1 (en) * 2005-05-18 2006-11-23 Micron Technology, Inc. Methods of electrically interconnecting different elevation conductive structures, methods of forming capacitors, methods of forming an interconnect between a substrate bit line contact and a bit line in DRAM, and methods of forming DRAM memory cell
US20060271262A1 (en) * 2005-05-24 2006-11-30 Mclain Harry P Iii Wireless agricultural network
WO2006127910A2 (en) * 2005-05-25 2006-11-30 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated erythropoietin formulations
US20110003744A1 (en) * 2005-05-25 2011-01-06 Novo Nordisk A/S Glycopegylated Erythropoietin Formulations
WO2006133013A2 (en) * 2005-06-03 2006-12-14 The Regents Of The University Of California Methods of generating protein variants with altered function
ES2569917T3 (es) 2005-06-21 2016-05-13 Xoma (Us) Llc Anticuerpos y fragmentos de los mismos que se unen a IL-1beta
KR20080025174A (ko) 2005-06-23 2008-03-19 메디뮨 인코포레이티드 응집 및 단편화 프로파일이 최적화된 항체 제제
US7582291B2 (en) * 2005-06-30 2009-09-01 The Rockefeller University Bacteriophage lysins for Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium and other bacteria
JP5265356B2 (ja) 2005-07-01 2013-08-14 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 除草剤耐性ヒマワリ植物、除草剤耐性のアセトヒドロキシ酸シンターゼ大サブユニットタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び使用方法
WO2007003660A1 (en) 2005-07-06 2007-01-11 Cropdesign N.V. Plant yield improvement by ste20-like gene expression
ATE529505T1 (de) 2005-07-08 2011-11-15 Novozymes As Subtilase varianten
WO2007009082A1 (en) * 2005-07-12 2007-01-18 Codon Devices, Inc. Compositions and methods for biocatalytic engineering
WO2007008951A1 (en) * 2005-07-12 2007-01-18 Codon Devices, Inc. Compositions and methods for design of non-immunogenic proteins
WO2007011722A2 (en) 2005-07-15 2007-01-25 President And Fellows Of Harvard College Reaction discovery system
EP1907553B1 (en) 2005-07-18 2012-08-22 Pioneer Hi-Bred International Inc. Modified frt recombination sites and methods of use
HUE031042T2 (en) 2005-07-29 2017-06-28 Abbott Laboratories Gmbh Methods for producing pancreatin powder with low viral content
KR20080052570A (ko) 2005-07-29 2008-06-11 타게티드 그로스 인코퍼레이티드 야생형 ｋｒｐ에 의한 활성 사이클린-ｃｄｋ 복합체 억제의우성 음성 돌연변이 ｋｒｐ 단백질 보호
DE102005037351B3 (de) * 2005-08-08 2007-01-11 Geneart Ag Verfahren für die kontinuierliche zielgerichtete Evolution von Proteinen in vitro
HUE029465T2 (en) 2005-08-10 2017-02-28 Macrogenics Inc Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
EP1924280A4 (en) * 2005-08-10 2008-12-10 Acambis Inc VACCINATION AGAINST DENGUE VIRUS INFECTION
US9198871B2 (en) 2005-08-15 2015-12-01 Abbott Products Gmbh Delayed release pancreatin compositions
US11266607B2 (en) 2005-08-15 2022-03-08 AbbVie Pharmaceuticals GmbH Process for the manufacture and use of pancreatin micropellet cores
US20070105755A1 (en) 2005-10-26 2007-05-10 Neose Technologies, Inc. One pot desialylation and glycopegylation of therapeutic peptides
ES2357626T3 (es) * 2005-08-24 2011-04-28 The Rockefeller University Lisinas mutantes de ply-gbs.
ES2343586T3 (es) 2005-08-26 2010-08-04 Novozymes Adenium Biotech A/S Polipeptidos con actividad antimicrobiana y polinucleotidos que codifican los mismos.
US7541431B2 (en) * 2005-09-07 2009-06-02 Maine Medical Center Cristin/R-spondin ligands active in the Wnt signaling pathway and methods, compositions and kits relating thereto
US7939258B2 (en) 2005-09-07 2011-05-10 Nugen Technologies, Inc. Nucleic acid amplification procedure using RNA and DNA composite primers
AR055439A1 (es) 2005-09-15 2007-08-22 Cropdesign Nv Plantas con rendimiento aumentado y metodo para elaborarlas
US8173613B2 (en) * 2005-09-22 2012-05-08 Maine Medical Center Modulation of mesenchymal and metastatic cell growth
EP2385110A3 (en) 2005-09-30 2011-11-16 Novozymes, Inc. Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material
US7312079B1 (en) 2005-10-06 2007-12-25 Lexicon Pharmaceuticals, Inc. Variants of FAM3C
US7470532B2 (en) 2005-10-19 2008-12-30 E.I. Du Pont De Nemours And Company Mortierella alpina C16/18 fatty acid elongase
NZ608188A (en) 2005-10-28 2014-10-31 Dow Agrosciences Llc Novel herbicide resistance genes
WO2007056191A2 (en) * 2005-11-03 2007-05-18 Neose Technologies, Inc. Nucleotide sugar purification using membranes
ES2555659T3 (es) 2005-11-07 2016-01-07 Cropdesign N.V. Plantas que tienen características de crecimiento mejoradas y un procedimiento de producción de las mismas
US8853492B2 (en) 2005-11-07 2014-10-07 Cropdesign N.V. Plants having improved growth characteristics and a method for making the same
AU2006311005B2 (en) 2005-11-08 2013-06-06 Cropdesign N.V. Plants having improved growth characteristics and a method for making the same
US20070118920A1 (en) 2005-11-09 2007-05-24 Basf Agrochemical Products B.V. Herbicide-resistant sunflower plants, polynucleotides encoding herbicide-resistant acetohydroxyacid synthase large subunit proteins, and methods of use
WO2007058833A2 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Dof (dna binding with one finger) sequences and methods of use
US20070199096A1 (en) 2005-11-14 2007-08-23 E.I. Du Pont De Nemours And Company Compositions and Methods for Altering Alpha- and Beta-Tocotrienol Content
EP1965824A4 (en) * 2005-11-18 2011-10-19 Gloucester Pharmaceuticals Inc METABOLITENE DERIVATIVES OF HDAC INHIBITOR FK228
GB2432366B (en) * 2005-11-19 2007-11-21 Alligator Bioscience Ab A method for in vitro molecular evolution of protein function
GB0526664D0 (en) * 2005-11-30 2006-02-08 Plasticell Ltd Method
EP2166106B1 (en) 2005-12-01 2015-02-25 CropDesign N.V. Plants having improved growth characteristics and methods for making the same
LT2336315T (lt) * 2005-12-01 2017-11-10 Nuevolution A/S Fermentiniai kodavimo būdai, skirti efektyviai didelių bibliotekų sintezei
US7674958B2 (en) 2005-12-01 2010-03-09 Athenix Corporation GRG23 and GRG51 genes conferring herbicide resistance
KR100784478B1 (ko) 2005-12-05 2007-12-11 한국과학기술원 기능요소의 동시 삽입에 의한 신기능을 갖는 단백질을제조하는 방법
US20080313769A9 (en) 2006-01-12 2008-12-18 Athenix Corporation EPSP synthase domains conferring glyphosate resistance
EP2216403A3 (en) 2006-02-02 2010-11-24 Verenium Corporation Esterases and related nucleic acids and methods
NZ595501A (en) 2006-02-10 2013-05-31 Verenium Corp Cellulolytic enzymes, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
TR201809912T4 (tr) 2006-02-14 2018-07-23 Bp Corp North America Inc Ksilanazlar, bunları kodlayan nükleik asitler ve bunları yapmak ve kullanmak için yöntemler.
AR059724A1 (es) 2006-03-02 2008-04-23 Athenix Corp Metodos y composiciones para mejorar la actividad enzimatica en plantas transgenicas
WO2007103469A2 (en) 2006-03-06 2007-09-13 Aeres Biomedical Ltd. Humanized anti-cd22 antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease
EP2112227B1 (en) 2006-03-07 2013-05-15 Cargill, Incorporated Aldolases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
EA029538B1 (ru) 2006-03-07 2018-04-30 Басф Энзаймс Ллк Полипептид, обладающий активностью альдолазы, полинуклеотид, кодирующий этот полипептид, и способы получения и применения полинуклеотида и полипептида
US20070214515A1 (en) 2006-03-09 2007-09-13 E.I.Du Pont De Nemours And Company Polynucleotide encoding a maize herbicide resistance gene and methods for use
CN101454444A (zh) 2006-03-20 2009-06-10 诺维信股份有限公司 具有内切葡聚糖酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸
US8703278B2 (en) * 2006-03-28 2014-04-22 Honeywell International Inc. Light weight printed wiring board
CN101460616A (zh) 2006-03-30 2009-06-17 诺维信股份有限公司 具有内切葡聚糖酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸
US8642838B2 (en) 2006-03-31 2014-02-04 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP1842915A1 (en) 2006-04-04 2007-10-10 Libragen Method of in vitro polynucleotide sequences shuffling by recursive circular DNA molecules fragmentation and ligation
AU2007234177B2 (en) 2006-04-04 2012-11-08 Novozymes A/S Phytase variants
BRPI0710455A2 (pt) 2006-04-19 2011-08-16 Pioneer Hi Bred Int polipeptìdeo isolado, polinucleotìdeo isolado e métodos para aumentar o nìvel de um polipeptìdeo em uma planta, para modular o nìvel de um polipeptìdeo em uma planta e para modificar o crescimento de uma planta
CA2649877A1 (en) * 2006-04-24 2007-12-21 Gloucester Pharmaceuticals Gemcitabine combination therapy
DE602007012343D1 (de) 2006-05-16 2011-03-17 Du Pont Antimykotische polypeptide
WO2007137114A2 (en) 2006-05-17 2007-11-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Artificial plant minichromosomes
US20090087840A1 (en) * 2006-05-19 2009-04-02 Codon Devices, Inc. Combined extension and ligation for nucleic acid assembly
US10072256B2 (en) 2006-05-22 2018-09-11 Abbott Products Gmbh Process for separating and determining the viral load in a pancreatin sample
EP2377937A1 (en) 2006-05-30 2011-10-19 CropDesign N.V. Plants with reduced expression of a CLE-like gene having enhanced yield-related traits and a method for making the same
WO2007141189A2 (en) 2006-06-08 2007-12-13 Basf Plant Science Gmbh Plants having improved growth characteristics and method for making the same
WO2007146730A2 (en) * 2006-06-08 2007-12-21 Gloucester Pharmaceuticals Deacetylase inhibitor therapy
MX2008016047A (es) 2006-06-15 2009-05-22 Cropdesign Nv Plantas que tienen rasgos mejorados relacionados con el crecimiento y un metodo para obtener las mismas.
BRPI0712507A2 (pt) 2006-06-15 2011-07-05 Cropdesign Nv método para intensificar caracterìsticas relacionadas ao rendimento em plantas, planta ou parte da mesma, contrução uso de uma construção planta, parte de planta ou célula vegetal, método para a produção de uma planta transgência, partes colhìveis de um planta, produtos, uso de um ácido nucleico, molécula isolada de ácido nucleico, e, polipeptìdeo isolado
EP2455391A3 (en) 2006-06-15 2012-08-22 Athenix Corporation A family of pesticidal proteins and methods for their use
CN104894158B (zh) 2006-06-19 2018-05-25 22世纪有限责任公司 编码n-甲基腐胺氧化酶之核酸及其应用
US8840882B2 (en) * 2006-06-23 2014-09-23 Quintessence Biosciences, Inc. Modified ribonucleases
AU2007281876B2 (en) 2006-06-26 2013-09-05 Macrogenics, Inc. FcgammaRIIB-specific antibodies and methods of use thereof
US7572618B2 (en) 2006-06-30 2009-08-11 Bristol-Myers Squibb Company Polynucleotides encoding novel PCSK9 variants
US20080004410A1 (en) * 2006-06-30 2008-01-03 Yu-Chin Lai Hydrophilic macromonomers having alpha,beta-conjugated carboxylic terminal group and medical devices incorporating same
US7977535B2 (en) 2006-07-12 2011-07-12 Board Of Trustees Of Michigan State University DNA encoding ring zinc-finger protein and the use of the DNA in vectors and bacteria and in plants
EP2043454B1 (en) 2006-07-13 2016-05-04 DSM IP Assets B.V. Use of bacterial amylases in feed for bovine animals
US8298801B2 (en) 2006-07-17 2012-10-30 Quintessence Biosciences, Inc. Methods and compositions for the treatment of cancer
US20080242607A1 (en) * 2006-07-21 2008-10-02 Neose Technologies, Inc. Glycosylation of peptides via o-linked glycosylation sequences
US20100167040A1 (en) * 2006-07-25 2010-07-01 Bayer Bioscience N.V. Identification of a novel type of sucrose synthase and use thereof in fiber modification
CN104099368A (zh) 2006-08-02 2014-10-15 克罗普迪塞恩股份有限公司 具有改良特征的植物及其制备方法
EP2054516B1 (en) 2006-08-02 2014-01-08 CropDesign N.V. Plants having improved characteristics and a method for making the same
US8026085B2 (en) * 2006-08-04 2011-09-27 California Institute Of Technology Methods and systems for selective fluorination of organic molecules
US8252559B2 (en) * 2006-08-04 2012-08-28 The California Institute Of Technology Methods and systems for selective fluorination of organic molecules
DK2069389T3 (en) 2006-08-04 2015-01-12 Bp Corp North America Inc Glucanases, nucleic acids encoding them, and processes for their preparation and use
US7968691B2 (en) * 2006-08-23 2011-06-28 Danisco Us Inc. Pullulanase variants with increased productivity
EA021255B1 (ru) 2006-08-28 2015-05-29 Киова Хакко Кирин Ко., Лимитед Антагонистические моноклональные антитела человека, специфичные в отношении light человека
US8053191B2 (en) * 2006-08-31 2011-11-08 Westend Asset Clearinghouse Company, Llc Iterative nucleic acid assembly using activation of vector-encoded traits
ES2378407T3 (es) 2006-09-01 2012-04-12 Therapeutic Human Polyclonals, Inc. Aumento de la expresión de inmunoglobulina humana o humanizada en animales transgénicos no humanos
EP2061904A2 (en) 2006-09-06 2009-05-27 Ortho-McNeil Pharmaceutical, Inc. Biomarkers for assessing response to c-met treatment
JP5401314B2 (ja) 2006-09-08 2014-01-29 メディミューン，エルエルシー ヒト化抗ｃｄ１９抗体ならびに癌、移植および自己免疫疾患の治療におけるその使用
CA2663001A1 (en) 2006-09-21 2008-03-27 Verenium Corporation Phospholipases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
HUE029140T2 (hu) 2006-09-21 2017-02-28 Basf Enzymes Llc Fitázok, ezeket kódoló nukleinsavak, valamint eljárások az elõállításukra és alkalmazásuk
ES2559059T3 (es) 2006-09-29 2016-02-10 Novozymes A/S Xilanasas para pienso animal
US8969532B2 (en) 2006-10-03 2015-03-03 Novo Nordisk A/S Methods for the purification of polypeptide conjugates comprising polyalkylene oxide using hydrophobic interaction chromatography
BRPI0717505B8 (pt) 2006-10-04 2021-05-25 Novo Nordisk As conjugado de peptídeo e formulação farmacêutica
GB0620715D0 (en) 2006-10-18 2006-11-29 Univ Durham Ethanol production
US20100162433A1 (en) 2006-10-27 2010-06-24 Mclaren James Plants with improved nitrogen utilization and stress tolerance
EP2460828A3 (en) * 2006-11-10 2012-08-08 UCB Pharma, S.A. Antibodies and diagnostics
US20110294782A1 (en) 2006-11-10 2011-12-01 Massachusetts Institute Of Technology Small molecule pak inhibitors
WO2008061013A2 (en) * 2006-11-10 2008-05-22 Amgen Inc. Antibody-based diagnostics and therapeutics
WO2008059048A1 (en) 2006-11-16 2008-05-22 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same using consensus sequences from the yabby protein family
BRPI0718977A2 (pt) 2006-11-24 2014-02-04 Cropdesign Nv Método para aumentar rendimento de sementes em plantas em relação às plantas de controle, construção, uso da mesma, planta, parte de planta ou célula de planta, método para a produção de uma planta transgênica tendo redimento aumentado de sementes em relação às plantas de controle, planta transgênica, partes colhíveis de uma planta, produtos, e, uso de um ácido nucleico
EP2099818A2 (en) 2006-11-29 2009-09-16 Novozymes Inc. Bacillus licheniformis chromosome
EP2089516B1 (en) 2006-11-29 2011-11-16 Novozymes Inc. Methods of improving the introduction of dna into bacterial cells
MX2009006093A (es) * 2006-12-07 2009-06-17 Dow Agrosciences Llc Genes marcadores seleccionables novedosos.
US9862956B2 (en) 2006-12-10 2018-01-09 Danisco Us Inc. Expression and high-throughput screening of complex expressed DNA libraries in filamentous fungi
US8680252B2 (en) 2006-12-10 2014-03-25 Dyadic International (Usa), Inc. Expression and high-throughput screening of complex expressed DNA libraries in filamentous fungi
MX2009005514A (es) 2006-12-15 2009-06-04 Cropdesign Nv Plantas que presentan un incremento de sus rasgos relacionados con el rendimiento y un metodo para producirlas.
CN101583719B (zh) 2006-12-20 2015-03-25 孟山都巴西有限公司 用于改变纤维长度和/或植物高度的核酸构建体和方法
AU2007335208B8 (en) 2006-12-20 2014-08-28 Fibria Celulose S/A Nucleic acid molecules encoding plant proteins in the C3HC4 family and methods for the alteration of plant cellulose and lignin content
BRPI0719449A2 (pt) 2006-12-21 2017-06-20 Syngenta Participations Ag molécula de ácido nucléico isolada, sintética ou recombinante, polipeptídeo isolado, planta ou parte de planta, eículo de clonagem que compreende um ácido nucléico, cassete de expressão que compreende uma molécula de ácido nucléico e método para hidrolisar um polissacarídeo, oligossacarídeo ou amido
BRPI0721100A2 (pt) 2006-12-21 2014-02-11 Basf Plant Science Gmbh Método para intensificar características relacionadas a rendimentos em plantas, e para a produção de uma planta transgênica, planta ou parte de mesma, molécula de ácido nucleico isolado, polipeptídio isolado, construção, usos de uma construção, de um ácido nucleico e de uma sequência de ácido nucleico, planta, parte de planta ou célula vegetal, partes colhíveis de uma planta, e, produtos
JP2010514801A (ja) * 2006-12-29 2010-05-06 グラスター ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド ロミデプシンの精製
CA2674313A1 (en) * 2006-12-29 2008-07-10 Gloucester Pharmaceuticals, Inc. Romidepsin-based treatments for cancer
DE102007003143A1 (de) 2007-01-16 2008-07-17 Henkel Kgaa Neue Alkalische Protease aus Bacillus gibsonii und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend diese neue Alkalische Protease
AU2007344910B2 (en) 2007-01-25 2013-03-28 Dupont Nutrition Biosciences Aps Production of a lipid acyltransferase from transformed Bacillus licheniformis cells
NZ578309A (en) 2007-01-30 2012-06-29 Verenium Corp Enzymes for the treatment of lignocellulosics, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
AR065100A1 (es) 2007-01-30 2009-05-13 Cropdesign Nv Plantas con rasgos relacionados con el rendimiento mejorado y un metodo para producirlas
BRPI0807047A2 (pt) 2007-01-31 2014-04-22 Basf Plant Science Gmbh Método para o aumento da resistência ao estresse abiótico em plantas relativa as plantas de controle, e, usos de uma construção, e de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante a nap1.
WO2008121435A2 (en) * 2007-02-02 2008-10-09 The California Institute Of Technology Methods for generating novel stabilized proteins
US8143046B2 (en) 2007-02-07 2012-03-27 Danisco Us Inc., Genencor Division Variant Buttiauxella sp. phytases having altered properties
KR101502634B1 (ko) 2007-02-08 2015-03-16 코덱시스, 인코포레이티드 케토 환원 효소 및 이의 용도
US20080268517A1 (en) * 2007-02-08 2008-10-30 The California Institute Of Technology Stable, functional chimeric cytochrome p450 holoenzymes
US20090118130A1 (en) 2007-02-12 2009-05-07 Codexis, Inc. Structure-activity relationships
CA2675926A1 (en) 2007-02-16 2008-08-21 Basf Plant Science Gmbh Nucleic acid sequences for regulation of embryo-specific expression in monocotyledonous plants
EP2711425A1 (en) 2007-02-28 2014-03-26 CropDesign N.V. Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
WO2008116878A1 (en) 2007-03-26 2008-10-02 Novozymes A/S Hafnia phytase
US20080248511A1 (en) * 2007-03-26 2008-10-09 Promega Corporation Methods to quench light from optical reactions
US20100209434A1 (en) 2007-03-30 2010-08-19 Medimmune, Llc Antibody formulation
DE102007016139A1 (de) 2007-03-30 2008-10-02 Jenabios Gmbh Verfahren zur regioselektiven Oxygenierung von N-Heterozyklen
CN101796063B (zh) * 2007-04-03 2017-03-22 拉蒂奥法姆有限责任公司 使用糖聚乙二醇化g‑csf的治疗方法
NZ597328A (en) 2007-04-04 2014-03-28 Basf Se Herbicide-resistant brassica plants and methods of use
CN101646761B (zh) 2007-04-09 2013-05-08 诺维信公司 皮脱脂的酶促处理
EP2230310B1 (en) 2007-05-03 2013-01-16 BASF Plant Science GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2164868B1 (en) 2007-05-04 2015-03-25 Technophage, Investigação E Desenvolvimento Em Biotecnologia, SA Engineered rabbit antibody variable domains and uses thereof
EP2703011A3 (en) 2007-05-07 2014-03-26 MedImmune, LLC Anti-icos antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease
US8298781B2 (en) * 2007-05-08 2012-10-30 Duke University Compositions and methods for characterizing and regulating olfactory sensation
ES2621919T3 (es) 2007-05-09 2017-07-05 Dow Agrosciences Llc Nuevos genes de resistencia a herbicidas
US8044186B2 (en) * 2007-05-11 2011-10-25 Wisconsin Alumni Research Foundation Heterologous production of capreomycin and generation of new capreomycin derivatives through metabolic engineering
DK3072525T3 (en) 2007-05-14 2018-04-30 Astrazeneca Ab PROCEDURES FOR REDUCING BASOFILE CELL LEVELS
EP2172556B1 (en) 2007-05-23 2015-07-22 CropDesign N.V. Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
US8822757B2 (en) 2007-05-25 2014-09-02 National Research Council Of Canada Nucleic acid sequences encoding transcription factors regulating nicotine alkaloid biosynthesis and their use in modifying plant metabolism
CN101679493A (zh) 2007-05-25 2010-03-24 克罗普迪塞恩股份有限公司 在植物中通过调节玉米alfin的产量增强
US20110177029A1 (en) * 2007-06-04 2011-07-21 Novo Nordisk A/S O-linked glycosylation using n-acetylglucosaminyl transferases
US9493499B2 (en) 2007-06-12 2016-11-15 Novo Nordisk A/S Process for the production of purified cytidinemonophosphate-sialic acid-polyalkylene oxide (CMP-SA-PEG) as modified nucleotide sugars via anion exchange chromatography
US7625555B2 (en) * 2007-06-18 2009-12-01 Novagen Holding Corporation Recombinant human interferon-like proteins
CA2691434C (en) 2007-06-21 2020-07-21 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
CA2690563A1 (en) 2007-06-29 2009-01-08 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
US7968811B2 (en) * 2007-06-29 2011-06-28 Harley-Davidson Motor Company Group, Inc. Integrated ignition and key switch
WO2009012357A2 (en) 2007-07-17 2009-01-22 The General Hospital Corporation Methods to identify and enrich for populations of ovarian cancer stem cells and somatic ovarian stem cells and uses thereof
AR067633A1 (es) 2007-07-20 2009-10-21 Basf Plant Science Gmbh Plantas que tienen rasgos aumentados relacionados con el rendimiento y un metodo para producirlas
AR067748A1 (es) 2007-07-31 2009-10-21 Basf Plant Science Gmbh Plantas que tienen rasgos mejorados relacionados con el rendimiento y un metodo para obtenerlas
CA2697186A1 (en) 2007-07-31 2009-02-05 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
US7923236B2 (en) 2007-08-02 2011-04-12 Dyadic International (Usa), Inc. Fungal enzymes
EP2178641B1 (en) * 2007-08-09 2018-04-11 Progenity, Inc. Methods and devices for correlated, multi-parameter single cell measurements and recovery of remnant biological material
EP2195443B1 (en) 2007-08-24 2015-01-07 Codexis, Inc. Improved ketoreductase polypeptides for the stereoselective production of (r)-3-hydroxythiolane
US8207112B2 (en) * 2007-08-29 2012-06-26 Biogenerix Ag Liquid formulation of G-CSF conjugate
CA2736661A1 (en) 2007-09-07 2009-03-12 Dyadic International, Inc. Novel fungal enzymes
US7579155B2 (en) * 2007-09-12 2009-08-25 Transgenomic, Inc. Method for identifying the sequence of one or more variant nucleotides in a nucleic acid molecule
US7749708B2 (en) * 2007-09-12 2010-07-06 Transgenomic, Inc. Method for identifying the sequence of one or more variant nucleotides in a nucleic acid molecule
CA2699066A1 (en) 2007-09-14 2009-03-19 Basf Plant Science Gmbh Plants having increased yield-related traits and a method for making the same comprising expression of a growth-regulating factor (grf) polypeptide
US8877688B2 (en) 2007-09-14 2014-11-04 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
EP3124497B1 (en) 2007-09-14 2020-04-15 Adimab, LLC Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
US12529164B2 (en) 2007-09-14 2026-01-20 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
CL2008002775A1 (es) 2007-09-17 2008-11-07 Amgen Inc Uso de un agente de unión a esclerostina para inhibir la resorción ósea.
EP2193195B1 (en) 2007-09-18 2014-12-17 Novozymes A/S Polypeptides having tyrosinase activity and polynucleotides encoding same
AU2008300478B2 (en) 2007-09-21 2014-11-06 Basf Plant Science Gmbh Plants having increased yield-related traits and a method for making the same
CN110577945A (zh) 2007-10-03 2019-12-17 维莱尼姆公司 木聚糖酶、编码它们的核酸以及其制备和应用方法
JP2010540681A (ja) * 2007-10-08 2010-12-24 クインテッセンス バイオサイエンシズ，インコーポレーテッド リボヌクレアーゼに基づく治療のための組成物及び方法
EP2728006B1 (en) 2007-10-10 2017-11-22 Athenix Corporation Synthetic genes encoding CRY1AC
US20090144852A1 (en) 2007-10-16 2009-06-04 Athenix Corporation Axmi-066 and axmi-076: delta-endotoxin proteins and methods for their use
DE102007051092A1 (de) 2007-10-24 2009-04-30 Henkel Ag & Co. Kgaa Subtilisin aus Becillus pumilus und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend dieses neue Subtilisin
CA2703827A1 (en) 2007-10-29 2009-05-07 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
US7618801B2 (en) * 2007-10-30 2009-11-17 Danison US Inc. Streptomyces protease
US7741088B2 (en) * 2007-10-31 2010-06-22 E.I. Dupont De Nemours And Company Immobilized microbial nitrilase for production of glycolic acid
US7871802B2 (en) * 2007-10-31 2011-01-18 E.I. Du Pont De Nemours And Company Process for enzymatically converting glycolonitrile to glycolic acid
JP5520828B2 (ja) 2007-11-05 2014-06-11 ダニスコ・ユーエス・インク 改変される特徴を有するバシルス種（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．）ＴＳ‐２３アルファ‐アミラーゼ変異体
EP2215110B1 (en) 2007-11-05 2025-07-16 Danisco US Inc. Alpha-amylase variants with altered properties
AR069410A1 (es) 2007-11-22 2010-01-20 Cropdesign Nv Plantas que tienen rasgos incrementados relacionados con el rendimiento y un metodo para producirlas, mediante la insercion de un acido nucleico que codifica para el polipeptido transportador de amonio (amt)
US8697948B2 (en) 2007-11-26 2014-04-15 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
CN101878299A (zh) 2007-11-27 2010-11-03 诺维信公司 具有α-葡糖醛酸糖苷酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸
US20100267067A1 (en) 2007-11-29 2010-10-21 Novozymes A/S Synthase Inhibitor Screening Method
EP2222709B1 (en) 2007-11-30 2016-11-23 Glaxo Group Limited Antigen-binding constructs
EP2224822B1 (en) 2007-12-06 2014-05-21 Novozymes A/S Polypeptides having acetylxylan esterase activity and polynucleotides encoding same
US8318481B2 (en) * 2007-12-07 2012-11-27 Pfenex Inc. High copy number self-replicating plasmids in pseudomonas
JP2011506483A (ja) * 2007-12-14 2011-03-03 アムジエン・インコーポレーテツド 抗スクレロスチン抗体を用いた骨折の治療方法
AU2008343105A1 (en) 2007-12-19 2009-07-09 Novozymes A/S Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
CN101969759A (zh) 2007-12-20 2011-02-09 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物及其制备方法
NZ585870A (en) 2007-12-21 2012-04-27 Danisco Process for edible oil refining using a lipid acyltransferase
EP2238242B9 (en) 2008-01-03 2015-06-10 BASF Enzymes LLC Transferases and oxidoreductases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
US8541220B2 (en) 2008-01-03 2013-09-24 Verenium Corporation Isomerases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
JP5647899B2 (ja) * 2008-01-08 2015-01-07 ラツィオファルム ゲーエムベーハーｒａｔｉｏｐｈａｒｍ ＧｍｂＨ オリゴサッカリルトランスフェラーゼを使用するポリペプチドの複合糖質化
ES2613963T3 (es) 2008-01-18 2017-05-29 Medimmune, Llc Anticuerpos manipulados con cisteína para conjugación específica de sitio
CA2712567A1 (en) 2008-01-25 2009-07-30 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2247733A2 (en) 2008-01-31 2010-11-10 National Institute of Biological Sciences Plants having altered growth and/or development and a method for making the same
CA2713582C (en) 2008-02-04 2017-02-21 Danisco Us Inc. Ts23 alpha-amylase variants with altered properties
WO2009100460A1 (en) * 2008-02-07 2009-08-13 Epic Advertising, Inc. Systems and methods for measuring the effectiveness of advertising
CN101952454B (zh) 2008-02-08 2014-06-04 米迪缪尼有限公司 具有减弱的Fc配体亲和性的抗IFNAR1抗体
EP2088432A1 (en) * 2008-02-11 2009-08-12 MorphoSys AG Methods for identification of an antibody or a target
EP2250594B1 (en) * 2008-02-12 2017-04-19 Codexis, Inc. Method of generating an optimized, diverse population of variants
US8034568B2 (en) 2008-02-12 2011-10-11 Nugen Technologies, Inc. Isothermal nucleic acid amplification methods and compositions
US8504498B2 (en) 2008-02-12 2013-08-06 Codexis, Inc. Method of generating an optimized, diverse population of variants
DK2257311T3 (da) 2008-02-27 2014-06-30 Novo Nordisk As Konjugerede Faktor VIII-Molekyler
GB2470672B (en) 2008-03-21 2012-09-12 Nugen Technologies Inc Methods of RNA amplification in the presence of DNA
US20110020368A1 (en) 2008-03-25 2011-01-27 Nancy Hynes Treating cancer by down-regulating frizzled-4 and/or frizzled-1
US20110020830A1 (en) * 2008-03-31 2011-01-27 Schneider Jane C Design for rapidly cloning one or more polypeptide chains into an expression system
CN102066568A (zh) 2008-04-16 2011-05-18 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物和用于产生该植物的方法
EP2281034B1 (en) 2008-04-30 2015-10-21 DuPont Nutrition Biosciences ApS Process using Pseudoglucanobacter saccharoketogenes alcohol dehydrogenase
US9296810B2 (en) 2008-05-02 2016-03-29 Novartis Ag Fibronectin-based binding molecules and uses thereof
US9017970B2 (en) 2008-05-02 2015-04-28 Cellscript, Llc RNA polyphosphatase compositions, kits, and uses thereof
DE112009000934T5 (de) 2008-05-05 2011-07-14 BASF Plant Science GmbH, 67063 Pflanzen mit verbesserten Ertragsmerkmalen und Verfahren zu ihrer Herstellung
WO2009136293A2 (en) 2008-05-08 2009-11-12 Alellyx Applied Genomics Genes and methods for increasing disease resistance in plants
SG176464A1 (en) 2008-05-09 2011-12-29 Agency Science Tech & Res Diagnosis and treatment of kawasaki disease
CA2723427C (en) 2008-05-23 2018-01-23 E. I. Du Pont De Nemours And Company Novel dgat genes for increased seed storage lipid production and altered fatty acid profiles in oilseed plants
MY159940A (en) 2008-06-06 2017-02-15 Procter & Gamble Detergent composition comprising a variant of a family 44 xyloglucanase
AU2009254546B2 (en) 2008-06-06 2014-09-25 Novozymes A/S Variants of a family 44 xyloglucanase
WO2009149130A2 (en) 2008-06-06 2009-12-10 Danisco Us Inc. Geobacillus stearothermophilus alpha-amylase (amys) variants with improved properties
EP2285958B1 (en) 2008-06-13 2016-03-09 Codexis, Inc. Method of synthesizing polynucleotide variants
US8383346B2 (en) 2008-06-13 2013-02-26 Codexis, Inc. Combined automated parallel synthesis of polynucleotide variants
US20090312196A1 (en) 2008-06-13 2009-12-17 Codexis, Inc. Method of synthesizing polynucleotide variants
EP2297327A1 (en) 2008-06-20 2011-03-23 BASF Plant Science GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
CA2728226A1 (en) 2008-06-24 2010-01-21 Codexis, Inc. Biocatalytic processes for the preparation of substantially stereomerically pure fused bicyclic proline compounds
UA121093C2 (uk) 2008-06-25 2020-04-10 Атенікс Корпорейшн Конструкція, яка містить токсиген, що кодує пестицидний білок, і спосіб її застосування для знищення напівтвердокрилих шкідників
BRPI0914689A2 (pt) 2008-06-26 2016-08-09 Basf Plant Science Gmbh métodos para intensificar as características relacionadas com o rendimento em plantas em relação às plantas de controle, e para a produção de uma planta transgênica, construto, uso de um construto, uso de um ácido nucleico, planta, parte da planta ou célula de planta, partes colhíveis de uma planta, e, produtos
MX357562B (es) 2008-07-02 2018-07-13 Athenix Corp Axmi-115, axmi-113, axmi-005, axmi-163 y axmi-184: proteinas insecticidas vip3a de bacillus thuringiensis y metodos para su uso.
BRPI0914602A2 (pt) 2008-07-04 2015-12-15 Basf Plant Science Gmbh método para intensificar características relacionadas a rendimento em plantas em relação a plantas de controle, e para a produção de uma planta transgênica, molécula de ácido nucleico isolada, polipeptídeo isolado, construção, usos de uma construção e de um ácido nucleico, planta, partes de uma planta ou célula de planta, partes colhíveis de uma plantas ,e , produtos.
AU2009272815B2 (en) 2008-07-17 2016-05-12 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2700651B1 (en) 2008-07-18 2019-04-10 Bristol-Myers Squibb Company Compositions monovalent for CD28 binding and methods of use
CN102247591A (zh) 2008-07-18 2011-11-23 诺维信阿德宁生物技术公司 使用哺乳动物β防御素的炎性肠病的治疗
WO2010011600A2 (en) * 2008-07-22 2010-01-28 Northwestern University Method for removal or inactivation of heparin
EP2669379A3 (en) 2008-07-31 2014-03-19 BASF Plant Science GmbH Plants having modified growth characteristics and a method for making the same
PY09026846A (es) 2008-08-05 2015-09-01 Novartis Ag Composiciones y métodos para anticuerpos que se dirigen a la proteína de complemento c5
BRPI0917396A2 (pt) 2008-08-20 2014-11-18 Basf Plant Science Gmbh Métodos para intensificar características relacionadas com rendimento em plantas em relação às plantas de controle, e para a produção de uma planta transgênica tendo rendimento aumentando, construto, usos de um construto, e de um ácido nucleico codificando um polipetídeo bhlh9, planta, parte de planta ou célula de planta, planta transgênica tendo rendimento aumentado, partes colhíveis de uma planta, produtos, molécula de ácido nucleico isolada, e, polipetídeo isolado.
WO2010025287A2 (en) 2008-08-27 2010-03-04 Codexis, Inc. Ketoreductase polypeptides for the production of 3-aryl-3-hydroxypropanamine from a 3-aryl-3-ketopropanamine
ES2560459T3 (es) 2008-08-27 2016-02-19 Codexis, Inc. Polipéptidos cetorreductasa para la producción de una 3-aril-3-hidroxipropanamina a partir de una 3-aril-3-cetopropanamina
WO2010027710A2 (en) 2008-08-27 2010-03-11 Codexis, Inc. Ketoreductase polypeptides and uses thereof
SG10201404330VA (en) 2008-08-29 2014-10-30 Codexis Inc Ketoreductase Polypeptides For The Stereoselective Production Of (4S)-3[(5S)-5(4-Fluorophenyl)-5-Hydroxypentanoyl]-4-Phenyl-1,3-Oxazolidin-2-One
US8153391B2 (en) 2008-08-29 2012-04-10 Bunge Oils, Inc. Hydrolases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
US8198062B2 (en) 2008-08-29 2012-06-12 Dsm Ip Assets B.V. Hydrolases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
US8357503B2 (en) 2008-08-29 2013-01-22 Bunge Oils, Inc. Hydrolases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
WO2010033229A2 (en) * 2008-09-22 2010-03-25 Calmune Corporation Methods and vectors for display of molecules and displayed molecules and collections
US20100081575A1 (en) * 2008-09-22 2010-04-01 Robert Anthony Williamson Methods for creating diversity in libraries and libraries, display vectors and methods, and displayed molecules
CN102224247B (zh) 2008-09-24 2016-09-28 巴斯夫植物科学有限公司 具有改良的产量相关性状的植物和用于制备该植物的方法
EP2337837B2 (en) 2008-09-25 2016-10-26 Danisco US Inc. Alpha-amylase blends and methods for using said blends
CN103834675A (zh) 2008-09-26 2014-06-04 巴斯夫农化产品有限公司 除草剂-抗性的ahas-突变体及使用方法
PL2342323T3 (pl) 2008-09-26 2013-11-29 Novozymes As Warianty fitazy z hafnia
CN105624193B (zh) 2008-09-26 2021-07-13 索元生物医药(美国)有限公司 重组载体
CN102227443B (zh) 2008-10-01 2014-05-14 昆特森斯生物科学公司 治疗性核糖核酸酶
WO2010039958A1 (en) 2008-10-03 2010-04-08 E.I. Dupont De Nemours And Company Improved perhydrolases for enzymatic peracid generation
US9267952B2 (en) * 2008-11-05 2016-02-23 Morphosys Ag Deconvolution method
WO2010054007A1 (en) 2008-11-07 2010-05-14 Fabrus Llc Combinatorial antibody libraries and uses thereof
EP2358880A1 (en) 2008-11-12 2011-08-24 BASF Plant Science Company GmbH Plants having enhanced abiotic stress tolerance and/or enhanced yield-related traits and a method for making the same
JP5933975B2 (ja) 2008-11-12 2016-06-15 メディミューン，エルエルシー 抗体製剤
ES2667812T3 (es) 2008-11-20 2018-05-14 Novozymes Inc. Polipéptidos que tienen actividad potenciadora amilolítica y polinucleótidos que codifican los mismos
EA201170752A1 (ru) 2008-12-03 2012-04-30 Басф Плант Сайенс Гмбх Растения с повышенной устойчивостью к абиотическому стрессу и/или улучшенными характеристиками урожайности и способ их получения
WO2010065830A1 (en) 2008-12-04 2010-06-10 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
US8431775B2 (en) 2008-12-04 2013-04-30 Pioneer Hi Bred International Inc Methods and compositions for enhanced yield by targeted expression of knotted1
US20110296557A1 (en) 2008-12-12 2011-12-01 Novozymes, Inc. Polypeptides Having Lipase Activity And Polynucleotides Encoding Same
US9493759B2 (en) 2008-12-12 2016-11-15 Novozymes, Inc. Polypeptides having aspartic endopeptidase activity and polynucleotides encoding same
EP2366025A1 (en) 2008-12-15 2011-09-21 Athenix Corporation Genes encoding nematode toxins
US20110269206A1 (en) 2008-12-15 2011-11-03 Novozymes, Inc Polypeptides Having Catalase Activity And Polynucleotides Encoding Same
US8633030B2 (en) 2008-12-16 2014-01-21 Novozymes, Inc. Polypeptides having carboxypeptidase activity and polynucleotides encoding same
WO2010077775A1 (en) 2008-12-16 2010-07-08 Novozymes, Inc. Polypeptides having alpha-mannosidase activity and polynucleotides encoding same
CA2745747A1 (en) 2008-12-17 2010-06-24 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and/or abiotic stress tolerance and a method for making the same
CN102257148A (zh) 2008-12-19 2011-11-23 诺维信公司 具有二氧化硅酶活性的酶的用途
ES2733067T3 (es) 2008-12-19 2019-11-27 Macrogenics Inc Diacuerpos covalentes y usos de los mismos
WO2010075352A1 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Athenix Corporation Pesticidal genes from brevibacillus and methods for their use
AR075114A1 (es) 2008-12-23 2011-03-09 Athenix Corp Gen de delta-endotoxina axmi-150 y metodos de uso del mismo
SG172783A1 (en) 2008-12-25 2011-08-29 Codexis Inc Enone reductases
ES2840000T3 (es) 2009-01-08 2021-07-06 Codexis Inc Polipéptidos de transaminasa
EP2206723A1 (en) 2009-01-12 2010-07-14 Bonas, Ulla Modular DNA-binding domains
US20110239315A1 (en) 2009-01-12 2011-09-29 Ulla Bonas Modular dna-binding domains and methods of use
JP2012515532A (ja) 2009-01-20 2012-07-12 ラモット アット テル アビブ ユニバーシティ， リミテッド Ｍｉｒ−２１プロモーター駆動性標的がん治療
AU2010206181B2 (en) 2009-01-21 2015-01-15 Novozymes A/S Polypeptides having esterase activity and nucleic acids encoding the same
US8604277B2 (en) 2009-01-28 2013-12-10 Novozymes, Inc. Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same
CN104232679A (zh) 2009-01-28 2014-12-24 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物及其制备方法
US8629324B2 (en) 2009-01-30 2014-01-14 Novozymes, Inc. Polypeptides having expansin activity and polynucleotides encoding same
WO2010088447A1 (en) 2009-01-30 2010-08-05 Novozymes A/S Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same
WO2010087927A2 (en) 2009-02-02 2010-08-05 Medimmune, Llc Antibodies against and methods for producing vaccines for respiratory syncytial virus
AR075371A1 (es) 2009-02-05 2011-03-30 Athenix Corp Genes de delta endotoxina variante axmi-r1 y metodos de uso de los mismos
EP2393925B1 (en) 2009-02-06 2014-10-08 University of Chile Protein and DNA sequence encoding a cold adapted xylanase
WO2010091221A1 (en) 2009-02-06 2010-08-12 Novozymes A/S Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same
WO2010092135A2 (en) 2009-02-11 2010-08-19 Novozymes Biopharma Uk Ltd. Albumin variants and conjugates
BRPI1013344A2 (pt) 2009-02-19 2015-09-01 Novozymes As Método para fermentar uma cerveja.
MY189620A (en) * 2009-02-20 2022-02-21 Malaysian Palm Oil Board A constitutive promoter from oil palm
US20110305692A1 (en) 2009-02-24 2011-12-15 Glaxo Group Limited Antigen-binding contructs
CA2753263A1 (en) 2009-02-24 2010-09-02 Glaxo Group Limited Multivalent and/or multispecific rankl-binding constructs
EP2401297A1 (en) 2009-02-24 2012-01-04 Glaxo Group Limited Antigen-binding constructs
EP2401291A1 (en) 2009-02-25 2012-01-04 BASF Plant Science Company GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
WO2010099500A2 (en) 2009-02-26 2010-09-02 Codexis, Inc. Beta-glucosidase variant enzymes and related polynucleotides
EP2401371A1 (en) 2009-02-27 2012-01-04 Novozymes A/S Mutant cells having reduced expression of metallopeptidase, suitable for recombinant polypeptide production
EP2957638B1 (en) 2009-02-27 2018-12-12 Athenix Corporation Pesticidal proteins and methods for their use
CA2753918A1 (en) 2009-03-06 2010-09-10 Athenix Corporation Methods and compositions for controlling plant pests
WO2010100247A1 (en) 2009-03-06 2010-09-10 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Novel therapy for anxiety
CA2754845A1 (en) 2009-03-11 2010-12-09 Athenix Corporation Axmi-030 insecticidal protein from bacillus thuringiensis and methods for use
WO2010106068A1 (en) 2009-03-17 2010-09-23 Novozymes A/S Polypeptides having tyrosinase activity and polynucleotides encoding same
CA2754580C (en) 2009-03-17 2014-06-17 Codexis, Inc. Variant endoglucanases and related polynucleotides
EP2411511B1 (en) 2009-03-24 2018-08-08 Novozymes A/S Polypeptides having acetyl xylan esterase activity and polynucleotides encoding same
JP2012521750A (ja) 2009-03-27 2012-09-20 プロイェクト、デ、ビオメディシナ、シーマ、ソシエダッド、リミターダ 肝硬変及び肝線維症の治療のための方法及び組成物
WO2010111691A2 (en) 2009-03-27 2010-09-30 Life Technologies Corp Conjugates of biomolecules to nanoparticles
WO2010120557A1 (en) 2009-03-31 2010-10-21 Codexis, Inc. Improved endoglucanases
CA2757343A1 (en) 2009-04-01 2010-10-07 Danisco Us Inc. Compositions and methods comprising alpha-amylase variants with altered properties
EP2241323A1 (en) 2009-04-14 2010-10-20 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Tenascin-W and brain cancers
GB0908770D0 (en) 2009-04-24 2009-07-01 Danisco Method
WO2010124953A1 (en) 2009-04-29 2010-11-04 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
CN102459613A (zh) 2009-04-29 2012-05-16 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物及其制备方法
US8779239B2 (en) 2009-05-04 2014-07-15 Pioneeri Hi-Bred International, Inc. Yield enhancement in plants by modulation of AP2 transcription factor
MX2011011646A (es) 2009-05-06 2011-11-29 Basf Plant Science Co Gmbh Plantas que tienen mejores rasgos relacionados con el rendimiento y/o mejor tolerancia al estres abiotico y un metodo para producirlas.
EP2248893A1 (en) 2009-05-06 2010-11-10 Novozymes A/S DFPase Enzymes from Octopus Vulgaris
MY186558A (en) * 2009-05-13 2021-07-27 Malaysian Palm Oil Board A constitutive promoter from oil palm type 2
WO2010134035A1 (en) 2009-05-19 2010-11-25 Danisco A/S Use
CN106011159A (zh) 2009-05-21 2016-10-12 巴斯夫酶有限责任公司 肌醇六磷酸酶、编码它们的核酸及制备和使用它们的方法
CN102549158B (zh) 2009-05-22 2017-09-26 库尔纳公司 通过抑制针对转录因子e3(tfe3)的天然反义转录物来治疗tfe3和胰岛素受体底物蛋白2(irs2)相关的疾病
US9989533B2 (en) 2009-05-28 2018-06-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Anti-TNF induced apoptosis (ATIA) diagnostic markers and therapies
WO2010138754A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Novozymes, Inc. Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material
WO2010136598A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Morphosys Ag A collection and methods for its use
WO2010141325A1 (en) 2009-06-02 2010-12-09 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same
CA2765034A1 (en) 2009-06-09 2010-12-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Early endosperm promoter and methods of use
AR077042A1 (es) 2009-06-12 2011-07-27 Danisco Metodo para tratar una composicion que contiene pirofiofitina
US20100317539A1 (en) * 2009-06-12 2010-12-16 Guo-Liang Yu Library of Engineered-Antibody Producing Cells
EP2443139B1 (en) 2009-06-16 2016-08-10 Codexis, Inc. Beta-glucosidase variant enzymes and related polynucleotides
CA2764732A1 (en) 2009-06-19 2011-01-20 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
CA2766405A1 (en) 2009-06-22 2011-01-13 Medimmune, Llc Engineered fc regions for site-specific conjugation
DK2446025T3 (en) 2009-06-22 2018-10-22 Codexis Inc : KETOREDUCTASE-MEDIATED STEREOSELECTIVE ROAD TO ALFA CHLORAL ALCOHOLS
CN102712919B (zh) 2009-06-26 2017-06-23 诺维信北美公司 热稳定性碳酸酐酶及其用途
MX346215B (es) 2009-07-02 2017-03-10 Athenix Corp Gen plaguicida axmi-205 y metodos para su uso.
WO2011000924A1 (en) 2009-07-03 2011-01-06 Abbott Products Gmbh Spray-dried amylase, pharmaceutical preparations comprising the same and use
WO2011005823A1 (en) 2009-07-07 2011-01-13 Castle Linda A Crystal structure of glyphosate acetyltransferase (glyat) and methods of use
US8143021B2 (en) 2009-07-07 2012-03-27 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
US8614081B2 (en) 2009-07-23 2013-12-24 Codexis, Inc. Nitrilase biocatalysts
EP2456865A1 (en) 2009-07-24 2012-05-30 Novozymes A/S Carbohydrate oxidases
WO2011009182A2 (pt) 2009-07-24 2011-01-27 Embrapa - Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuária Molécula de ácido nucléico isolada, construção gênica, vetor, célula transgênica, método para obtenção de uma célula e de uma planta transgênica, polipeptídeo isolado e purificado, composição pesticida biodegradável, método para o controle de uma praga, método de obtenção de linhagens transgênicas resistentes a um inseto praga
WO2011014458A1 (en) 2009-07-28 2011-02-03 Novozymes, Inc. Polypeptides having phytase activity and polynucleotides encoding same
WO2011014749A1 (en) 2009-07-31 2011-02-03 Athenix Corp. Axmi-192 family of pesticidal genes and methods for their use
US9133500B2 (en) 2009-08-10 2015-09-15 MorphoSys A6 Screening strategies for the identification of binders
AU2010282340B2 (en) 2009-08-13 2016-12-22 The Johns Hopkins University Methods of modulating immune function
DK2464664T3 (da) 2009-08-13 2016-01-18 Crucell Holland Bv Antistoffer mod humant respiratorisk syncytialvirus (rsv) og fremgangsmåder til anvendelse deraf
EA201200284A1 (ru) 2009-08-19 2013-03-29 Басф Плант Сайенс Компани Гмбх Растения, имеющие улучшенные характеристики, связанные с урожаем, и способ создания таких
WO2011022548A2 (en) 2009-08-19 2011-02-24 Codexis, Inc. Ketoreductase polypeptides for the preparation of phenylephrine
WO2011022597A1 (en) 2009-08-20 2011-02-24 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Functional expression of shuffled yeast nitrate transporter (ynti) in maize to improve nitrate uptake under low nitrate environment
US8409830B2 (en) 2009-08-21 2013-04-02 Novozymes A/S Polypeptides having isoamylase activity and methods of use
EP2292266A1 (en) 2009-08-27 2011-03-09 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Treating cancer by modulating copine III
MX2012002532A (es) 2009-09-01 2012-04-11 Novozymes Inc Metodos para mejorar la produccion de acido malico en hongos filamentosos.
EP2473604B1 (en) 2009-09-04 2017-01-11 Codexis, Inc. Variant cbh2 cellulases and related polynucleotides
WO2011029166A1 (en) 2009-09-09 2011-03-17 Braskem S.A. Microorganisms and process for producing n-propanol
US8293483B2 (en) 2009-09-11 2012-10-23 Epitomics, Inc. Method for identifying lineage-related antibodies
WO2011035027A2 (en) 2009-09-17 2011-03-24 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
EP2478137B1 (en) 2009-09-18 2017-09-13 Codexis, Inc. Reduced codon mutagenesis
US20110189183A1 (en) 2009-09-18 2011-08-04 Robert Anthony Williamson Antibodies against candida, collections thereof and methods of use
WO2011035029A1 (en) 2009-09-18 2011-03-24 Novozymes, Inc. Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same
US20120244170A1 (en) 2009-09-22 2012-09-27 Rafal Ciosk Treating cancer by modulating mex-3
CA2772983A1 (en) 2009-09-25 2011-03-31 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
AU2010299857A1 (en) 2009-09-25 2012-04-19 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
MX339581B (es) 2009-09-25 2016-06-01 Novozymes As Variantes de subtilasa.
CN102648277B (zh) 2009-09-25 2015-05-20 诺维信公司 蛋白酶变体的用途
DK2483295T3 (en) 2009-09-29 2016-02-22 Novozymes Inc Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding them
US8211665B2 (en) 2009-09-29 2012-07-03 Novozymes, Inc. Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same
CN108165542A (zh) 2009-09-30 2018-06-15 诺维信股份有限公司 具有纤维素分解增强活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸
CN102666846A (zh) 2009-09-30 2012-09-12 诺维信公司 具有纤维素分解增强活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸
US8222012B2 (en) * 2009-10-01 2012-07-17 E. I. Du Pont De Nemours And Company Perhydrolase for enzymatic peracid production
BR112012009381A2 (pt) 2009-10-02 2017-03-01 Syngenta Participations Ag "proteínas inseticidas"
AU2010303415B2 (en) 2009-10-07 2015-02-19 Macrogenics, Inc. Fc region-containing polypeptides that exhibit improved effector function due to alterations of the extent of fucosylation, and methods for their use
WO2011045352A2 (en) 2009-10-15 2011-04-21 Novartis Forschungsstiftung Spleen tyrosine kinase and brain cancers
UA111708C2 (uk) 2009-10-16 2016-06-10 Бандж Ойлз, Інк. Спосіб рафінування олії
UA109884C2 (uk) 2009-10-16 2015-10-26 Поліпептид, що має активність ферменту фосфатидилінозитол-специфічної фосфоліпази с, нуклеїнова кислота, що його кодує, та спосіб його виробництва і застосування
DE112010003738T5 (de) 2009-10-22 2013-08-14 Basf Plant Science Company Gmbh Pflanzen mit gesteigerten Ertragsmerkmalen und Verfahren zu deren Herstellung
US8541651B2 (en) 2009-10-23 2013-09-24 Novozymes, Inc. Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same
CN102597244B (zh) 2009-10-26 2014-07-23 先锋国际良种公司 胚珠体细胞特异性启动子及应用方法
CA2776336A1 (en) 2009-10-29 2011-05-19 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same
WO2011051327A2 (en) 2009-10-30 2011-05-05 Novartis Ag Small antibody-like single chain proteins
US20120213801A1 (en) 2009-10-30 2012-08-23 Ekaterina Gresko Phosphorylated Twist1 and cancer
CN102741280B (zh) 2009-10-30 2015-12-02 诺维信生物制药丹麦公司 白蛋白变体
BR112012010394A2 (pt) 2009-11-02 2017-06-27 Plant Sensory Systems Llc método para a biossíntese de taurina ou hipotaurina em células
WO2011051466A1 (en) 2009-11-02 2011-05-05 Novartis Ag Anti-idiotypic fibronectin-based binding molecules and uses thereof
US10207240B2 (en) 2009-11-03 2019-02-19 Gen9, Inc. Methods and microfluidic devices for the manipulation of droplets in high fidelity polynucleotide assembly
EP2496693B1 (en) 2009-11-06 2017-10-25 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same
EP2496692B1 (en) 2009-11-06 2016-03-16 Novozymes, Inc. Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same
EP2499251A1 (en) 2009-11-13 2012-09-19 BASF Plant Science Company GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
GB0920089D0 (en) 2009-11-17 2009-12-30 Danisco Method
RU2413226C1 (ru) * 2009-11-20 2011-02-27 Дина Дамировна Гайнетдинова Способ определения нестабильности генома у детей, больных детским церебральным параличом с перивентрикулярной лейкомаляцией
US20130183326A9 (en) 2009-11-20 2013-07-18 St. Jude Children's Research Hospital Methods and compositions for modulating the activity of the interleukin-35 receptor complex
WO2011062748A1 (en) 2009-11-23 2011-05-26 E.I. Du Pont De Nemours And Company Sucrose transporter genes for increasing plant seed lipids
CN102740868B (zh) 2009-11-25 2016-01-20 科德克希思公司 用于从纤维素生物质产生可溶性糖的重组β-葡糖苷酶变体
EP2504431A4 (en) 2009-11-25 2013-10-16 Codexis Inc RECOMBINANT BETA-GLUCOSIDASE VARIANTS OF THERMOASCUS AURIENTIACUS FOR THE PRODUCTION OF FERMENTABLE SUGARS FROM CELLULOSIC BIOMASS
WO2011066186A1 (en) 2009-11-25 2011-06-03 Gen9, Inc. Methods and apparatuses for chip-based dna error reduction
US9216414B2 (en) 2009-11-25 2015-12-22 Gen9, Inc. Microfluidic devices and methods for gene synthesis
EP2504429B1 (en) 2009-11-27 2016-04-20 BASF Plant Science Company GmbH Chimeric endonucleases and uses thereof
DE112010004582T5 (de) 2009-11-27 2012-11-29 Basf Plant Science Company Gmbh Optimierte Endonukleasen und Anwendungen davon
JP2013511979A (ja) 2009-11-27 2013-04-11 ビーエーエスエフ プラント サイエンス カンパニー ゲーエムベーハー キメラエンドヌクレアーゼおよびその使用
ES2534098T3 (es) 2009-11-30 2015-04-17 Novozymes A/S Polipéptidos que tienen actividad de glucoamilasa y polinucleótidos que codifican los mismos
EP2507370B1 (en) 2009-11-30 2015-02-11 Novozymes A/S Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same
CN104169417B (zh) 2009-12-01 2020-05-08 诺维信公司 具有葡糖淀粉酶活性的多肽及其编码多核苷酸
JP2013512672A (ja) 2009-12-02 2013-04-18 アムジエン・インコーポレーテツド ヒトＦＧＦＲ１ｃ、ヒトβ−クロト−、ならびにヒトＦＧＦＲ１ｃおよびヒトβ−クロト−の両方に結合する結合タンパク質
TW201125577A (en) 2009-12-02 2011-08-01 Novozymes As Use of defensins for treatment of infective endocarditis
WO2011067349A1 (en) 2009-12-03 2011-06-09 Novozymes A/S Variants of a polypeptide with lipolytic activity and improved stability
WO2011071982A2 (en) 2009-12-08 2011-06-16 Codexis, Inc. Synthesis of prazole compounds
CN102753023A (zh) 2009-12-09 2012-10-24 诺维信公司 产生gh8木聚糖酶变体的方法
US9040280B2 (en) 2009-12-11 2015-05-26 Novozymes A/S Protease variants
US8653024B2 (en) 2009-12-11 2014-02-18 Adenium Biotech Aps Use of AMPs for treatment of UTI/cystitis
WO2011080267A2 (en) 2009-12-29 2011-07-07 Novozymes A/S Polypetides having detergency enhancing effect
CA2786001A1 (en) 2009-12-31 2011-07-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Engineering plant resistance to diseases caused by pathogens
AU2011203460B2 (en) 2010-01-04 2014-09-18 Novozymes A/S Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same
US9217144B2 (en) 2010-01-07 2015-12-22 Gen9, Inc. Assembly of high fidelity polynucleotides
US20120295793A1 (en) 2010-01-22 2012-11-22 Proteus Methods of generating modified polynucleotide libraries and methods of using the same for directed protein evolution
CA2787698C (en) 2010-01-25 2018-07-31 Bayer Cropscience Nv Methods for manufacturing plant cell walls comprising chitin
WO2011092233A1 (en) 2010-01-29 2011-08-04 Novartis Ag Yeast mating to produce high-affinity combinations of fibronectin-based binders
EP2357220A1 (en) 2010-02-10 2011-08-17 The Procter & Gamble Company Cleaning composition comprising amylase variants with high stability in the presence of a chelating agent
MX369096B (es) 2010-02-10 2019-10-29 Novozymes As Variantes y composiciones que comprenden variantes con alta estabilidad en presencia de un agente quelante.
US9173961B2 (en) 2010-02-10 2015-11-03 Immunogen, Inc. CD20 antibodies and uses thereof
US9080192B2 (en) 2010-02-10 2015-07-14 Codexis, Inc. Processes using amino acid dehydrogenases and ketoreductase-based cofactor regenerating system
EP2536267B1 (en) 2010-02-18 2015-07-22 Athenix Corp. AXMI221z, AXMI222z, AXMI223z, AXMI224z, AND AXMI225z DELTA-ENDOTOXIN GENES AND METHODS FOR THEIR USE
MX2012009634A (es) 2010-02-18 2012-09-28 Athenix Corp Genes delta-endotoxinicos axmi218, axmi219, axmi220, axmi226, axmi227, axmi228, axmi229, axmi230, y axmi231 y metodos para sus uso.
WO2011104128A2 (en) 2010-02-24 2011-09-01 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
BR112012021232A2 (pt) 2010-02-24 2015-09-08 Basf Plant Science Co Gmbh método para acentuar traços relacionados a rendimento em plantas, plantas, construções, usos de uma construção. métodos de produção de uma planta transgênica, planta transgênicas, partes colhíveis de uma planta, produtos derivados de uma planta, uso de um a´cido nuclleíco
WO2011104284A1 (en) 2010-02-25 2011-09-01 Novozymes A/S Polypeptides having antimicrobial activity
EP2539447B1 (en) 2010-02-25 2017-07-26 Novozymes A/S Variants of a lysozyme and polynucleotides encoding same
EP2361927A1 (en) 2010-02-26 2011-08-31 BASF Plant Science Company GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2361985A1 (en) 2010-02-26 2011-08-31 BASF Plant Science Company GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
BR112012020309A2 (pt) 2010-03-03 2015-11-03 Novozymes As "variante isolado de uma xilanase precursora, polinucleotídeo isolado, célula hospedeira, métodos para produzir e para obter um variante, planta transgênica, parte da planta ou célula da planta, e, métodos para degradar um material contendo xilano, para tratar uma polpa, e para produzir xilose."
WO2011107586A1 (en) 2010-03-05 2011-09-09 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research, Smoc1, tenascin-c and brain cancers
WO2011110967A1 (en) 2010-03-12 2011-09-15 Danisco A/S Process
AU2011228707A1 (en) 2010-03-18 2012-09-27 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and method for making the same
EP2547773A4 (en) 2010-03-18 2014-01-22 Basf Plant Science Holding Gmbh PLANTS WITH IMPROVED PERFORMANCE CHARACTERISTICS AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF
WO2011114251A1 (en) 2010-03-18 2011-09-22 Danisco A/S Foodstuff
US9556248B2 (en) 2010-03-19 2017-01-31 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Hepatocyte growth factor fragments that function as potent met receptor agonists and antagonists
CA2793394A1 (en) 2010-03-19 2011-09-22 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
BR112012023503A2 (pt) 2010-03-19 2015-09-01 Basf Plant Science Co Gmbh Método para aumentar o rendimento em plantas em relação a plantas de controle, planta, construção, uso de uma construção, métodos para a produção de uma planta transgênica e de um produto, partes colhíveis de uma planta, produtos derivados de uma planta e uso de um ácido nucleico
EP2371845A1 (en) 2010-03-22 2011-10-05 BASF Plant Science Company GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
AU2011231563B2 (en) 2010-03-26 2015-01-29 Novozymes A/S Thermostable phytase variants
CA3028904A1 (en) 2010-03-28 2011-10-06 Novozymes A/S Enzymatic hydroxylation of aliphatic hydrocarbon
EP2553110B1 (en) 2010-03-30 2017-05-17 Novozymes North America, Inc. Processes of producing a fermentation product
EP2553108A4 (en) 2010-03-31 2015-01-28 Codexis Inc PRODUCTION OF MONOTERPENES
BR112012020503A2 (pt) 2010-03-31 2015-09-15 Novozymes Inc variante isolado de celobioidrolase precursor, polipeptídeo isolado, construção de ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira, método de produzir um variante de celobioidrolas precursor, métodos para obter o variante, para degradar variante de celobioidrolase precursor, métodos para obter o variante, para degradar ou converter um material celulósico, poara produzir um produto de fermentação e de fermentar um material celulósico, e, composição de enzima.
CN106977608A (zh) 2010-04-09 2017-07-25 阿尔布麦狄克斯公司 白蛋白衍生物和变体
WO2011127802A1 (en) 2010-04-14 2011-10-20 Novozymes A/S Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same
US8383793B2 (en) 2010-04-15 2013-02-26 St. Jude Children's Research Hospital Methods and compositions for the diagnosis and treatment of cancer resistant to anaplastic lymphoma kinase (ALK) kinase inhibitors
CA2832672A1 (en) 2010-04-16 2011-10-20 Nuevolution A/S Bi-functional complexes and methods for making and using such complexes
US20130034543A1 (en) 2010-04-19 2013-02-07 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Resear Modulating xrn1
EP2566497B1 (en) 2010-05-04 2015-07-29 Codexis, Inc. Biocatalysts for ezetimibe synthesis
CA2798432A1 (en) 2010-05-06 2011-11-10 Novartis Ag Compositions and methods of use for therapeutic low density lipoprotein -related protein 6 (lrp6) antibodies
EA201291181A1 (ru) 2010-05-06 2013-05-30 Новартис Аг Композиции и способы применения терапевтических поливалентных антител против белка, родственного рецептору липопротеинов низкой плотности 6 (lrp6)
MX2012012672A (es) 2010-05-06 2012-12-17 Du Pont Gen y proteina acc sintasa 3 de maiz y sus usos.
US20120135912A1 (en) 2010-05-10 2012-05-31 Perseid Therapeutics Llc Polypeptide inhibitors of vla4
SMT202000095T1 (it) 2010-05-14 2020-03-13 Amgen Inc Formulazioni di anticorpi anti-sclerostina ad alta concentrazione
US20130129676A1 (en) 2010-05-25 2013-05-23 Universite De Strasbourg Combination of anti-envelope antibodies and anti-receptor antibodies for the treatment and prevention of hcv infection
WO2011150313A1 (en) 2010-05-28 2011-12-01 Codexis, Inc. Pentose fermentation by a recombinant microorganism
EP2576606B1 (en) 2010-06-04 2014-12-10 Novozymes, Inc. C4 dicarboxylic acid production in filamentous fungi
WO2011154485A1 (en) 2010-06-10 2011-12-15 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Treating cancer by modulating mammalian sterile 20-like kinase 3
CN102984961A (zh) 2010-06-11 2013-03-20 诺维信公司 减少食物中生物胺的方法
US8835604B2 (en) 2010-06-12 2014-09-16 Adenium Biotech Aos Antimicrobial peptide variants and polynucleotides encoding same
BR112012032176A2 (pt) 2010-06-17 2015-09-08 Dupont Nutrition Biosci Aps processo de tratamento de sementes que contém óleo, método de obtenção de óleo de sementes vegetais, processo de produção de um óleo vegetal refinado e óleo vegetal bruto ou refinado que pode ser obtido por meio de um método ou processo
US8852900B2 (en) 2010-06-17 2014-10-07 Codexis, Inc. Biocatalysts and methods for the synthesis of (S)-3-(1-aminoethyl)-phenol
CA2803343C (en) 2010-06-21 2018-08-07 Novozymes, Inc. Aspergillus aculeatus derived polypeptides having c4-dicarboxylic acid transporter activity and polynucleotides encoding same
CN102947458B (zh) 2010-06-21 2016-05-04 诺维信股份有限公司 用于丝状真菌中c4-二羧酸的改善的产生的方法
WO2011161617A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and method for making the same
WO2011161620A1 (en) 2010-06-25 2011-12-29 Basf Plant Science Company Gmbh Plants with enhanced yield-related traits and producing method thereof
EP4449858A3 (en) 2010-06-25 2025-04-16 Corteva Agriscience LLC Compositions and methods for enhancing resistance to northern leaf blight in maize
EP2585587B1 (en) 2010-06-28 2017-08-09 Codexis, Inc. Fatty alcohol forming acyl reductases (fars) and methods of use thereof
AU2011272878B2 (en) 2010-06-30 2015-04-23 Codexis, Inc. Highly stable beta-class carbonic anhydrases useful in carbon capture systems
DK2588604T3 (en) 2010-06-30 2016-09-26 Novozymes Inc Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding them
GB201011513D0 (en) 2010-07-08 2010-08-25 Danisco Method
EP2591000B1 (en) 2010-07-09 2017-05-17 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Anti-human respiratory syncytial virus (rsv) antibodies and methods of use
MX342913B (es) 2010-07-12 2016-10-19 Celgene Corp * Formas solidas de romidepsina y sus usos.
US9428763B2 (en) 2010-07-16 2016-08-30 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
KR102024922B1 (ko) 2010-07-16 2019-09-25 아디맵 엘엘씨 항체 라이브러리
US8865448B2 (en) 2010-07-30 2014-10-21 Cleanvantage Llc Aspergillus containing beta-glucosidase, beta-glucosidases and nucleic acids encoding the same
MX345300B (es) 2010-07-30 2017-01-24 Novartis Ag * Moléculas andamio de fibronectina y bibliotecas de las mismas.
MX339622B (es) 2010-08-02 2016-06-02 Macrogenics Inc Diacuerpos covalentes y sus usos.
US9273335B2 (en) 2010-08-12 2016-03-01 Novozymes, Inc. Compositions comprising a polypeptide having cellulolytic enhancing activity and a quinone compound and uses thereof
CA2805937A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Chimeric promoters and methods of use
WO2012022734A2 (en) 2010-08-16 2012-02-23 Medimmune Limited Anti-icam-1 antibodies and methods of use
EP2605772B1 (en) 2010-08-16 2016-06-22 Cardiome International AG Process for preparing aminocyclohexyl ether compounds
CN103080306B (zh) 2010-08-20 2015-02-18 科德克希思公司 糖苷水解酶61家族蛋白在纤维素加工中的用途
SG187908A1 (en) 2010-08-20 2013-03-28 Novartis Ag Antibodies for epidermal growth factor receptor 3 (her3)
US9322027B2 (en) 2010-08-20 2016-04-26 Shell Oil Company Expression constructs comprising fungal promoters
US8865967B2 (en) 2010-08-23 2014-10-21 Pioneer Hi Bred International Inc Defensin variants and methods of use
MX2013002137A (es) 2010-08-24 2013-05-17 Basf Plant Science Co Gmbh Plantas que tienen mejores rasgos relacionados con el rendimiento y un metodo para prepararlas.
US20130149771A1 (en) 2010-08-24 2013-06-13 Novozymes A/S Heat-Stable Persephonella Carbonic Anhydrases and Their Use
EP2609202A1 (en) 2010-08-26 2013-07-03 E.I. Du Pont De Nemours And Company Mutant hpgg motif and hdash motif delta-5 desaturases and their use in making polyunsaturated fatty acids
US8980589B2 (en) 2010-08-26 2015-03-17 E I Du Pont De Nemours And Company Mutant delta-9 elongases and their use in making polyunsaturated fatty acids
WO2012030845A2 (en) 2010-08-30 2012-03-08 Novozymes A/S Polypeptides having beta-glucosidase activity, beta-xylosidase activity, or beta-glucosidase and beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same
WO2012030858A2 (en) 2010-08-30 2012-03-08 Novozymes A/S Polypeptides having hemicellulolytic activity and polynucleotides encoding same
US8624082B2 (en) 2010-08-30 2014-01-07 Novozymes A/S Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same
WO2012030811A1 (en) 2010-08-30 2012-03-08 Novozymes A/S Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same
DK2735611T3 (en) 2010-08-30 2019-01-28 Novozymes As POLYPEPTIDES WITH CELLULOLYSE INCREASING ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM
WO2012030844A1 (en) 2010-08-30 2012-03-08 Novozymes A/S Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same
EP2614080A1 (en) 2010-09-10 2013-07-17 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Phosphorylated twist1 and metastasis
US8859502B2 (en) 2010-09-13 2014-10-14 Celgene Corporation Therapy for MLL-rearranged leukemia
EP2616483A1 (en) 2010-09-16 2013-07-24 Novozymes A/S Lysozymes
CN103298341B (zh) 2010-09-22 2016-06-08 拜耳知识产权有限责任公司 活性成分在抗线虫作物中用于防治线虫的用途
CN103237891B (zh) 2010-09-30 2017-07-14 诺维信股份有限公司 具有纤维素分解增强活性的多肽变体及其编码多核苷酸
WO2012044835A1 (en) 2010-09-30 2012-04-05 Novozymes, Inc. Variants of polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
CN103534349B (zh) 2010-10-01 2017-07-21 诺维信公司 具有内肽酶活性的多肽以及编码其的多核苷酸
ES2563209T3 (es) 2010-10-01 2016-03-11 Novozymes, Inc. Variantes de beta-glucosidasa y polinucleótidos que codifican las mismas
BR112013008347A2 (pt) 2010-10-06 2016-06-14 Bp Corp North America Inc polipeptídeos de variantes cbh i
BR112013009817B1 (pt) 2010-10-26 2020-02-04 Novozymes As métodos de degradar ou converter refugo de cana de açúcar, de produzir um produto de fermentação, e, de fermentar refugo de cana de açúcar
CA2810903A1 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Novozymes A/S Recombinant n-propanol and isopropanol production
WO2012058566A1 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Novozymes A/S Polypeptides having succinyl-coa:aceto acetate transferase activity and polynucleotides encoding same
EP2635689B1 (en) 2010-11-02 2015-04-15 Novozymes, Inc. Methods of pretreating cellulosic material with a gh61 polypeptide
US9212354B2 (en) 2010-11-04 2015-12-15 Novozymes Inc. Polypeptides having cellobiohydrolase activitiy and polynucleotides encoding same
PL2635607T3 (pl) 2010-11-05 2020-05-18 Zymeworks Inc. Projekt stabilnego przeciwciała heterodimerowego z mutacjami w domenie FC
WO2012064351A1 (en) 2010-11-08 2012-05-18 Novozymes A/S Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same
ES2649555T3 (es) 2010-11-08 2018-01-12 Novozymes A/S Polipéptidos con actividad glucoamilasa y polinucleótidos que los codifican
BR112013011523A2 (pt) 2010-11-10 2019-09-24 Basf Plant Science Co Gmbh método, planta, construto, uso, planta transgênica, partes colhíveis de uma planta, produtos e partes colhíveis de uma planta
RU2013126882A (ru) 2010-11-12 2014-12-20 Новозимс А/С Полипептиды, обладающие активностью фосфолипазы с, и полинуклеотиды, кодирующие их
US9295965B2 (en) 2010-11-12 2016-03-29 Gen9, Inc. Methods and devices for nucleic acid synthesis
US9139823B2 (en) 2010-11-12 2015-09-22 Novozymes, Inc. Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same
US10457935B2 (en) 2010-11-12 2019-10-29 Gen9, Inc. Protein arrays and methods of using and making the same
WO2012065937A1 (en) 2010-11-15 2012-05-24 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Anti-fungal agents
BR112013010129A2 (pt) 2010-11-18 2016-07-05 Novozymes Inc polipeptídeo gh61 quimérico isolado, polinucleotídeo isolado, célula hospedeira, métodos para produzir um polipeptídeo gh61 quimérico, para degradas ou converter um material celulóstico, para sintetizar um produto de fermentação, para fermentar um material celulósico e para limpar ou lavar uma superfície dura ou roupa para lavar, planta transgênica, parte da planta ou célula de planta, uso do polipeptídeo gh61 quimérico, composição detergente, e, formulação de caldo ou composição de cultura de células completas
HRP20181811T1 (hr) 2010-11-19 2018-12-28 Morphosys Ag Zbirka sljedova protutijela i njezina upotreba
SG190362A1 (en) 2010-11-24 2013-06-28 Glaxo Group Ltd Multispecific antigen binding proteins targeting hgf
US20130245233A1 (en) 2010-11-24 2013-09-19 Ming Lei Multispecific Molecules
EP2649188A1 (en) 2010-12-06 2013-10-16 Novozymes North America, Inc. Methods of hydrolyzing oligomers in hemicellulosic liquor
HUE037616T2 (hu) 2010-12-08 2018-09-28 Codexis Inc Biokatalizátorok és eljárások armodafinil szintéziséhez
BR112013014698A2 (pt) 2010-12-22 2017-03-07 E I Du Point De Nemours & Company constructo de dna, vetor, célula vegetal, planta, semente transgênica proveniente da planta, método para expressão de uma sequência de nucleotídeos em uma planta, método para expressão de uma sequência de nucleotídeos em uma célula vegetal, método para expressar seletivamente uma sequência de nucleotídeos em tecidos de raiz, caule, grão e pendão de milho
CA2821154A1 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Viral promoter, truncations thereof, and methods of use
US8822762B2 (en) 2010-12-28 2014-09-02 Pioneer Hi Bred International Inc Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity
AR084844A1 (es) 2011-01-14 2013-06-26 Jones Jeffrey B Arboles de citricos con resistencia a cancro de los citricos
CN103429745A (zh) 2011-01-20 2013-12-04 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物和用于制备该植物的方法
MX337913B (es) 2011-01-26 2016-03-28 Novozymes As Polipeptidos que tienen actividad celobiohidrolasa y polinucleotidos que codifican los mismos.
WO2012103322A1 (en) 2011-01-26 2012-08-02 Novozymes A/S Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same
CN103534348B (zh) 2011-01-26 2018-04-10 诺维信公司 具有纤维二糖水解酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸
MX2013007720A (es) 2011-01-26 2013-08-09 Novozymes As Polipeptidos que tienen actividad celobiohidrolasa y polinucleotidos que codifican para los mismos.
EP3763740A1 (en) 2011-01-26 2021-01-13 Celldex Therapeutics, Inc. Anti-kit antibodies and uses thereof
US9080161B2 (en) 2011-01-26 2015-07-14 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same
BR112013019324B1 (pt) 2011-01-31 2021-06-08 Novozymes North America, Inc processos para refinamento enzimático de um material celulósico pré-tratado
WO2012106579A1 (en) 2011-02-03 2012-08-09 Bristol-Myers Squibb Company Amino acid dehydrogenase and its use in preparing amino acids from keto acids
US8916377B2 (en) 2011-02-15 2014-12-23 Pioneer Hi Bred International Inc Root-preferred promoter and methods of use
JP2014511409A (ja) 2011-02-16 2014-05-15 ノボザイムス アクティーゼルスカブ 金属プロテアーゼを含む洗剤組成物
MX2013009178A (es) 2011-02-16 2013-08-29 Novozymes As Composiciones detergentes que comprenden metaloproteasas.
CN103476916A (zh) 2011-02-16 2013-12-25 诺维信公司 包含m7或m35金属蛋白酶的去污剂组合物
MX2013007997A (es) 2011-02-23 2013-08-21 Novozymes Inc Polipeptidos que tienen actividad de incremento celulolitico y polinucleotidos que codifican para los mismos.
ES2649912T3 (es) 2011-02-23 2018-01-16 Dupont Nutrition Biosciences Aps Tratamiento enzimático de la clorofila en los aceites vegetales
WO2012114232A1 (en) 2011-02-23 2012-08-30 Dupont Nutrition Biosciences Aps Process
CA2825628A1 (en) 2011-02-23 2012-08-30 Dupont Nutrition Biosciences Aps Method
BR112013019036A2 (pt) 2011-02-28 2017-04-04 Novozymes Inc célula hospedeira recombinante, e, método para produzir um ácido dicarboxílico.
WO2012117324A1 (en) 2011-02-28 2012-09-07 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and producing methods thereof
PH12013501770A1 (en) 2011-02-28 2013-10-14 Basf Plant Science Co Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and producing methods thereof
CA2827386A1 (en) 2011-03-01 2012-09-07 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and producing methods thereof
EP2681242B1 (en) 2011-03-01 2018-01-24 Amgen Inc. Sclerostin and dkk-1 bispecific binding agents
EP2683830A1 (en) 2011-03-09 2014-01-15 Novozymes A/S Methods of increasing the cellulolytic enhancing activity of a polypeptide
WO2012122477A1 (en) 2011-03-10 2012-09-13 Novozymes A/S Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
US8878007B2 (en) 2011-03-10 2014-11-04 Pioneer Hi Bred International Inc Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity
WO2012127002A1 (en) 2011-03-23 2012-09-27 Novozymes A/S Sweet-tasting polypeptide from gram-positive bacteria
WO2012127001A1 (en) 2011-03-23 2012-09-27 Novozymes A/S Methods for producing secreted polypeptides
EP2688910B1 (en) 2011-03-25 2019-05-29 Amgen Inc. Anti-sclerostin antibody crystals and formulations thereof
US9879294B2 (en) 2011-03-25 2018-01-30 Novozymes A/S Methods for degrading or converting cellulosic material
WO2012135501A2 (en) 2011-03-30 2012-10-04 Athenix Corp. Axmi232, axmi233, and axmi249 toxin genes and methods for their use
EP2691517A4 (en) 2011-03-30 2015-04-22 Codexis Inc FERMENTATION OF PENTOSES BY A RECOMBINANT MICROORGANISM
WO2012135436A1 (en) 2011-03-30 2012-10-04 Athenix Corp. Axmi238 toxin gene and methods for its use
WO2012135719A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Novozymes, Inc. Cellulose binding domain variants and polynucleotides encoding same
US9410136B2 (en) 2011-03-31 2016-08-09 Novozymes, Inc. Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material
UA120584C2 (uk) 2011-04-05 2020-01-10 Атенікс Корп. Варіантний інсектицидний ген axmi115 та способи його застосування
US20140031272A1 (en) 2011-04-08 2014-01-30 Danisco Us Inc. Compositions
EP2697662B1 (en) 2011-04-13 2018-06-06 Codexis, Inc. Biocatalytic process for preparing eslicarbazepine and analogs thereof
WO2012142233A1 (en) 2011-04-14 2012-10-18 St. Jude Children's Research Hospital Methods and compositions for detecting and modulating a novel mtor complex
US9034322B2 (en) 2011-04-21 2015-05-19 The Rockefeller University Streptococcus bacteriophage lysins for detection and treatment of gram positive bacteria
US9926547B2 (en) 2011-04-28 2018-03-27 Novozymes, Inc. Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same
CN103797126A (zh) 2011-04-29 2014-05-14 诺维信股份有限公司 用于增强纤维素材料的降解或转化的方法
MX353816B (es) 2011-05-05 2018-01-30 Albumedix As Variantes de albumina.
WO2012159009A1 (en) 2011-05-19 2012-11-22 Novozymes, Inc. Methods for enhancing the degradation of cellulosic material with chitin binding proteins
US20140141471A1 (en) 2011-05-19 2014-05-22 Novozymes, Inc. Methods for Enhancing the Degradation of Cellulosic Material with Chitin Binding Proteins
EA201391753A1 (ru) 2011-05-21 2014-08-29 Макродженикс, Инк. Домены, связывающиеся с деиммунизованной сывороткой, и их применение для увеличения времени полужизни в сыворотке
EP2527448A1 (en) 2011-05-23 2012-11-28 Novozymes A/S Simultaneous site-specific integrations of multiple gene-copies in filamentous fungi
EP2527432A1 (en) 2011-05-23 2012-11-28 Novozymes A/S Bi-directional cytosine deaminase-encoding selection marker
US9150625B2 (en) 2011-05-23 2015-10-06 E I Du Pont De Nemours And Company Chloroplast transit peptides and methods of their use
EP2714738B1 (en) 2011-05-24 2018-10-10 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
EP2717911A1 (en) 2011-06-06 2014-04-16 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Protein tyrosine phosphatase, non-receptor type 11 (ptpn11) and triple-negative breast cancer
WO2012170742A2 (en) 2011-06-07 2012-12-13 University Of Hawaii Treatment and prevention of cancer with hmgb1 antagonists
US9244074B2 (en) 2011-06-07 2016-01-26 University Of Hawaii Biomarker of asbestos exposure and mesothelioma
WO2012172495A1 (en) 2011-06-14 2012-12-20 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting tem8
US20140216118A1 (en) 2011-06-14 2014-08-07 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Compositions and Methods for Making and Biocontaining Auxotrophic Transgenic Plants
AR086995A1 (es) 2011-06-21 2014-02-05 Pioneer Hi Bred Int Metodos y composiciones para producir plantas con esterilidad masculina
EP2723858B1 (en) 2011-06-24 2017-04-12 Novozymes A/S Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same
HUE042817T2 (hu) 2011-06-28 2019-07-29 Codexis Inc Fehérjevariánsok elõállítása régiókeveréssel
BR112013033614A2 (pt) 2011-06-30 2018-05-29 Codexis Inc fermentação de pentose por microorganismo recombinante
ES2834102T3 (es) 2011-06-30 2021-06-16 Novozymes As Variantes de alfa-amilasa
EP2540824A1 (en) 2011-06-30 2013-01-02 The Procter & Gamble Company Cleaning compositions comprising amylase variants reference to a sequence listing
CN103703124B (zh) 2011-06-30 2021-01-15 诺维信公司 用于筛选α-淀粉酶的方法
CA2840962C (en) 2011-07-06 2021-04-13 Novozymes A/S Alpha amylase variants and polynucleotides encoding same
EP2729576A2 (en) 2011-07-07 2014-05-14 Novozymes A/S Enzymatic preparation of diols
US9217021B2 (en) 2011-07-08 2015-12-22 Defensin Therapeutics Aps Oral treatment of inflammatory bowel disease
US20130097734A1 (en) 2011-07-12 2013-04-18 Two Blades Foundation Late blight resistance genes
CN103827298A (zh) 2011-07-15 2014-05-28 诺维信公司 脂肪酶变体及其编码多核苷酸
WO2013012643A1 (en) 2011-07-15 2013-01-24 Syngenta Participations Ag Polynucleotides encoding trehalose-6-phosphate phosphatase and methods of use thereof
CA2841782A1 (en) 2011-07-15 2013-01-24 Syngenta Participations Ag Methods of increasing yield and stress tolerance in a plant
WO2013016207A2 (en) 2011-07-22 2013-01-31 California Institute Of Technology Stable fungal cel6 enzyme variants
DK2734633T3 (da) 2011-07-22 2019-06-11 Novozymes North America Inc Fremgangsmåder til forbehandling af celluloseholdigt materiale og forbedring af hydrolyse deraf
BR112014001909A2 (pt) 2011-07-28 2017-02-21 Athenix Corp gene da toxina axmi270 e métodos para a sua utilização
BR122020017359B1 (pt) 2011-07-28 2021-10-13 Syngenta Participations Ag Método para controle de uma praga de nemátodos
CN103975066B (zh) 2011-07-28 2018-03-27 阿森尼克斯公司 Axmi205变体蛋白及其使用方法
BR112014002027A8 (pt) 2011-07-29 2022-07-05 Athenix Corp Gene pesticida axmi279 e métodos para a sua utilização
US9951346B2 (en) 2011-08-03 2018-04-24 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions for targeted integration in a plant
SI2739311T1 (en) 2011-08-04 2018-07-31 Amgen Inc. Method for the treatment of bone defect defects
US8859227B2 (en) 2011-08-04 2014-10-14 Novozymes, Inc. Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same
CN103703125B (zh) 2011-08-04 2016-09-07 诺维信公司 具有内切葡聚糖酶活性的多肽及其编码多核苷酸
WO2013021064A1 (en) 2011-08-10 2013-02-14 Novozymes A/S Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same
WO2013021062A1 (en) 2011-08-10 2013-02-14 Novozymes A/S Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same
WO2013021059A1 (en) 2011-08-10 2013-02-14 Novozymes A/S Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same
CN103827297B (zh) 2011-08-10 2018-06-22 诺维信公司 具有过氧化酶活性的多肽及编码该多肽的多核苷酸
US9487761B2 (en) 2011-08-10 2016-11-08 Novozymes A/S Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same
EP2742130B1 (en) 2011-08-10 2017-11-01 Novozymes A/S Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same
WO2013021065A1 (en) 2011-08-10 2013-02-14 Novozymes A/S Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same
US9000138B2 (en) 2011-08-15 2015-04-07 Novozymes A/S Expression constructs comprising a Terebella lapidaria nucleic acid encoding a cellulase, host cells, and methods of making the cellulase
WO2013024156A2 (en) 2011-08-17 2013-02-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Combinations of anti-hcv-entry factor antibodies and interferons for the treatment and the prevention of hcv infection
WO2013024157A2 (en) 2011-08-17 2013-02-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Combinations of host targeting agents for the treatment and the prevention of hcv infection
WO2013024155A1 (en) 2011-08-17 2013-02-21 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Combinations of anti-hcv-entry factor antibodies and direct acting antivirals for the treatment and the prevention of hcv infection
DK2744904T3 (en) 2011-08-19 2016-07-25 Novozymes Inc Recombinant microorganisms for the preparation of C4 dicarboxylic acids
WO2013026794A1 (en) 2011-08-19 2013-02-28 Novozymes Novel immunomodulatory peptide
ES2641039T3 (es) 2011-08-19 2017-11-07 Novozymes A/S Polipéptidos con actividad de proteasa
DK2748317T3 (en) 2011-08-22 2017-07-17 Codexis Inc GH61 glycoside hydrolase protein variants and cofactors that enhance GH61 activity
EP2748188A4 (en) 2011-08-26 2015-03-18 Novozymes As POLYPEPTIDES WITH GLUCCOAMYLASE ACTIVITY AND THESE CODING POLYNUCLEOTIDES
ES2737957T3 (es) 2011-08-26 2020-01-17 Gen9 Inc Composiciones y métodos para el ensamblaje de alta fidelidad de ácidos nucleicos
US11377663B1 (en) 2011-08-30 2022-07-05 Monsanto Technology Llc Genetic regulatory elements
US12188028B1 (en) 2011-08-30 2025-01-07 Monsanto Technology, Llc Methods for making genetic regulatory elements
CA2847057C (en) 2011-08-31 2019-06-11 St. Jude Children's Research Hospital Methods and compositions to detect the level of lysosomal exocytosis activity and methods of use
WO2013036526A1 (en) 2011-09-06 2013-03-14 Novozymes A/S Glucoamylase variants and polynucleotides encoding same
US9109209B2 (en) 2011-09-08 2015-08-18 Codexis, Inc. Biocatalysts and methods for the synthesis of substituted lactams
CA2847236A1 (en) 2011-09-09 2013-03-14 Novozymes A/S Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same
CN103764905A (zh) 2011-09-09 2014-04-30 诺维信公司 改进纸张材料的特性
EP2756091A1 (en) 2011-09-13 2014-07-23 Novozymes North America, Inc. Methods of hydrolyzing and fermenting cellulosic material
US20140308705A1 (en) 2011-09-20 2014-10-16 Novozymes A/S Polypeptides Having Cellulolytic Enhancing Activity And Polynucleotides Encoding Same
ES2628190T3 (es) 2011-09-22 2017-08-02 Novozymes A/S Polipéptidos con actividad de proteasa y polinucleótidos que codifican los mismos
US9670614B2 (en) 2011-09-23 2017-06-06 Novozymes A/S Color modification of textile
CA2850070A1 (en) 2011-09-30 2013-04-04 Novozymes A/S Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same
BR112014007647A2 (pt) 2011-09-30 2017-04-18 Novozymes As “variante de 3-hpdh, polipeptídeo tendo atividade de 3-hpdh, polinucleotídeo isolado, célula hospedeira microbiana transgênica, e, método para produzir 3-hp
US20130084608A1 (en) 2011-09-30 2013-04-04 Codexis, Inc. Fungal proteases
WO2013052643A1 (en) 2011-10-05 2013-04-11 The Rockefeller University Dimeric bacteriophage lysins
KR20220116585A (ko) 2011-10-11 2022-08-23 비엘라 바이오, 인크. Cd40l 특이적 tn3 유래 스카폴드 및 이의 사용 방법
DK2766476T3 (en) 2011-10-11 2017-08-28 Novozymes As GLUCOAMYLASE VARIETIES AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM
MX355356B (es) 2011-10-17 2018-04-17 Novozymes As Variantes de alfa-amilasa y polinucleotidos que codifican las mismas.
CA2852603C (en) 2011-10-17 2025-10-07 Novozymes A/S VARIANTS OF ALPHA-AMYLASE AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM
US20130111634A1 (en) 2011-10-28 2013-05-02 E I Du Pont De Nemours And Company And Pioneer Hi-Bred International Methods and compositions for silencing genes using artificial micrornas
DK2773656T3 (da) 2011-10-31 2019-09-09 Novozymes Inc Polypeptider med cellulolyseforbedrende aktivitet og polynukleotider, som koder for dem
AU2012332593B2 (en) 2011-11-01 2016-11-17 Bionomics, Inc. Anti-GPR49 antibodies
EP2773664A1 (en) 2011-11-01 2014-09-10 Bionomics, Inc. Anti-gpr49 antibodies
JP2014533247A (ja) 2011-11-01 2014-12-11 バイオノミクス インコーポレイテッド 抗体および癌を治療する方法
EP2773373B1 (en) 2011-11-01 2018-08-22 Bionomics, Inc. Methods of blocking cancer stem cell growth
WO2013064195A1 (en) 2011-11-04 2013-05-10 Enel Ingegneria E Ricerca S.P.A. A new heat-stable carbonic anhydrase and uses thereof
PL2773671T3 (pl) 2011-11-04 2022-01-24 Zymeworks Inc. Projekt stabilnego przeciwciała heterodimerycznego z mutacjami w domenie fc
US20140294732A1 (en) 2011-11-08 2014-10-02 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute Early diagnostic of neurodegenerative diseases
EP2776022A1 (en) 2011-11-08 2014-09-17 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research New treatment for neurodegenerative diseases
CN103930544A (zh) 2011-11-08 2014-07-16 诺维信公司 酵母中生产古细菌蛋白酶的方法
US9562222B2 (en) 2011-11-18 2017-02-07 Novozymes A/S Polypeptides having beta-glucosidase activity, beta-xylosidase activity, or beta-glucosidase and beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same
HK1200842A1 (en) 2011-11-18 2015-08-14 Albumedix Ltd Proteins with improved half-life and other properties
EP2780448B1 (en) 2011-11-18 2019-09-11 Codexis, Inc. Biocatalysts for the preparation of hydroxy substituted carbamates
EP3597736A1 (en) 2011-11-21 2020-01-22 Novozymes A/S Gh61 polypeptide variants and polynucleotides encoding same
EP2782998B1 (en) 2011-11-22 2018-01-10 Novozymes Inc. Polypeptides having beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same
CN103957929B (zh) 2011-11-25 2017-06-30 诺维信公司 具有溶菌酶活性的多肽和编码所述多肽的多核苷酸
EP2782988A1 (en) 2011-11-25 2014-10-01 Novozymes A/S Subtilase variants and polynucleotides encoding same
DK2785732T3 (en) 2011-12-01 2017-06-19 Novozymes Inc POLYPEPTIDES WITH BETA-XYLOSIDASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM
WO2013079533A1 (en) 2011-12-02 2013-06-06 Novozymes A/S Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same
US9169469B2 (en) 2011-12-02 2015-10-27 Novozymes A/S Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same
KR102083957B1 (ko) 2011-12-05 2020-03-04 노파르티스 아게 표피 성장 인자 수용체 3 (her3)에 대한 항체
JP2015500829A (ja) 2011-12-05 2015-01-08 ノバルティス アーゲー 上皮細胞増殖因子受容体３（ｈｅｒ３）のドメインｉｉに対するｈｅｒ３の抗体
WO2013087027A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Novozymes, Inc. Polypeptides having laccase activity and polynucleotides encoding same
EP2794870A4 (en) 2011-12-19 2015-06-17 Novozymes Inc POLYPEPTIDES WITH XYLANASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES THAT CODE
US10036050B2 (en) 2011-12-20 2018-07-31 Novozymes, Inc. Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same
EP2794871A4 (en) 2011-12-20 2015-12-30 Codexis Inc VARIANTS OF ENDOGLUCANASE-1B (EG1B)
CN104011204A (zh) 2011-12-20 2014-08-27 诺维信公司 枯草杆菌酶变体和编码它们的多核苷酸
EP2607468A1 (en) 2011-12-20 2013-06-26 Henkel AG & Co. KGaA Detergent compositions comprising subtilase variants
ES2728278T3 (es) 2011-12-21 2019-10-23 Novartis Ag Composiciones que comprenden anticuerpos dirigidos al factor P y C5
US10036030B2 (en) 2011-12-22 2018-07-31 E I Du Pont De Nemours And Company Use of the soybean sucrose synthase promoter to increase plant seed lipid content
EP3539982B1 (en) 2011-12-23 2025-02-19 Pfizer Inc. Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
EP2797953B1 (en) 2011-12-28 2020-06-03 Amgen Inc. Method of treating alveolar bone loss through the use of anti-sclerostin antibodies
AU2012360992B2 (en) 2011-12-28 2018-08-09 Novozymes A/S Polypeptides having protease activity
EP2800583A1 (en) 2012-01-02 2014-11-12 Novartis AG Cdcp1 and breast cancer
US20130180008A1 (en) 2012-01-06 2013-07-11 Pioneer Hi Bred International Inc Ovule Specific Promoter and Methods of Use
US9006515B2 (en) 2012-01-06 2015-04-14 Pioneer Hi Bred International Inc Pollen preferred promoters and methods of use
CA2860692A1 (en) 2012-01-06 2013-07-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. A method to screen plants for genetic elements inducing parthenogenesis in plants
CA2860611A1 (en) 2012-01-06 2013-07-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for the expression of a sequence in a reproductive tissue of a plant
WO2013104660A1 (en) 2012-01-13 2013-07-18 Dupont Nutrition Biosciences Aps Process for treating a plant oil comprising hydrolysing chlorophyll or a chlorophyll derivative and involving partial caustic neutralisation
WO2013104659A2 (en) 2012-01-13 2013-07-18 Dupont Nutrition Biosciences Aps Process
BR112014018294B1 (pt) 2012-01-26 2022-01-11 Norfolk Plant Sciences, Ltd Método para produzir uma planta, cassete de expressão, e, célula bacteriana
MX2014008764A (es) 2012-01-26 2014-08-27 Novozymes As Uso de polipeptidos que tienen actividad proteasa en alimentos para animales y detergentes.
AR089793A1 (es) 2012-01-27 2014-09-17 Du Pont Metodos y composiciones para generar locus de rasgos transgenicos complejos
EP2809144B1 (en) 2012-02-01 2019-11-13 Dow AgroSciences LLC Novel class of glyphosate resistance genes
WO2013116261A2 (en) 2012-02-03 2013-08-08 The Procter & Gamble Company Compositions and methods for surface treatment with lipases
DK3211074T3 (da) 2012-02-03 2020-06-02 Novozymes As Lipasevarianter og polynukleotider, som koder for dem
EP2814956B1 (en) 2012-02-17 2017-05-10 Novozymes A/S Subtilisin variants and polynucleotides encoding same
EP2628785B1 (en) 2012-02-17 2016-05-18 Henkel AG & Co. KGaA Detergent compositions comprising subtilase variants
WO2013123871A1 (en) 2012-02-20 2013-08-29 Novozymes A/S Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same
GB201203374D0 (en) 2012-02-28 2012-04-11 Univ Sheffield Alkane production
US9790258B2 (en) 2012-03-08 2017-10-17 Athenix Corp. AXMI335 toxin gene and methods for its use
EP2822962A1 (en) 2012-03-08 2015-01-14 Athenix Corp. Axmi345 delta-endotoxin gene and methods for its use
US20150059019A1 (en) 2012-03-14 2015-02-26 E I Du Pont De Nemours And Company Agronomic characteristics of plants through abph2
CN104168760B (zh) 2012-03-14 2018-06-22 纳幕尔杜邦公司 编码fasciated ear3(fea3)的核苷酸序列及其使用方法
CA2867342A1 (en) 2012-03-14 2013-09-19 Iowa State University Research Foundation, Inc. Nucleotide sequences encoding fasciated ear4 (fea4) and methods of use thereof
MX2014010278A (es) 2012-03-16 2015-03-05 Novozymes Biopharma Dk As Variantes de albumina.
US9150853B2 (en) 2012-03-21 2015-10-06 Gen9, Inc. Methods for screening proteins using DNA encoded chemical libraries as templates for enzyme catalysis
US9139821B2 (en) 2012-03-23 2015-09-22 Codexis, Inc. Biocatalysts and methods for synthesizing derivatives of tryptamine and tryptamine analogs
EP2831112A1 (en) 2012-03-29 2015-02-04 Friedrich Miescher Institute for Biomedical Research Inhibition of interleukin- 8 and/or its receptor cxcrl in the treatment her2/her3 -overexpressing breast cancer
JP2015516804A (ja) 2012-03-31 2015-06-18 ノボザイムス アクティーゼルスカブ ペルオキシゲナーゼを用いたエポキシ化
WO2013149858A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 Novozymes A/S Lipase variants and polynucleotides encoding same
CN104245930A (zh) 2012-04-23 2014-12-24 诺维信公司 具有葡萄糖醛酸酯酶活性的多肽以及编码其的多核苷酸
WO2013160248A2 (en) 2012-04-23 2013-10-31 Novozymes A/S Polypeptides having alpha-glucuronidase activity and polynucleotides encoding same
EP2841601B1 (en) 2012-04-24 2019-03-06 Gen9, Inc. Methods for sorting nucleic acids and multiplexed preparative in vitro cloning
DK2840900T3 (da) 2012-04-25 2019-09-09 Novozymes As Fremgangsmåde til bagning
WO2013160374A1 (en) 2012-04-27 2013-10-31 Dupont Nutrition Biosciences Aps Process for refining crude plant oil involving enzymatic hydrolysis and gum recycling
CN119193513A (zh) 2012-04-27 2024-12-27 诺维信股份有限公司 Gh61多肽变体以及编码其的多核苷酸
WO2013160372A1 (en) 2012-04-27 2013-10-31 Dupont Nutrition Biosciences Aps Process for treating plant oil involving addition of serial doses of chlorophyll or chlorophyll derivative degrading enzyme
BR112014027468A2 (pt) 2012-05-04 2017-06-27 Du Pont polinucleotídeo isolado ou recombinante, construção de dna recombinante, célula, planta, explante vegetal, semente transgênica, polipeptídeo isolado, composição, métodos de produção de meganuclease, de introdução de rompimento e de integração de um polinucleotídeo.
US9458441B2 (en) 2012-05-07 2016-10-04 Novozymes A/S Polypeptides having xanthan degrading activity and polynucleotides encoding same
HUE042605T2 (hu) 2012-05-08 2019-07-29 Codexis Inc Biokatalizátorok és kémiai vegyületek hidroxilálására szolgáló eljárások
JP6351572B2 (ja) 2012-05-10 2018-07-04 ザイムワークス，インコーポレイテッド Ｆｃドメインに突然変異を有する免疫グロブリン重鎖のヘテロ多量体構築物
SG11201407297VA (en) 2012-05-11 2014-12-30 Codexis Inc Engineered imine reductases and methods for the reductive amination of ketone and amine compounds
WO2013173711A1 (en) 2012-05-18 2013-11-21 Novozymes A/S Bacterial mutants with improved transformation efficiency
CN104364371B (zh) 2012-05-31 2018-10-23 诺维信公司 具有有机磷水解酶活性的多肽
WO2013178699A1 (en) 2012-05-31 2013-12-05 Novozymes A/S Isopropanol production by bacterial hosts
SG11201407017WA (en) 2012-06-04 2014-12-30 Irm Llc Site-specific labeling methods and molecules produced thereby
DK2859099T3 (da) 2012-06-11 2019-07-29 Codexis Inc Svampe-beta-xylosidase-varianter
CA2876426A1 (en) 2012-06-15 2013-12-19 E. I. Du Pont De Nemours And Company Methods and compositions involving als variants with native substrate preference
US9347105B2 (en) 2012-06-15 2016-05-24 Pioneer Hi Bred International Inc Genetic loci associated with resistance of soybean to cyst nematode and methods of use
EP2861749A1 (en) 2012-06-19 2015-04-22 Novozymes Bioag A/S Enzymatic reduction of hydroperoxides
BR112014031882A2 (pt) 2012-06-20 2017-08-01 Novozymes As uso de um polipeptídeo isolado, polipeptídeo, composição, polinucleotídeo isolado, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão, célula hospedeira de expressão recombinante, métodos para produção de um polipeptídeo, para melhoria do valor nutricional de uma ração animal, e para o tratamento de proteínas, uso de pelo menos um polipeptídeo, aditivo de ração animal, ração animal, e, composição detergente
LT2864491T (lt) 2012-06-22 2018-12-27 Phytogene, Inc. Fermentai ir stireno sintezės būdai
EP2677035A1 (en) 2012-06-22 2013-12-25 BASF Plant Science Company GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
CA2877823A1 (en) 2012-06-25 2014-01-03 Gen9, Inc. Methods for nucleic acid assembly and high throughput sequencing
UA117731C2 (uk) 2012-06-29 2018-09-25 Атенікс Корп. Токсин axmi277 проти нематод та його застосування
WO2014001482A1 (en) 2012-06-29 2014-01-03 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniererlassung, Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Treating diseases by modulating a specific isoform of mkl1
US9925260B2 (en) 2012-07-05 2018-03-27 Ucb Pharma S.A. Treatment for bone diseases
WO2014006114A1 (en) 2012-07-05 2014-01-09 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research New treatment for neurodegenerative diseases
MX2015000312A (es) 2012-07-12 2015-04-10 Novozymes As Polipeptidos que tienen actividad lipasa y polinucleotidos que los codifican.
BR112014032865A2 (pt) 2012-07-18 2017-08-01 Novozymes As método para tratamento de têxtil de poliéster, e, composição
CN104781412A (zh) 2012-07-20 2015-07-15 诺维信公司 5-羟甲基糠醛及其衍生物的酶氧化
CN104812775B (zh) 2012-07-25 2019-05-03 塞尔德克斯医疗公司 抗kit抗体及其用途
EP2880159A1 (en) 2012-07-30 2015-06-10 Allylix, Inc. Sclareol and labdenediol diphosphate synthase polypeptides encoding nucleic acid molecules and uses thereof
JP6367196B2 (ja) 2012-08-14 2018-08-01 テンエックス・ジェノミクス・インコーポレイテッド マイクロカプセル組成物および方法
US10752949B2 (en) 2012-08-14 2020-08-25 10X Genomics, Inc. Methods and systems for processing polynucleotides
US9951386B2 (en) 2014-06-26 2018-04-24 10X Genomics, Inc. Methods and systems for processing polynucleotides
US10584381B2 (en) 2012-08-14 2020-03-10 10X Genomics, Inc. Methods and systems for processing polynucleotides
US10273541B2 (en) 2012-08-14 2019-04-30 10X Genomics, Inc. Methods and systems for processing polynucleotides
US9701998B2 (en) 2012-12-14 2017-07-11 10X Genomics, Inc. Methods and systems for processing polynucleotides
US10323279B2 (en) 2012-08-14 2019-06-18 10X Genomics, Inc. Methods and systems for processing polynucleotides
US10221442B2 (en) 2012-08-14 2019-03-05 10X Genomics, Inc. Compositions and methods for sample processing
US11591637B2 (en) 2012-08-14 2023-02-28 10X Genomics, Inc. Compositions and methods for sample processing
JP6644547B2 (ja) 2012-08-16 2020-02-12 バングラデシュ ジュート リサーチ インスティテュートＢａｎｇｌａｄｅｓｈ Ｊｕｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａｐｈａｓｅｏｌｉｎａ由来のペクチン分解酵素およびその使用
EP2885405B1 (en) 2012-08-16 2019-04-17 Novozymes A/S Method for treating textile with endoglucanase
ES2693461T3 (es) 2012-08-16 2018-12-11 Bangladesh Jute Research Institute Enzimas que degradan celulosa y/o hemicelulosas de Macrophomina phaseolina y usos de las mismas
BR112015003257A2 (pt) 2012-08-17 2017-11-14 Novozymes As variante de asparaginase, métodos para produção de um produto alimentar a partir de um material alimentar, para produção de uma variante de asparaginase e para obtenção de uma variante de asparaginase, polinucleotídeo isolado, constructo de ácido nucleico, vetor de expressão, e, célula hospedeira
MX357022B (es) 2012-08-22 2018-06-25 Novozymes As Metaloproteasas de alicyclobacillus sp.
CN104603265A (zh) 2012-08-22 2015-05-06 诺维信公司 包括金属蛋白酶的洗涤剂组合物
EP2888361A1 (en) 2012-08-22 2015-07-01 Novozymes A/S Metalloprotease from exiguobacterium
WO2014036238A1 (en) 2012-08-30 2014-03-06 Athenix Corp. Axmi-234 and axmi-235 toxin genes and methods for their use
WO2014033266A1 (en) 2012-08-31 2014-03-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-sr-bi antibodies for the inhibition of hepatitis c virus infection
AU2013311668B2 (en) 2012-09-05 2019-02-28 Novozymes A/S Polypeptides having protease activity
AU2013202506B2 (en) 2012-09-07 2015-06-18 Celgene Corporation Resistance biomarkers for hdac inhibitors
EP2895610B1 (en) 2012-09-13 2019-11-06 Indiana University Research and Technology Corporation Compositions and systems for conferring disease resistance in plants and methods of use thereof
EP2898068A2 (en) 2012-09-19 2015-07-29 Novozymes, Inc. Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material
CN104704120A (zh) 2012-09-20 2015-06-10 诺维信公司 针对编码功能蛋白的变体筛选多核苷酸文库
CN104619721A (zh) 2012-09-27 2015-05-13 诺维信股份有限公司 具有改进的转化效率的细菌突变体
US10005988B2 (en) 2012-10-05 2018-06-26 Novozymes A/S Reducing adhesion of bacteria to a surface or releasing bacteria from a surface to which they adhere using endo-beta-A,4-glucanases
US10035996B2 (en) 2012-10-08 2018-07-31 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
JP2015533832A (ja) 2012-10-09 2015-11-26 アイジェニカ バイオセラピューティクス インコーポレイテッド 抗Ｃ１６ｏｒｆ５４抗体およびその使用方法
WO2014059155A1 (en) 2012-10-11 2014-04-17 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Guard cell promoters and uses thereof
WO2014056922A2 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Novozymes A/S Polypeptides having peroxygenase activity
CN104704115B (zh) 2012-10-12 2018-11-02 诺维信公司 具有过氧合酶活性的多肽
EP2906687B1 (en) 2012-10-12 2018-08-15 Novozymes A/S Polypeptides having peroxygenase activity
US9458435B2 (en) 2012-10-12 2016-10-04 Novozymes A/S Polypeptides having peroxygenase activity
US9453207B2 (en) 2012-10-12 2016-09-27 Novozymes A/S Polypeptides having peroxygenase activity
US9719072B2 (en) 2012-10-12 2017-08-01 Novozymes A/S Polypeptides having peroxygenase activity
EP2906689B1 (en) 2012-10-12 2018-12-12 Novozymes A/S Polypeptides having peroxygenase activity
US9783820B2 (en) 2012-10-15 2017-10-10 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions to enhance activity of Cry endotoxins
EP2909230B1 (en) 2012-10-19 2019-05-22 Danisco US Inc. Stabilization of biomimetic membranes
WO2014066497A2 (en) 2012-10-23 2014-05-01 Montana State University Production of high quality durum wheat having increased amylose content
US20150275194A1 (en) 2012-10-24 2015-10-01 Novozymes A/S Polypeptides Having Cellulolytic Enhancing Activity And Polynucleotides Encoding Same
WO2014070673A1 (en) 2012-10-29 2014-05-08 University Of Rochester Artemisinin derivatives, methods for their preparation and their use as antimalarial agents
WO2014068010A1 (en) 2012-10-31 2014-05-08 Novozymes A/S Isopropanol production by bacterial hosts
BR112015009774A2 (pt) 2012-11-01 2017-12-05 Univ British Columbia polipeptídeos citocromo p450 e citocromo p450 redutase, codificando moléculas de ácido nucléicos e usos das mesmas
WO2014072481A1 (en) 2012-11-08 2014-05-15 Novozymes Biopharma Dk A/S Albumin variants
AU2013202507B9 (en) 2012-11-14 2015-08-13 Celgene Corporation Inhibition of drug resistant cancer cells
WO2014076232A2 (en) 2012-11-19 2014-05-22 Novozymes A/S Isopropanol production by recombinant hosts using an hmg-coa intermediate
EP2922953A4 (en) 2012-11-20 2016-11-09 Shell Int Research PENTOSEFERMENTATION BY A RECOMBINANT MICROORGANISM
UY35148A (es) 2012-11-21 2014-05-30 Amgen Inc Immunoglobulinas heterodiméricas
WO2014084859A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Novartis Ag Molecules and methods for modulating tmem16a activities
WO2014085330A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Novozymes, Inc. 3-hydroxypropionic acid production by recombinant yeasts
WO2014089111A1 (en) 2012-12-05 2014-06-12 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting epo
CN104837994A (zh) * 2012-12-06 2015-08-12 安捷伦科技有限公司 分子制造
WO2014087011A1 (en) 2012-12-07 2014-06-12 Novozymes A/S Preventing adhesion of bacteria
EP2929028A1 (en) 2012-12-07 2015-10-14 Novozymes A/S Method for generating site-specific mutations in filamentous fungi
EP2740840A1 (en) 2012-12-07 2014-06-11 Novozymes A/S Improving drainage of paper pulp
DK2928865T3 (en) 2012-12-07 2018-06-18 Merck Sharp & Dohme BIOCATALYTIC TRANSAMINATION PROCEDURE
BR112015013399B1 (pt) 2012-12-11 2023-02-14 Novozymes A/S Uso de polipeptídeo tendo atividade de fosfolipase c e método para redução do conteúdo de componentes contendo fósforo em um óleo comestível
AR093909A1 (es) 2012-12-12 2015-06-24 Bayer Cropscience Ag Uso de ingredientes activos para controlar nematodos en cultivos resistentes a nematodos
WO2014093835A1 (en) 2012-12-14 2014-06-19 Novozymes A/S Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
US10533221B2 (en) 2012-12-14 2020-01-14 10X Genomics, Inc. Methods and systems for processing polynucleotides
WO2014090940A1 (en) 2012-12-14 2014-06-19 Novozymes A/S Removal of skin-derived body soils
EP3567116A1 (en) 2012-12-14 2019-11-13 10X Genomics, Inc. Methods and systems for processing polynucleotides
DK2935574T3 (da) 2012-12-17 2020-02-03 Novozymes As Alfaamylaser og polynukleotider, som koder for dem
CA2891686A1 (en) 2012-12-18 2014-06-26 Novartis Ag Compositions and methods that utilize a peptide tag that binds to hyaluronan
WO2014099798A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Novozymes A/S Polypeptides having cellulolytic enhancinc activity and polynucleotides encoding same
US9551042B2 (en) 2012-12-21 2017-01-24 Novozymes A/S Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same
CA2895752C (en) 2012-12-21 2021-09-21 Codexis, Inc. Engineered biocatalysts and methods for synthesizing chiral amines
WO2014101753A1 (en) 2012-12-24 2014-07-03 Novozymes A/S Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same
CN103013938B (zh) 2012-12-25 2014-12-17 北京大北农科技集团股份有限公司 除草剂抗性蛋白质、其编码基因及用途
CN103060279B (zh) 2012-12-25 2014-08-13 北京大北农科技集团股份有限公司 除草剂抗性蛋白质、其编码基因及用途
US9902946B2 (en) 2013-01-03 2018-02-27 Novozymes A/S Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same
SG11201505329YA (en) 2013-01-18 2015-08-28 Codexis Inc Engineered biocatalysts useful for carbapenem synthesis
RU2664695C2 (ru) 2013-01-31 2018-08-21 Кодексис, Инк. Способы, системы и программное обеспечение для идентификации биомолекул с помощью моделей мультипликативной формы
WO2014120916A1 (en) 2013-02-01 2014-08-07 Bristol-Myers Squibb Company Pegylated domain antibodies monovalent for cd28 binding and methods of use
WO2014122109A1 (en) 2013-02-05 2014-08-14 Novozymes A/S Enzymatic preparation of indigo dyes and intermediates
US9441215B2 (en) 2013-02-06 2016-09-13 Novozymes A/S Polypeptides having protease activity
KR102190198B1 (ko) 2013-02-08 2020-12-14 10엑스 제노믹스, 인크. 폴리뉴클레오티드 바코드 생성
WO2014124258A2 (en) 2013-02-08 2014-08-14 Irm Llc Specific sites for modifying antibodies to make immunoconjugates
CA2900755C (en) 2013-02-08 2021-07-20 Irm Llc Specific sites for modifying antibodies to make immunoconjugates
EP2956547B1 (en) 2013-02-13 2018-05-02 Athenix Corp. Use of axmi184 for the control of rootworm insects
AU2014219180A1 (en) 2013-02-20 2015-10-08 Emory University Methods of sequencing nucleic acids in mixtures and compositions related thereto
HUE042206T2 (hu) 2013-02-28 2019-06-28 Codexis Inc Módosított transzamináz polipeptidek ipari biokatalízishez
US9487773B2 (en) * 2013-03-01 2016-11-08 Technophage, Investigacao E Desenvolvimento Em Biotecnologia, Sa Cell-based methods for coupling protein interactions and binding molecule selection
BR112015021651B1 (pt) 2013-03-07 2021-12-28 Bayer Cropscience Lp Molécula de ácido nucleico recombinante, cassete de expressão, célula hospedeira de bactéria, polipeptídeo recombinante, composição e métodos para aplicação dos mesmos
CN110628749A (zh) 2013-03-08 2019-12-31 诺维信公司 纤维二糖水解酶变体和编码它们的多核苷酸
US20160326540A1 (en) 2013-03-11 2016-11-10 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and Compositions Employing a Sulfonylurea-Dependent Stabilization Domain
CA2905377A1 (en) 2013-03-11 2014-10-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions to improve the spread of chemical signals in plants
US9273322B2 (en) 2013-03-12 2016-03-01 Pioneer Hi Bred International Inc Root-preferred promoter and methods of use
GB201308828D0 (en) 2013-03-12 2013-07-03 Verenium Corp Phytase
US9803214B2 (en) 2013-03-12 2017-10-31 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Breeding pair of wheat plants comprising an MS45 promoter inverted repeat that confers male sterility and a construct that restores fertility
US9243258B2 (en) 2013-03-12 2016-01-26 Pioneer Hi Bred International Inc Root-preferred promoter and methods of use
US9498532B2 (en) 2013-03-13 2016-11-22 Novartis Ag Antibody drug conjugates
HUE035866T2 (en) 2013-03-14 2018-05-28 Evolva Inc Valencene synthase polypeptides, coding nucleic acid molecules and their use
JP2016514130A (ja) 2013-03-14 2016-05-19 ノバルティス アーゲー Ｎｏｔｃｈ３に対する抗体
BR112015023272A2 (pt) 2013-03-14 2017-07-18 Pioneer Hi Bred Int célula vegetal, planta, explante vegetal, semente transgênica, método para produzir uma célula vegetal tendo um polinucleotídeo heterólogo que codifica um polipeptídeo tendo atividade de dicamba descarboxilase, método para controlar plantas daninhas em um campo contendo uma cultura e método para controlar plantas daninhas em um campo contendo uma cultura
GB201308843D0 (en) 2013-03-14 2013-07-03 Verenium Corp Phytase formulation
EP2970935A1 (en) 2013-03-14 2016-01-20 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions having dicamba decarboxylase activity and methods of use
WO2014145735A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Orpro Therapeutics, Inc. Product and process for mucus viscosity normalization
CA2901316A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Phi-4 polypeptides and methods for their use
BR112015021134A2 (pt) 2013-03-15 2017-10-10 Novartis Ag conjugados de fármaco e anticorpo
EP2970361B1 (en) * 2013-03-15 2023-02-15 Gen9, Inc. Compositions and methods for multiplex nucleic acids synthesis
MX2015013163A (es) 2013-03-15 2016-04-04 Zyngenia Inc Complejos multiespecificos multivalente y monovalentes y sus usos.
MX360759B (es) 2013-03-21 2018-11-15 Novozymes As Polipeptidos con actividades lipasa y polinucleotidos que los codifican.
US9670470B2 (en) 2013-03-21 2017-06-06 Novozymes A/S Polypeptides having phospholipase A activity and polynucleotides encoding same
SMT201900315T1 (it) 2013-04-18 2019-07-11 Codexis Inc Polipeptidi di fenilalanina ammoniaca liasi ingegnerizzati
DK2986701T3 (en) 2013-04-18 2019-01-14 Novozymes As Polypeptides with protease activity and polynucleotides encoding them
EP3569611A1 (en) 2013-04-23 2019-11-20 Novozymes A/S Liquid automatic dish washing detergent compositions with stabilised subtilisin
CN121380029A (zh) 2013-04-30 2026-01-23 诺维信公司 葡糖淀粉酶变体和编码它们的多核苷酸
WO2014177541A2 (en) 2013-04-30 2014-11-06 Novozymes A/S Glucoamylase variants and polynucleotides encoding same
EP2992076B1 (en) 2013-05-03 2018-10-24 Novozymes A/S Microencapsulation of detergent enzymes
DK2994529T3 (en) 2013-05-10 2019-03-04 Novozymes As Polypeptides with xylanase activity and polynucleotides encoding them
MY192746A (en) 2013-05-14 2022-09-06 Novozymes As Detergent compositions
WO2014183921A1 (en) 2013-05-17 2014-11-20 Novozymes A/S Polypeptides having alpha amylase activity
SG10201708143QA (en) 2013-06-06 2017-11-29 Pf Medicament Anti-c10orf54 antibodies and uses thereof
US10538751B2 (en) 2013-06-06 2020-01-21 Novozymes A/S Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same
EP2816115A1 (en) 2013-06-17 2014-12-24 BASF Plant Science Company GmbH Plants having one or more enhanced yield-related traits and a method for making the same
AR096601A1 (es) 2013-06-21 2016-01-20 Novartis Ag Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso
JP2016521579A (ja) 2013-06-21 2016-07-25 ノボザイムス アクティーゼルスカブ バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）における分泌シグナルを含まないポリペプチドの生成
UY35620A (es) 2013-06-21 2015-01-30 Novartis Ag Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso
EP3013955A1 (en) 2013-06-27 2016-05-04 Novozymes A/S Subtilase variants and polynucleotides encoding same
US10378001B2 (en) 2013-06-27 2019-08-13 Novozymes A/S Subtilase variants and compositions comprising same
RU2015156280A (ru) 2013-07-04 2017-08-09 Новозимс А/С Полипептиды, обладающие эффектом против переосаждения, и полинуклеотиды, кодирующие их
WO2015006105A1 (en) 2013-07-09 2015-01-15 Board Of Trustees Of Michigan State University Transgenic plants produced with a k-domain, and methods and expression cassettes related thereto
US11459579B2 (en) 2013-07-09 2022-10-04 Board Of Trustees Of Michigan State University Transgenic plants produced with a K-domain, and methods and expression cassettes related thereto
CN105339492A (zh) 2013-07-09 2016-02-17 诺维信公司 具有脂肪酶活性的多肽和编码它们的多核苷酸
CN105339494B (zh) 2013-07-17 2020-04-17 诺维信公司 普鲁兰酶嵌合体以及编码它们的多核苷酸
AR095173A1 (es) 2013-07-25 2015-09-30 Basf Enzymes Llc Fitasa
CN117904081A (zh) 2013-07-29 2024-04-19 诺维信公司 蛋白酶变体以及对其进行编码的多核苷酸
EP2832853A1 (en) 2013-07-29 2015-02-04 Henkel AG&Co. KGAA Detergent composition comprising protease variants
US9926550B2 (en) 2013-07-29 2018-03-27 Novozymes A/S Protease variants and polynucleotides encoding same
US9845484B2 (en) 2013-07-31 2017-12-19 Novozymes A/S 3-hydroxypropionic acid production by recombinant yeasts expressing an insect aspartate 1-decarboxylase
ES2761587T3 (es) 2013-08-07 2020-05-20 Friedrich Miescher Institute For Biomedical Res Nuevo método de cribado para el tratamiento de la ataxia de Friedreich
BR122022020536B1 (pt) 2013-08-08 2023-11-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Molécula de ácido nucleico isolada, construto de dna, célula hospedeira bacteriana, polipeptídeo isolado, composição, método para controlar uma população, método para matar uma praga, método para produzir um polipeptídeo, método para produzir uma planta ou célula vegetal, método para proteger uma planta
WO2015038262A2 (en) 2013-08-09 2015-03-19 Athenix Corp. Axmi281 toxin gene and methods for its use
UY35696A (es) 2013-08-09 2015-03-27 Athenix Corp ?molécula de adn recombinante que comprende al gen de toxina axmi440, vector, célula huésped, plantas, composiciones y métodos relacionados?.
US10010094B2 (en) 2013-08-15 2018-07-03 Novozymes A/S Polypeptides having beta-1,3-galactanase activity and polynucleotides encoding same
MX359026B (es) 2013-08-16 2018-09-12 Pioneer Hi Bred Int Proteinas insecticidas y metodos de uso.
US10395758B2 (en) 2013-08-30 2019-08-27 10X Genomics, Inc. Sequencing methods
EA201690560A1 (ru) 2013-09-11 2016-10-31 Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. Регуляторные элементы растений и способы их применения
US10667524B2 (en) 2013-09-13 2020-06-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
CA2959117C (en) 2013-09-19 2023-08-22 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for producing hepatocyte-like cells
WO2015048016A2 (en) 2013-09-24 2015-04-02 E. I. Du Pont De Nemours And Company Fasciated inflorescence (fin) sequences and methods of use
HUE039618T2 (hu) 2013-09-27 2019-01-28 Codexis Inc Enzimvariánsok automatizált szûrése
WO2015050959A1 (en) 2013-10-01 2015-04-09 Yale University Anti-kit antibodies and methods of use thereof
WO2015049370A1 (en) 2013-10-03 2015-04-09 Novozymes A/S Detergent composition and use of detergent composition
WO2015059133A1 (en) 2013-10-22 2015-04-30 Novozymes A/S Cellobiose dehydrogenase variants and polynucleotides encoding same
EP3068793B1 (en) 2013-11-13 2021-02-17 Codexis, Inc. Engineered imine reductases and methods for the reductive amination of ketone and amine compounds
WO2015077525A1 (en) 2013-11-25 2015-05-28 Bayer Cropscience Lp Use of axmi-011 for the control of hemipteran insects
EP2876156A1 (en) 2013-11-26 2015-05-27 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives New enzymes and method for preparing hydroxylated L-lysine or L-ornithine and analogs thereof
EP3943646A1 (en) * 2013-11-27 2022-01-26 Gen9, Inc. Libraries of nucleic acids and methods for making the same
RU2016125246A (ru) 2013-11-27 2018-01-09 Е. И. Дюпон Де Немур Энд Компани Генетические локусы, связанные с реакцией на абиотический стресс
EP3074509B1 (en) 2013-11-29 2019-03-06 Novozymes A/S Peroxygenase variants
US9309314B2 (en) 2013-12-03 2016-04-12 Agency For Science, Technology And Research (A*Star) Polypeptides, nucleic acids and uses thereof
WO2015088937A2 (en) 2013-12-09 2015-06-18 Athenix Corp. Axmi477, axmi482, axmi486 and axmi525 toxin genes and methods for their use
CN122012456A (zh) 2013-12-11 2026-05-12 诺维信公司 角质酶变体以及对其进行编码的多核苷酸
US9824068B2 (en) 2013-12-16 2017-11-21 10X Genomics, Inc. Methods and apparatus for sorting data
EP2886656A1 (en) 2013-12-18 2015-06-24 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives New enzyme and method for preparing 4-hydroxyl benzyl alcohol and derivatives thereof
CA2934039A1 (en) 2013-12-19 2015-06-25 Danisco Us Inc. Use of hydrophobins to increase gas transferin aerobic fermentation processes
CN105814200A (zh) 2013-12-20 2016-07-27 诺维信公司 具有蛋白酶活性的多肽以及编码它们的多核苷酸
EP3087088B1 (en) 2013-12-23 2022-05-25 University Of Rochester Methods and compositions for ribosomal synthesis of macrocyclic peptides
NZ630311A (en) 2013-12-27 2016-03-31 Celgene Corp Romidepsin formulations and uses thereof
EP2896698A1 (en) 2014-01-17 2015-07-22 BASF Plant Science Company GmbH Plants having one or more enhanced yield-related traits and a method for making the same
US10030237B2 (en) 2014-01-22 2018-07-24 Novozymes A/S Pullulanase variants and polynucleotides encoding same
WO2015109972A1 (en) 2014-01-22 2015-07-30 Novozymes A/S Polypeptides with lipase activity and polynucleotides encoding same
PL3097122T3 (pl) 2014-01-24 2020-10-19 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Przeciwciała wiążące domenę 2 beta klotho oraz sposoby ich stosowania
SG10201803094QA (en) 2014-01-28 2018-06-28 Dice Molecules Sv Llc Monoliths with attached recognition compounds, arrays thereof and uses thereof
US20170166920A1 (en) 2014-01-30 2017-06-15 Two Blades Foundation Plants with enhanced resistance to phytophthora
WO2015120270A1 (en) 2014-02-07 2015-08-13 Pioneer Hi Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
UA120608C2 (uk) 2014-02-07 2020-01-10 Піонір Хай-Бред Інтернешнл, Інк. Очищений поліпептид ptip-83 та спосіб його застосування
EP2910640B1 (en) 2014-02-25 2018-12-05 Biopract GmbH A method for improving substrate degradation in agricultural biogas plants
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
WO2015135464A1 (en) 2014-03-12 2015-09-17 Novozymes A/S Polypeptides with lipase activity and polynucleotides encoding same
CN106659800A (zh) 2014-03-12 2017-05-10 诺华股份有限公司 用于修饰抗体以制备免疫缀合物的特定位点
ES3062708T3 (en) 2014-03-19 2026-04-13 Novozymes As Polypeptides having phospholipase c activity and polynucleotides encoding same
WO2015143144A1 (en) 2014-03-19 2015-09-24 Novozymes A/S Method for enhancing activity of an x143 polypeptide
EP3126479A1 (en) 2014-04-01 2017-02-08 Novozymes A/S Polypeptides having alpha amylase activity
WO2015150372A1 (en) 2014-04-01 2015-10-08 Dupont Nutrition Biosciences Aps Method for increasing crude palm oil yields
AU2015240599B2 (en) 2014-04-04 2020-11-19 Bionomics, Inc. Humanized antibodies that bind LGR5
EP3129478B1 (en) 2014-04-10 2019-03-27 Novozymes A/S Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same
CA2943624A1 (en) 2014-04-10 2015-10-15 10X Genomics, Inc. Fluidic devices, systems, and methods for encapsulating and partitioning reagents, and applications of same
RU2737535C2 (ru) 2014-04-11 2020-12-01 Новозимс А/С Моющая композиция
EP3131921B1 (en) 2014-04-15 2020-06-10 Novozymes A/S Polypeptides with lipase activity and polynucleotides encoding same
CA2943432A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Codexis, Inc. Engineered tyrosine ammonia lyase
SG10201809152QA (en) 2014-04-17 2018-11-29 Boehringer Ingelheim Rcv Gmbh Recombinant host cell for expressing proteins of interest
AU2015248815B2 (en) 2014-04-17 2021-07-08 Boehringer Ingelheim Rcv Gmbh & Co Kg Recombinant host cell engineered to overexpress helper proteins
AR100159A1 (es) 2014-04-22 2016-09-14 Du Pont Genes de anhidrasa carbónica plastídica para el incremento de aceite en semillas con expresión incrementada de dgat
WO2015171603A1 (en) 2014-05-06 2015-11-12 Two Blades Foundation Methods for producing plants with enhanced resistance to oomycete pathogens
CA2948491C (en) 2014-05-09 2024-01-16 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Vaccines against genital herpes simplex infections
EP3143135B1 (en) 2014-05-15 2019-04-10 Novozymes A/S Compositions comprising polypeptides having phospholipase c activity and use thereof
WO2015181119A2 (en) 2014-05-27 2015-12-03 Novozymes A/S Lipase variants and polynucleotides encoding same
WO2015183710A1 (en) 2014-05-30 2015-12-03 Novozymes A/S Variants of gh family 11 xylanase and polynucleotides encoding same
EP2952584A1 (en) 2014-06-04 2015-12-09 Boehringer Ingelheim RCV GmbH & Co KG Improved protein production
CN106414729A (zh) 2014-06-12 2017-02-15 诺维信公司 α‑淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸
EP3154579A1 (en) 2014-06-13 2017-04-19 Friedrich Miescher Institute for Biomedical Research New treatment against influenza virus
ES2694296T3 (es) 2014-06-17 2018-12-19 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Anticuerpos monoclonales anti-pVHL y usos de los mismos
JP6655074B2 (ja) 2014-06-20 2020-02-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド シャガシンに基づく足場組成物、方法及び使用
US20170327553A1 (en) 2014-06-25 2017-11-16 Novartis Ag Compositions and methods for long acting proteins
EP3160990A2 (en) 2014-06-25 2017-05-03 Novartis AG Compositions and methods for long acting proteins
WO2015200659A1 (en) 2014-06-25 2015-12-30 Novozymes A/S Xylanase variants and polynucleotides encoding same
JP2017526046A (ja) 2014-06-26 2017-09-07 １０エックス ゲノミクス，インコーポレイテッド 核酸配列アセンブルのプロセス及びシステム
US12312640B2 (en) 2014-06-26 2025-05-27 10X Genomics, Inc. Analysis of nucleic acid sequences
EP4574974A3 (en) 2014-06-26 2025-10-08 10x Genomics, Inc. Methods of analyzing nucleic acids from individual cells or cell populations
WO2015200869A1 (en) 2014-06-26 2015-12-30 10X Genomics, Inc. Analysis of nucleic acid sequences
WO2016001319A1 (en) 2014-07-03 2016-01-07 Novozymes A/S Improved stabilization of non-protease enzyme
EP3140399B1 (en) 2014-07-04 2018-03-28 Novozymes A/S Subtilase variants and polynucleotides encoding same
EP3739029A1 (en) 2014-07-04 2020-11-18 Novozymes A/S Subtilase variants and polynucleotides encoding same
WO2016007623A1 (en) 2014-07-09 2016-01-14 Codexis, Inc. Novel p450-bm3 variants with improved activity
WO2016020791A1 (en) 2014-08-05 2016-02-11 Novartis Ag Ckit antibody drug conjugates
MA40094B1 (fr) 2014-08-06 2022-05-31 Univ Miami Protéines de fusion de l'interleukine-2/récepteur alpha de l'interleukine-2 et procédés d'utilisation
SG10201805646WA (en) 2014-08-07 2018-08-30 Novartis Ag Angiopoietin-like 4 antibodies and methods of use
WO2016020882A2 (en) 2014-08-07 2016-02-11 Novartis Ag Angiopoetin-like 4 (angptl4) antibodies and methods of use
US20170218384A1 (en) 2014-08-08 2017-08-03 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Ubiquitin promoters and introns and methods of use
PE20170903A1 (es) 2014-08-12 2017-07-12 Novartis Ag Conjugados de farmacos con anticuerpos anti-cdh6
EP3183339A1 (en) 2014-08-20 2017-06-28 Novozymes A/S Xyloglucan endotransglycosylase variants and polynucleotides encoding same
US9963687B2 (en) 2014-08-27 2018-05-08 New England Biolabs, Inc. Fusion polymerase and method for using the same
JP6594955B2 (ja) 2014-08-27 2019-10-23 ニユー・イングランド・バイオレイブス・インコーポレイテツド シントン形成
EP3594335B1 (en) 2014-09-05 2024-05-01 Novozymes A/S Carbohydrate binding module variants and polynucleotides encoding same
WO2016040788A1 (en) 2014-09-11 2016-03-17 Promega Corporation Luciferase sequences utilizing infrared-emitting substrates to produce enhanced luminescence
BR112017003757A2 (pt) 2014-09-12 2017-12-26 Du Pont ?plantas de milho, partes de planta de milho ou sementes de milho?
EP3197557A1 (en) 2014-09-24 2017-08-02 Friedrich Miescher Institute for Biomedical Research Lats and breast cancer
EP4696781A3 (en) 2014-09-26 2026-04-01 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Wheat ms1 polynucleotides, polypeptides, and methods of use
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
US20170292153A1 (en) * 2014-10-14 2017-10-12 Bgi Shenzhen Co., Limited Method for breaking nucleic acid and adding adaptor by means of transposase, and reagent
RU2750459C2 (ru) 2014-10-16 2021-06-28 Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. Инсектицидные полипептиды с широким спектром активности и их применения
WO2016061197A1 (en) 2014-10-16 2016-04-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal polypeptides having improved activity spectrum and uses thereof
CN107108705B (zh) 2014-10-16 2021-05-25 先锋国际良种公司 杀昆虫蛋白及其使用方法
GB201418713D0 (en) 2014-10-21 2014-12-03 Kymab Ltd Bindings Proteins
CN106795505A (zh) 2014-10-23 2017-05-31 诺维信公司 葡糖淀粉酶变体和编码它们的多核苷酸
US20170306360A1 (en) 2014-10-24 2017-10-26 Danisco Us Inc. Method for producing alcohol by use of a tripeptidyl peptidase
AU2015334890B2 (en) 2014-10-24 2021-12-23 Dupont Nutrition Biosciences Aps Proline tolerant tripeptidyl peptidases and uses thereof
WO2016069939A1 (en) 2014-10-29 2016-05-06 10X Genomics, Inc. Methods and compositions for targeted nucleic acid sequencing
EP3215615B1 (en) 2014-11-04 2025-05-21 Novozymes A/S Polypeptides having serine protease activity and polynucleotides encoding same and their application in animal feed
US9975122B2 (en) 2014-11-05 2018-05-22 10X Genomics, Inc. Instrument systems for integrated sample processing
WO2016073610A1 (en) 2014-11-07 2016-05-12 Novozymes A/S Xylanase based bleach boosting
PE20170912A1 (es) 2014-11-14 2017-07-12 Novartis Ag Conjugados de anticuerpo-farmaco
WO2016079305A1 (en) 2014-11-20 2016-05-26 Novozymes A/S Alicyclobacillus variants and polynucleotides encoding same
SG10202012428PA (en) 2014-11-25 2021-01-28 Codexis Inc Engineered imine reductases and methods for the reductive amination of ketone and amine compounds
WO2016087327A1 (en) 2014-12-01 2016-06-09 Novozymes A/S Polypeptides having pullulanase activity comprising the x25, x45 and cbm41 domains
WO2016090059A1 (en) 2014-12-02 2016-06-09 Novozymes A/S Laccase variants and polynucleotides encoding same
RU2710720C2 (ru) 2014-12-04 2020-01-10 Новозимс А/С Варианты субтилазы и кодирующие их полинуклеотиды
CN116286218A (zh) 2014-12-04 2023-06-23 诺维信公司 包括蛋白酶变体的液体清洁组合物
US10457921B2 (en) 2014-12-05 2019-10-29 Novozymes A/S Lipase variants and polynucleotides encoding same
WO2016094837A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Igenica Biotherapeutics, Inc. Anti-c10orf54 antibodies and uses thereof
CN106998697B (zh) 2014-12-12 2021-09-03 先正达参股股份有限公司 用于控制植物有害生物的组合物和方法
MA41142A (fr) 2014-12-12 2017-10-17 Amgen Inc Anticorps anti-sclérostine et utilisation de ceux-ci pour traiter des affections osseuses en tant qu'élements du protocole de traitement
WO2016100309A1 (en) 2014-12-16 2016-06-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Restoration of male fertility in wheat
CN107002049A (zh) 2014-12-16 2017-08-01 诺维信公司 具有n‑乙酰基葡萄糖胺氧化酶活性的多肽
US20170362613A1 (en) 2014-12-19 2017-12-21 Novozymes A/S Recombinant Host Cells For The Production Of 3-Hydroxypropionic Acid
DK3234143T5 (da) 2014-12-19 2024-10-14 Novozymes As Sammensætninger omfattende polypeptider med xylanaseaktivitet og polypeptider med arabinofuranosidaseaktivitet
WO2016097352A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 Novozymes A/S Protease variants and polynucleotides encoding same
UY36449A (es) 2014-12-19 2016-07-29 Novartis Ag Composiciones y métodos para anticuerpos dirigidos a bmp6
EP3234123B1 (en) 2014-12-19 2020-06-03 Novozymes A/S Protease variants and polynucleotides encoding same
US20170360900A1 (en) 2014-12-22 2017-12-21 Codexis, Inc. Human alpha-galactosidase variants
CN107427808B (zh) 2015-01-12 2020-10-23 10X基因组学有限公司 用于制备核酸测序文库的方法和系统以及用其制备的文库
WO2016115273A1 (en) 2015-01-13 2016-07-21 10X Genomics, Inc. Systems and methods for visualizing structural variation and phasing information
EP3244727B1 (en) 2015-01-15 2025-10-22 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
CA2971462A1 (en) 2015-02-04 2016-08-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Novel bt toxin receptors and methods of use
CN107208156B (zh) 2015-02-09 2021-10-08 10X基因组学有限公司 用于使用变异识别数据来确定结构变异和定相的系统和方法
US10602744B2 (en) 2015-02-09 2020-03-31 Bioconsortia, Inc. Agriculturally beneficial microbes, microbial compositions, and consortia
ES2830725T3 (es) 2015-02-10 2021-06-04 Codexis Inc Polipéptidos cetoreductasa para la síntesis de compuestos quirales
KR20170117403A (ko) 2015-02-12 2017-10-23 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 소과 동물에서 사료 소화율을 개선시키는 방법
DK3262165T3 (da) 2015-02-24 2020-08-24 Novozymes As Cellobiohydrolasevarianter og polynukleotider, som koder for dem
EP3262407B1 (en) 2015-02-24 2023-08-30 10X Genomics, Inc. Partition processing methods and systems
CN107532202A (zh) 2015-02-24 2018-01-02 10X 基因组学有限公司 用于靶向核酸序列覆盖的方法
WO2016138315A1 (en) 2015-02-25 2016-09-01 Danisco Us Inc Alpha-glucosidase, compositions & methods
CN107406821B (zh) 2015-02-27 2021-10-15 诺维信公司 用于生产3-羟基丙酸的突变宿主细胞
KR102740384B1 (ko) 2015-03-03 2024-12-06 키맵 리미티드 항체, 용도 및 방법
CA2977026A1 (en) 2015-03-11 2016-09-15 E.I. Du Pont De Nemours And Company Insecticidal combinations of pip-72 and methods of use
WO2016142536A1 (en) 2015-03-11 2016-09-15 Genencor International B.V. Enzymatic activity of lytic polysaccharide monooxygenase
CN107428817B (zh) 2015-03-12 2022-07-12 免疫医疗有限责任公司 纯化白蛋白融合蛋白的方法
EP3070103A1 (en) 2015-03-19 2016-09-21 Institut Hospitalier Universitaire De Strasbourg Anti-Claudin 1 monoclonal antibodies for the prevention and treatment of hepatocellular carcinoma
US11124747B2 (en) 2015-03-19 2021-09-21 Novozymes A/S Brewing method
WO2016149352A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 Pioneer Hi-Bred International Inc Methods and compositions for accelerated trait introgression
EP3280817A2 (en) 2015-04-07 2018-02-14 Novozymes A/S Methods for selecting enzymes having enhanced activity
EP3280818A2 (en) 2015-04-07 2018-02-14 Novozymes A/S Methods for selecting enzymes having lipase activity
EP3280791A1 (en) 2015-04-10 2018-02-14 Novozymes A/S Laundry method, use of dnase and detergent composition
CN107636134A (zh) 2015-04-10 2018-01-26 诺维信公司 洗涤剂组合物
CA2981053A1 (en) 2015-04-17 2016-10-20 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
MA41951A (fr) 2015-04-22 2018-02-28 Agbiome Inc Gènes insecticides et procédés d'utilisation
CN104805508B (zh) * 2015-04-29 2017-07-14 江南大学 一种基于合成单链dna文库进化代谢途径的方法
WO2016179522A1 (en) 2015-05-06 2016-11-10 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions for the production of unreduced, non-recombined gametes and clonal offspring
JP6755886B2 (ja) 2015-05-07 2020-09-16 コデクシス， インコーポレイテッド ペニシリンｇアシラーゼ
JP7175612B2 (ja) 2015-05-08 2022-11-21 ノボザイムス アクティーゼルスカブ アルファ－アミラーゼ多様体およびこの多様体をコードするポリヌクレオチド
US10316275B2 (en) 2015-05-08 2019-06-11 Novozymes A/S Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same
EP3294883A1 (en) 2015-05-08 2018-03-21 Novozymes A/S Alpha-amylase variants having improved performance and stability
EP3294892B1 (en) 2015-05-09 2020-11-25 Two Blades Foundation Late blight resistance gene from solanum americanum and methods of use
RU2017144238A (ru) 2015-05-19 2019-06-19 Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. Инсектицидные белки и способы их применения
EP3297661B1 (en) 2015-05-21 2021-06-30 Full Spectrum Genetics, Inc. Method of improving characteristics of proteins
EP3303578B1 (en) 2015-05-27 2020-07-08 Novozymes A/S Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same
WO2016196202A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Novozymes A/S Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same
BR112017025929A2 (pt) 2015-06-03 2018-08-14 Agbiome Inc genes pesticidas e métodos de uso
US10450539B2 (en) 2015-06-04 2019-10-22 Novozymes A/S Use of M4 metalloprotease in wort production
EA201792561A1 (ru) 2015-06-05 2018-04-30 Новартис Аг Антитела, нацеленные на морфогенетический белок кости 9 (bmp9), и способы их применения
EP3310908B1 (en) 2015-06-16 2020-08-05 Novozymes A/S Polypeptides with lipase activity and polynucleotides encoding same
WO2016205502A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant regulatory elements and methods of use thereof
WO2016203432A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Novartis Ag Antibody drug conjugates
EP3310912B1 (en) 2015-06-18 2021-01-27 Novozymes A/S Subtilase variants and polynucleotides encoding same
EP3106508B1 (en) 2015-06-18 2019-11-20 Henkel AG & Co. KGaA Detergent composition comprising subtilase variants
EP3310910A1 (en) 2015-06-18 2018-04-25 Novozymes A/S Polypeptides having trehalase activity and the use thereof in process of producing fermentation products
RU2742467C2 (ru) 2015-06-22 2021-02-08 Агбайоми, Инк. Пестицидные гены и способы применения
ES2879249T3 (es) 2015-06-24 2021-11-22 Genencor Int Bv Polipéptidos que tienen actividad de desmetilación
US10851399B2 (en) 2015-06-25 2020-12-01 Native Microbials, Inc. Methods, apparatuses, and systems for microorganism strain analysis of complex heterogeneous communities, predicting and identifying functional relationships and interactions thereof, and selecting and synthesizing microbial ensembles based thereon
US9938558B2 (en) 2015-06-25 2018-04-10 Ascus Biosciences, Inc. Methods, apparatuses, and systems for analyzing microorganism strains from complex heterogeneous communities, predicting and identifying functional relationships and interactions thereof, and selecting and synthesizing microbial ensembles based thereon
AU2016282996A1 (en) 2015-06-25 2018-01-18 Ascus Biosciences, Inc. Methods, apparatuses, and systems for analyzing microorganism strains from complex heterogeneous communities, predicting and identifying functional relationships and interactions thereof, and selecting and synthesizing microbial ensembles based thereon
US10632157B2 (en) 2016-04-15 2020-04-28 Ascus Biosciences, Inc. Microbial compositions and methods of use for improving fowl production
UY36751A (es) 2015-06-26 2017-01-31 Novartis Ag Anticuerpos de factor xi y métodos de uso
WO2016206621A1 (en) 2015-06-26 2016-12-29 Novozymes A/S Biofinishing system
WO2016207373A1 (en) 2015-06-26 2016-12-29 Novozymes A/S Polypeptides having peroxygenase activity
DK3313193T3 (da) 2015-06-26 2021-06-07 Novozymes As Fremgangsmåde til fremstilling af en kaffeekstrakt
CA2990822A1 (en) 2015-06-26 2016-12-29 Dupont Nutrition Biosciences Aps Aminopeptidases for protein hydrlyzates
CA3175255A1 (en) 2015-07-01 2017-01-05 Novozymes A/S Methods of reducing odor
AU2016286612B2 (en) 2015-07-02 2021-01-28 Novozymes A/S Animal feed compositions and uses thereof
EP3320089B1 (en) 2015-07-06 2021-06-16 Novozymes A/S Lipase variants and polynucleotides encoding same
US9683220B2 (en) 2015-07-07 2017-06-20 Codexis, Inc. P450-BM3 variants with improved activity
US10577594B2 (en) 2015-07-24 2020-03-03 Novozymes, Inc. Polypeptides having arabinofuranosidase activity and polynucleotides encoding same
US20180216089A1 (en) 2015-07-24 2018-08-02 Novozymes, Inc. Polypeptides Having Beta-Xylosidase Activity And Polynucleotides Encoding Same
CN109072168B (zh) 2015-07-25 2023-07-07 生物联盟有限公司 农业上有利的微生物、微生物组合物以及聚生体
WO2017021893A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Novartis Ag Methods of treating fgf21-associated disorders
CN109475096B (zh) 2015-08-06 2022-08-23 先锋国际良种公司 植物来源的杀昆虫蛋白及其使用方法
WO2017029407A1 (en) 2015-08-20 2017-02-23 Albumedix A/S Albumin variants and conjugates
EP3341475A1 (en) 2015-08-24 2018-07-04 Novozymes A/S Beta-alanine aminotransferases for the production of 3-hydroxypropionic acid
EP3347466B9 (en) 2015-09-08 2024-06-26 Cold Spring Harbor Laboratory Genetic copy number determination using high throughput multiplex sequencing of smashed nucleotides
KR20180042433A (ko) 2015-09-09 2018-04-25 노파르티스 아게 흉선 기질 림포포이에틴 (tslp)-결합 항체 및 항체의 사용 방법
TWI799366B (zh) 2015-09-15 2023-04-21 美商建南德克公司 胱胺酸結骨架平臺
CN108449941B (zh) 2015-09-22 2022-03-11 豪夫迈·罗氏有限公司 OmpG变体
WO2017050242A1 (en) 2015-09-22 2017-03-30 Novozymes A/S Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same
EP3355920A4 (en) 2015-09-29 2019-05-15 Celgene Corporation PD-1 BINDING PROTEINS AND METHOD OF USE THEREOF
WO2017062343A1 (en) 2015-10-06 2017-04-13 Pierce Biotechnology, Inc. Devices and methods for producing nucleic acids and proteins
WO2017060475A2 (en) 2015-10-07 2017-04-13 Novozymes A/S Polypeptides
WO2017062790A1 (en) 2015-10-09 2017-04-13 Two Blades Foundation Cold shock protein receptors and methods of use
DK3362574T3 (da) 2015-10-14 2021-10-11 Novozymes As Glucoamylasevarianter og polynukleotider, der koder for dem
CN108291215A (zh) 2015-10-14 2018-07-17 诺维信公司 具有蛋白酶活性的多肽以及编码它们的多核苷酸
EP3362556B1 (en) 2015-10-14 2024-07-10 Novozymes A/S Polypeptide variants
CN108367251A (zh) 2015-10-14 2018-08-03 诺维信公司 滤水膜的清洁
WO2017070219A1 (en) 2015-10-20 2017-04-27 Novozymes A/S Lytic polysaccharide monooxygenase (lpmo) variants and polynucleotides encoding same
MX388896B (es) 2015-10-28 2025-03-20 Novozymes As Composicion detergente que comprende variantes de amilasa y proteasa.
US20180348224A1 (en) 2015-10-28 2018-12-06 Friedrich Miescher Institute For Biomedical Resear Ch Tenascin-w and biliary tract cancers
ITUB20155272A1 (it) 2015-11-02 2017-05-02 Scuola Normale Superiore Intracellular antibody
EP3370509B1 (en) 2015-11-03 2025-12-31 The Sainsbury Laboratory YELLOW RUST RESISTANCE GENES OF WHEAT AND METHODS OF USE
US20180258438A1 (en) 2015-11-06 2018-09-13 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Generation of complex trait loci in soybean and methods of use
EP3380608A1 (en) 2015-11-24 2018-10-03 Novozymes A/S Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same
CA3004913A1 (en) 2015-11-30 2017-06-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant regulatory elements and methods of use thereof
WO2017093318A1 (en) 2015-12-01 2017-06-08 Novozymes A/S Methods for producing lipases
SG10202108763UA (en) 2015-12-04 2021-09-29 10X Genomics Inc Methods and compositions for nucleic acid analysis
US9988624B2 (en) 2015-12-07 2018-06-05 Zymergen Inc. Microbial strain improvement by a HTP genomic engineering platform
CA3007840C (en) 2015-12-07 2020-09-15 Zymergen Inc. Microbial strain improvement by a htp genomic engineering platform
US10035995B2 (en) 2015-12-07 2018-07-31 Eastman Chemical Company CALB variants
WO2017097861A1 (en) 2015-12-07 2017-06-15 Henkel Ag & Co. Kgaa Dishwashing compositions comprising polypeptides having beta-glucanase activity and uses thereof
US11208649B2 (en) 2015-12-07 2021-12-28 Zymergen Inc. HTP genomic engineering platform
CA3007635A1 (en) 2015-12-07 2017-06-15 Zymergen Inc. Promoters from corynebacterium glutamicum
CN108575091A (zh) 2015-12-18 2018-09-25 先锋国际良种公司 杀昆虫蛋白及其使用方法
CA3008102A1 (en) 2015-12-18 2017-06-22 Novartis Ag Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof
US10358654B2 (en) 2015-12-22 2019-07-23 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
JP7146637B2 (ja) 2015-12-22 2022-10-04 アルブミディクス リミティド 改善されたタンパク質発現株
WO2017112847A1 (en) 2015-12-22 2017-06-29 Albumedix A/S Improved protein expression strains
BR112018012887B1 (pt) 2015-12-22 2024-02-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc Cassete de expressão, vetor, métodos de obtenção de célula vegetal e planta transgênica, métodos para expressar um polinucleotídeo
CN119120430A (zh) 2015-12-30 2024-12-13 诺维信公司 酶变体以及编码它们的多核苷酸
CA3010505A1 (en) 2016-01-07 2017-07-13 Ascus Biosciences, Inc. Methods for improving milk production by administration of microbial consortia
EP3405492B1 (en) 2016-01-21 2020-10-21 Novartis AG Multispecific molecules targeting cll-1
CA3007148A1 (en) 2016-01-29 2017-08-03 Novozymes A/S Beta-glucanase variants and polynucleotides encoding same
SG11201806757XA (en) 2016-02-11 2018-09-27 10X Genomics Inc Systems, methods, and media for de novo assembly of whole genome sequence data
GB201602535D0 (en) 2016-02-12 2016-03-30 Univ Edinburgh Improved flu vaccine yield
US11685911B2 (en) 2016-02-16 2023-06-27 Monaghan Mushroom S Group Fungal polypeptides having lysozyme activity
US10072267B2 (en) 2016-02-22 2018-09-11 Danisco Us Inc Fungal high-level protein production system
US10988749B2 (en) 2016-02-23 2021-04-27 Da Volterra Beta-lactamase variants
CA3013166A1 (en) 2016-02-23 2017-08-31 Da Volterra Beta-lactamase variants
CA3013383A1 (en) 2016-02-25 2017-08-31 Dupont Nutrition Biosciences Aps Method for producing a protein hydrolysate employing an aspergillus fumigatus tripeptidyl peptidase
EP3423576B1 (en) 2016-02-29 2021-05-12 Genia Technologies, Inc. Polymerase variants
EP4410974A3 (en) 2016-03-02 2025-04-02 Novozymes A/S Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same
GB201604124D0 (en) 2016-03-10 2016-04-27 Ucb Biopharma Sprl Pharmaceutical formulation
KR20180138205A (ko) 2016-03-22 2018-12-28 바이오노믹스 리미티드 항-lgr5 단클론성 항체의 투여
CN109072209A (zh) 2016-03-24 2018-12-21 诺维信公司 纤维二糖水解酶变体和编码其的多核苷酸
US9988641B2 (en) 2016-04-05 2018-06-05 Corn Products Development, Inc. Compositions and methods for producing starch with novel functionality
US20190161786A1 (en) 2016-04-07 2019-05-30 Novozymes A/S Methods for selecting enzymes having protease activity
CA3012362A1 (en) 2016-04-14 2017-10-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal polypeptides having improved activity spectrum and uses thereof
CA3020833A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Ascus Biosciences, Inc. Methods for improving agricultural production of fowl by administration of microbial consortia or purified strains thereof
AR108284A1 (es) 2016-04-19 2018-08-08 Pioneer Hi Bred Int Combinaciones insecticidas de polipéptidos que tienen espectro de actividad mejorado y usos de éstas
CN109071647B (zh) 2016-04-27 2022-11-22 诺华股份有限公司 抗生长分化因子15的抗体及其用途
MX391044B (es) 2016-04-29 2025-03-21 Novozymes As Composiciones detergentes y sus usos.
BR112018071972A2 (pt) 2016-04-29 2019-02-26 Defensin Therapeutics Aps métodos para tratamento ou prevenção de uma doença ou distúrbio de fígado, para tratamento de câncer de fígado e para tratamento de inflamação no fígado, trato biliar ou pâncreas de um animal, alfa-defensina e/ou ss-defensina de mamífero e/ou uma catelicidina e/ou um análogo de glp-1, e, uso dos mesmos.
CN109415421B (zh) 2016-05-03 2023-02-28 诺维信公司 α-淀粉酶变体以及编码它们的多核苷酸
EA201892293A1 (ru) 2016-05-04 2019-04-30 Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. Инсектицидные белки и способы их применения
WO2017193022A1 (en) 2016-05-05 2017-11-09 Codexis, Inc. Penicillin-g acylases
US11186833B2 (en) 2016-05-09 2021-11-30 Novozymes A/S Variant polypeptides with improved performance and use of the same
WO2017197343A2 (en) 2016-05-12 2017-11-16 10X Genomics, Inc. Microfluidic on-chip filters
WO2017197338A1 (en) 2016-05-13 2017-11-16 10X Genomics, Inc. Microfluidic systems and methods of use
EP3246401A1 (en) 2016-05-20 2017-11-22 Commissariat À L'Énergie Atomique Et Aux Énergies Alternatives New fatty acid decarboxylase and its uses
EP3462904B1 (en) 2016-05-24 2024-12-18 Novozymes A/S Gastric stable polypeptides having alpha-galactosidase activity and polynucleotides encoding same
WO2017202997A1 (en) 2016-05-24 2017-11-30 Novozymes A/S Compositions comprising polypeptides having galactanase activity and polypeptides having beta-galactosidase activity
MX2018014434A (es) 2016-05-24 2019-03-28 Novozymes As Composiciones que comprenden polipeptidos que tienen actividad galactanasa y polipeptidos que tienen actividad beta-galactosidasa.
WO2017202966A1 (en) 2016-05-24 2017-11-30 Novozymes A/S Polypeptides having alpha-galactosidase activity and polynucleotides encoding same
TW201802121A (zh) 2016-05-25 2018-01-16 諾華公司 抗因子XI/XIa抗體之逆轉結合劑及其用途
WO2017205535A1 (en) 2016-05-27 2017-11-30 Novozymes, Inc. Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same
EP3464538A1 (en) 2016-05-31 2019-04-10 Novozymes A/S Stabilized liquid peroxide compositions
EP3464582A1 (en) 2016-06-03 2019-04-10 Novozymes A/S Subtilase variants and polynucleotides encoding same
WO2017211803A1 (en) 2016-06-07 2017-12-14 Novozymes A/S Co-expression of heterologous polypeptides to increase yield
WO2017213758A1 (en) 2016-06-09 2017-12-14 Codexis, Inc. Biocatalysts and methods for hydroxylation of chemical compounds
CA3027651A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Novartis Ag Methods for treating disease using inhibitors of bone morphogenetic protein 6 (bmp6)
US11299723B2 (en) 2016-06-15 2022-04-12 Codexis, Inc. Engineered beta-glucosidases and glucosylation methods
EP3472186A1 (en) 2016-06-17 2019-04-24 National Hellenic Research Foundation Systems for recombinant protein production
RU2019101793A (ru) 2016-06-24 2020-07-24 Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. Регуляторные элементы растений и способы их применения
US11203732B2 (en) 2016-06-30 2021-12-21 Novozymes A/S Lipase variants and compositions comprising surfactant and lipase variant
WO2018005793A1 (en) 2016-06-30 2018-01-04 Zymergen Inc. Methods for generating a glucose permease library and uses thereof
JP2019519242A (ja) 2016-06-30 2019-07-11 ザイマージェン インコーポレイテッド 細菌ヘモグロビンライブラリーを生成するための方法およびその使用
WO2018002379A2 (en) 2016-07-01 2018-01-04 Novozymes A/S Enzymatic preparation of indigo dyes and in situ dyeing process
CA3026113A1 (en) 2016-07-01 2018-01-04 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins from plants and methods for their use
WO2018002261A1 (en) 2016-07-01 2018-01-04 Novozymes A/S Detergent compositions
CN109715794A (zh) 2016-07-05 2019-05-03 诺维信公司 果胶裂解酶变体以及编码它们的多核苷酸
MX2019000139A (es) 2016-07-08 2019-06-10 Novozymes As Polipeptidos que tienen actividad xilanasa y polinucleotidos que los codifican.
WO2018007573A1 (en) 2016-07-08 2018-01-11 Novozymes A/S Detergent compositions with galactanase
DK3481948T5 (da) 2016-07-08 2024-09-02 Novozymes As Xylanasevarianter og polynukleotider, der koder for dem
WO2018011277A1 (en) 2016-07-13 2018-01-18 Novozymes A/S Bacillus cibi dnase variants
WO2018015295A1 (en) 2016-07-18 2018-01-25 Novozymes A/S Lipase variants, polynucleotides encoding same and the use thereof
CN109477083B (zh) 2016-07-20 2023-06-06 诺维信公司 热稳定性宏基因组碳酸酐酶及其用途
WO2018015304A1 (en) 2016-07-21 2018-01-25 Novozymes A/S Serine protease variants and polynucleotides encoding same
EP3487995B1 (en) 2016-07-21 2021-05-26 Novozymes A/S Serine protease variants and polynucleotides encoding same
WO2018015444A1 (en) 2016-07-22 2018-01-25 Novozymes A/S Crispr-cas9 genome editing with multiple guide rnas in filamentous fungi
WO2018026868A1 (en) 2016-08-01 2018-02-08 Novozymes, Inc. Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same
WO2018037061A1 (en) 2016-08-24 2018-03-01 Novozymes A/S Xanthan lyase variants and polynucleotides encoding same
WO2018037065A1 (en) 2016-08-24 2018-03-01 Henkel Ag & Co. Kgaa Detergent composition comprising gh9 endoglucanase variants i
US11072765B2 (en) 2016-08-24 2021-07-27 Novozymes A/S GH9 endoglucanase variants and polynucleotides encoding same
AU2017317563B8 (en) 2016-08-24 2023-03-23 Henkel Ag & Co. Kgaa Detergent compositions comprising xanthan lyase variants I
SG10202111589RA (en) 2016-08-26 2021-11-29 Codexis Inc Engineered imine reductases and methods for the reductive amination of ketone and amine compounds
EP4219528A3 (en) 2016-09-06 2023-09-13 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
JP2019534858A (ja) 2016-09-09 2019-12-05 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｆｒｉｚｚｌｅｄの選択的ペプチド阻害剤
US11578316B2 (en) 2016-09-16 2023-02-14 Dupont Nutrition Biosciences Aps Acetolactate decarboxylase variants having improved specific activity
WO2018053405A1 (en) 2016-09-19 2018-03-22 Celgene Corporation Methods of treating immune disorders using pd-1 binding proteins
EP3515943A4 (en) 2016-09-19 2020-05-06 Celgene Corporation METHODS OF TREATING VITILIGO WITH PD-1 BINDING PROTEINS
CA3036968A1 (en) 2016-09-20 2018-03-29 22Nd Century Limited, Llc Trichome specific promoters for the manipulation of cannabinoids and other compounds in glandular trichomes
US20190284647A1 (en) 2016-09-29 2019-09-19 Novozymes A/S Spore Containing Granule
WO2018063870A1 (en) 2016-09-30 2018-04-05 Dow Agrosciences Llc Binary insecticidal cry toxins
WO2018077938A1 (en) 2016-10-25 2018-05-03 Novozymes A/S Detergent compositions
EP3535285B1 (en) 2016-11-01 2022-04-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
WO2018085370A1 (en) 2016-11-02 2018-05-11 Novozymes A/S Processes for reducing production of primeverose during enzymatic saccharification of lignocellulosic material
US11779604B2 (en) 2016-11-03 2023-10-10 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses and methods
CN110312800B (zh) 2016-11-11 2025-01-10 生物辐射实验室股份有限公司 处理核酸样本的方法
CN110168102A (zh) * 2016-11-15 2019-08-23 基因组影像公司 利用分子梳理监测经修饰的核酸酶诱导的基因编辑事件的方法
US20210284991A1 (en) 2016-11-21 2021-09-16 Novozymes A/S Yeast Cell Extract Assisted Construction of DNA Molecules
BR112019010476A2 (pt) 2016-11-23 2019-09-10 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC molécula de ácido nucleico recombinante, vetor, célula hospedeira, planta transgênica, semente transgênica, polipeptídeo recombinante, composição, método para controlar uma população de pragas, para matar pragas, para produzir um polipeptídeo, planta ou célula vegetal, método para proteger uma planta contra uma praga, para aumentar o rendimento em uma planta, uso e produto primário
WO2018098124A1 (en) 2016-11-23 2018-05-31 Novozymes A/S Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same
CN110177873A (zh) 2016-11-29 2019-08-27 诺维信公司 α-淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸
AU2017369532B2 (en) 2016-11-30 2022-03-24 Novozymes A/S Method of baking
US20190345522A1 (en) 2016-12-06 2019-11-14 Novozymes A/S Improved Processes For Production Of Ethanol From Xylose-Containing Cellulosic Substrates Using Engineered Yeast Strains
US11413328B2 (en) 2016-12-13 2022-08-16 Novozymes A/S Methods for treating inflammatory conditions of the lungs
CA3044404A1 (en) 2016-12-14 2018-06-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
EP3555299A1 (en) 2016-12-16 2019-10-23 Two Blades Foundation Late blight resistance genes and methods of use
EP3538063B1 (en) 2016-12-20 2022-11-30 Colgate-Palmolive Company Oral care composition and methods for whitening teeth
EP3534872B1 (en) 2016-12-20 2022-03-23 Colgate-Palmolive Company Two-phase oral care whitening compositions
DK3559234T3 (da) 2016-12-20 2021-11-15 Novozymes As Rekombinante gærstammer til pentosefermentering
US10426719B2 (en) 2016-12-20 2019-10-01 Colgate-Palmolive Company Oral care compositions and methods for whitening teeth
US10986850B2 (en) 2016-12-21 2021-04-27 Novozymes A/S Polypeptides having lysozyme activity, polynucleotides encoding same and uses and compositions thereof
EP3558004A1 (en) 2016-12-22 2019-10-30 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
US10815525B2 (en) 2016-12-22 2020-10-27 10X Genomics, Inc. Methods and systems for processing polynucleotides
EA201991547A1 (ru) 2016-12-22 2020-01-17 БАСФ АГРИКУЛЬЧУРАЛ СОЛЮШНС СИД УС ЛЛСи Применение cry14 для борьбы с вредителями нематодами
US10550429B2 (en) 2016-12-22 2020-02-04 10X Genomics, Inc. Methods and systems for processing polynucleotides
US10011872B1 (en) 2016-12-22 2018-07-03 10X Genomics, Inc. Methods and systems for processing polynucleotides
US20200231701A1 (en) 2016-12-23 2020-07-23 Novartis Ag Methods of treatment with anti-factor xi/xia antibodies
BR112019012667A2 (pt) 2016-12-23 2020-02-11 Novartis Ag Anticorpos do fator xi e métodos de uso
CN110366596A (zh) 2016-12-28 2019-10-22 埃斯库斯生物科技股份公司 用于对复杂异质群落中的完整微生物株系进行分析、确定其功能关系及相互作用以及基于此来识别和合成生物活性改性剂的方法、设备和系统
AU2017388535A1 (en) 2016-12-28 2019-07-25 Native Microbials, Inc. Methods, apparatuses, and systems for microorganism strain analysis of complex heterogeneous communities with tracer analytics, determination of functional relationships and interactions thereof, and synthesis of microbial ensembles including dosed microbial ensembles and inoculative microbial ensembles
US20180230218A1 (en) 2017-01-04 2018-08-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
CA3048475A1 (en) 2017-01-05 2018-07-12 Codexis, Inc. Penicillin-g acylases
WO2018136604A1 (en) 2017-01-18 2018-07-26 Bayer Cropscience Lp Bp005 toxin gene and methods for its use
US11286498B2 (en) 2017-01-18 2022-03-29 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Use of BP005 for the control of plant pathogens
WO2018140214A1 (en) 2017-01-24 2018-08-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Nematicidal protein from pseudomonas
US12264411B2 (en) 2017-01-30 2025-04-01 10X Genomics, Inc. Methods and systems for analysis
CN110506117A (zh) 2017-01-30 2019-11-26 农业生物群落股份有限公司 杀虫基因及使用方法
EP4310183B1 (en) 2017-01-30 2025-07-09 10X Genomics, Inc. Methods and systems for droplet-based single cell barcoding
CA3051426C (en) 2017-02-01 2023-10-17 The Procter & Gamble Company Cleaning compositions comprising amylase variants
BR112019015943A2 (pt) 2017-02-01 2020-04-07 Novozymes A/S variantes de alfa-amilase
EP3878967A3 (en) 2017-02-03 2021-12-08 Codexis, Inc. Engineered glycosyltransferases and steviol glycoside glucosylation methods
JOP20190187A1 (ar) 2017-02-03 2019-08-01 Novartis Ag مترافقات عقار جسم مضاد لـ ccr7
EP3580237B1 (en) 2017-02-08 2025-05-14 Novartis AG Fgf21 mimetic antibodies and uses thereof
WO2018148001A1 (en) 2017-02-08 2018-08-16 Pioneer Hi-Bred International Inc Insecticidal combinations of plant derived insecticidal proteins and methods for their use
SG11201906880VA (en) 2017-02-13 2019-08-27 Codexis Inc Engineered phenylalanine ammonia lyase polypeptides
CA3051770A1 (en) 2017-02-20 2018-08-23 Novozymes A/S Lipolytic enzyme for use in baking
EP3363900A1 (en) * 2017-02-21 2018-08-22 ETH Zurich Evolution-guided multiplexed dna assembly of dna parts, pathways and genomes
CN110603322A (zh) 2017-03-07 2019-12-20 丹尼斯科美国公司 热稳定的葡糖淀粉酶及其使用方法
WO2018178126A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 Boehringer Ingelheim Rcv Gmbh & Co Kg Recombinant host cell with altered membrane lipid composition
WO2018177936A1 (en) 2017-03-31 2018-10-04 Novozymes A/S Polypeptides having dnase activity
EP3601552A4 (en) 2017-03-31 2022-01-12 Novozymes A/S POLYPEPTIDES WITH DNASE ACTIVITY
EP3601551A1 (en) 2017-03-31 2020-02-05 Novozymes A/S Polypeptides having rnase activity
US11208639B2 (en) 2017-03-31 2021-12-28 Novozymes A/S Polypeptides having DNase activity
WO2018185618A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Novartis Ag Anti-cdh6 antibody drug conjugates and anti-gitr antibody combinations and methods of treatment
WO2018185150A1 (en) 2017-04-04 2018-10-11 Novozymes A/S Polypeptides
US20200109352A1 (en) 2017-04-04 2020-04-09 Novozymes A/S Polypeptide compositions and uses thereof
CN114480034A (zh) 2017-04-04 2022-05-13 诺维信公司 糖基水解酶
CA3058757A1 (en) 2017-04-11 2018-10-18 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
CN110651048A (zh) 2017-04-11 2020-01-03 诺维信公司 葡糖淀粉酶变体和编码它们的多核苷酸
CN110753684A (zh) 2017-04-24 2020-02-04 特沙诺有限公司 尼拉帕利的制造方法
WO2018197520A1 (en) 2017-04-24 2018-11-01 Dupont Nutrition Biosciences Aps Methods and compositions of anti-crispr proteins for use in plants
US11021729B2 (en) 2017-04-27 2021-06-01 Codexis, Inc. Ketoreductase polypeptides and polynucleotides
WO2018201049A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Ascus Biosciences, Inc. Methods for supporting grain intensive and/or energy intensive diets in ruminants with a synthetic bioensemble of microbes
CN110651038B (zh) 2017-05-05 2025-02-18 诺维信公司 包含脂肪酶和亚硫酸根的组合物
WO2018206535A1 (en) 2017-05-08 2018-11-15 Novozymes A/S Carbohydrate-binding domain and polynucleotides encoding the same
EP3622063A1 (en) 2017-05-08 2020-03-18 Novozymes A/S Mannanase variants and polynucleotides encoding same
CA3062550A1 (en) 2017-05-08 2018-11-15 Codexis, Inc. Engineered ligase variants
EP3622064B1 (en) 2017-05-08 2025-05-14 Novozymes A/S Mannanase variants and polynucleotides encoding same
CN110621780B (zh) 2017-05-11 2024-03-19 先锋国际良种公司 杀昆虫蛋白及其使用方法
CN110870018B (zh) 2017-05-19 2024-11-22 10X基因组学有限公司 用于分析数据集的系统和方法
KR20200010285A (ko) 2017-05-19 2020-01-30 지머젠 인코포레이티드 증가된 nadph를 유도하는 생합성 경로의 게놈 공학
WO2018215937A1 (en) 2017-05-24 2018-11-29 Novartis Ag Interleukin-7 antibody cytokine engrafted proteins and methods of use in the treatment of cancer
JOP20190271A1 (ar) 2017-05-24 2019-11-21 Novartis Ag بروتينات مطعّمة بسيتوكين- الجسم المضاد وطرق الاستخدام للاضطرابات المتعلقة بالمناعة
JP2020520671A (ja) 2017-05-24 2020-07-16 ノバルティス アーゲー 抗体−サイトカイングラフト化タンパク質及び使用方法
CN110662762A (zh) 2017-05-24 2020-01-07 诺华股份有限公司 抗体细胞因子移植蛋白和用于治疗癌症的方法
CN109526228B (zh) 2017-05-26 2022-11-25 10X基因组学有限公司 转座酶可接近性染色质的单细胞分析
WO2018217333A1 (en) 2017-05-26 2018-11-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal polypeptides having improved activity spectrum and uses thereof
US10844372B2 (en) 2017-05-26 2020-11-24 10X Genomics, Inc. Single cell analysis of transposase accessible chromatin
US11091753B2 (en) 2017-05-31 2021-08-17 Novozymes A/S Xylose fermenting yeast strains and processes thereof for ethanol production
WO2018222990A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 Novozymes A/S Improved yeast for ethanol production
KR20200026874A (ko) 2017-06-06 2020-03-11 지머젠 인코포레이티드 대장균 개량을 위한 htp 게놈 공학 플랫폼
EP3635111A1 (en) 2017-06-06 2020-04-15 Zymergen, Inc. High throughput transposon mutagenesis
KR20200026878A (ko) 2017-06-06 2020-03-11 지머젠 인코포레이티드 균류 균주를 개량하기 위한 htp 게놈 공학 플랫폼
JP7350659B2 (ja) 2017-06-06 2023-09-26 ザイマージェン インコーポレイテッド Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ ｓｐｉｎｏｓａの改良のためのハイスループット（ＨＴＰ）ゲノム操作プラットフォーム
WO2018224544A1 (en) 2017-06-08 2018-12-13 Novozymes A/S Compositions comprising polypeptides having cellulase activity and amylase activity, and uses thereof in cleaning and detergent compositions
WO2018224035A1 (en) 2017-06-09 2018-12-13 Novozymes A/S Polypeptide, use and method for hydrolysing protein
CA3064574A1 (en) 2017-06-14 2018-12-20 Codexis, Inc. Engineered transaminase polypeptides for industrial biocatalysis
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
DK3642343T3 (en) 2017-06-20 2022-03-14 Albumedix Ltd Improved protein expression strains
DK3642339T3 (da) 2017-06-22 2025-12-15 Novozymes As Xylanasevarianter og polynukleotider, der koder for dem
CN117737045A (zh) 2017-06-27 2024-03-22 科德克希思公司 青霉素g酰化酶
US11584783B2 (en) 2017-06-28 2023-02-21 Novozymes A/S Processes for producing a fermentation product
CN111417724A (zh) 2017-06-30 2020-07-14 科德克希思公司 T7 rna聚合酶变体
WO2019005540A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Codexis, Inc. T7 POLYMERASE RNA VARIANTS
EP3645692B1 (en) 2017-06-30 2025-12-31 Novozymes A/S ENZYMATIC SUSPENSION COMPOSITION
WO2019016772A2 (en) 2017-07-21 2019-01-24 Novartis Ag COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING CANCER
EP3658610B1 (en) 2017-07-24 2023-10-25 Novozymes A/S Gh5 and gh30 in wet milling
US11261458B2 (en) 2017-07-28 2022-03-01 Two Blades Foundation Potyvirus resistance genes and methods of use
US20190040411A1 (en) 2017-08-03 2019-02-07 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
EP3665275A1 (en) 2017-08-08 2020-06-17 Novozymes A/S Polypeptides having trehalase activity and the use thereof in process of producing fermentation products
WO2019040335A1 (en) 2017-08-19 2019-02-28 University Of Rochester MICHELOLID DERIVATIVES, PREPARATION METHODS AND THEIR USE AS ANTICANCER AND ANTI-INFLAMMATORY AGENTS
WO2019038058A1 (en) 2017-08-24 2019-02-28 Novozymes A/S GH9 ENDOGLUCANASE VARIANTS AND POLYNUCLEOTIDES ENCODING SUCH VARIANTS
EP3673060A1 (en) 2017-08-24 2020-07-01 Henkel AG & Co. KGaA Detergent composition comprising xanthan lyase variants ii
CA3071078A1 (en) 2017-08-24 2019-02-28 Novozymes A/S Xanthan lyase variants and polynucleotides encoding same
US11624059B2 (en) 2017-08-24 2023-04-11 Henkel Ag & Co. Kgaa Detergent compositions comprising GH9 endoglucanase variants II
MX2020002165A (es) 2017-08-29 2020-08-13 Novozymes As Levadura de panadería que expresa amilasas contra el endurecimiento/frescura.
ES3038027T3 (en) 2017-08-31 2025-10-09 Novozymes As Polypeptides having d-psicose 3-epimerase activity and polynucleotides encoding same
AU2018322865B2 (en) 2017-09-01 2023-11-09 Novozymes A/S Animal feed additives comprising polypeptide having protease activity and uses thereof
HUE069804T2 (hu) 2017-09-01 2025-04-28 Novozymes As Állatitakarmány-adalékanyagok, amelyek proteázaktivitású polipeptidet tartalmaznak, és alkalmazásaik
WO2019046703A1 (en) 2017-09-01 2019-03-07 Novozymes A/S METHODS OF ENHANCING GENOME EDITION IN FUNGI
WO2019052907A2 (en) 2017-09-07 2019-03-21 Total Raffinage Chimie METHOD FOR DETECTING THE HYDROGEN PEROXIDE CONVERSION ACTIVITY OF AN ENZYME
WO2019047199A1 (en) 2017-09-11 2019-03-14 Danisco Us Inc. GLUCOAMYLASE AND METHODS OF USE THEREOF
US20200270622A1 (en) 2017-09-25 2020-08-27 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Tissue-preferred promoters and methods of use
BR112020005803A2 (pt) 2017-09-25 2020-12-01 Agrospheres, Inc. composições e métodos para produção e administração moduláveis de produtos biológicos
CA3072932C (en) 2017-09-27 2023-09-26 The Procter & Gamble Company Detergent compositions comprising lipases
CA3073362A1 (en) 2017-09-27 2019-04-04 Novozymes A/S Lipase variants and microcapsule compositions comprising such lipase variants
CN111417725A (zh) 2017-10-02 2020-07-14 诺维信公司 具有甘露聚糖酶活性的多肽和编码它们的多核苷酸
US11732221B2 (en) 2017-10-02 2023-08-22 Novozymes A/S Polypeptides having mannanase activity and polynucleotides encoding same
BR112020006356A2 (pt) 2017-10-04 2020-09-29 Novozymes A/S polipeptídeo com atividade de protease, polinucleotídeo, construto de ácido nucleico, ou vetor de expressão recombinante, célula hospedeira recombinante, método para a produção de um polipeptídeo com atividade de protease, processos para liquefazer material contendo amido, para produzir produtos de fermentação a partir de material contendo amido e para recuperação de óleo de uma produção de produto de fermentação, composição enzimática, e, uso de uma protease s8a de palaeococcus ferrophilus.
US20200165626A1 (en) 2017-10-13 2020-05-28 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Virus-induced gene silencing technology for insect control in maize
EP3697230A4 (en) 2017-10-18 2022-04-13 Native Microbials, Inc. IMPROVING POULTRY PRODUCTION BY ADMINISTRATION OF A SYNTHETIC BIOENSEMBLE OF MICROBES OR PURIFIED STRAIN THEREOF
CN111417726A (zh) 2017-10-23 2020-07-14 诺维信公司 通过与前肽共表达改善蛋白酶的表达
JP7223015B2 (ja) 2017-10-25 2023-02-15 ダ・ヴォルテッラ β－ラクタマーゼ変異体
WO2019081983A1 (en) 2017-10-25 2019-05-02 Novartis Ag CD32B TARGETING ANTIBODIES AND METHODS OF USE
PL3476936T3 (pl) 2017-10-27 2022-04-11 The Procter & Gamble Company Kompozycje detergentu zawierające odmiany polipeptydowe
CN111542604A (zh) 2017-10-27 2020-08-14 诺维信公司 Dna酶变体
US11225670B2 (en) 2017-10-30 2022-01-18 Corteva Agriscience Llc Plant promoter for transgene expression
DE102017125560A1 (de) 2017-11-01 2019-05-02 Henkel Ag & Co. Kgaa Reinigungszusammensetzungen, die dispersine iii enthalten
DE102017125559A1 (de) 2017-11-01 2019-05-02 Henkel Ag & Co. Kgaa Reinigungszusammensetzungen, die dispersine ii enthalten
DE102017125558A1 (de) 2017-11-01 2019-05-02 Henkel Ag & Co. Kgaa Reinigungszusammensetzungen, die dispersine i enthalten
CA3080512A1 (en) 2017-11-07 2019-05-16 Codexis, Inc. Transglutaminase variants
CA3082288A1 (en) 2017-11-10 2019-05-16 Defensin Therapeutics Aps Maturation of mucosal defense and gut/lung function in the preterm infant
EP3707252A1 (en) 2017-11-10 2020-09-16 Novozymes A/S Temperature-sensitive cas9 protein
EP3710580A1 (en) 2017-11-14 2020-09-23 Danisco US Inc. Alpha-amylase, composition and method
CN111051523B (zh) 2017-11-15 2024-03-19 10X基因组学有限公司 功能化凝胶珠
US10829815B2 (en) 2017-11-17 2020-11-10 10X Genomics, Inc. Methods and systems for associating physical and genetic properties of biological particles
WO2019096903A1 (en) 2017-11-20 2019-05-23 Novozymes A/S New galactanases (ec 3.2.1.89) for use in soy processing
AU2018371948A1 (en) 2017-11-24 2020-06-11 Defensin Therapeutics Aps Prevention and treatment of graft-versus-host-disease with defensins
WO2019108619A1 (en) 2017-11-28 2019-06-06 Two Blades Foundation Methods and compositions for enhancing the disease resistance of plants
US11725197B2 (en) 2017-12-04 2023-08-15 Novozymes A/S Lipase variants and polynucleotides encoding same
ES2954431T3 (es) 2017-12-08 2023-11-22 Novozymes As Variantes de alfa-amilasa y polinucleótidos que codifican las mismas
MX2020005458A (es) 2017-12-08 2020-08-27 Novozymes As Variantes de alfa-amilasa y polinucleotidos que codifican las mismas.
MX2020006222A (es) 2017-12-13 2020-08-31 Codexis Inc Polipeptidos de carboxiesterasa para acoplamiento de amidas.
ES3018269T3 (en) 2017-12-13 2025-05-14 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Carboxyesterase biocatalysts
EP3728294A4 (en) 2017-12-19 2021-12-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal polypeptides and uses thereof
CN111788306A (zh) 2017-12-20 2020-10-16 巴斯夫欧洲公司 核酸酶以及用于制备和使用其的方法
US20230183385A1 (en) 2017-12-22 2023-06-15 Novozymes A/S Wheat Milling Process and GH8 Xylanases
CN111727195A (zh) 2017-12-22 2020-09-29 农业生物群落股份有限公司 杀有害生物基因及使用方法
MX2023001675A (es) 2018-01-10 2023-02-22 Brightseed Inc Metodo para modular el metabolismo.
EP3737226A1 (en) 2018-01-12 2020-11-18 Two Blades Foundation Stem rust resistance genes and methods of use
MX2020007914A (es) 2018-01-29 2020-10-28 Novozymes As Microorganismos con uso de nitrogeno mejorado para produccion de etanol.
CN111757930A (zh) 2018-02-08 2020-10-09 诺维信公司 脂肪酶变体及其组合物
EP3749761A1 (en) 2018-02-08 2020-12-16 Novozymes A/S Lipases, lipase variants and compositions thereof
US11905518B2 (en) 2018-02-12 2024-02-20 Curators Of The University Of Missouri Small auxin upregulated (SAUR) gene for the improvement of root system architecture, waterlogging tolerance, drought resistance and yield in plants and methods of uses
CA3089284A1 (en) 2018-02-28 2019-09-06 The Procter & Gamble Company Methods of cleaning using a glycogen debranching enzyme
CA3093378A1 (en) 2018-03-09 2019-09-12 Danisco Us Inc Glucoamylases and methods of use thereof
ES3036459T3 (en) 2018-03-12 2025-09-19 Pioneer Hi Bred Int Methods for plant transformation
US20210002588A1 (en) 2018-03-13 2021-01-07 Novozymes A/S Microencapsulation Using Amino Sugar Oligomers
EP3764798B1 (en) 2018-03-14 2025-12-17 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins from plants and methods for their use
EP3764796B1 (en) 2018-03-14 2025-12-03 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins from plants and methods for their use
CA3091228A1 (en) 2018-03-20 2019-09-26 Zymergen Inc. A htp platform for the genetic engineering of chinese hamster ovary cells
KR102824112B1 (ko) 2018-03-28 2025-06-24 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 인터루킨-2/인터루킨-2 수용체 알파 융합 단백질 및 사용 방법
EP3775190A1 (en) 2018-03-29 2021-02-17 Novozymes A/S Mannanase variants and polynucleotides encoding same
HRP20260414T1 (hr) 2018-03-30 2026-05-08 Amgen Inc. C-terminalne varijante protutijela
EP3775178B1 (en) 2018-04-06 2025-08-06 Braskem S.A. Novel nadh-dependent enzyme mutants to convert acetone into isopropanol
WO2019195166A1 (en) 2018-04-06 2019-10-10 10X Genomics, Inc. Systems and methods for quality control in single cell processing
CN112105729B (zh) 2018-04-09 2024-05-14 诺维信公司 具有α-淀粉酶活性的多肽以及编码它们的多核苷酸
CN118460512A (zh) 2018-04-19 2024-08-09 诺维信公司 稳定化的纤维素酶变体
CN118530973A (zh) 2018-04-19 2024-08-23 诺维信公司 稳定化的纤维素酶变体
US11021717B2 (en) 2018-04-20 2021-06-01 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
BR112020023407A2 (pt) 2018-05-17 2021-02-09 Bp Corporation North America Inc. produção de ácido 2-ceto-3-desoxi-d-glucônico em fungos filamentosos
CA3096516A1 (en) 2018-05-22 2019-11-28 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant regulatory elements and methods of use thereof
UY38247A (es) 2018-05-30 2019-12-31 Novartis Ag Anticuerpos frente a entpd2, terapias de combinación y métodos de uso de los anticuerpos y las terapias de combinación
CN112313378A (zh) 2018-05-31 2021-02-02 诺维信公司 使用溶解性多糖单加氧酶处理溶解浆的方法
AU2019277029C1 (en) 2018-06-01 2024-01-04 Novartis Ag Binding molecules against BCMA and uses thereof
EP3802807B1 (en) 2018-06-05 2024-11-20 LifeEDIT Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use
EP3810750A4 (en) 2018-06-06 2022-03-23 Zymergen, Inc. Manipulation of genes involved in signal transduction to control fungal morphology during fermentation and production
EP3807409A4 (en) 2018-06-12 2022-08-03 Codexis, Inc. Engineered tyrosine ammonia lyase
KR20210032972A (ko) 2018-06-27 2021-03-25 베링거 인겔하임 에르체파우 게엠베하 운트 코 카게 전사인자를 사용하여 단백질 발현을 증가시키는 수단 및 방법
BR112020026640A2 (pt) 2018-06-28 2021-04-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Métodos para selecionar plantas transformadas
WO2020002575A1 (en) 2018-06-28 2020-01-02 Novozymes A/S Polypeptides having pectin lyase activity and polynucleotides encoding same
EP3818165A2 (en) 2018-07-04 2021-05-12 Danisco US Inc. Glucoamylases and methods of use, thereof
WO2020014048A1 (en) 2018-07-09 2020-01-16 Codexis, Inc. Engineered deoxyribose-phosphate aldolases
MX2021000328A (es) 2018-07-09 2021-03-25 Codexis Inc Enzimas de variantes de galactosa oxidasa modificadas geneticamente.
CA3108728A1 (en) 2018-07-09 2020-01-16 Codexis, Inc. Engineered phosphopentomutase variant enzymes
WO2020014050A1 (en) 2018-07-09 2020-01-16 Codexis, Inc. Engineered pantothenate kinase variant enzymes
AU2019302423B2 (en) 2018-07-09 2024-11-21 Codexis, Inc. Engineered purine nucleoside phosphorylase variant enzymes
WO2020014306A1 (en) 2018-07-10 2020-01-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
JP2021531749A (ja) 2018-07-12 2021-11-25 コデクシス， インコーポレイテッド 操作されたフェニルアラニンアンモニアリアーゼポリペプチド
IL280199B2 (en) 2018-07-20 2025-08-01 Pf Medicament Receptor for vista
MX2021000893A (es) 2018-07-25 2021-03-31 Novozymes As Levadura que expresa enzimas para la producción de etanol.
CA3108268A1 (en) 2018-07-30 2020-02-06 Codexis, Inc. Engineered glycosyltransferases and steviol glycoside glucosylation methods
EP3829608B1 (en) 2018-08-01 2024-01-10 Board of Supervisors of Louisiana State University and Agricultural and Mechanical College Compositions comprising herpes simplex virus-1 for use in methods of treating and preventing cancer
EP3844283A1 (en) 2018-08-29 2021-07-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
EP3843552A1 (en) 2018-08-31 2021-07-07 Novozymes A/S Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same
AU2019334672A1 (en) 2018-09-07 2021-03-25 Basf Plant Science Company Gmbh Improved method for the production of high levels of PUFA in plants
AU2019334671A1 (en) 2018-09-07 2021-03-25 Basf Plant Science Company Gmbh Improved method for the production of high levels of PUFA in plants
CA3110651A1 (en) 2018-09-07 2020-03-12 Basf Plant Science Company Gmbh Improved method for the production of high levels of pufa in plants
TW202028237A (zh) 2018-09-27 2020-08-01 美商西建公司 SIRPα結合蛋白及其使用方法
CN113056476A (zh) 2018-10-03 2021-06-29 诺维信公司 具有α-甘露聚糖降解活性的多肽以及编码它们的多核苷酸
MX2021003955A (es) 2018-10-08 2021-05-27 Novozymes As Levadura que expresa enzimas para la produccion de etanol.
UY38407A (es) 2018-10-15 2020-05-29 Novartis Ag Anticuerpos estabilizadores de trem2
CN113316635A (zh) 2018-10-29 2021-08-27 科德克希思公司 工程化dna聚合酶变体
SG11202104409YA (en) 2018-10-31 2021-05-28 Zymergen Inc Multiplexed deterministic assembly of dna libraries
US20230053449A1 (en) 2018-10-31 2023-02-23 Novartis Ag Dc-sign antibody drug conjugates
US20220010305A1 (en) 2018-10-31 2022-01-13 Novozymes A/S Genome Editing by Guided Endonuclease and Single-stranded Oligonucleotide
AU2019369415A1 (en) 2018-10-31 2021-03-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for Ochrobactrum-mediated plant transformation
US12385027B2 (en) 2018-12-12 2025-08-12 Novozymes A/S Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same
EP3893860A4 (en) 2018-12-14 2023-03-29 Codexis, Inc. ENGINEERED TYROSINE AMMONIA LYASE
MX2021007552A (es) 2018-12-20 2021-08-11 Codexis Inc Variantes de alfa-galactosidasa humana.
US11959111B2 (en) 2018-12-21 2024-04-16 Novozymes A/S Polypeptides having peptidoglycan degrading activity and polynucleotides encoding same
PH12021551479A1 (en) 2018-12-21 2022-07-18 Novartis Ag Antibodies to pmel17 and conjugates thereof
SG11202106977PA (en) 2018-12-27 2021-07-29 Lifeedit Therapeutics Inc Polypeptides useful for gene editing and methods of use
AU2019414303B2 (en) 2018-12-27 2022-09-01 Colgate-Palmolive Company Oral care compositions
AU2019418750A1 (en) 2019-01-02 2021-07-22 Intima Bioscience, Inc. Modified adeno-associated viral vectors for use in genetic engineering
WO2020150125A1 (en) 2019-01-15 2020-07-23 Codexis, Inc. Engineered transaminase polypeptides
BR112021014873A2 (pt) 2019-01-31 2021-10-05 Novozymes A/S Polipeptídeo, combinação de enzimas, polinucleotídeo, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão recombinante, célula hospedeira recombinante, método de produção de um polipeptídeo, e, processo de produção de um produto de fermentação
EP3917571A4 (en) 2019-01-31 2022-10-12 Agency For Science, Technology And Research CNX/ERP57 INHIBITOR FOR USE IN TREATMENT OR PREVENTION OF CANCER
CA3129871A1 (en) 2019-03-08 2020-09-17 Zymergen Inc. Iterative genome editing in microbes
US11053515B2 (en) 2019-03-08 2021-07-06 Zymergen Inc. Pooled genome editing in microbes
BR112021017998A2 (pt) 2019-03-11 2021-11-16 Pioneer Hi Bred Int Métodos para a produção de plantas clonais
CA3122942A1 (en) 2019-03-21 2020-09-24 Novozymes A/S Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same
EP3947425A1 (en) 2019-03-27 2022-02-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant explant transformation
CN114096559B (zh) 2019-03-27 2026-03-20 蒂嘉特克斯公司 工程化iga抗体及其使用方法
US20220169706A1 (en) 2019-03-28 2022-06-02 Danisco Us Inc Engineered antibodies
WO2020198496A1 (en) 2019-03-28 2020-10-01 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Modified agrobacterium strains and use thereof for plant transformation
US20220169953A1 (en) 2019-04-03 2022-06-02 Novozymes A/S Polypeptides having beta-glucanase activity, polynucleotides encoding same and uses thereof in cleaning and detergent compositions
EP3953462A1 (en) 2019-04-10 2022-02-16 Novozymes A/S Polypeptide variants
MX2021012289A (es) 2019-04-12 2021-11-12 Novozymes As Variantes de glucosido hidrolasa estabilizadas.
SG11202110852RA (en) 2019-05-01 2021-10-28 Codexis Inc Engineered imine reductases and methods for the reductive amination of ketone and amine compounds
JP7677630B2 (ja) 2019-05-01 2025-05-15 コデクシス， インコーポレイテッド 操作されたグルコースデヒドロゲナーゼ、ならびにケトンおよびアミン化合物の還元的アミノ化を行うための方法
WO2020229191A1 (en) 2019-05-15 2020-11-19 Novozymes A/S Temperature-sensitive rna-guided endonuclease
WO2020236797A1 (en) 2019-05-21 2020-11-26 Novartis Ag Variant cd58 domains and uses thereof
UY38701A (es) 2019-05-21 2020-12-31 Novartis Ag Moléculas de unión a cd19, conjugados, composiciones que las comprenden y usos de las mismas
CN118994397A (zh) 2019-05-21 2024-11-22 诺华股份有限公司 针对bcma的三特异性结合分子及其用途
CN113993996A (zh) 2019-06-24 2022-01-28 诺维信公司 α-淀粉酶变体
WO2020264552A1 (en) 2019-06-24 2020-12-30 The Procter & Gamble Company Cleaning compositions comprising amylase variants
BR112021026248A2 (pt) 2019-06-27 2022-03-03 Two Blades Found Molécula de ácido nucleico isolada que codifica uma proteína atrlp23 engenheirada, proteína atrlp23 engenheirada, cassete de expressão, vetor, célula hospedeira, planta ou célula vegetal, métodos para fazer uma proteína atrlp23 engenheirada, para fazer uma molécula de ácido nucleico que codifica uma proteína atrlp23 engenheirada e para intensificar a resistência de uma planta
AU2020299358A1 (en) 2019-07-02 2021-12-23 Codexis, Inc. Engineered acetate kinase variant enzymes
WO2021001400A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 Novozymes A/S Lipase variants and compositions thereof
JP7678580B2 (ja) 2019-07-02 2025-05-16 コデクシス， インコーポレイテッド 操作されたスクロースホスホリラーゼバリアント酵素
EP4004211A1 (en) 2019-07-25 2022-06-01 Novozymes A/S Filamentous fungal expression system
AU2020321930A1 (en) 2019-07-26 2022-01-06 Novozymes A/S Microorganisms with improved nitrogen transport for ethanol production
WO2021018751A1 (en) 2019-07-26 2021-02-04 Novozymes A/S Enzymatic treatment of paper pulp
CA3148593A1 (en) 2019-07-29 2021-02-04 Brightseed, Inc. Method for improving digestive health
WO2021025872A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Novozymes A/S Fusion proteins for improved enzyme expression
WO2021030344A1 (en) 2019-08-12 2021-02-18 Lifeedit, Inc. Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use
BR112022000573A2 (pt) 2019-08-22 2022-03-15 Basf Se Polipeptídeo isolado, sintético ou recombinante com atividade alfa-amilase, ácido nucleico isolado, sintético ou recombinante, construto de ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira, composição, método para produzir polipeptídeo isolado, sintético ou recombinante, método para preparar uma massa ou um produto de panificação, e, métodos para usar o polipeptídeo isolado, sintético ou recombinante e um domínio c de uma primeira amilase
MX2022002473A (es) 2019-08-30 2022-08-02 Codexis Inc Variantes de lipasa modificadas geneticamente.
CN114760980B (zh) 2019-09-12 2024-10-18 科德克希思公司 针对10-乙酰基-3,7-二羟基吩噁嗪的过氧化物酶活性
PY2055454A (es) 2019-09-16 2022-03-31 Novozymes As Polipéptidos que poseen actividad de beta-glucanasa y polinucleótidos que los codifican
JP2022548881A (ja) 2019-09-18 2022-11-22 ノバルティス アーゲー Ｅｎｔｐｄ２抗体、組合せ療法並びに抗体及び組合せ療法を使用する方法
TW202124446A (zh) 2019-09-18 2021-07-01 瑞士商諾華公司 與ｅｎｔｐｄ２抗體之組合療法
US20220372542A1 (en) 2019-10-02 2022-11-24 Abbott Diabetes Care Inc. Detection of analytes by protein switches
WO2021064068A1 (en) 2019-10-03 2021-04-08 Novozymes A/S Polypeptides comprising at least two carbohydrate binding domains
AU2020367523A1 (en) 2019-10-14 2022-04-28 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Novel insect resistant genes and methods of use
CN114555628A (zh) 2019-10-14 2022-05-27 巴斯夫农业种子解决方案美国有限责任公司 新颖抗虫基因和使用方法
AU2020383340A1 (en) 2019-11-11 2022-06-09 Brightseed, Inc Extract, consumable product and method for enriching bioactive metabolite in an extract
EP3821946A1 (en) 2019-11-12 2021-05-19 Université de Strasbourg Anti-claudin-1 monoclonal antibodies for the prevention and treatment of fibrotic diseases
WO2021108209A1 (en) 2019-11-26 2021-06-03 Codexis, Inc. Biocatalysts and methods for hydroxylation of chemical compounds
CA3158982A1 (en) 2019-12-10 2021-06-17 Monica TASSONE Microorganism for improved pentose fermentation
CA3160401C (en) 2019-12-19 2025-06-10 The Procter & Gamble Company CLEANING COMPOSITIONS COMPRISING POLYPEPTIDES HAVING ALPHA-AMYLASE ACTIVITY
WO2021122687A1 (en) 2019-12-19 2021-06-24 Basf Se Increasing space-time-yield, carbon-conversion-efficiency and carbon substrate flexibility in the production of fine chemicals
AR120801A1 (es) 2019-12-19 2022-03-16 Novozymes As Variantes de xilanasa y polinucleótidos que codifican las mismas
JP7824218B2 (ja) 2019-12-19 2026-03-04 ノボザイムス アクティーゼルスカブ α－アミラーゼ変異体
PE20221266A1 (es) 2019-12-20 2022-08-16 Codexis Inc Variantes de alfa-glucosidasa acida disenadas por ingenieria
CN115135762A (zh) 2019-12-20 2022-09-30 巴斯夫欧洲公司 降低萜烯的毒性和增加微生物的生产潜力
EP4077656A2 (en) 2019-12-20 2022-10-26 Novozymes A/S Polypeptides having proteolytic activity and use thereof
JP2023508731A (ja) 2019-12-30 2023-03-03 ライフエディット セラピューティクス，インコーポレイティド Ｒｎａ誘導ヌクレアーゼ、その活性断片および多様体、ならびに使用方法
WO2021142393A1 (en) 2020-01-10 2021-07-15 The Regents Of The University Of California Biosynthetic platform for the production of olivetolic avid and analogues of olivetolic acid
WO2021146508A2 (en) * 2020-01-17 2021-07-22 Asklepios Biopharmaceutical, Inc. Systems and methods for synthetic regulatory sequence design or production
BR112022014573A2 (pt) 2020-01-24 2022-10-04 Novozymes As Mutantes de uma célula fúngica filamentosa com produtividade aumentada na produção de um polipeptídeo
EP4097227A1 (en) 2020-01-31 2022-12-07 Novozymes A/S Mannanase variants and polynucleotides encoding same
US12497606B2 (en) 2020-01-31 2025-12-16 Novozymes A/S Mannanase variants and polynucleotides encoding same
BR112022015139A2 (pt) 2020-02-04 2022-10-11 Codexis Inc Polipeptídeo da leucina descarboxilase engenheirada, composição, sequência de polinucleotídeo engenheirado, vetor de expressão, célula hospedeira, métodos para produzir um polipeptídeo da leucina descarboxilase engenheirada e para tratar e/ou prevenir os sintomas de doença da urina de xarope de bordo, composição, e, uso
WO2021163015A1 (en) 2020-02-10 2021-08-19 Novozymes A/S Process for producing ethanol from raw starch using alpha-amylase variants
PY2110525A (es) 2020-02-10 2022-05-11 Novozymes As Polipéptidos con actividad de alfa amilasa y polinucleótidos que los codifican
WO2021163212A1 (en) 2020-02-10 2021-08-19 Native Microbials, Inc. Microbial compositions and methods of use for canine enteropathy and dysbiosis
CA3166233A1 (en) 2020-02-10 2021-08-19 Sarah Schultheis ELLIOTT Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same
US12421558B2 (en) 2020-02-13 2025-09-23 10X Genomics, Inc. Systems and methods for joint interactive visualization of gene expression and DNA chromatin accessibility
EP4103580A4 (en) 2020-02-13 2024-03-06 Zymergen Inc. METAGENOMIC LIBRARY AND NATURAL PRODUCT DISCOVERY PLATFORM
WO2021168399A1 (en) * 2020-02-21 2021-08-26 Regents Of The University Of Minnesota Novel methods for creating alpha-n-methylated polypeptides
EP4110909A1 (en) 2020-02-26 2023-01-04 Novozymes A/S Polypeptide variants
WO2021202463A1 (en) 2020-03-30 2021-10-07 Danisco Us Inc Anti-rsv antibodies
US20230203191A1 (en) 2020-03-30 2023-06-29 Danisco Us Inc Engineered antibodies
EP4133066A1 (en) 2020-04-08 2023-02-15 Novozymes A/S Carbohydrate binding module variants
CN115427557A (zh) 2020-04-10 2022-12-02 科德克希思公司 工程化转氨酶多肽
US12612605B2 (en) 2020-04-10 2026-04-28 Codexis, Inc. Carboxyesterase polypeptides for kinetic resolution
CA3175633A1 (en) 2020-04-17 2021-10-21 Danisco Us Inc. Glucoamylase and methods of use thereof
US20230167384A1 (en) 2020-04-21 2023-06-01 Novozymes A/S Cleaning compositions comprising polypeptides having fructan degrading activity
TW202208626A (zh) 2020-04-24 2022-03-01 美商生命編輯公司 Rna引導核酸酶及其活性片段與變體，以及使用方法
US20230181756A1 (en) 2020-04-30 2023-06-15 Novartis Ag Ccr7 antibody drug conjugates for treating cancer
US20230242647A1 (en) 2020-05-01 2023-08-03 Novartis Ag Engineered immunoglobulins
US20230167193A1 (en) 2020-05-01 2023-06-01 Novartis Ag Immunoglobulin variants
CA3173882A1 (en) 2020-05-11 2021-11-18 Alexandra Briner CRAWLEY Rna-guided nucleic acid binding proteins and active fragments and variants thereof and methods of use
CN115516102B (zh) 2020-06-04 2025-10-31 艾瑟拜奥尼克斯公司 合成的檀香烯合酶
US20230292764A1 (en) 2020-06-17 2023-09-21 Bioconsortia, Inc. Agriculturally beneficial microbes, microbial compositions, and consortia
US20230287383A1 (en) 2020-07-03 2023-09-14 Engenes Biotech Gmbh PYRROLYSYL-tRNA SYNTHETASE VARIANTS AND USES THEREOF
CA3186978A1 (en) 2020-07-14 2022-01-20 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
CA3173949A1 (en) 2020-07-15 2022-01-20 LifeEDIT Therapeutics, Inc. Uracil stabilizing proteins and active fragments and variants thereof and methods of use
WO2022012680A1 (en) 2020-07-16 2022-01-20 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Cd20 binding molecules and uses thereof
US11479779B2 (en) 2020-07-31 2022-10-25 Zymergen Inc. Systems and methods for high-throughput automated strain generation for non-sporulating fungi
WO2022031576A1 (en) 2020-08-03 2022-02-10 Janssen Biotech, Inc. Materials and methods for multidirectional biotransportation in virotherapeutics
EP4192848A1 (en) 2020-08-10 2023-06-14 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant regulatory elements and methods of use thereof
MX2023001641A (es) 2020-08-10 2023-03-08 Du Pont Composiciones y metodos para mejorar la resistencia al tizon foliar norte?o en el maiz.
US12037613B2 (en) 2020-08-13 2024-07-16 Novozymes A/S Phytase variants and polynucleotides encoding same
US20230313209A1 (en) 2020-08-18 2023-10-05 Novozymes A/S Dispersins expressed with amylase signal peptides
EP4204551B1 (en) 2020-08-25 2025-09-17 Novozymes A/S Variants of a family 44 xyloglucanase
WO2022047264A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Codexis, Inc. Engineered amylase variants
CA3191867A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Codexis, Inc. Engineered protease variants
WO2022043563A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Novozymes A/S Polyester degrading protease variants
EP4211235A2 (en) 2020-09-11 2023-07-19 Lifeedit Therapeutics, Inc. Dna modifying enzymes and active fragments and variants thereof and methods of use
AU2021340243A1 (en) 2020-09-14 2023-05-04 Aesculus Bio Aps Defensin fragment derived lipopeptides for treatment of drug-resistant microorganisms
WO2022072335A2 (en) 2020-09-30 2022-04-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Rapid transformation of monocot leaf explants
US20250346879A1 (en) 2020-10-07 2025-11-13 Novozymes A/S Alpha-amylase variants
CN116529375A (zh) 2020-10-13 2023-08-01 诺维信公司 用于提高蛋白质产量的糖基转移酶变体
EP4237525A1 (en) 2020-10-28 2023-09-06 Novozymes A/S Use of lipoxygenase
US20240035005A1 (en) 2020-10-29 2024-02-01 Novozymes A/S Lipase variants and compositions comprising such lipase variants
CA3199315A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Novozymes A/S Glucoamylase variants and polynucleotides encoding same
EP4237430A1 (en) 2020-11-02 2023-09-06 Novozymes A/S Leader peptides and polynucleotides encoding the same
AU2021374083A1 (en) 2020-11-06 2023-06-01 Novartis Ag Anti-cd19 agent and b cell targeting agent combination therapy for treating b cell malignancies
EP4240491A1 (en) 2020-11-06 2023-09-13 Novartis AG Cd19 binding molecules and uses thereof
WO2022106400A1 (en) 2020-11-18 2022-05-27 Novozymes A/S Combination of immunochemically different proteases
WO2022106404A1 (en) 2020-11-18 2022-05-27 Novozymes A/S Combination of proteases
CR20230283A (es) 2020-11-24 2023-07-27 Novartis Ag Anticuerpos anti-cd48, conjugados de anticuerpo-fármaco, y usos de los mismos
EP4251755A2 (en) 2020-11-24 2023-10-04 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
CA3201757A1 (en) 2020-12-11 2022-06-16 Mathias Schuetz Recombinant acyl activating enzyme (aae) genes for enhanced biosynthesis of cannabinoids and cannabinoid precursors
CN116710471A (zh) 2020-12-15 2023-09-05 诺维信公司 具有减少的细胞运动的突变的宿主细胞
EP4015626A1 (en) 2020-12-18 2022-06-22 Isobionics B.V. Enzymes and methods for fermentative production of monoterpene esters
WO2022133289A2 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Codexis, Inc. Engineered uridine phosphorylase variant enzymes
WO2023288294A1 (en) 2021-07-16 2023-01-19 Novozymes A/S Compositions and methods for improving the rainfastness of proteins on plant surfaces
JP2024502832A (ja) 2020-12-31 2024-01-23 アラマー バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド 高親和性及び／または特異性を有する結合剤分子ならびにその製造及び使用方法
CN112725331B (zh) * 2021-01-25 2021-07-20 深圳市狂风生命科技有限公司 一种高通量突变体文库的构建方法
EP4284905A1 (en) 2021-01-28 2023-12-06 Novozymes A/S Lipase with low malodor generation
EP4291646A2 (en) 2021-02-12 2023-12-20 Novozymes A/S Alpha-amylase variants
WO2022175440A1 (en) 2021-02-18 2022-08-25 Novozymes A/S Inactive heme polypeptides
EP4294917A1 (en) 2021-02-22 2023-12-27 Basf Se Amylase variants
EP4047088A1 (en) 2021-02-22 2022-08-24 Basf Se Amylase variants
EP4305146A1 (en) 2021-03-12 2024-01-17 Novozymes A/S Polypeptide variants
MX2023005793A (es) 2021-03-15 2023-05-29 Procter & Gamble Composiciones de limpieza que contienen variantes de polipeptido.
US20240060061A1 (en) 2021-03-15 2024-02-22 Novozymes A/S Dnase variants
EP4060036A1 (en) 2021-03-15 2022-09-21 Novozymes A/S Polypeptide variants
CN117295817A (zh) 2021-03-22 2023-12-26 生命编辑制药股份有限公司 Dna修饰酶及其活性片段和变体以及使用方法
CN117083370A (zh) 2021-03-26 2023-11-17 诺维信公司 聚合物含量降低的洗涤剂组合物
CA3214973A1 (en) 2021-04-02 2022-10-06 Codexis, Inc. Engineered guanylate kinase variant enzymes
CN117120600A (zh) 2021-04-02 2023-11-24 科德克希思公司 工程化腺苷酸激酶变体酶
CA3215105A1 (en) 2021-04-02 2022-10-06 Codexis, Inc. Engineered acetate kinase variant enzymes
CA3214975A1 (en) 2021-04-02 2022-10-06 Codexis, Inc. Engineered cyclic gmp-amp synthase (cgas) variant enzymes
CN117529235A (zh) 2021-04-12 2024-02-06 诺维信公司 用于生产人造肉产品的方法
WO2022221720A1 (en) 2021-04-16 2022-10-20 Novartis Ag Antibody drug conjugates and methods for making thereof
AR125794A1 (es) 2021-05-06 2023-08-16 Agbiome Inc Genes plaguicidas y métodos de uso
EP4336997A1 (en) 2021-05-11 2024-03-20 Two Blades Foundation Methods for preparing a library of plant disease resistance genes for functional testing for disease resistance
AU2022279241A1 (en) 2021-05-21 2023-11-30 Syntis Bio, Inc. Engineered methionine gamma lyase variants
WO2022251056A1 (en) 2021-05-27 2022-12-01 Novozymes A/S Transcriptional regulators and polynucleotides encoding the same
BR112023025624A2 (pt) 2021-06-07 2024-02-27 Novozymes As Célula de levedura recombinante, célula hospedeira recombinante, composição, cocultura, métodos de produção de um derivado de uma célula hospedeira recombinante e de produção de um produto de fermentação, e, uso de uma célula hospedeira recombinante
AU2022290278A1 (en) 2021-06-11 2024-01-04 LifeEDIT Therapeutics, Inc. Rna polymerase iii promoters and methods of use
EP4355868A1 (en) 2021-06-16 2024-04-24 Novozymes A/S Method for controlling slime in a pulp or paper making process
EP4370534A1 (en) 2021-07-13 2024-05-22 Novozymes A/S Recombinant cutinase expression
EP4377451A2 (en) 2021-07-30 2024-06-05 Willow Biosciences, Inc. Recombinant prenyltransferase polypeptides engineered for enhanced biosynthesis of cannabinoids
US20240352490A1 (en) 2021-08-02 2024-10-24 Basf Se Novel production of aroma compounds with ionylideneethane synthases
EP4388088A1 (en) 2021-08-19 2024-06-26 Willow Biosciences, Inc. Recombinant olivetolic acid cyclase polypeptides engineered for enhanced biosynthesis of cannabinoids
WO2023056269A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Two Blades Foundation Plant disease resistance genes against stem rust and methods of use
US20240417709A1 (en) 2021-10-12 2024-12-19 Novozymes A/S Endoglucanase with improved stability
KR20240115809A (ko) 2021-10-15 2024-07-26 싸이톰스 테라퓨틱스, 인크. 활성화 가능한 폴리펩타이드 복합체
TW202323282A (zh) 2021-10-15 2023-06-16 美商賽特艾克斯生物製藥公司 可活化之多肽複合物
EP4416278A4 (en) 2021-10-15 2026-01-14 Codexis Inc MODIFIED DNA POLYMERASE VARIANTS
WO2023064955A1 (en) 2021-10-15 2023-04-20 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable anti-cd3, anti-egfr, heteromultimeric bispecific polypeptide complex
WO2023069865A1 (en) 2021-10-15 2023-04-27 Codexis, Inc. Engineered terminal deoxynucleotidyl transferase variants
EP4416280A1 (en) 2021-10-15 2024-08-21 Danisco Us Inc Glucoamylase variants and methods for use thereof
WO2023069921A1 (en) 2021-10-19 2023-04-27 Epimeron Usa, Inc. Recombinant thca synthase polypeptides engineered for enhanced biosynthesis of cannabinoids
JP2024540358A (ja) 2021-11-01 2024-10-31 シンティス バイオ，インコーポレイティド 工学操作ロイシン脱炭酸酵素
EP4444890A1 (en) 2021-12-07 2024-10-16 Agbiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
US20250034535A1 (en) 2021-12-10 2025-01-30 Novozymes A/S Improved protein production in recombinant bacteria
CN118401115A (zh) 2021-12-22 2024-07-26 诺维信公司 生产乳基产品的方法
EP4453232A1 (en) 2021-12-23 2024-10-30 Novozymes A/S Reduction of residual dna in microbial fermentation products
UY40097A (es) 2022-01-07 2023-07-14 Johnson & Johnson Entpr Innovation Inc Materiales y métodos de proteínas de unión a il-1b
CN119317713A (zh) 2022-01-24 2025-01-14 生命编辑制药股份有限公司 Rna引导核酸酶、其活性片段与变体，及使用方法
EP4476240A1 (en) 2022-02-10 2024-12-18 Novozymes A/S Improved expression of recombinant proteins
US20250161187A1 (en) 2022-02-22 2025-05-22 Novozymes A/S Oral care composition comprising enzymes
WO2023165507A1 (en) 2022-03-02 2023-09-07 Novozymes A/S Use of xyloglucanase for improvement of sustainability of detergents
US20250215412A1 (en) 2022-03-08 2025-07-03 Novozymes A/S Fusion Polypeptides with Deamidase Inhibitor and Deamidase Domains
EP4242303A1 (en) 2022-03-08 2023-09-13 Novozymes A/S Fusion polypeptides with deamidase inhibitor and deamidase domains
US20250197448A1 (en) 2022-03-11 2025-06-19 University Of Rochester Cyclopeptibodies and uses thereof
DE112023000593T5 (de) 2022-03-31 2024-11-14 Qingdao Kingagroot Chemical Compound Co., Ltd. Monoaminoxidase und deren anwendung
WO2023209568A1 (en) 2022-04-26 2023-11-02 Novartis Ag Multispecific antibodies targeting il-13 and il-18
US20250311734A1 (en) 2022-05-14 2025-10-09 Novozymes A/S Compositions and Methods for Preventing, Treating, Suppressing and/or Eliminatting Phytopathogenic Infestations and Infections
CA3255689A1 (en) 2022-05-17 2023-11-23 Novozymes A/S PROCESS FOR REDUCING FREE FATTY ACIDS
WO2023247348A1 (en) 2022-06-21 2023-12-28 Novozymes A/S Mannanase variants and polynucleotides encoding same
WO2023247514A1 (en) 2022-06-22 2023-12-28 Novozymes A/S Recombinant mannanase expression
US20250368924A1 (en) 2022-06-24 2025-12-04 Novozymes A/S Lipase variants and compositions comprising such lipase variants
WO2024003143A1 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Novozymes A/S Mutanases and oral care compositions comprising same
EP4554969A1 (en) 2022-07-15 2025-05-21 Janssen Biotech, Inc. Material and methods for improved bioengineered pairing of antigen-binding variable regions
CN119546339A (zh) 2022-07-15 2025-02-28 丹尼斯科美国公司 用于产生单克隆抗体的方法
CN119156397A (zh) 2022-07-15 2024-12-17 诺维信公司 具有脱酰胺酶抑制剂活性的多肽
EP4311430A1 (en) 2022-07-28 2024-01-31 Limagrain Europe Chlorotoluron tolerance gene and methods of use thereof
WO2024026406A2 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Vestaron Corporation Next Generation ACTX Peptides
JP2025526654A (ja) 2022-08-11 2025-08-15 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア プロテアーゼ、マンナナーゼ及び／又はセルラーゼを含む酵素組成物
JP2025526759A (ja) 2022-08-11 2025-08-15 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア アミラーゼを含む酵素組成物
MA71732A (fr) 2022-08-12 2025-05-30 Life Edit Therapeutics, Inc. Nucléases guidées par arn et fragments actifs, variants associés et procédés d'utilisation
WO2024040020A1 (en) 2022-08-15 2024-02-22 Absci Corporation Quantitative affinity activity specific cell enrichment
WO2024044596A1 (en) 2022-08-23 2024-02-29 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
EP4577650A1 (en) 2022-08-25 2025-07-02 Life Edit Therapeutics, Inc. Chemical modification of guide rnas with locked nucleic acid for rna guided nuclease-mediated gene editing
EP4587565A1 (en) 2022-09-15 2025-07-23 Novozymes A/S Fungal signal peptides
AU2023374241A1 (en) 2022-11-04 2025-06-12 Life Edit Therapeutics, Inc. Evolved adenine deaminases and rna-guided nuclease fusion proteins with internal insertion sites and methods of use
EP4627074A2 (en) 2022-11-30 2025-10-08 Novozymes A/S Carbonic anhydrase variants and polynucleotides encoding same
EP4630563A1 (en) 2022-12-05 2025-10-15 Novozymes A/S Modified rna polymerase activities
JP2026508744A (ja) 2022-12-05 2026-03-12 ノボザイムス アクティーゼルスカブ プロテアーゼバリアント、及びそれをコードするポリヌクレオチド
EP4629834A1 (en) 2022-12-06 2025-10-15 Novozymes A/S Method for producing a meat analogue product involving protein-deamidase
EP4629835A1 (en) 2022-12-08 2025-10-15 Novozymes A/S Fiber-degrading enzymes for animal feed comprising an oil seed material
CN120302889A (zh) 2022-12-08 2025-07-11 诺维信公司 具有溶菌酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸
WO2024129674A1 (en) 2022-12-13 2024-06-20 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
EP4634355A1 (en) 2022-12-14 2025-10-22 Novozymes A/S Improved lipase (gcl1) variants
EP4634219A1 (en) 2022-12-14 2025-10-22 Novozymes A/S High strength liquid protease formulations
WO2024127369A1 (en) 2022-12-16 2024-06-20 LifeEDIT Therapeutics, Inc. Guide rnas that target foxp3 gene and methods of use
WO2024126811A1 (en) 2022-12-16 2024-06-20 Boehringer Ingelheim Rcv Gmbh & Co Kg Means and methods for increased protein expression by use of a combination of transport proteins and either chaperones or transcription factors
KR20250124113A (ko) 2022-12-16 2025-08-19 바스프 에스이 신규한 에틸렌디아민-n,n'-디숙신산 (edds) 신타아제
JP2026504733A (ja) 2022-12-16 2026-02-09 ライフ エディット セラピューティクス，インコーポレイティド Ｔｒａｃ遺伝子を標的とするガイドｒｎａおよび使用方法
EP4638759A2 (en) 2022-12-19 2025-10-29 BASF Agricultural Solutions US LLC Insect toxin genes and methods for their use
EP4638768A2 (en) 2022-12-19 2025-10-29 Novozymes A/S Processes for producing fermentation products using fiber-degrading enzymes with engineered yeast
EP4638724A1 (en) 2022-12-19 2025-10-29 Novozymes A/S Carbohydrate esterase family 1 (ce1) polypeptides having ferulic acid esterase and/or acetyl xylan esterase activity and polynucleotides encoding same
EP4638725A1 (en) 2022-12-19 2025-10-29 Novozymes A/S Carbohydrate esterase family 3 (ce3) polypeptides having acetyl xylan esterase activity and polynucleotides encoding same
CN120435563A (zh) 2022-12-19 2025-08-05 巴斯夫农业解决方案美国有限责任公司 用于发现抗病先导的单细胞方法
EP4389864A1 (en) 2022-12-20 2024-06-26 Basf Se Cutinases
WO2024133344A1 (en) 2022-12-20 2024-06-27 Novozymes A/S A method for providing a candidate biological sequence and related electronic device
WO2024133495A1 (en) 2022-12-21 2024-06-27 Novozymes A/S Microbial proteases for cell detachment
EP4638684A1 (en) 2022-12-21 2025-10-29 Novozymes A/S Recombinant protease for cell detachment
EP4389865A1 (en) 2022-12-21 2024-06-26 Novozymes A/S Recombinant protease for cell detachment
EP4389886A1 (en) 2022-12-22 2024-06-26 Novozymes A/S Lactase enzymes and method of producing a milk-based product
JP2026504068A (ja) 2023-01-12 2026-02-03 ノバルティス アーゲー 改変ケトレダクターゼポリペプチド
EP4655371A1 (en) 2023-01-23 2025-12-03 Novozymes A/S Cleaning compositions and uses thereof
EP4669302A1 (en) 2023-02-22 2025-12-31 Novozymes A/S ORAL CARE COMPOSITION INCLUDING AN INVERTASE
TW202507006A (zh) 2023-04-12 2025-02-16 美商生命編輯治療學公司 藉由編輯突變亨廷頓基因治療亨廷頓氏病之組合物及方法
AU2024303961A1 (en) 2023-06-13 2025-12-11 Novozymes A/S Processes for producing fermentation products using engineered yeast expressing a beta-xylosidase
WO2025002934A1 (en) 2023-06-28 2025-01-02 Novozymes A/S Detergent composition comprising lipases
CN121548353A (zh) 2023-07-05 2026-02-17 诺维信公司 用于获得植物基即饮咖啡或茶饮料的方法
EP4739120A1 (en) 2023-07-05 2026-05-13 Novozymes A/S Foamable dairy products
EP4273249A3 (en) 2023-07-07 2024-05-22 Novozymes A/S Improved expression of recombinant proteins
CN121548646A (zh) 2023-07-07 2026-02-17 巴斯夫农业解决方案美国有限责任公司 Cry基因用于控制线虫有害生物的用途
CN121464215A (zh) 2023-07-10 2026-02-03 诺维信公司 人工信号肽
EP4743480A1 (en) 2023-07-15 2026-05-20 Two Blades Found Broad-spectrum polerover gene
WO2025022367A2 (en) 2023-07-27 2025-01-30 Life Edit Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use
WO2025034544A1 (en) 2023-08-04 2025-02-13 Genective Sa Insecticidal proteins compositions and methods of use
WO2025032096A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 Novozymes A/S Methods for obtaining a plant-based food ingredient
WO2025036987A1 (en) 2023-08-15 2025-02-20 Novozymes A/S Polypeptides having alkaline phosphatase activity for animal feed
CN121569032A (zh) 2023-09-01 2026-02-24 诺维信公司 稳定的液体脱酰胺酶组合物
CN121666449A (zh) 2023-09-13 2026-03-13 诺维信公司 稳定的脱酰胺酶组合物
WO2025061262A1 (en) 2023-09-19 2025-03-27 Novozymes A/S Methods for evaluating protein substrate gelling by microbial transglutaminase
WO2025061911A1 (en) 2023-09-22 2025-03-27 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Methods of producing nucleotide triphosphates (ntps)
AU2024351905A1 (en) 2023-09-26 2026-03-05 Novozymes A/S Using protein deamidase in processes for obtaining a seed-based dairy alternative beverage with improved stability
WO2025072888A2 (en) 2023-09-28 2025-04-03 Novavax, Inc. Anti-sars-cov-2 spike (s) antibodies and their use in treating covid-19
CN121925476A (zh) 2023-09-29 2026-04-24 诺维信公司 基于液滴的筛选方法
WO2025083619A1 (en) 2023-10-18 2025-04-24 Life Edit Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleases and acive fragments and variants thereof and methods of use
WO2025088003A1 (en) 2023-10-24 2025-05-01 Novozymes A/S Use of xyloglucanase for replacement of optical brightener
AU2024366942A1 (en) 2023-10-27 2026-05-07 Basf Agricultural Solutions Us Llc Use of novel genes for the control of nematode pests
WO2025103765A1 (en) 2023-11-17 2025-05-22 Novozymes A/S Lytic polysaccharide monooxygenases and their use in detergent
WO2025111274A2 (en) 2023-11-20 2025-05-30 Novozymes A/S Epimerase variants and polynucleotides encoding same
AU2024391409A1 (en) 2023-11-30 2026-04-23 Novozymes A/S Oral care composition comprising peptidase or lactonase
WO2025132815A1 (en) 2023-12-20 2025-06-26 Novozymes A/S Novel cas nucleases and polynucleotides encoding the same
WO2025133162A1 (en) 2023-12-20 2025-06-26 Novozymes A/S Recombinant protein expression
WO2025132872A1 (en) 2023-12-20 2025-06-26 Novozymes A/S Modified leguminous protein with improved colloidal stability
WO2025132905A1 (en) 2023-12-22 2025-06-26 Novozymes A/S Fermentation method
WO2025144700A1 (en) 2023-12-27 2025-07-03 Absci Corporation Nanobody library screening using bacterial surface display
WO2025140303A1 (en) 2023-12-28 2025-07-03 Novozymes A/S Enzymatic treatment of a material comprising corn protein
WO2025155518A1 (en) 2024-01-18 2025-07-24 Pivot Bio, Inc. Host cells for enhanced plant growth
WO2025155521A1 (en) 2024-01-18 2025-07-24 Pivot Bio, Inc. Host cells for enhanced plant growth
WO2025168806A1 (en) 2024-02-08 2025-08-14 Novozymes A/S Polypeptides having carbonic anhydrase activity and polynucleotides encoding same
TW202546224A (zh) 2024-02-12 2025-12-01 美商生命編輯治療學公司 新穎的ｒｎａ引導之核酸酶及用於聚合酶編輯之蛋白質
WO2025178772A1 (en) 2024-02-23 2025-08-28 Genective Sa Insecticidal proteins compositions and methods of use
WO2025189007A1 (en) 2024-03-07 2025-09-12 The Regents Of The University Of California Defining a caffeine demethylation system for improved decaffeination
WO2025191164A2 (en) 2024-03-12 2025-09-18 Novozymes A/S Use of chymopapain in cell detachment
WO2025193453A1 (en) 2024-03-14 2025-09-18 Genective Sa Insecticidal proteins compositions and methods of use
WO2025196175A1 (en) 2024-03-22 2025-09-25 Novozymes A/S Oral care compositions comprising dnases
WO2025217017A1 (en) 2024-04-08 2025-10-16 Novozymes A/S Compositions and methods for increasing phosphorous availability
WO2025226596A1 (en) 2024-04-24 2025-10-30 Novozymes A/S Methods for producing secreted polypeptides
WO2025229230A1 (en) 2024-05-03 2025-11-06 Novozymes A/S Combined carbon capture and soda ash process
WO2025235515A1 (en) 2024-05-07 2025-11-13 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable polypeptide complex formulations
WO2025235589A1 (en) 2024-05-08 2025-11-13 Codexis, Inc. Dna polymerase variants
WO2025235220A1 (en) 2024-05-08 2025-11-13 Genective Sa Insecticidal proteins compositions and methods of use
WO2025233391A1 (en) 2024-05-09 2025-11-13 Novozymes A/S Stabilized liquid deamidase compositions
WO2025233389A1 (en) 2024-05-09 2025-11-13 Novozymes A/S Stabilized liquid deamidase compositions
EP4650443A1 (en) 2024-05-13 2025-11-19 Novozymes A/S Stabilized liquid deamidase compositions
WO2025242320A1 (en) 2024-05-21 2025-11-27 Novozymes A/S Stabilized ready-to-drink coffee beverages
WO2025242702A1 (en) 2024-05-23 2025-11-27 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Enzymatic process for producing n-acetyl galactosamine clusters
WO2025247765A1 (en) 2024-05-30 2025-12-04 Chr. Hansen A/S Non-heated fermented meat analogue product prepared with vegetable protein transglutaminase and pediococcus strains
WO2025257254A1 (en) 2024-06-12 2025-12-18 Novozymes A/S Lipases and lipase variants and the use thereof
WO2025264577A1 (en) 2024-06-20 2025-12-26 Genective Sa Insecticidal proteins, compositions and methods of use
WO2025264584A1 (en) 2024-06-20 2025-12-26 Genective Sa Insecticidal proteins, compositions and methods of use
WO2026006045A1 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Genective Sa Insecticidal proteins, compositions and methods of use
WO2026003754A1 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Life Edit Therapeutics, Inc. Novel reverse transcriptases and uses thereof
WO2026010930A1 (en) 2024-07-05 2026-01-08 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Use of axmi277 for the control of rotylenchulus reniformis nematode pests
WO2026017381A1 (en) 2024-07-17 2026-01-22 Novozymes A/S Optimized bacillus host cells
WO2024254620A2 (en) 2024-08-01 2024-12-12 Novozymes A/S Protease for diagnostics
WO2026043743A1 (en) 2024-08-21 2026-02-26 Genective Sa Insecticidal proteins compositions and methods of use
WO2026055006A2 (en) 2024-09-03 2026-03-12 Genective Sa Insecticidal proteins compositions and methods of use
WO2026058155A1 (en) 2024-09-11 2026-03-19 Novartis Ag Antibodies targeting il-31
WO2026068782A1 (en) 2024-09-30 2026-04-02 Novozymes A/S Protease variants and polynucleotides encoding same
WO2026076007A1 (en) 2024-10-04 2026-04-09 Genective Sa Insecticidal proteins compositions and methods of use
WO2026076952A1 (en) 2024-10-08 2026-04-16 Novozymes A/S Processes for obtaining dairy protein-based ready-to-drink beverages

Family Cites Families (154)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4994379A (en) * 1983-03-09 1991-02-19 Cetus Corporation Modified signal peptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5422266A (en) 1984-12-31 1995-06-06 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Recombinant DNA vectors capable of expressing apoaequorin
US4683202A (en) * 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4965188A (en) * 1986-08-22 1990-10-23 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme
US5176995A (en) * 1985-03-28 1993-01-05 Hoffmann-La Roche Inc. Detection of viruses by amplification and hybridization
US6492107B1 (en) 1986-11-20 2002-12-10 Stuart Kauffman Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique
DE3546807C2 (ja) 1985-03-30 1991-03-28 Marc Genf/Geneve Ch Ballivet
US4959312A (en) 1985-05-31 1990-09-25 The University Of Tennessee Research Corporation Full spectrum mutagenesis
ATE93541T1 (de) * 1985-07-03 1993-09-15 Genencor Int Hybride polypeptide und verfahren zu deren herstellung.
US5866363A (en) 1985-08-28 1999-02-02 Pieczenik; George Method and means for sorting and identifying biological information
US4800159A (en) * 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
DK311186D0 (da) * 1986-06-30 1986-06-30 Novo Industri As Enzymer
US5824469A (en) * 1986-07-17 1998-10-20 University Of Washington Method for producing novel DNA sequences with biological activity
US4994368A (en) * 1987-07-23 1991-02-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Amplification method for polynucleotide assays
US4994367A (en) 1988-10-07 1991-02-19 East Carolina University Extended shelf life platelet preparations and process for preparing the same
FR2641793B1 (fr) * 1988-12-26 1993-10-01 Setratech Procede de recombinaison in vivo de sequences d'adn presentant des mesappariements de bases
DD282028A5 (de) 1989-02-16 1990-08-29 Akad Wissenschaften Ddr Verfahren zur herstellung einer thermostabilen, hybriden bacillus-beta-1,3-1,4-glukanase
US5043272A (en) 1989-04-27 1991-08-27 Life Technologies, Incorporated Amplification of nucleic acid sequences using oligonucleotides of random sequence as primers
US5106727A (en) * 1989-04-27 1992-04-21 Life Technologies, Inc. Amplification of nucleic acid sequences using oligonucleotides of random sequences as primers
US5556750A (en) * 1989-05-12 1996-09-17 Duke University Methods and kits for fractionating a population of DNA molecules based on the presence or absence of a base-pair mismatch utilizing mismatch repair systems
CA2016842A1 (en) * 1989-05-16 1990-11-16 Richard A. Lerner Method for tapping the immunological repertoire
CA2016841C (en) * 1989-05-16 1999-09-21 William D. Huse A method for producing polymers having a preselected activity
IT1231157B (it) * 1989-07-20 1991-11-19 Crc Ricerca Chim Nuovi geni ibridi funzionali di bacillus thuringiensis ottenuti mediante ricombinazione in vivo.
US5574205A (en) 1989-07-25 1996-11-12 Cell Genesys Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts
US5023171A (en) * 1989-08-10 1991-06-11 Mayo Foundation For Medical Education And Research Method for gene splicing by overlap extension using the polymerase chain reaction
WO1991006570A1 (en) * 1989-10-25 1991-05-16 The University Of Melbourne HYBRID Fc RECEPTOR MOLECULES
US5071743A (en) 1989-10-27 1991-12-10 Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The National Research Council Of Canada Process for conducting site-directed mutagenesis
DE3936258C1 (ja) 1989-10-31 1991-04-25 Max-Planck-Gesellschaft Zur Foerderung Der Wissenschaften Ev, 3400 Goettingen, De
AU6886991A (en) * 1989-11-08 1991-06-13 United States of America, as represented by the Secretary, U.S. Department of Commerce, The A method of synthesizing double-stranded dna molecules
EP0527809B1 (en) * 1990-04-05 1995-08-16 CREA, Roberto Walk-through mutagenesis
AU7791991A (en) 1990-04-24 1991-11-11 Stratagene Methods for phenotype creation from multiple gene populations
US5877402A (en) 1990-05-01 1999-03-02 Rutgers, The State University Of New Jersey DNA constructs and methods for stably transforming plastids of multicellular plants and expressing recombinant proteins therein
US5851813A (en) * 1990-07-12 1998-12-22 President And Fellows Of Harvard College Primate lentivirus antigenic compositions
US5571208A (en) 1990-07-13 1996-11-05 Caspers; Carl A. Reinforced prosthetic polyurethane hypobaric sleeve
ES2128323T3 (es) 1990-07-24 1999-05-16 Hoffmann La Roche Reduccion de la amplificacion no-especifica durante la amplificacion in vitro del acido nucleico empleando bases de acido nucleico modificadas.
US5169764A (en) 1990-08-08 1992-12-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multitrophic and multifunctional chimeric neurotrophic factors, and nucleic acids and plasmids encoding the chimeras
US5264563A (en) * 1990-08-24 1993-11-23 Ixsys Inc. Process for synthesizing oligonucleotides with random codons
DE69130647T2 (de) * 1990-08-24 1999-05-06 Ixsys, Inc., San Diego, Calif. Verfahren zur herstellung von oligonukleotiden mit regellosen codonen
US5871974A (en) * 1990-09-28 1999-02-16 Ixsys Inc. Surface expression libraries of heteromeric receptors
IL99553A0 (en) * 1990-09-28 1992-08-18 Ixsys Inc Compositions containing oligonucleotides linked to expression elements,a kit for the preparation of vectors useful for the expression of a diverse population of random peptides and methods utilizing the same
US5770434A (en) * 1990-09-28 1998-06-23 Ixsys Incorporated Soluble peptides having constrained, secondary conformation in solution and method of making same
US5698426A (en) * 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
US5858725A (en) * 1990-10-10 1999-01-12 Glaxo Wellcome Inc. Preparation of chimaeric antibodies using the recombinant PCR strategy
US5234824A (en) * 1990-11-13 1993-08-10 Specialty Laboratories, Inc. Rapid purification of DNA
US5187083A (en) * 1990-11-13 1993-02-16 Specialty Laboratories, Inc. Rapid purification of DNA
US5489523A (en) * 1990-12-03 1996-02-06 Stratagene Exonuclease-deficient thermostable Pyrococcus furiosus DNA polymerase I
DE69131017T2 (de) * 1990-12-20 1999-07-15 Ixsys, Inc., San Diego, Calif. Optimierung von bindenden proteinen
US5795747A (en) * 1991-04-16 1998-08-18 Evotec Biosystems Gmbh Process for manufacturing new biopolymers
DE4112440C1 (ja) * 1991-04-16 1992-10-22 Diagen Institut Fuer Molekularbiologische Diagnostik Gmbh, 4000 Duesseldorf, De
JPH06510116A (ja) * 1991-04-17 1994-11-10 ベミス・マニファクチュアリング・カンパニー データ点解析の方法及び装置
US5514568A (en) * 1991-04-26 1996-05-07 Eli Lilly And Company Enzymatic inverse polymerase chain reaction
US5512463A (en) * 1991-04-26 1996-04-30 Eli Lilly And Company Enzymatic inverse polymerase chain reaction library mutagenesis
ES2091976T3 (es) 1991-06-20 1996-11-16 Hoffmann La Roche Metodos perfeccionados para la amplificacion del acido nucleico.
WO1993000103A1 (en) * 1991-06-21 1993-01-07 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Chimeric envelope proteins for viral targeting
JP3442774B2 (ja) 1991-07-01 2003-09-02 バーレックス ラボラトリーズ，インコーポレイティド 新規な突然変異誘発法および組成物
US6071889A (en) 1991-07-08 2000-06-06 Neurospheres Holdings Ltd. In vivo genetic modification of growth factor-responsive neural precursor cells
US5223408A (en) * 1991-07-11 1993-06-29 Genentech, Inc. Method for making variant secreted proteins with altered properties
GB9115364D0 (en) * 1991-07-16 1991-08-28 Wellcome Found Antibody
US5279952A (en) * 1991-08-09 1994-01-18 Board Of Regents, The University Of Texas System PCR-based strategy of constructing chimeric DNA molecules
EP0605522B1 (en) * 1991-09-23 1999-06-23 Medical Research Council Methods for the production of humanized antibodies
GB9125979D0 (en) * 1991-12-06 1992-02-05 Wellcome Found Antibody
FR2685004A1 (fr) * 1991-12-11 1993-06-18 Pasteur Institut Procede de generation d'une diversite structurale et fonctionnelle dans une sequence peptidique.
EP0625205A1 (en) * 1992-01-30 1994-11-23 Genzyme Limited Chiral synthesis with modified enzymes
US5773267A (en) 1992-02-07 1998-06-30 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University, A Division Of Yeshiva University D29 shuttle phasmids and uses thereof
GB9202796D0 (en) * 1992-02-11 1992-03-25 Wellcome Found Antiviral antibody
US5843643A (en) 1992-02-21 1998-12-01 Ratner; Paul L. Site-specific transfection of eukaryotic cells using polypeptide-linked recombinant nucleic acid
EP0632829A1 (en) * 1992-03-02 1995-01-11 Biogen, Inc. Thrombin receptor antagonists
EP1477558A1 (en) 1992-03-16 2004-11-17 WOHLSTADTER, Jacob Nathaniel Selection methods
JP3507073B2 (ja) 1992-03-24 2004-03-15 ケンブリッジ アンティボディー テクノロジー リミティド 特異的結合対の成員の製造方法
US5316935A (en) 1992-04-06 1994-05-31 California Institute Of Technology Subtilisin variants suitable for hydrolysis and synthesis in organic media
DE69333127T2 (de) 1992-06-03 2004-05-06 Genentech, Inc., South San Francisco Varianten des Gewebeplasminogenaktivators mit verbesserter therapeutischer Wirkung
WO1993025237A1 (en) * 1992-06-15 1993-12-23 City Of Hope Chimeric anti-cea antibody
DE69331323D1 (de) * 1992-07-10 2002-01-24 Energy Biosystems Corp Für einen entschwefelungs-biokatalysator kodierende, rekombinante dna
US6107062A (en) * 1992-07-30 2000-08-22 Inpax, Inc. Antisense viruses and antisense-ribozyme viruses
FR2694754B1 (fr) 1992-08-12 1994-09-16 Bio Merieux Fragments d'ADN de mycobactéries, amorces d'amplification, sondes d'hybridation, réactifs et procédé de détection de détection de mycobactéries.
WO1994009817A1 (en) * 1992-11-04 1994-05-11 City Of Hope Novel antibody construct
WO1994011496A1 (en) * 1992-11-10 1994-05-26 Ixsys, Inc. Soluble peptides having constrained, secondary conformation in solution and method of making same
US5360728A (en) * 1992-12-01 1994-11-01 Woods Hole Oceanographic Institution (W.H.O.I.) Modified apoaequorin having increased bioluminescent activity
JP3720353B2 (ja) * 1992-12-04 2005-11-24 メディカル リサーチ カウンシル 多価および多重特異性の結合タンパク質、それらの製造および使用
US5571708A (en) 1993-04-19 1996-11-05 Bristol-Myers Squibb Company Thrombin-activatable plasminogen activator
IT1264712B1 (it) * 1993-07-13 1996-10-04 Eniricerche Spa Metodo di sintesi biologica di peptidi
US5498531A (en) 1993-09-10 1996-03-12 President And Fellows Of Harvard College Intron-mediated recombinant techniques and reagents
US5474920A (en) 1993-11-23 1995-12-12 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education On Behalf Of The Oregon Health Sciences University Modified thermo-resistant DNA polymerases
US5556772A (en) * 1993-12-08 1996-09-17 Stratagene Polymerase compositions and uses thereof
DE4343591A1 (de) * 1993-12-21 1995-06-22 Evotec Biosystems Gmbh Verfahren zum evolutiven Design und Synthese funktionaler Polymere auf der Basis von Formenelementen und Formencodes
US5928905A (en) * 1995-04-18 1999-07-27 Glaxo Group Limited End-complementary polymerase reaction
US5837458A (en) 1994-02-17 1998-11-17 Maxygen, Inc. Methods and compositions for cellular and metabolic engineering
US6117679A (en) 1994-02-17 2000-09-12 Maxygen, Inc. Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination
US5605793A (en) 1994-02-17 1997-02-25 Affymax Technologies N.V. Methods for in vitro recombination
US6395547B1 (en) * 1994-02-17 2002-05-28 Maxygen, Inc. Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination
US5834252A (en) 1995-04-18 1998-11-10 Glaxo Group Limited End-complementary polymerase reaction
US6995017B1 (en) 1994-02-17 2006-02-07 Maxygen, Inc. Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination
US6335160B1 (en) * 1995-02-17 2002-01-01 Maxygen, Inc. Methods and compositions for polypeptide engineering
US6165793A (en) 1996-03-25 2000-12-26 Maxygen, Inc. Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination
US5521077A (en) * 1994-04-28 1996-05-28 The Leland Stanford Junior University Method of generating multiple protein variants and populations of protein variants prepared thereby
WO1996017056A1 (en) 1994-12-02 1996-06-06 Institut Pasteur Hypermutagenesis
EP0714980A1 (en) 1994-12-02 1996-06-05 Institut Pasteur Hypermutagenesis
US5514588A (en) 1994-12-13 1996-05-07 Exxon Research And Engineering Company Surfactant-nutrients for bioremediation of hydrocarbon contaminated soils and water
US5629179A (en) * 1995-03-17 1997-05-13 Novagen, Inc. Method and kit for making CDNA library
WO1996034112A1 (en) * 1995-04-24 1996-10-31 Chromaxome Corp. Methods for generating and screening novel metabolic pathways
US6057103A (en) 1995-07-18 2000-05-02 Diversa Corporation Screening for novel bioactivities
US6004788A (en) 1995-07-18 1999-12-21 Diversa Corporation Enzyme kits and libraries
US6168919B1 (en) 1996-07-17 2001-01-02 Diversa Corporation Screening methods for enzymes and enzyme kits
US6030779A (en) 1995-07-18 2000-02-29 Diversa Corporation Screening for novel bioactivities
US5958672A (en) * 1995-07-18 1999-09-28 Diversa Corporation Protein activity screening of clones having DNA from uncultivated microorganisms
DK0843725T3 (da) * 1995-08-11 2002-08-12 Novozymes As Fremgangmåde til fremstilling af polypeptidvarianter
US5962258A (en) 1995-08-23 1999-10-05 Diversa Corporation Carboxymethyl cellulase fromthermotoga maritima
FR2738840B1 (fr) 1995-09-19 1997-10-31 Rhone Poulenc Rorer Sa Souches de levures genetiquement modifiees
US6051409A (en) 1995-09-25 2000-04-18 Novartis Finance Corporation Method for achieving integration of exogenous DNA delivered by non-biological means to plant cells
US5756316A (en) * 1995-11-02 1998-05-26 Genencor International, Inc. Molecular cloning by multimerization of plasmids
US6171820B1 (en) 1995-12-07 2001-01-09 Diversa Corporation Saturation mutagenesis in directed evolution
US5830696A (en) * 1996-12-05 1998-11-03 Diversa Corporation Directed evolution of thermophilic enzymes
US6358709B1 (en) 1995-12-07 2002-03-19 Diversa Corporation End selection in directed evolution
US6238884B1 (en) 1995-12-07 2001-05-29 Diversa Corporation End selection in directed evolution
US5965408A (en) * 1996-07-09 1999-10-12 Diversa Corporation Method of DNA reassembly by interrupting synthesis
US5962283A (en) 1995-12-07 1999-10-05 Diversa Corporation Transminases and amnotransferases
US20030215798A1 (en) 1997-06-16 2003-11-20 Diversa Corporation High throughput fluorescence-based screening for novel enzymes
US6352842B1 (en) 1995-12-07 2002-03-05 Diversa Corporation Exonucease-mediated gene assembly in directed evolution
US5814473A (en) 1996-02-09 1998-09-29 Diversa Corporation Transaminases and aminotransferases
US6361974B1 (en) 1995-12-07 2002-03-26 Diversa Corporation Exonuclease-mediated nucleic acid reassembly in directed evolution
US5939250A (en) * 1995-12-07 1999-08-17 Diversa Corporation Production of enzymes having desired activities by mutagenesis
DK0873398T3 (da) * 1996-01-10 2005-08-15 Novozymes As Fremgangsmåde til in vivo produktion af et mutantbibliotek i celler
US5942430A (en) 1996-02-16 1999-08-24 Diversa Corporation Esterases
US5958751A (en) 1996-03-08 1999-09-28 Diversa Corporation α-galactosidase
US6096548A (en) 1996-03-25 2000-08-01 Maxygen, Inc. Method for directing evolution of a virus
US5783431A (en) * 1996-04-24 1998-07-21 Chromaxome Corporation Methods for generating and screening novel metabolic pathways
US5789228A (en) 1996-05-22 1998-08-04 Diversa Corporation Endoglucanases
US5877001A (en) 1996-06-17 1999-03-02 Diverso Corporation Amidase
US5763239A (en) 1996-06-18 1998-06-09 Diversa Corporation Production and use of normalized DNA libraries
US5939300A (en) 1996-07-03 1999-08-17 Diversa Corporation Catalases
US6093873A (en) 1996-08-19 2000-07-25 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Genetically engineered mice containing alterations in the gene encoding RXR
US5834458A (en) 1996-10-09 1998-11-10 Eli Lilly And Company Heterocyclic compounds and their use
EP0948615B1 (en) * 1996-12-20 2004-12-15 Novozymes A/S In vivo recombination
US6326204B1 (en) * 1997-01-17 2001-12-04 Maxygen, Inc. Evolution of whole cells and organisms by recursive sequence recombination
AU743305C (en) * 1997-01-17 2006-03-30 Maxygen, Inc. Evolution of whole cells and organisms by recursive sequence recombination
BR9808368A (pt) * 1997-03-18 2000-05-23 Novo Nordisk As Processos para a construção de uma biblioteca de polinucleotideos homólogos recombinados, para a identificação um polipeptìdeo de interesse, e, para a produção de um polipeptìdeo de interesse.
DK0996718T3 (da) * 1997-03-18 2009-04-06 Novozymes As Fremgangsmåde til konstruktion af et bibliotek ved anvendelse af DNA-shuffling
NZ337910A (en) * 1997-03-18 2001-10-26 Novo Nordisk As Shuffling of heterologous DNA sequences using conserved regions
US5948653A (en) 1997-03-21 1999-09-07 Pati; Sushma Sequence alterations using homologous recombination
US6153410A (en) * 1997-03-25 2000-11-28 California Institute Of Technology Recombination of polynucleotide sequences using random or defined primers
US6051049A (en) 1997-05-29 2000-04-18 Exothermic Distribution Corporation Utilization of strontium aluminate in steelmaking
US5948666A (en) 1997-08-06 1999-09-07 Diversa Corporation Isolation and identification of polymerases
US5876997A (en) 1997-08-13 1999-03-02 Diversa Corporation Phytase
AU746786B2 (en) * 1997-12-08 2002-05-02 California Institute Of Technology Method for creating polynucleotide and polypeptide sequences
US6087341A (en) 1998-02-12 2000-07-11 The Board Of Trustees Of The Leland Standford Junior University Introduction of nucleic acid into skin cells by topical application
US6365408B1 (en) 1998-06-19 2002-04-02 Maxygen, Inc. Methods of evolving a polynucleotides by mutagenesis and recombination
EP1100891A2 (en) 1998-07-28 2001-05-23 California Institute Of Technology Expression of functional eukaryotic proteins
BR9911681A (pt) 1998-08-12 2001-10-02 Maxygen Inc Embaralhamento de dna para produzir culturas seletivas para herbicidas
IL140441A0 (en) 1998-09-29 2002-02-10 Maxygen Inc Shuffling of codon altered genes
US6376246B1 (en) 1999-02-05 2002-04-23 Maxygen, Inc. Oligonucleotide mediated nucleic acid recombination
US6397053B1 (en) * 1999-12-30 2002-05-28 Koninklijke Philips Electronics N.V. (Kpenv) Reduction of power consumption with increased standby time in wireless communications device
US20050084907A1 (en) 2002-03-01 2005-04-21 Maxygen, Inc. Methods, systems, and software for identifying functional biomolecules
US20090312196A1 (en) 2008-06-13 2009-12-17 Codexis, Inc. Method of synthesizing polynucleotide variants

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003524416A (ja) * 2000-01-11 2003-08-19 バイエル・バイオサイエンス・エヌ・ヴェー 生物学的サンプル中のエリートイベントｇａｔ−ｚｍ１を同定する方法およびキット
JP2003519665A (ja) * 2000-01-14 2003-06-24 ニュー・ホライズンズ・ダイアグノスティックス・コーポレイション 細菌感染の治療処置における、細菌ファージに関連した溶菌酵素の非経口使用
JP2003521933A (ja) * 2000-02-10 2003-07-22 ゼンコー タンパク質ライブラリーに関するタンパク質設計オートメーション
JP2003533228A (ja) * 2000-05-16 2003-11-11 カリフォルニア インスティテュート オブ テクノロジー オキシダーゼ酵素の指向的進化
US7122310B2 (en) 2000-10-11 2006-10-17 Sanko Junyaku Co., Ltd. Methods of constructing self-assembly of probes and method of detecting the same
JP2006502706A (ja) * 2002-07-25 2006-01-26 エムジェイ バイオワークス インコーポレーティッド ハイブリッドタンパク質方法および組成物
JP2006500934A (ja) * 2002-10-04 2006-01-12 マックワリー ユニバーシティ ランダムドリフト突然変異誘発
JP2006504438A (ja) * 2002-11-01 2006-02-09 エヴォジェニクス・ピーティーワイ・リミテッド リバビリンおよび／またはｒｎａレプリカーゼを使用した変異誘発方法
JP4789271B2 (ja) * 2005-12-02 2011-10-12 シンセティック ゲノミクス、インク． エラーが最小化された核酸分子の合成
JP2011523555A (ja) * 2008-06-04 2011-08-18 モディクエスト べー．フェー． 抗炎症剤
US9718877B2 (en) 2008-06-04 2017-08-01 Modiquest B.V. Anti-inflammatory agents
US10703822B2 (en) 2008-06-04 2020-07-07 Modiquest B.V. Anti-inflammatory agents

Also Published As

Publication number Publication date
US6132970A (en) 2000-10-17
JP3393848B2 (ja) 2003-04-07
ATE216722T1 (de) 2002-05-15
AU2010200270A1 (en) 2010-02-18
US5830721A (en) 1998-11-03
ES2176324T3 (es) 2002-12-01
EP0752008A4 (en) 1999-03-17
DE1094108T1 (de) 2002-10-17
DE69526497D1 (de) 2002-05-29
ES2165652T3 (es) 2002-03-16
AU2006202542A1 (en) 2006-07-13
JP2007244399A (ja) 2007-09-27
WO1995022625A1 (en) 1995-08-24
JP2004254709A (ja) 2004-09-16
EP1205547A3 (en) 2002-07-24
DE934999T1 (de) 2001-04-05
RU2157851C2 (ru) 2000-10-20
EP1094108A3 (en) 2001-05-09
US6602986B1 (en) 2003-08-05
CN1145641A (zh) 1997-03-19
US5811238A (en) 1998-09-22
JP2003033180A (ja) 2003-02-04
JP2001057893A (ja) 2001-03-06
US5605793A (en) 1997-02-25
US6420175B1 (en) 2002-07-16
US6277638B1 (en) 2001-08-21
US6297053B1 (en) 2001-10-02
DE752008T1 (de) 2001-04-05
AU703264C (en) 2003-06-12
US7288375B2 (en) 2007-10-30
US20080261833A1 (en) 2008-10-23
DE69526497T2 (de) 2002-11-21
EP0752008B2 (en) 2013-04-10
AU703264B2 (en) 1999-03-25
AU2971495A (en) 1995-09-04
JP3485560B2 (ja) 2004-01-13
ATE211761T1 (de) 2002-01-15
EP0752008A1 (en) 1997-01-08
DK0752008T3 (da) 2002-06-17
US6444468B1 (en) 2002-09-03
EP1205547A2 (en) 2002-05-15
US20100222237A1 (en) 2010-09-02
CA2182393C (en) 2005-05-17
US6576467B1 (en) 2003-06-10
US6287861B1 (en) 2001-09-11
CA2182393A1 (en) 1995-08-24
US20040241853A1 (en) 2004-12-02
DE69525084T2 (de) 2002-07-11
EP0934999B1 (en) 2002-01-09
DE69525084D1 (de) 2002-02-28
EP0934999A1 (en) 1999-08-11
EP0752008B1 (en) 2002-04-24
JP2003174881A (ja) 2003-06-24
DK0934999T3 (da) 2002-02-18
JP4067516B2 (ja) 2008-03-26
US7981614B2 (en) 2011-07-19
EP1094108A2 (en) 2001-04-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4067516B2 (ja) ランダムフラグメント化および再組立によるｄｎａ変異誘発
JP4015193B2 (ja) 反復的選択および組換えにより所望の特徴を有するポリヌクレオチドを作製する方法
US20120252701A1 (en) Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination
JP2000514651A (ja) 合成または増幅過程をブロックまたは中断することにより製造されたポリヌクレオチドによるｄｎａのシャッフリング方法
JP2002505845A (ja) Ｄｎａシャッフリング方法
KR100491810B1 (ko) 무작위단편화및재조립에의한dna돌연변이유발방법
CA2497384C (en) Dna mutagenesis by random fragmentation and reassembly
AU744681B2 (en) Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination
AU747034B2 (en) DNA mutagenesis by random fragmentation and reassembly
AU2747302A (en) DNA mutagenesis by random fragmentation and reassembly
AU2747402A (en) DNA mutagenesis by random fragmentation and reassembly